专利名称:利用葡萄皮渣和酒糟固态发酵生产木霉菌的制作方法
技术领域：
本发明属于生物农药技术领域：
。
技术背景葡萄酒生产过程中要产生大量葡萄皮渣，这些葡萄皮渣主要是由葡萄皮、葡萄籽以及梗、叶组成，如果不妥善处理会对环境带来严重污染。近来的研究表明，葡萄籽可以用来生产葡萄籽油和抗氧化剂(原花青素)等附加值较高的产品，而葡萄皮、梗和叶等除了少量用来作饲料(需严格检测农药残留)外，大部分用堆肥的方法处理。而这些皮渣中含有较高含量的纤维素类物质和少量葡萄糖、果糖、有机酸以及其他多糖类物质，可以为微生物生长提供良好营养，是微生物资源开发比较理想的营养来源之一。
木霉菌(Trichoderma sp.)在自然界中分布广泛，是一种重要的生防菌，对多种植物真菌病害均有较好的防治作用。木霉菌生防作用的生化机制主要包括代谢几丁质酶、β-1，3-葡聚糖酶、蛋白酶等多种胞外酶，强烈水解植物病原真菌的细胞壁，从而杀灭病原菌；降解真菌细胞壁释放出诱导剂，激发植物的防御反应；代谢产生戊酮、辛酮、萜类、氨基酸衍生物、木霉菌素、胶霉毒素、绿木霉素、抗菌肽等抗菌素类物质，抑制病原菌的生长；产生植物防御反应的激发子，诱导植物抗病性；增强植物组织过氧化物酶、超氧化物歧化酶与过氧化氢酶、多酚氧化酶活性，保护膜脂不被氧化；产生毒性蛋白，或以多种机制的协同拮抗作用，抑制病原菌生长与繁殖。
文献报道的作为生防剂的木霉菌生产方法所采用的培养基以粮食为主。如中国专利(公开号CN 1554242A)中公开了一种木霉菌的生产方法，其培养基主要是颗粒直径在1-5毫米之间的小米、稻米、玉米、大麦、小麦或高梁。中国专利(公开号CN 1422946A)中公开了一种木霉菌的生产方法，其生产原料主要是大麦、麸皮、莜麦等。而以葡萄皮渣和酒糟作为培养基来生产木霉菌生防剂的方法还未见报道。木霉菌可以代谢多种纤维素和半纤维素酶，能有效利用富含纤维素类生物质，在葡萄皮渣上生长良好。酒糟中含有大量酵母细胞以及其它葡萄酒生产过程中剩余的养分，可以为木霉菌生长提供多种营养。因此，用葡萄酒生产过程产生的废弃物来生产木霉菌生防剂不仅可以降低生产成本，而且可以有效处理废弃物。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用葡萄酒生产过程产生的废弃物(葡萄皮渣和酒糟)来生产木霉菌生防剂方法。
本发明所述的木霉菌生防剂的生产方法如下1、葡萄皮渣预处理由于葡萄籽中含有丰富的油脂和抗氧化剂，因此需要将葡萄籽先从皮渣中筛分出来，用作生产高附加值产品的原料。用筛分机筛分后的去除葡萄籽的皮渣晒干或烘干到含水量10％以下保存备用。
2、酒糟预处理葡萄酒的酒糟中酒精含量8％左右，采用蒸馏方法处理，并回收酒精，处理后的酒糟酒精含量小于1％。
3、液体种子制备向处理后的酒糟中添加2-5倍的水，高压灭菌，接种木霉菌孢子，于25-35℃，耗氧深层培养24-48小时，得到液体种子。木霉菌菌种为绿色木霉(Trichoderma viride)、哈茨木霉(Trichoderma harziamum)、黄绿木霉(Trichodermaauxeoviride)或康氏木霉(Trichoderma koningii)。
4、固态发酵向经过预处理的葡萄皮渣中加入1-3倍重量的液体种子，或先加入经过稀释的酒糟1-3倍重量，然后接种木霉菌孢子或液体种子。于20-35℃，静态培养5-15天。
5、后处理培养好的物料经干燥处理后，添加稳定剂和助剂，粉碎，包装。
由本发明技术方案生产的木霉菌生防剂能够高效防治多种真菌类植物病害，而且无公害，生产成本低。以下通过具体实施例详细说明本发明的实施，目的在于帮助读者更好地理解本发明的精神实质，但不作为对本发明实施范围的限定。
实施例1原料预处理将刚出厂的葡萄皮渣用筛分设备分离出葡萄籽，将去籽的葡萄皮渣尽快晒干或烘干，以免发霉变质。采用蒸馏方法处理葡萄酒的酒糟，并回收酒精。
液体种子制备向处理后的酒糟中添加3倍的水，用氢氧化钠调节其pH值到6.0。于121℃，灭菌15分钟，接种木霉菌孢子，于30℃，摇瓶200转/分，培养24小时，得到液体种子。
发酵产品称取去籽后，经干燥处理的葡萄皮渣20公斤，加入5倍稀释的酒糟(预先调节pH到中性)30公斤，然后接种木霉菌液体种子3升，充分搅拌均匀。于30℃，固态发酵反应器中培养10天。培养好的物料经干燥处理后，添加稳定剂和助剂，粉碎，包装。
实施例2液体种子制备向处理后的酒糟中添加3倍的水，用氢氧化钠调节其pH值到6.0。于121℃，灭菌15分钟，接种木霉菌孢子，于30℃，搅拌式深层发酵反应器中，耗氧培养24小时，得到液体种子。
发酵产品称取去籽后，经干燥处理的葡萄皮渣20公斤，加入木霉菌液体种子35升，充分搅拌均匀。于30℃，固态发酵反应器中培养10天。培养好的物料经干燥处理后，添加稳定剂和助剂，粉碎，包装。
实施例3称取去籽后，经干燥处理的葡萄皮渣20公斤，加入5倍稀释的酒糟(预先调节pH到中性)35公斤，然后接种木霉菌固态发酵产物3公斤，充分搅拌均匀。于30℃，固态发酵反应器中培养10天。培养好的物料经干燥处理后，添加稳定剂和助剂，粉碎，包装。
权利要求
1.一种木霉菌生防剂的生产方法，其特征在于，该生产方法是以葡萄酒生产过程中产生的废物葡萄皮渣和酒糟为生产原料进行固态发酵生产木霉菌。
2.权利要求
1所述的木霉菌生防剂的生产方法，其特征在于，木霉菌菌种为绿色木霉(Trichoderma viride)、哈茨木霉(Trichoderma harziamum)、黄绿木霉(Trichodermaauxeoviride)、康氏木霉(Trichoderma koningii)。
3.权利要求
1所述的木霉菌生防剂的生产方法，其特征在于，其生产原料，葡萄皮渣先经过筛分处理，回收葡萄籽；酒糟先经过蒸馏处理，回收酒精。
4.权利要求
1所述的木霉菌生防剂的生产方法，其特征在于，液体种子制备是向蒸馏处理后的酒糟中添加2-5倍的水，高压灭菌，接种木霉菌孢子，于25-35℃，耗氧深层培养24-48小时。
5.权利要求
1所述的木霉菌生防剂的生产方法，其特征在于，固态发酵培养基是由去除籽的葡萄皮渣与蒸馏出酒精的酒糟和水混合制备而成。固态发酵是在20-35℃，静态培养5-15天。
专利摘要
本发明涉及一种木霉菌生防剂的生产方法，属于生物农药技术领域：
。该方法主要是以葡萄酒生产过程中产生的葡萄皮渣和酒糟为生产原料，采用固态发酵的方法生产木霉菌生防剂。生产工艺包括(1)葡萄皮渣经筛分处理，回收葡萄籽；(2)酒糟经蒸馏处理，回收酒精；(3)去除酒精的酒糟经稀释后与去除籽的葡萄皮渣混合配制固态发酵培养基；(4)培养基经灭菌后接种木霉菌种进行固态发酵；(5)发酵产物经干燥处理后添加稳定剂和助剂，粉碎、包装。该工艺生产的木霉菌生防剂能有效防治多种植物真菌病害，并且产品生产成本低，还可以有效处理废弃物，减少环境污染。
文档编号A01N63/04GKCN1718724SQ200510085465
公开日2006年1月11日 申请日期2005年7月21日
发明者白志辉, 郝春博, 金波, 王晓谊, 张占营, 张洪勋 申请人:中国科学院生态环境研究中心导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan