一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法与流程

1.本发明属于虎舌红植物组织培养技术领域，具体公开了一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法。


背景技术：

2.虎舌红(ardisia mamillata hance)又名红毛毡、毛凉伞，为紫金牛科紫金牛属多年生常绿小灌木，原产我国南部，1987年庐山植物园考察团在庚岭山脉考察野生花卉资源时，在江西大余县境内的深山老林中发现并进行了引种栽培。虎舌红全株紫红色，叶倒卵形，叶缘有细锯齿，正背两面疏生腺点，密被紫红色厚长绒毛，形似老虎舌头。虎舌红花期6～8月，果实成熟后呈鲜红色，周年挂果，果叶相映呈现出喜庆祥和的观赏效果。
3.1999年昆明世界园艺博览会上，江西参展的虎舌红荣获国际室内观叶植物大奖第一名，2001年第五届中国花卉博览会(广东顺德)上虎舌红再获殊荣，一举跻身于世界级花卉新秀的宝座。2019年北京世界园艺博览会上，由贵州省林业科学研究院培育的虎舌红杂交种—万紫千红荣获室内观叶植物金奖。虎红不仅有良好的观赏价值还有很高的药用价值。近年来人们对虎舌红的研究主要在其栽培管理、化学成份分析、生物学特性观察、抗逆性等研究上。
4.虽然虎舌红种子发芽率高，但出苗不整齐，出苗过程长达2～6个月，而且种子繁殖的实生苗性状不稳定，易变异，优良单株不易保存和扩繁，植物组织培养技术作为现代育苗技术的重要技术手段，近年来得到了大量研究。目前通过组织培养实现虎舌红的再生已经趋于成熟，但关于虎舌红组织培养生根方式均为瓶内生根，该方法需要无菌操作，过程复杂，周期长。因此亟需一种生产工序简化，生根率高、成活率高的虎舌红组培苗瓶外生根方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法，以解决虎舌红组培苗瓶内生根生产周期长、移栽成活率低、生产成本高的问题。
6.为了达到上述目的，本发明的技术方案为：一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法，包括以下步骤：
7.(1)育苗盘：育苗盘有2种，一种是育苗箱，由盖子、穴盘、接水盘3部分组成、另一种是林木穴盘，使用过的育苗盘用浓度为0.5～1g/l的多菌灵、百菌清等杀菌剂溶液喷洒进行消毒处理；
8.(2)水分准备：将自来水加入到步骤(1)的接水盘或盛水容器中；
9.(3)基质处理：生根基质为蛭石、珍珠岩、泥炭；首先将基质装入步骤(1)的穴盘中、压实，然后将穴盘放入步骤(2)的接水盘或盛水容器中，让基质自动吸水浸透；
10.(4)配制生根剂：生根剂为iaa(吲哚乙酸)、iba(吲哚丁酸)、naa(萘乙酸)，将生根剂配置成浓度为50～150mg/l的溶液；
11.(5)插条制作与处理：选取丛生芽长势良好，茎段、叶片以及茸毛呈红色的瓶苗，取出瓶苗，将粗度在≥1.5mm的丛生芽切成带顶芽的茎段，并剪除茎段基部1～3cm处的叶片作为插条；制作好的插条用橡胶圈绕成捆，插条基部1～3cm处浸泡在步骤(4)的生根剂溶液中，浸泡时间15～30min；
12.(6)扦插方法：将步骤(5)处理的插条插入步骤(3)处理好的基质中，每穴1株，插入深度1～3cm、压实；
13.(7)培养条件：培养条件有2种，一种是组培培养室，另一种是大棚苗床；
14.(8)养护管理：在步骤(7)的培养条件下，插条15～25d开始生根；培养室培养20～25d时打开育苗箱盖子上的通气阀驯化3～5d，25～30d时将整个育苗箱移出培养室至大棚苗床放置2～3d时揭盖并搭遮阳网；大棚苗床持续培养30d左右，打开小拱棚两端的塑料膜透气；
15.(9)促根壮苗：培养30d左右的幼苗，同时喷洒浓度为1g/l的花多多和多菌灵溶液2～3次、间隔5～7d/次，促根壮苗15～20d(培养45～50d)的幼苗即可移栽上盆。
16.本技术方案的原理在于：
17.(1)基质：蛭石为云母类硅质矿物，它的阳离子代换量(cec)很高，并且含有较多的钾、钙、镁等营养元素，可被植物吸收利用促进生长；蛭石在生产过程中经过高温消毒，几乎无菌和病虫害、且吸水能力很强，保证了虎舌红插条在育苗箱培养期间无菌、水分及养分供给；
18.(2)育苗盘：一种是加盖的育苗箱，另一种是小拱棚上覆膜的林木穴盘，减少了穴盘内水分的散失与病菌的污染；
19.(3)培养条件：一种是室内培养室培养条件，与虎舌红组培苗培养所需的条件相对一致，保证了插条生根所需的光照强度和时间、以及培养的温度条件；另一种是室外大棚苗床培养条件，时间选择在4～10月，虎舌红生长期，在小拱棚上覆膜，膜内温度25
±
10℃，湿度90～100％，保证了插条生根期间的温度与湿度条件。
20.本技术方案的有益效果在于：
21.(1)诱导与驯化同时完成：本发明将增殖后的丛生芽进行瓶外诱导生根，育苗箱培养第20～25d打开盖子上的通气阀驯化3～5d，移出培养室在大棚苗床培养；大棚苗床的插条持续培养30d左右即可打开小拱棚2端的塑料膜；2种培养条件插条的整个生根过程即是诱导与驯化同时进行的过程；
22.(2)缩短了生根与成苗时间：本发明所述的整个瓶外生根条件，插条培养15～20d开始生根、培养25～30d生根率达到100％，缩短了生根时间；促根壮苗培养仅需15～20d，缩短了成苗时间；
23.(3)省掉了消毒与洗根流程：本发明通过试验对比，确定了蛭石作为最佳瓶外生根基质，水分就用自来水，新开封的基质与自来水都无需额外消毒；同时本发明省去现有的组培苗瓶内生根移栽方法中的洗根过程，避免了洗根造成的根部损伤和清洗不到位造成的污染；
24.(4)便于规模化生产：25～30d获得了0感染率、100％生根的虎舌红幼苗，大棚苗床扦插培养30d左右的幼苗平均根长3.51cm、根点2.92个，45～50d的幼苗平均根长4.57cm、根点4.13个、根幅6～8cm，且均已长出二级侧根，形成完好的根团；整个过程简化，生根率高、
感病率低，且易于操作，便于规模化生产。
附图说明
25.图1是12穴不带通气阀的育苗箱(实施例1)；
26.图2是试验号3扦插2个月的生长效果(实施例1)(2020年11月16日拍照)；
27.图3是9个试验处理扦插苗生长效果(实施例1)(2020年11月16日拍照)；
28.图4是24穴带通气阀的育苗箱(实施例2)；
29.图5是蛭石装盘与自动吸水流程(实施例2)；
30.图6是生长健壮的瓶苗(实施例2、实施例3)；
31.图7是带顶芽的茎段及插条制作(实施例2、实施例3)；
32.图8是插条成捆并用iaa生根剂浸泡(实施例2、实施例3)；
33.图9是插条插入穴盘(实施例2)；
34.图10是育苗箱放入培养室培养(实施例2)；
35.图11是扦插15天的生根效果(实施例2)；
36.图12是e号扦插25天的生根效果(单头)(实施例2)；
37.图13是e号扦插30天的生根效果(多头)(实施例2)；
38.图14是扦插25天打开通气阀驯化炼苗(实施例2)；
39.图15是育苗箱移出培养室到大棚苗床第3天揭盖炼苗(实施例2)；
40.图16是b号扦插33天的生根效果(实施例2)(7月14日扦插，8月17日拍照)；
41.图17是b号扦插53天的生根效果(实施例2)(7月14日扦插，9月7日拍照)；
42.图18是混合无性系扦插55天的生根效果(实施例2)(5月28日扦插，7月3日移出，7月23日调查)；
43.图19是50穴的育苗盘及基质处理流程(实施例3)；
44.图20是大棚苗床扦插22天的生根效果(实施例3)(8月1日扦插，8月23日调查)
45.图21是大棚苗床扦插30天的生根效果(实施例3)(7月1日扦插，8月2日调查)；
46.图22是大棚苗床扦插53天的生根效果(单头)(实施例3)(7月1日扦插，8月23日调查)；
47.图23是大棚苗床扦插53天的生长效果(双头)(实施例3)(7月1日扦插，8月23日调查)；
具体实施方式
48.本发明提供的一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法，包括但不限于以下实施例。
49.实施例1，基质与生根剂筛选
50.一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法，包括以下步骤：
51.(1)育苗箱：育苗箱由盖子、穴盘、接水盘3部分组成，穴盘长、宽、深规格为19.0厘米
×
14.0厘米
×
5.5厘米、上孔穴为5厘米
×
5厘米，穴盘的穴数为3
×
4的12穴(图1)；
52.(2)基质及处理：2020年9月15日，生根基质为1～6mm颗粒状的新的蛭石、珍珠岩、泥炭(表1)，首先将基质在高压灭菌锅中灭菌，然后装入穴盘并压实，最后将穴盘放入到已添加600～800ml去离子水的接水盘中，让基质自动吸水浸透；
53.(3)插条制作：选取丛生芽长势良好，茎段、叶片以及茸毛呈红色的瓶苗，将丛生芽取出切成带顶芽的茎段，并剪除茎段基部的叶片作为插条；
54.(4)生根剂处理：生根剂为iaa(吲哚乙酸)、iba(吲哚丁酸)、naa(萘乙酸)，用自来水配置成浓度为50～150mg/l的溶液(表1)，将插条基部1～3cm处浸泡在生根剂溶液中，浸泡时间15～30min；
55.(5)扦插方法：按正交试验设计安排试验(表2)，每个处理12株，每穴1株、直插，插入深度1～2cm、压实，并盖好育苗箱盖子；
56.(6)培养室养护管理：扦插好的育苗箱直接放培养室，常温管理，光照强度2000～2500lux，光照时间12h
·
d
‑1；
57.表1:正交试验设计表
[0058][0059]
表2：正交试验结果表
[0060][0061]
2020年11月16日(培养2个月)，统计结果表明：试验号1、2、3号的基质是蛭石，平均成活率与生根率达到最大值为72.22％，特别是试验3号扦插苗的成活率和生根率都达到100％，且大部分均生二级侧根，平均生根点2.58个，平均根长为2.48cm(图2)，而基质为珍珠岩与泥炭的扦插苗的生根率仅分别为38.89％、27.78％；分析原因，虽然基质为泥炭培养中插条苗的根系最好，但因自身病菌较多或容易感菌，导致插条污染感病至死亡严重，试验7号仅成活1株，也是生长最好的1株(图3)；珍珠岩没有营养，扦插后插条即使能形成愈伤组织，但不能供给植物营养，所以根系不能生长；此次试验只是为了筛选基质与生根剂，室内温度为常温20
±
3℃，温度偏低，也是导致生根时间较长的原因。
[0062]
生根率＝(生根株数/扦插株数)*100％；
[0063]
成活率＝(有愈伤组织的株数/扦插株数)*100％；
[0064]
实施例2，改进育苗箱在培养室继续进行验证试验
[0065]
一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法，包括以下步骤：
[0066]
(1)育苗箱：育苗箱由盖子、穴盘、接水盘3部分组成，穴盘长、宽、深规格分别为37
厘米
×
23厘米
×
5.8厘米、孔穴的规格为5厘米
×
5厘米、穴数为6
×
4的24穴(图4)；
[0067]
(2)基质及处理：生根基质为1～3mm颗粒状的蛭石，基质装入穴盘、压实，将穴盘放入到已添加1300ml左右自来水的接水盘中，让基质自动吸水浸透(图5)；
[0068]
(3)插条制作：选取丛生芽长势良好，茎段、叶片以及茸毛呈红色的瓶苗(图6)，取出瓶苗，将粗度为≥1.5mm的丛生芽切成7～8cm长、带顶芽的茎段，并剪除茎段基部1～3cm处的叶片作为插条(图7)；
[0069]
(4)生根剂处理：生根剂为iaa(吲哚乙酸)，浓度为150mg/l的溶液，制作好的插条用橡胶圈绕成捆，并将插条基部1～3cm处浸泡在生根剂溶液中，浸泡时间15min(图8)；
[0070]
(5)扦插方法：每穴1株，插入深度1～3cm、压实，并盖好育苗箱盖子(图9)；
[0071]
(6)培养室条件：将育苗箱转移至光照强度2000～2500lux，光照时间12h
·
d
‑
1，温度25
±
3℃的培养室中进行生根培养(图10)；
[0072]
(7)培养室养护管理：扦插15～20d开始生根(图11)，随着根系的生长、根点数不断增加，根团的形成多头插条比单头插条更快(图12、图13)，培养20～25d打开盖子上的通气阀进行驯化炼苗3～5d(图14)，扦插25～30d将整个育苗箱移出培养室至大棚苗床进行促根壮苗管理(图15)；
[0073]
(8)促根壮苗：从培养室移出的育苗箱在大棚苗床上驯化2～3d开始揭盖(图15)，然后用浓度为1g/l的花多多和多菌灵溶液喷洒幼苗2～3次、间隔5～7d/次，促根壮苗15～20d(扦插45～50d)的幼苗即可移栽上盆；经调查，虎舌红优良无性系b号扦插培养33d的平均根长3.51cm、平均根点2.92个、根幅3～5cm(图16)，扦插培养53d(含促根壮苗20d)的平均根长4.29cm、平均根点3.58个、根幅5～7cm、已形成良好的根团(图17)；虎舌红混合无性系扦插培养55d(含促根壮苗20d)，平均根长4.57cm、平均根点4.13个、根幅6～8cm，不论单头还是多头的苗木均已形成良好的根团，明显优于当年培养的播种苗(图18)。
[0074]
实施例3，用林木穴盘在大棚苗床进行验证试验
[0075]
一种虎舌红组培苗瓶外生根的方法，包括以下步骤：
[0076]
(1)育苗盘：育苗盘为林木穴盘，长、宽、深分别为54厘米
×
28厘米
×
9厘米、上孔穴为5厘米
×
5厘米、下空穴为1.5厘米
×
1.5厘米、穴数为5
×
10的50穴(图19)；
[0077]
(2)基质及摆盘：生根基质与实施例2相同，只是不控制自来水的量，即：1～3mm颗粒状的蛭石，基质装入穴盘、压实，将穴盘放入装有自来水的盛水容器中、让基质自动吸水浸透，最后将穴盘在大棚苗床上摆放好(图19)；
[0078]
(3)插条制作：插条制作与实施例2相同，只是不控制插条的长度，即：选取丛生芽长势良好，茎段、叶片以及茸毛呈红色的瓶苗(图6)，取出瓶苗，将粗度为≥1.5mm的丛生芽切成带顶芽的茎段，并剪除茎段基部1～3cm处的叶片作为插条(图7)；
[0079]
(4)生根剂处理：生根剂处理与实施例2相同，即：生根剂为iaa(吲哚乙酸)，浓度为150mg/l的溶液，制作好的插条用橡胶圈绕成捆，并将插条基部1～3cm处浸泡在生根剂溶液中，浸泡时间15min(图8)；
[0080]
(5)扦插方法：每穴1株，插入深度1～3cm、压实，扦插完成后，用喷雾器喷洒使插条与基质密切接触；
[0081]
(6)培养条件：塑料大棚内，苗床上搭小拱棚、高度60～80cm，扦插完成后小拱棚上覆膜并压实，常温与自然光照培养；
[0082]
(7)养护管理：虎舌红混合无性系在大棚苗床扦插培养20d左右开始生根(图20)，30d左右时已生出2级侧根且长势旺盛、平均根长3.40cm、平均根点4.7个、根幅4～5cm(图21)；
[0083]
(8)促根壮苗：虎舌红混合无性系持续培养30d时，打开塑料膜的两端透气，用浓度为1g/l的花多多和多菌灵溶液喷洒幼苗2～3次、间隔5～7d/次，促根壮苗15～20d(培养45～50d)的幼苗即可移栽上盆，调查提出培养53d的虎舌红幼苗的平均根长6.5cm、平均根点5.5个、根幅6～8cm(图22、图23)。
[0084]
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。