专利名称：大孢耳霉及其对蚜虫的防治的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种大孢耳霉以及利用大孢耳霉对蚜虫及螨虫的防治，特别是对烟草蚜虫的防治。
烟蚜[Mygus Persicae(Sulger)]与其它蚜虫一样，具有生活周期短，繁殖能力强，世代重叠严重，寄生范围广等特点。烟蚜群集于烟株顶端嫩叶上为害，造成烟株生长缓慢，叶片卷曲，并传播病毒病，使烟草产量降低，品质变劣，严重者，使整株烟草坏死。目前，由于单一使用化学农药防治，导致害虫抗药性增强，同时使蚜虫的天敌受到伤害，降低了烟草品质，污染了环境，并危害人体健康。
本发明的目的在于提供一种利用生物因子，即大孢耳霉来防治烟蚜，同时发挥烟田中蚜虫天敌的总体效能，达到减少农药残毒对烟草品质的不良影响。
图1中Ⅰ为大孢耳霉“88-Ⅰ”的分生孢子，Ⅰ为88-Ⅰ的休眠孢子。
图2中为88-Ⅰ的菌落特征。
图3中为88-Ⅰ在蚜尸上的休眠孢子。
图4为88-Ⅰ的假根。
图5为寄生拟褐飞虱上的大孢耳霉的假根。
一、菌株的分离筛选及确定1、菌种的分离及保芷从烟田中选取被大孢耳霉侵染的新鲜暗黄色的蚜尸，带回实验室内，自然风干后，用昆虫针的一头插住蚜虫，另一头灭菌后插入已制备好的平板培养基中，使蚜尸立于培养基的上面，而后置于25℃恒温箱中，待大孢耳霉的孢子散射于培养基中，在无菌条件下挑取边缘无杂菌的孢子转接于另一平板培养基中培养，从而得到有效的大孢耳霉[(Conidiobolws majos Rem.et kell.)异名(Entomophthora major Gustafs菌株。该菌株被命名为88-Ⅰ菌株，采用斜面原种保存于4℃的冰箱中，每2周转接一次。
2、88-Ⅰ菌株的生物学特性蚜虫暗黄色、无囊状体，假根单丝状(如图4)。初生分生孢子球形，乳突明显(如
图1)，大小为41-63×30-57Nm，平均50×46Nm。休眠孢子球形(如
图1)，外壁光滑，直径为52-70Nm，平均为62Nm，壁厚2.5-6.5Nm。
来源于马铃薯综合培养基的分生孢子大小为20-72×16-63Nm，平均为46×38Nm，休眠孢子大小为19-79Nm，平均为46Nm。
3、88-Ⅰ菌株的菌学特征及生理生化特征菌落在马铃薯综合培养基上生长迅速，菌落表面具有网状皱褶线，似鱼网状，菌落初期为米黄色，后期为乳黄色。大孢耳霉对糖的利用不显著，它对糖的利用顺序表现为可溶性淀粉＞蔗糖＞葡萄糖。大孢耳霉在有N，C源的培养基上均能生长，但有蛋白胨、酵母膏、蛋黄存在时生良好，它对N源的利用顺序为蛋白胨＞酵母膏＞鱼粉＞黄豆粉。大孢耳霉生长及产孢的PH值范围在4.5-9.5，其中以6.0-7.5较为适宜，以6.5最佳。其生长的温度范围为10-40℃，其中以20-30℃较为适宜，以30℃最佳。
4、88-Ⅰ菌株与寄生于拟褐飞虱上的大孢耳霉的生物学特征的区别A、88-Ⅰ菌株
(1)蚜尸及培养基上均产生休眠孢子(如
图1、如图3)(2)假根单丝状，无吸盘(如图4)B、寄生于拟褐飞虱上的大孢耳霉(1)蚜尸及培养基上均无休眠孢子(2)假根有吸盘(如图5)由上可见，88-Ⅰ菌株为大孢耳霉新菌株。该菌株现已保芷在中国微生物菌种保芷管理委员会普通微生物中心，保芷号为CGMCC NO.170二、杀虫物的培养及提取本发明是利用大孢耳霉的分生孢子、休眠孢子及菌丝体所产生的毒素以及它们的侵染性，对各类蚜虫及螨类进行防治的。我们将大孢耳霉的分生孢子、休眠孢子及菌丝体统称为杀虫物。其具体培养提取工艺过程如下。
(1)斜面菌种用马铃薯综合培养基或常规培养基(如萨氏培养基PDA培养基)来保存菌种，菌种置于4～5℃的冰箱中，保存期为2～6周，若采用低温(-20℃)冷藏法保存，可保存10以上。
(2)平板培养用马铃薯综合培养基制成平板培养基，接菌后，于20～35℃左右的温度下培养2-4天，其中以28℃左右条件培养2-3天最佳。
(3)三角烧瓶振荡培养用马铃薯综合液体培养基(未加琼脂)分装于三角烧瓶中(50ml或30ml)，每瓶装液体培养基的量为瓶容量的1/3，然后接入0.1%的来源于平板培养基的菌种，在20～30℃条件下培养2～5天，其中以28℃条件培养2-3天最佳，三角烧瓶接种后的振荡次数为90～180次/分钟。
(4)发酵培养用鱼粉加豆粉(或地瓜粉)制成液体培养基，其配方为鱼粉2%+豆粉2%(或地瓜粉8%)，其余为无菌水，在该培养基中于25～30℃温度下培养48～72小时。
(5)杀虫物的回收及干燥用板筐过滤法将上述发酵液中的滤液与滤渣分离，滤渣在温度为20°～30℃相对温度为80～90%的条件下自然干燥，即可得杀虫物纯粉。每100ml培养物可得到5g纯菌丝，菌丝体经上述条件下可得到2g孢子纯粉，每克孢子含孢子量为40亿。
(6)杀虫物的应用及其使用效果以每20公斤水加入0.4+g纯粉制得的喷雾剂其杀虫效果经济有效喷施杀虫物悬浊液后，蚜虫即停止取食，呈现烦燥不安，2-3小时后开始死亡，24小时内蚜虫死亡率可达60%以上，72小时内，死亡率可达90%以上。
上述马铃薯综合培养基的配方为马铃薯40g+蛋白胨2g+酵母膏2g+葡萄糖20g+水100ml(固体培养基加18-20g琼脂)。
本发明具有以下几方面的优点(1)生产技术简单制取大孢耳霉杀虫物所需的设备及培养过程简单。
(2)杀虫效果好且稳定，在72小时内，对蚜虫及螨虫的杀灭率可达90%以上。
(3)杀虫物贮存容易。
(4)对温血动物安全无毒，对蚜虫的天敌无杀伤的作用。
(5)减少农药残留残毒对烟草及其它农作物产生的不良影响，可增加出口创汇。
(6)保护环境，保护生态平衡，保证人体健康。
权利要求
1.一种大孢耳霉(保存于CGMCC.NO.170保芷日期92.1.23)杀虫物(即大孢耳霉的分生孢子、休眠孢子、菌丝体)的发酵提取方法(该方法所用的大孢耳霉是从烟田中罹病的蚜虫体内分离筛选得到的)为一般的微生物发酵提取方法。
全文摘要
本发明涉及一种大孢耳霉以及利用大孢耳霉对蚜虫及螨虫的防治，特别是对烟草蚜虫的防治。本发明所述的大孢耳霉是一种从烟草中罹病的蚜虫体内分离培养出的大孢耳霉新菌株，该菌株现已保存于CCMCC、保藏号170、保藏日期92.1.23。本发明的大孢耳霉杀虫物(即其分生孢子、休眠孢子、菌丝体)的发酵提取方法为一般的微生物发酵提取法，其所需的设备及培养过程简单，杀虫率可达90％以上，且贮存容易。
文档编号A01N63/02GK1068473SQ92103608
公开日1993年2月3日 申请日期1992年5月13日 优先权日1992年5月13日
发明者陈家骅, 张玉珍, 刘明晖 申请人:福建农学院, 中国烟草总公司福建省公司