鞑靼忍冬组培配方和培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种鞑靼忍冬组培配方和培养方法。
【背景技术】
[0002]鞑靼忍冬别名桃色忍冬、新疆忍冬，忍冬科忍冬属落叶灌木，高达3米。叶卵形或卵状椭圆形，长2-6厘米。花成对腋生，总花梗长1-2厘米，花冠唇形，桃红色、红色或白色，外面光滑，里面有毛。浆果红色，常合生。鞑靼忍冬花开繁茂灿烂，白的皎洁高贵，红的激情似火，桃红色的娇艳妩媚，各色都别具风采!夏日，红果灿若玛瑙，圆如珍珠，挂满枝梢更添火热，因此具有很高的园林价值。
[0003]目前，鞑靼忍冬常用的繁殖方法为种子繁殖、扦插繁殖，受季节的限制，繁殖系数低，目前尚未看到鞑靼忍冬组培方面的报道和专利。
【发明内容】
[0004]针对上述现有技术，本发明要解决的技术问题在于提供一种鞑靼忍冬组培配方和培养方法，通过消毒外植体，得到无菌培养体系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长和生根进行筛选、调控，最后确定最佳外植体和培养基配方，使鞑靼忍冬能不受季节的限制、快速的增殖，能适应工厂化生产。
[0005]为此，本发明提供了一种鞑靼忍冬组培配方，其特征在于，包括:
[0006]初代培养基:MS+6-BA0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0007]继代增殖培养基:MS+6-BA2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0008]生根培养基:1/2MS+NAA1.5mg/L；
[0009]上述培养基均添加3%质量百分比蔗糖和0.65%质量百分比琼脂粉，pH值5.85。
[0010]优选的，所述MS培养基为:工作液浓度单位为mg/L，其中包含:
[0011]大量元素:NH4NO31650、KN03 1900^CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20370^KH2PO4170；
[0012]微量元素:KI0.83^H3BO3 6.2^MnSO4.H2O 21.4^ZnSO4.7H20 8.6^Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H20 0.025；
[0013]铁盐:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8；
[0014]有机物:烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
[0015]优选的，所述培养基需要经过高压灭菌锅消毒25min，高压灭菌锅工作温度120°C，压强 115kPa。
[0016]所述6-BA为6-苄基嘌呤，所述KT为激动素，所述NAA为奈乙酸。
[0017]本发明还提供了一种鞑靼忍冬培养方法，包括以下几个步骤:
[0018](I)选择外植体，用肥皂水清洗后在接种室超净工作台用75%体积百分比酒精消毒Imin，接着用无菌水冲洗2遍，再用0.1 %质量百分比升萊消毒15min，用无菌水冲洗3遍，最后用消毒过的滤纸吸干外面的水分；
[0019](2)将消毒好的外植体接种到初代培养基上，培养得到无菌的幼苗；
[0020](3)将得到无菌的幼苗接种到继代增殖培养基上，培养得到分化苗；
[0021](4)将得到的分化苗接种到生根培养基上，培养得到生根苗；
[0022](5)炼苗，把得到的生根组培苗在炼苗室中不开盖炼苗10天，然后移栽到珍珠岩:土壤=1:4的基质中，得到成品；
[0023]所述培养基为:
[0024]初代培养基:MS+6-BA0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0025]继代增殖培养基:MS+6-BA2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0026]生根培养基:1/2MS+NAA1.5mg/L；
[0027]上述培养基均添加3%质量百分比蔗糖和0.65%质量百分比琼脂粉，pH值5.85。
[0028]优选的，所述MS培养基为:
[0029]工作液浓度单位为mg/L，其中包含:
[0030]大量元素:NH4NO31650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440、MgS(k.7H20370、ΚΗ2Ρ〇4170；
[0031]微量元素:KI0.83^H3BO3 6.2^MnSO4.H2O 21.4^ZnSO4.7H20 8.6^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025；
[0032]铁盐:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8；
[0033]有机物:烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
[0034]优选的，所述步骤(I)选择的外植体为当年新生带侧芽茎段。
[0035]优选的，所述步骤(2)至(4)选用的培养室条件为:培养温度25°C，光照强度1200勒克斯，光照时间12h/d。
[0036]本发明的鞑靼忍冬组培配方和培养方法，通过消毒外植体，得到无菌培养体系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长和生根进行筛选、调控，最后确定最佳外植体和培养基配方，使其能适应工厂化生产。通过该组培配方和方法能够大量繁殖鞑靼忍冬，满足园林绿化需求，所生产的苗木形状稳定，生产周期短，能够满足规模化快速生产。本发明能不受季节的限制、快速的增殖，繁殖周期短，能完整的继承母本的优良特性，为组培工厂化生产解决了一个难题。
【具体实施方式】
[0037]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明:
[0038]1、鞑靼忍冬培养基配方的配制
[0039]1.1培养基母液的配制和保存
[0040]MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的整数倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
[0041]母液INH4NO333g/L、KN03 38g/L、MgS04.7H20 7.4g/L、KH2P043.4g/L，母液 ΠCaCl2.2H20 8.8g/L，母液ΙΠΗ3ΒΟ3 620mg/L、MnS04.H202140mg/L、ZnSO4.7H20 860mg/L、KI83mg/L，母液IVNa2MnO4.2H20250mg/L、CuSO4.5H20 25mg/L、CoCl2.6H2O 25mg/L，母液 VNa2.EDTA3.73g/L,FeSO4.7H20 2.78g/L，母液VI肌醇 10g/L、甘氨酸0.2g/L，母液VII烟酸0.5g/L、盐酸吡哆素(VB6)0.5g/L、盐酸硫胺素(VBl)0.lg/L，溶液①NAA1000mg/L，溶液②KT1000mg/L，溶液③升汞lg/L，溶液④6-BA1000mg/L，溶液⑤NaOH0.5mol/L，溶液⑥HC10.5mol/Lo
[0042]配制母液1、母液Π、母液m、母液IV、母液V、母液V1、母液νπ、溶液①、溶液②、溶液③、溶液④，溶液⑤，溶液⑥各IL。
[0043]母液I和母液Π为20倍浓缩液，母液m、母液V和母液VI为100倍浓缩液，母液IV和母液W为1000倍浓缩液，保存在冰箱的冷藏室中。
[0044]1.2配制IL鞑靼忍冬初代培养基配方需要母液I和母液Π 50ml，母液ΙΠ、母液V和母液VIlOml，母液IV和母液VHlml，溶液①0.2ml，溶液②0.5ml，溶液④0.5ml，蔗糖25g，琼脂粉6.5g。
[0045]1.3配制IL鞑靼忍冬继代增殖培养基配方需要母液I和母液Π 50ml，母液ΙΠ、母液V和母液VI1ml，母液IV和母液Wlml，溶液①0.2ml，溶液②Iml，溶液④2ml，蔗糖30g，琼脂粉6.5g。
[0046]1.4配制IL鞑靼忍冬生根培养基配方需要母液I和母液Π 25ml，母液ΙΠ、母液V和母液VIlOml，母液IV和母液VHlml，溶液①1.5ml，蔗糖30g，琼脂粉6.5g。
[0047]1.5用溶液⑤或溶液⑥将pH值调到5.85。
[0048]1.6把IL鞑靼忍冬培养基配方分装到培养瓶中，每瓶50ml。
[0049]1.7把装有鞑靼忍冬培养基配方的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒25min，高压灭菌锅工作温度120 °C，压强115kPa。
[0050]1.8把灭菌好的鞑靼忍冬培养基放置接种室，冷却凝固。
[0051]2、外植体的处理，选择鞑靼忍冬当年生的带侧芽的茎段作为外植体，以下都称作外植体，用肥皂水清外植体，晾干备用。
[0052]3、外植体接种到鞑靼忍冬初代培养基上，外植体接种步骤都在接种室的超净工作台上操作。
[0053]3.1外植体首先用75%体积百分比酒精消毒lmin，用无菌水清洗2遍。
[0054]3.2外植体再用0.1 %质量百分比升汞溶液消毒15min，用无菌水清洗3遍。
[0055]3.3用消毒过的滤纸吸干外植体表面的水分。
[0056]3.4用消毒过的镊子把外植体接种到初代培养基上。
[0057]3.5每瓶培养基接种4个外植体。
[0058]4、外植体的培养，把接种外植体的培养基放置到培养室培养I个月，可以诱导出侧芽，得到鞑靼忍冬无菌苗。培养室温度25°C，光照强度1200勒克斯，每天光照时间12h。
[0059]5、继代接种和培养，在接种室超净工作台上取初代培养中生长良好的侧芽，然后接种到鞑靼忍冬继代增殖培养基上，每瓶接种4个，把接种好的鞑靼忍冬继代增殖培养基放置到培养室培养1.5个月，增殖得到更多的无菌苗。培养室温度25°C，光照强度1200勒克斯，每天光照时间12h。
[0060]6、生根接种和培养，在接种室超净工作台上，把继代增殖培养基中无菌苗接种到生根培养基上，每瓶接种5株，接种好的鞑靼忍冬生根培养基放置到培养室培养1.5个月。培养室温度25°C，光照强度1200勒克斯，每天光照时间12h。
[0061]7、经过生根培养后，成为生根苗，经过15天开盖炼苗，然后移栽到珍珠岩:土壤=1:4的基质中，得到成品。
[0062]上述对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以对其作出种种变化。
【主权项】
1.一种鞑靼忍冬组培配方，其特征在于，包括: 初代培养基:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 继代增殖培养基:MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 生根培养基:1/2MS+NAA 1.5mg/L ； 上述培养基均添加3 %质量百分比蔗糖和0.65 %质量百分比琼脂粉，pH值5.85。2.根据权利要求1所述的鞑靼忍冬组培配方，其特征在于，所述MS培养基为: 工作液浓度单位为mg/L，其中包含: 大量元素:NH4NO3 1650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20 370^KH2PO4 170；微量元素:KI 0.83、Η3Β03 6.2、MnS04.H2O 21.4 ^ ZnSO4.7H20 8.6 ^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025； 铁盐:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8； 有机物:烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。3.根据权利要求1所述的鞑靼忍冬组培配方，其特征在于，所述培养基需要经过高压灭菌锅消毒25min，高压灭菌锅工作温度120°C，压强115kPa。4.根据权利要求1所述的鞑靼忍冬组培配方，其特征在于，所述6-BA为6-苄基嘌呤，所述KT为激动素，所述NAA为奈乙酸。5.一种鞑靼忍冬培养方法，其特征在于，包括以下几个步骤: (1)选择外植体，用肥皂水清洗后在接种室超净工作台用75%体积百分比酒精消毒Imin，接着用无菌水冲洗2遍，再用0.1 %质量百分比升萊消毒15min，用无菌水冲洗3遍，最后用消毒过的滤纸吸干外面的水分； (2)将消毒好的外植体接种到初代培养基上，培养得到无菌的幼苗； (3)将得到无菌的幼苗接种到继代增殖培养基上，培养得到分化苗； (4)将得到的分化苗接种到生根培养基上，培养得到生根苗； (5)炼苗，把得到的生根组培苗在炼苗室中不开盖炼苗10天，然后移栽到珍珠岩:土壤=1:4的基质中，得到成品； 所述培养基为: 初代培养基:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 继代增殖培养基:MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 生根培养基:1/2MS+NAA 1.5mg/L ； 上述培养基均添加3 %质量百分比蔗糖和0.65 %质量百分比琼脂粉，pH值5.85。6.根据权利要求5所述的鞑靼忍冬培养方法，其特征在于，所述MS培养基为: 工作液浓度单位为mg/L，其中包含: 大量元素:NH4NO3 1650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20 370^KH2PO4 170；微量元素:KI 0.83、Η3Β03 6.2、MnS04.H2O 21.4 ^ ZnSO4.7H20 8.6 ^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025； 铁盐:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8； 有机物:烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。7.根据权利要求5所述的鞑靼忍冬培养方法，其特征在于，所述步骤(I)选择的外植体为当年新生带侧芽的茎段。8.根据权利要求5所述的鞑靼忍冬培养方法，其特征在于，所述步骤(2)至(4)选用的培养室条件为:培养温度25°C，光照强度1200勒克斯，光照时间12h/d。
【专利摘要】本发明的鞑靼忍冬组培配方和培养方法，通过消毒外植体，得到无菌培养体系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长和生根进行筛选、调控，最后确定最佳外植体和培养基配方，使其能适应工厂化生产。通过该组培配方和方法能够大量繁殖鞑靼忍冬，满足园林绿化需求，所生产的苗木形状稳定，生产周期短，能够满足规模化快速生产。本发明能不受季节的限制、快速的增殖，繁殖周期短，能完整的继承母本的优良特性，为组培工厂化生产解决了一个难题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105706937
【申请号】CN201610168489
【发明人】李根生
【申请人】宁夏皇达生物科技股份有限公司