专利名称：含有细菌的农用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用一种组合物处理植物，该组合物含有一种农业上有效的活性成分，和一种含有选自芽孢杆菌属或土壤细菌的细菌的大体上纯的培养物的强化添加剂。所添加的培养物可以是细胞、芽胞、或悬浮液形式。
背景技术：
农药生产商一直在寻找提高使用在植物上的活性成分的效力的办法。当所使用的材料是植物生长调节剂(生长抑制或生长促进)、除草剂或内吸收剂(例如，杀昆虫剂或杀真菌剂)时，特别希望如此。进入植物的运输机制，和在各种植物组织之间的转移是很重要的，而且在某些场合下，可能是决定所使用成分的效力的主要因素。对某些活性成分而言，运输机制的改善可能表现为在现有使用量下效果的提高，需要更少的活性成分，或能处理新的物种的能力，该物种以前对该活性成分有抗性。
助壮素是一种活性成分，对该成分而言，植物的吸收或输送是重要的。助壮素(N，N-二甲基哌啶阳离子氯化物)被作为活性成分每年一次地使用在上百万英亩的棉花上，以便抑制棉株的营养生长，并加强保果作用。助壮素对马铃薯、甘薯、花生、葡萄、玉米、小麦、柑橘、番茄和洋葱也具有某些作用。
助壮素对棉花植株具有抑制营养生长的作用，从而强迫该植株将其能量用于果实(棉铃)生产。对开始出现过度营养生长的植株适当使用助壮素，可以保持或提高棉株的产量，而不会损害该植株。当作物生长在肥沃的土壤中时或在有利于植株生长而不是果实形成的天气条件之后，特别需要所述生长抑制作用。
棉花植株具有可预见的生活周期和生长期。在将棉花种子种植到地沟中7-10天之后，长出棉花植株。棉花植株的根系生长，和通过茎杆进行的植株高度伸长，以及分支生长是以被称为“营养生长”的形式进行的，这种生长一直持续到第4-8节。然后，棉株产生一个生殖枝(第一“结实位点”)，而且，随后的所有分支都是生殖性的。棉花种植者试图控制植株的生长，以确保营养生长与生殖生长(结铃)的比例有利于生殖生长的期望范围。
棉花种植者一般喜欢看到主茎节之间的长度大约为2英寸(5cm)。这一比例意味着过分生殖生长(结铃)或过分营养生长之间的平衡，过度的生殖生长会导致植株的生长超过营养生长的速度，并在产量达到最大之前结束生长，过度的营养生长会减少成熟棉铃的数量。
将大部分可利用植物能量用于营养生长的棉株被称作“疯长棉”，这种植株产生较少的、随后能成熟的棉铃，并在较长时间内易受极端天气的影响。表现出疯长迹象的棉花可很容易地通过相对结铃植株的异常植株高度和生殖性主茎节的数量辨认。可将助壮素用于终止棉花的疯长，这一目的是通过改变棉花植株的生长特性而实现的。
一般，主茎的分支总是从主茎的交替一侧伸出的。每一个分支位点被称作一个“节”，在带有真叶的第一座果分支形成之前，在子叶上面会形成5-7个节。节的计数始于植株的底部，并沿主茎向上延伸。“节间长度”是分支点之间的距离，大约每隔3天形成一个新的节。为了进行测量和比较，通常使用第8节以上的节数和节间长度，以便消除植株间座果节的变化，因为座果分支必需是由第8节形成的。因此，座果节的计数通常是从第1生殖节开始的，该生殖节通常为第7或第8节。
棉株上的座果位点被称为“棉蕾”。每一个座果枝可形成1-6个位点，通常大约3个座果位点(“棉蕾”)，在每一个分支上形成棉蕾的时间间隔大约为6天。棉花植株上的新的棉蕾和生殖生长的开始被称作“针头”棉蕾，因为其大小几乎不可见。大约5-10天之后，该棉蕾已长至大约接近火柴头大小，这一阶段在植物周期中被称作“火柴头棉蕾”。火柴头棉蕾继续生长至接近普通成年人指甲大小，然后开花(“初花”)。3天以后，在花的下面形成棉铃。在初花之后大约30天，产物棉铃已完全成熟，并可以采收。总体上讲，棉花总产量的大约80％是在初花期之后的头3周内形成的，而总产量的95％是在初花期的5周之内形成的。
一般，用两种方法中的一种将助壮素使用到棉花植株上。到1986年为止，一直使用的方法是在初花期给每英亩棉花一次性使用8-16盎司的重量百分比为4.2％的溶液。这种一次性处理的方法确实能控制植株的高度，不过，已发现植物产量偶尔会降低，特别是在使用期间或之后植株受到胁迫时。
从1987年以后的趋势是，通过一系列的应用来使用助壮素，每一次使用的剂量都低于单次使用的剂量。第1次处理是在火柴头棉蕾期进行的，7-14天之后进行第2次处理。两次处理的使用量均在每英亩大约0-8盎司重量百分比为4.2％的溶液，具体使用量取决于棉花植株是否出现以下迹象受到胁迫(不使用)，中度生长(每英亩大约2盎司溶液)，或活跃生长(每英亩大约4盎司溶液)。然后，以7-14天的间隔再进行两次处理，使用量可提高到大约8盎司重量百分比为4.2％的助壮素溶液，具体用量取决于大田中的营养生长量。由个别种植者进行的进一步试验，可以得出各种多次使用的量。
如果能将助壮素的使用整合成一个处理系统的话将是有利的，这样可以提高根、茎、叶中的植物组织质量，以提供更高水平的养分转移，与此同时，限制营养生长，以提高果实产量。
植物除草剂技术一直希望提高杀草效力，而又不会相应增加除草剂的用量。很多除草剂也可以使用一种活性促进剂，而不提高所使用的除草剂的量。农场主和除草剂生产商同时面临着控制杂草和有害植物生长而又不超过验证过的除草剂使用量的需要，如果植株能从根本上得到控制的话。某些植物，如佛罗里达马齿苋，公牛草，狗牙根，毛叶泽兰，和樱草都是高度抗除草剂的，已证实对这些植物有效。
如果具有一种能提高诸如除草剂的农业上的活性成分的效力，而又不提高该活性成分的用量的方法将是十分有用的。
发明概述本发明的一个目的是提供一种组合物和使用方法，以提高农业上有效的活性成分的效力。
本发明的另一个目的是，提供一种组合物和将该组合物用在结实植物和种子上的方法，以增加处理植株上的座果位点数，其目标是提供较高产量的果实。
本发明的再一个目的是提供一种组合物及其使用方法，其中，处理过的植株能以更健康的状态生长。
按照本发明的上述及其它目的(这些目的通过本说明书可以看出)，本发明的组合物包括(a)一种农业上有效的活性成分，和(b)一种含有培养物的强化成分，该培养物含有细胞、培养物、或悬浮液形式的源于芽孢杆菌属或土壤细菌的细菌，其用量足以提高所述活性成分的效果。优选地，所述强化成分在与诸如助壮素的植物生长抑制剂组合使用时不含植物生长激素，助壮素能抑制处理植株中的植物生长激素。
本发明的组合物能提高所使用的农业上的活性成分的效力。通常使用相同量的活性材料会更有效。使用较少量的活性成分即可取得与较高常规用量的相同效果。另外，用本发明组合物处理过的植株更为健壮，其附带优点是对病害或其它胁迫作用具有更高的抗性，并具有较大数量的座果位点和较高的产量。
详述本发明提供了一种用含有一种农业上有效的活性成分和一种含有选自芽孢杆菌属或土壤细菌的细菌培养物的强化成分的组合物处理植物的方法，所述强化成分的用量足以提高在使用该强化成分同时、之前、或之后使用的农业上有效的活性成分的效果。所述提高的效果归功于含有细菌的强化成分，该强化成分可用于降低农业上有效的活性成分的用量，或在以相同的用量使用所述活性成分时，由所述芽孢杆菌提高所使用的农业上有效的活性成分的效果。所述提高了的效果可用于控制用常规除草剂难于控制的杂草。
含有细菌的强化成分所述强化成分含有源于芽孢杆菌属或土壤细菌的细菌的芽胞、培养物、和悬浮液。优选地，用于强化成分的细菌为芽胞形式，因为需要对温度、pH、盐度进行适当调整。
适用于本发明的细菌包括具有能以任何机制提高农业上有效的活性成分的效果的能力的细菌。通过阅读本文所提供的说明和实例，本领域普通技术人员可以了解筛选具有生物活性的细菌菌株的方法，该菌株能提高植物生长调节剂、除草剂、内吸杀真菌剂、或内吸杀昆虫剂的效果的能力。例如，可以在标准实验室条件下培养并维持诸如蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的候选细菌菌株。(例如，参见Sambrook等，“分子克隆实验室手册”，冷泉港实验室出版社(1989))。可以选择对诸如除草剂或植物生长调节剂的特定农业上有效的化合物敏感或具有抗性的特殊植株。例如，如在本文的实施例部分所提出的，可将棉花用于评价与植物生长调节剂组合的细菌菌株的生物活性，其活性体现在座果位点的数量和/或所产生的棉铃数量，并与仅用植物生长调节剂或细菌处理的类似的植株进行比较。或者，可以在受控制的条件下种植易感诸如番茄叶枯病、马铃薯斑点病、小麦茎锈病、玉米黑粉病、或各种植物物种的叶锈病的某些真菌病害的植物，用一种合适的杀真菌剂、杀真菌剂与候选细菌菌种或单用细菌菌种处理，所述处理是在用所述致病生物接种植物之前、同时或之后进行的，以评价所述菌种提高所述杀真菌剂的活性的能力。以上类型的试验可以在大田中，在半控制的条件下，如在温室中进行，或者在相对控制的条件下进行，如在生长箱中进行。以上试验涉及对生物进行的常规筛选，筛选其在已知植物种上对化合物或组合物的强化作用，而用于评价其作用的参数同样是已知的，并且是用常规方法测定。
可将所述类似类型的筛选用于本文所披露的细菌菌株，以产生对特定的农业上有效的活性成分的强化效果，即通过由美国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为ATCC55675的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株提供对植物生长调节剂助壮素和除草剂阿特拉津产生强化作用，以筛选对诸如内吸杀昆虫剂和内吸杀真菌剂的其它农业上有效的活性成分具有潜在强化作用的细菌菌种。
特别优选的是土壤细菌的培养物、芽胞、和悬浮液，所述土壤细菌是在当地的土壤中繁茂生长的植物类型的根部之间和之中出现的细菌。以约0.1×1010-10×1010CFU/英亩的用量叶面喷施所述当地的土壤细菌，可以增强与植物生长和繁殖相关的天然机制，使其达到足于使所述农业上的活性成分对处理的植株产生强化活性的程度。
可将芽孢杆菌属和已知土壤细菌菌种的多种细菌菌种用于本发明中。以下是用于本发明的菌种的目录来自芽孢杆菌属的细菌酸热芽孢杆菌(Bacillus acidocaldarius)酸土芽孢杆菌(Bacillus acidoterrestris)嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)蜂房类芽孢杆菌(Bacillus alvei)短小芽孢杆菌(Bacillus aminoglucosidicus)噬胺芽孢杆菌(Bacillus aminovorans)解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)溶淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolyticus)炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)解硫胺素芽孢杆菌(Bacillus aneurinolyticus)蜂芽孢杆菌(Bacillus apiarius)固氮类芽孢杆菌(Bacillus azotofixans)短芽孢杆菌(Bacillus brevis)栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)卵头芽孢杆菌(Bacillus capitovalis)蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)丛毛芽孢杆菌(Bacillus cirroflagellosus)凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)结肠臭芽孢杆菌(Bacillus colofoetidus)环庚基芽孢杆菌(Bacillus cycloheptanicus)植表芽孢杆菌(Bacillus epiphytus)苛求芽孢杆菌(Bacillus fastidiosus)丝状菌落芽孢杆菌(Bacillus filicolonicus)坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)弗氏尿杆菌(Bacillus freudenreidii)巨大芽孢杆菌(Bacillus fructosus)枯草芽孢杆菌(Bacillus globigii)圆孢芽孢杆菌(Bacillus globisporus)异常芽孢杆菌(Bacillus insolitus)左旋乳酸芽孢杆菌(Bacillus laevolacticus)幼虫类芽孢杆菌(Bacillus larvae)侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)缓病芽孢杆菌(Bacillus lentimorbus)迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)
地衣芽孢杆菌(Bacillus lechenigormis)软化芽孢杆菌(Bacillus macerans)马阔里类芽孢杆菌(Bacillus macquariensis)摩洛哥芽孢杆菌(Bacillus maroccanus)延长芽孢杆菌(Bacillus macroides)蜡状芽孢杆菌(Bacillus medusa)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)枯草芽孢杆菌(Bacillus nigrificans)饲料芽孢杆菌(Bacillus pabuli)太平洋芽孢杆菌(Bacillus pacificus)泛酸芽孢杆菌(Bacillus pantothenticus)副短芽孢杆菌(Bacillus parabrevis)巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)日本甲虫芽孢杆菌(Bacillus popilliae)Bacillus pulvifa尘埃芽孢杆菌(Bacillus pulvifaciens)短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)灵菌芽孢杆菌(Bacillus prodigiosus)嗜冷芽孢杆菌(Bacillus psychrophilus)冷解糖芽孢杆菌(Bacillus psychrosaccharolyticus)消旋乳酸芽孢杆菌(Bacillus racemilacticus)球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)热反硝化芽孢杆菌(Bacillus thermodenitrificans)解硫胺素芽孢杆菌(Bacillus thiaminolyticus)苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)枯草芽孢杆菌(Bacillus uniflagellatus)强壮芽孢杆菌(Bacillus validus)
土壤细菌带疫无色杆菌(Achromobacter pestifer)真养产碱菌(Alcaligenes eutrophus)广泛产碱菌(Alcaligenes latus)自养无枝酸菌(Amycolata autotrophica)过渡原囊菌(Archangium gephyra)粘节杆菌(Arthrobacter viscosus)褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)Bacillus acidovorans短芽孢杆菌(Bacillus brevis)蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)异常芽孢杆菌(Bacillus insolitus)侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)摩加夫芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)覃状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)冷解糖芽孢杆菌(Bacillus psychrosaccharolyticus)球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)粘稠芽孢杆菌(Bacillus viscosus)吸水黑蓝钦氏菌(Chainia hygroatrocyanea)不同梭菌(Clostridium absonum)深褐孢囊杆菌(Cystobacter fuscus)约氏噬纤维菌(Cytophaga johnsonae)粘着剑菌(Ensifer adhaerens)敏捷生丝微菌(Hyphomicrobium facilis)藤黄微球菌(Microccoccus luteus)青铜小单孢菌(Micromonospora chalcea)青蓝小单孢菌(Micromonospora coerulea)灰色小单孢菌(Micromonospora grisea)多弯小单孢菌(Micromonospora polytrota)Microteraspora glauca田野分枝杆菌(Mycobacterium agri)爱知分枝杆菌(Mycobacterium aichiense)金色分枝杆菌(Mycobacterium aurum)千田分枝杆菌(Mycobacterium chitae)楚布分枝杆菌(Mycobacterium chubuense)迪氏分枝杆菌(Mycobacterium diernhoferi)偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)副偶然分枝杆菌(Mycobacterium parafortuitum)土分枝杆菌(Mycobacterium terrae)抗热分枝杆菌(Mycobacterium thermoresistibile)珊瑚状粘球菌(Myxococcus coralloides)橙色粘球菌(Myxococcus fulvus)大孢粘球菌(Myxococcus macrosporus)黄色粘球菌(Myxococcus xanthus)侵蚀侏囊菌(Nannocystis exedens)多形亚硝化叶菌(Nitrosolobus multiformis)巴西诺卡氏菌(Nocardia brasiliensis)白色类诺卡氏菌(Nocardioides albus)人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)纤维多布菌(Polyangium cellulosum)铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)格氏假单胞菌(Pseudomonas glathei)水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)尖形糖杆菌(Saccharobacterium acuminatum)绿色糖单孢菌(Saccharomonospora viridis)粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)
阿南德氏链霉菌(Streptomyces anandii)金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)教酒链霉菌(Strptomyces chartreusis)深蓝链霉菌(Strptomyces cyaneus)Strptomyces cymarogenes淀粉酶产色链霉菌(Strptomyces diastatochromogenes)黄灰链霉菌(Strptomyces flavogriseus)胶样链霉菌(Strptomyces gelaticus)吸水链霉菌(Strptomyces hygroscopecus)靛蓝色链霉菌(Strptomyces indigocolor)卡特拉链霉菌(Strptomyces katrae)利波曼链霉菌(Strptomyces lipmanii)长孢链霉菌(Strptomyces longisporus)堆孢链霉菌(Strptomyces massasporeus)高贵链霉菌(Strptomyces nobilis)土味链霉菌(Strptomyces odorifer)大宫链霉菌(Strptomyces omiyaensis)微小链霉菌(Strptomyces parvulus)暗产色链霉菌(Strptomyces phaeochromogenes)假浅灰链霉菌(Strptomyces pseudogriseolus)玫瑰黄链霉菌(Strptomyces roseoflavus)锈赤蜡黄链霉菌(Strptomyces rubiginosohelvolus)鲁地链霉菌(Strptomyces rutgersensis)菌核粒链霉菌(Strptomyces sclerogranulatus)毒三素链霉菌(Strptomyces toxytricini)紫红链霉菌(Strptomyces violaceoruber)紫色链霉菌(Strptomyces violaceus)略紫链霉菌(Strptomyces violarius)普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris)脱氮硫杆菌(Thiobacillus denitrificans)排硫杆菌(Thiobacillus thioparus)无荧光假单胞菌(non-fluorescent pseudomonas)
根瘤菌属(Rhizobium)土壤杆菌属(Agrobacterium)产尿素棒杆菌(Corynebacterium ureafaciens)产脲节杆菌(Arthrobacter ureafaciens)铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)苛求芽孢杆菌(Bacillus fastidosus)脱氮微球菌(Micrococcus dentrificans)草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)产气气杆菌(Aerobacter aerogenes)串球镰孢(Fusarium moniliforme)荚膜组织孢浆菌(Histoplasma capsulata)产黄青霉(Penicillinum chrysogenum)特别有用的是枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌是在全球范围内天然存在的土壤腐生菌。在1992年版的American Type Culture Collection中列举了182种不同的枯草芽孢杆菌菌株，该资料被收作本文的参考文献。以下是可用于本发明的枯草芽孢杆菌目录枯草芽孢杆菌(B.Subtilis)ATCC 10783ATCC 15818ATCC 15819ATCC 15245纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)ATCC 15134枯草芽孢杆菌(Bacillus uniflagellatus)ATCC 13542ATCC 13472ATCC 15575ATCC 27505ATCC 21697裂腈无色杆菌(Achromobacter nitriloclastes)ATCC 15811ATCC 4925枯草芽孢杆菌(Bacillus nigrificans)ATCC 27370ATCC 6051aATCC 7003ATCC 11838ATCC 15563ATCC 33234ATCC 25369ATCC 27689ATCC 55033ATCC 13933ATCC 15244ATCC 27328ATCC 12695ATCC 12100ATCC 21554ATCC 21555ATCC 15561ATCC 15562ATCC 9799ATCC 12711ATCC14593ATCC4944ATCC31002ATCC31004ATCC9943ATCC13407ATCC7067ATCC29056ATCC31524ATCC31526ATCC21359ATCC21360ATCC13954ATCC13955ATCC15044ATCC33677ATCC31003ATCC31522ATCC465N.ATCC12432ATCC43223ATCC13952ATCC13953ATCC14662ATCC15039ATCC15040ATCC15041ATCC15042ATCC15043ATCC15181ATCC15182ATCC15183ATCC15184ATCC21183ATCC21336ATCC49343ATCC6537ATCC21394ATCC8473ATCC31523ATCC31525ATCC31527ATCC29233ATCC14660
ATCC14661ATCC31268ATCC4925ATCC55405ATCC9524ATCC15476ATCC23858ATCC23859ATCC7060ATCC7058ATCC7059ATCC7480(Bacillus endoparasiticus)ATCC21584ATCC31022ATCC21331ATCC21332ATCC21777ATCC21778ATCC6598地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ATCC49822ATCC23857ATCC19221ATCC9858ATCC21742ATCC4529ATCC35148ATCC33608ATCC19549ATCC19550ATCC21556ATCC31340ATCC49760ATCC53325ATCC14807ATCC21228ATCC15512ATCC15841ATCC10774ATCC31091ATCC31092ATCC31094ATCC31096ATCC31097ATCC35946ATCC39374ATCC11774ATCC15116ATCC35021ATCC31954ATCC19062ATCC23059ATCC53115ATCC15115ATCC13956ATCC21952ATCC82ATCC21603ATCC31785ATCC21697ATCC15477ATCC31098ATCC19162ATCC14617ATCC14618
ATCC33713ATCC33714ATCC55422ATCC6461ATCC21007ATCC21770ATCC6984ATCC19163ATCC21663ATCC19217ATCC19219ATCC19220ATCC21005ATCC21006用于本发明的优选枯草芽孢杆菌菌株包括GB03。以前，枯草芽孢杆菌菌株GB03被认为是生物杀真菌剂，并被商业化用作种子处理剂，该处理剂由Gustafson公司(Plano，德克萨斯75093)以KODIAKTMHB或GUS2000TM为商标出售(EPA注册号7501146)。该产品是以2.75％的粉状制剂形式出售，每一克该粉状制剂中含有不少于5.5×1010个活性芽胞，并且以每100磅种子2-4盎司的用量使用。其使用指南表明，该产品仅能用于处理作物种子。据称，该菌株可以定居于发育的根系，并与有可能侵害根系的致病生物竞争。未提及叶面使用。
以下是可用于本发明的蜡状芽孢杆菌目录蜡状芽孢杆菌(B.cereus)ATCC55675(BP01)ATCC13824 NCIB2600蜡状芽孢杆菌荧光变种(Bacillus cereusvar.fluorescens)ATCC14603ATCC15816ATCC15817ATCC13472
ATCC14737ATCC9592(Bacillus metiens)ATCC27877ATCC19637ATCC11950ATCC23261ATCC6464ATCC11773黑腐欧文氏菌(Erwinia atroseptica)ATCC10876ATCC10987ATCC4342栖乳芽孢杆菌(Bacillus lacticola)ATCC21182ATCC7004乳白芽孢杆菌(Bacillus albolactis)ATCC10702ATCC12480ATCC49063ATCC2田野芽孢杆菌(Bacillus agri)ATCC19265蜡状芽孢杆菌阿莱亚种(Bacillus cereus subsp.
alesti)ATCC21634ATCC12826ATCC21768ATCC21769ATCC21771ATCC21772ATCC9139ATCC21928ATCC27522ATCC31430ATCC43881ATCC246乳病芽孢杆菌(Bacillus lactimorbus)ATCC21770蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)ATCC21929蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)ATCC13367ATCC31429ATCC31293ATCC21366凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)ATCC25621蜡状芽孢杆菌(Bacillus medusa)ATCC7039(Bacillus metiens)ATCC14893枯草芽孢杆菌(Bacillus subitilis)ATCC9818乳芽孢杆菌(Bacillus lactis)ATCC33018ATCC33019ATCC55055ATCC53522ATCC13366ATCC7064(Bacillus siamensis)ATCC11949ATCC10792蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)ATCC27348ATCC23260(Bacillus endorhythmos)ATCC13061ATCC13062巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ATCC25972ATCC14597ATCC19646ATCC49064ATCC11778ATCC39152ATCC19146FDA假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株PCI818用于本发明的优选蜡状芽孢杆菌菌株包括菌株ATCC No.55675。在另一种实施方案中，用于本发明的蜡状芽孢杆菌菌株具有ATCC No.55675的特性。在又一种实施方案中，用于本发明的枯草芽孢杆菌菌株具有ATCCNo.55675的特性。以下是可用于本发明中的巨大芽孢杆菌的目录巨大芽孢杆菌(B.Megaterium)ATCC33166ATCC33167ATCC33168ATCC33169ATCC12872ATCC33164ATCC11478ATCC33165ATCC11561ATCC11561aATCC11561bATCC11561cATCC11561dATCC11561eATCC6458ATCC6459ATCC14946ATCC27327ATCC33729ATCC9885ATCC13639ATCC13632ATCC15374ATCC49099ATCC49096ATCC43725ATCC19136ATCC25848ATCC4531ATCC13402ATCC15046ATCC15047ATCC25300ATCC19380ATCC13368ATCC21181ATCC35985ATCC39383ATCC11562ATCC15127ATCC15128ATCC7703ATCC14945ATCC15177ATCC19218ATCC25833ATCC15450ATCC19135ATCC19137ATCC21916ATCC8245ATCC15781ATCC31294ATCC15117ATCC15118ATCC19160ATCC19161ATCC89ATCC21209ATCC35076ATCC49098ATCC39118ATCC7051ATCC7052ATCC10778ATCC8011ATCC7056ATCC14581ATCC13062ATCC49097ATCC19213ATCC71ATCC35075ATCC21603ATCC21738ATCC72ATCC21737ATCC49095ATCC15451活性成分用于本发明的农业上有效的活性成分可以从多种材料中选择，这些材料能对受处理的植物的代谢产生影响并通过其代谢。为了预混合材料，需要选择活性成分，所选择的成分不会降解或者在用于保持芽胞形式的含细菌的强化成分的条件下长期储存不会受到损害。
通用名词“植物生长调节剂”包括多种以不同方式影响植物的活性成分。一般来讲，植物生长调节剂包括植物生长抑制剂，植物生长促进剂，和除草剂。
适用于本发明的植物生长促进剂包括植物生长激素，如84种已鉴定的赤霉素中的至少一种，优选GA3，GA4，GA5，GA7和GA9；细胞激动素(例如，玉米素，细胞分裂素，苄基腺嘌呤，二氢玉米素和异戊烯腺嘌呤)；植物生长素(例如，吲哚乙酸(IAA)，吲哚丁酸(IBA)，和萘乙酸(NAA))；邻-硝基苯酚钠；对-硝基苯酚钠；5-硝基-愈伤木酚钠；和2，4，5，和6碳结构的多羟基羧酸；乙烯利；和多种含氮或含磷的肥料。
适用于本发明的植物生长抑制剂包括氯化矮壮素，助壮素，和马来酰肼及其酯。上述植物生长调节剂能影响并改变植物的代谢过程，以促进或抑制植物生长。上述所有调节剂均可按照由生产商在产品标签上注明的用量和次数使用。
除草剂包括三嗪(例如，阿特拉津)，尿素，草甘膦，sulfosate，glyfosinate，和sethoxydim。
得益于增强了的植物吸收、运输、和同化过程的合适内吸剂包括内吸杀虫剂和内吸杀真菌剂。得益于本发明的植物内吸剂特别包括，杀昆虫剂涕天威，乙酰甲胺磷，虫螨威，乐果，甲拌磷，和特丁磷。
得益于本发明混合物的内吸杀真菌剂包括克啉菌，氨丙灵，二氯苯基甲乙基二氧咪唑烷羧酰胺，fosetyl-aluminum，托布津，苯菌灵，triadimeson，萎锈灵，萎锈散，多菌灵，涕必灵，托布津，乙菌定，磺嘧菌灵，和甲菌定。
可以用本发明处理的植物实际上包括生长在土壤中的、受农业上有效的活性成分影响的一切植物。典型的植物包括商品粮作物(例如，玉米、小麦和大豆)，高粱，需要和不需要的牧草，杂草，药草等。
本发明适于提高植物的果实产量，所述植物能产生座果位点，由这些座果位点长成果实。所述植物优选包括粗农业商品粮的任一种，特别是棉花，大豆，花生，葡萄，苹果，柑橘(例如，柠檬，酸橙，橙，葡萄)，浆果(例如，草莓，黑刺莓，树莓)，块茎(例如，马铃薯，甘薯)，玉米，谷类(例如，小麦，稻，黑麦)，番茄，洋葱，瓜类(例如，西瓜，黄瓜和罗马甜瓜)。
使用方法本发明的组合物可以采用液体、乳剂、悬浮液、固体颗粒、团聚体、或复合颗粒(例如，由一种惰性载体颗粒携带的活性成分固体)的各种物理形式。一般，通过常规技术将每一种物理形式的组合物施在植物叶片上。
可将革兰氏阳性细菌菌株以细胞、芽胞、培养物或其悬浮液形式用于所述活性成分中，在液体或可分散的固体形式中，所述强化成分以稳定的含水浓缩溶液形式加入喷雾箱或其它形式的液体分配容器中，所述浓缩溶液的芽胞农度相当于大约300,000菌落形成单位/毫升(CFU/ml)至大约1.5百万CFU/ml，优选大约1-1.2百万CFU/ml，制成向植物叶片喷施的组合物其用量为大约0.1×1010-100×1010CFU/英亩，优选为大约0.1×1010-10×1010CFU/英亩，最优选为大约0.5×1010CFU/英亩(0.5fl.oz./英亩浓缩液)至大约8×1010CFU/英亩(2fl.oz./英亩浓缩液)。在优选实施方案中，所述喷雾箱中还可以选择性地含有所述农业上有效的活性成分，以便同时喷施两种成分。
在播撒之前，可以对固体形式的成分进行干燥混合或制成团聚体。可将一种或几种常规佐剂用于增强分散性、降解、对叶片的附着等。
根据将所述溶液施加到植物表面的方法不同，其具体用量可有所改变。例如，飞机喷雾所采用的稀释比例和用量不同于宽幅喷雾、手压式喷雾器或撒播颗粒。可将常规装置用于喷雾。如果需要，可将所述强化成分与其它处理剂混合，并同时或用一个独立的处理步骤喷施。叶面喷施是用于提高结果植物的座果位点数量的优选方法。
还可将所述浓缩液用于制备可立即使用的、包装好的混合物。在这样制备以后，将所述强化成分在该包装容器中稀释到大约150,000-600,000CFU/ml的量，而且所使用的条件适于确保细菌成分保持其芽胞形式，但在使用以后会繁殖。
对于很多细菌来说，使用低于7的pH(即酸性pH)可以保持该细菌处于芽胞形式。如果必要，可将任何常见的酸化剂或缓冲液(优选食用级或被美国环保署认为是“一般视为是安全的”的试剂)用于保持合适的酸性pH，以确保储存的稳定性。在所述酸性条件下，这些芽胞保持稳定，并表现出良好的储存稳定性。在进行稀释使用和在使用以后，该溶液的pH会升高到超过7，从而导致所述强化成分中的细菌形成活的、生殖性的菌落。因此，这些细菌会在处理的植物表面上繁殖，并促进农业上有效的活性成分的转移。
所述含有细菌的强化成分可以作为独立的处理剂使用，或与多种其它农业上有效的活性成分同时使用。有用的农业上有效的活性成分包括植物生长促进剂，植物生长抑制剂，除草剂，内吸杀昆虫剂和内吸杀真菌剂。优选地，所述组合物是植物生长抑制剂或除草剂与含有大体上纯的枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或ATCC55675(BP01)的菌株的强化成分的组合，该组合物的用量至少为0.1×1010CFU/英亩。
在一种特别优选的实施方案中，将一种含有所述芽孢杆菌的无赤霉素强化成分施加到棉花植株的叶片上。与此同时，用助壮素处理该植株。含有所述含细菌的强化成分(优选ATCC55675)和助壮素的水箱混合物是同时使用以上两种成分的便捷方法。如果进行预混合，可以在大约4-6.5的pH下保存所述助壮素和含有细菌的强化成分，最优选为在大约5-6.5的pH下保存。
应当指出的是，本发明的制剂优选不包括能以相互矛盾的方式作用于植物代谢的材料的组合。例如，通常是将助壮素用在棉花叶片上，以抑制植物生长激素并抑制该植物的营养生长。所制备的制剂中优选不含植物生长激素，因为助壮素和该生长激素会对植物代谢产生不一致的作用，从而降低助壮素的效力，并导致不一致的结果。不过，通过本发明，助壮素和ATCC55675的组合会一致产生具有较高产量、生长更健壮、并且对病害具有更高抗性的处理植物。
尽管不希望受任何特定的操作理论的限制，就含有细菌的强化成分和助壮素在棉花上的组合使用而言，该细菌似乎能影响植物的生长机制，以增加第一和第二座果位点上的棉铃保持量，并通过在普通营养枝上产生并保持座果位点增加棉铃总数。
对本发明而言，助壮素是以使用量使用，并且是在棉花植株生长的常规阶段使用。助壮素的常规用量高达大约60克/英亩(25克/英亩)或大约1-16盎司/英亩，每一次的用量为大约2.5克/英亩(1.0克/公顷)，即使用2盎司/英亩的重量百分比为4.2％的溶液，到10克/英亩(4.1克/公顷)，即使用8盎司/英亩的相同的重量百分比为4.2％的溶液。如果所使用的助壮素的纯度和/或活性较高或较低，其具体用量应当根据常用助壮素活性的变化而进行上调或下调。
实施例例1以1∶1的体积比制备重量百分比为4.2％的助壮素和560,000CFU/ml蜡状芽孢杆菌(试验室样品BP01，ATCC55675)的含水混合物。用常规喷雾器通过4次喷雾将所述溶液喷洒到大田A中的试验小区(50英亩中的10英亩，密西西比)和大田B中的试验小区(60英亩中的8英亩，田纳西)中的棉花植株的叶片上。以每英亩4盎司的液体用量对大田A进行一个剂量的处理，在以后的5周内以每英亩8盎司液体的用量进行处理。
大田B的处理方案不同。大田B的头3次用量为每英亩4盎司液体(第一次和第二次使用间隔24小时。第二次和第三次使用间隔6天)。大田B中的最后一次使用是在11天之后，其用量为每英亩8盎司液体。在所有场合下，对照大田都是仅用相同量的助壮素处理。
在进行处理以后，从大田A和B中取样，取样是用手在代表性株行中进行的。将所有已知偏差都带入对照中，该对照仅用助壮素处理。
在大田A和B中，测定处理棉花植株的起始植株高度和最终植株高度。所述对照大田的总的植株高度与用本发明处理过的植株高度相当。参见表1。
表1
在生长期内，对照植株和处理植株之间的差别容易发现。当幼株仅含有座果的第一个月的棉蕾时，会出现异常大量和体积的额外座果枝，此时，主座果枝离开主茎。很多座果枝都与主座果枝同样大或几乎同样大，并带有先于第一花的果实。额外的果实还出现在座果分支和主茎的交接处。
随着花朵向植株上部延伸，并且仅仅在这些花的下面发现棉铃或缺失位点，还会出现出乎预料的量的背景座果。在棉蕾、花、小棉铃和“正在开放的棉铃”(罕见)中观察到了双座果。尽管双座果现象在对照和处理植株中均有所出现，但在处理植株中出现的比例较高。
在生长期结束之前大约3-4周，检查植株的座果位点数、第一节和第二节上的棉铃数、以及棉铃的类型。检测结果如表2所示。
表2
在大田B中，在试验期结束时，对20个植株进行检查。将所述植株割出。在对照组中没有开放的棉铃，在处理组中仅有7个开放的棉铃。不过，与对照植株相比，处理植株上的较幼小的果实更大、也更成熟一些。这表明处理过的植株是以更快和更有利的速度生长。处理过的植株具有总计达265个的棉铃，与此对应，对照组仅有238个棉铃，其增加量为11％。
处理过的植株在营养枝上的座果数量也有所增加，其比例为88∶51，增加量大约为73％。处理过的植株在其它座果方面(即在座果枝位置3和更大范围内的果实)也有所增加，其比例为86∶50(增加量为72％)。来自20个植株的果实的估计重量(籽棉)在处理植株中也较高，处理和对照的重量分别为1796克和1456克(增加量为23％)。
所述植株上的额外果实会产生这样的设想即额外的植株部分和幼小的果实会消耗该植株系统。棉铃会更快的开放，但会对产量产生不利影响。这种设想并未实现。处理植株能以比对照更快的速度和更健康的状态生长。
为了减少误差，所有棉花都是用手从试验大田中采收，包括从部分开放的棉铃中采收未起绒的棉花。所述未起绒的棉花通常来自永远也不会正确开放的、位于植株下部的棉铃或来自位于该植株上部的刚开放的棉铃。表3中给出了处理大田和对照大田中每10英尺长的一个棉垄的籽棉重量和青棉铃数量。
表3
试验结果表明，根据本发明，助壮素与含有ATCC55675的强化成分同时组合使用，能比仅使用助壮素产生更高的棉花产量和更健壮的植株。
例2将蜡状芽孢杆菌菌株BP01(ATCC55675)与广泛使用的除草剂阿特拉津组合使用，以测定BP01是否会对被公认为用三嗪难于杀死的杂草的控制产生影响。使用阿特拉津对玉米、高粱、和其它作物产生一个季度的控制，其建议的使用量为每英亩2磅活性成分。在足够高的用量下，如本实施例的用量下可以发现阿特拉津具有非选择性杂草控制能力。
在沙性土壤中，将每一个试验重复进行3次，小区面积为12英尺×25英尺，采用随即完全封闭形式。在处理时杂草高度为2-6英寸(5-15cm)。以水溶液形式使用阿特拉津，其用量相当于每英亩1或2磅活性成分。将BP01浓缩物以相当于每英亩0.5或1盎司液体(0.5-1×1010CFU/英亩)的用量加入所述阿特拉津中。为了进行比较，以常规方式将作物油浓缩物(大约85％的石蜡油和大约17％的表面活性剂)与三嗪除草剂组合使用，以提高其效力。表4-8中给出了对佛罗里达马齿苋(表4)、公牛草(表5)、狗牙根(表6)、毛叶泽兰(表7)、和樱草(表8)的控制效果。
表4-佛罗里达马齿苋
表5-公牛草
表7-毛叶泽兰
>表8-樱草
从表4-8中可以看出，BP01一般能在处理之后23天提高阿特拉津的效果。对狗牙根、毛叶泽兰、和樱草而言，使用1磅的阿特拉津和芽孢杆菌比使用2磅的阿特拉津具有更好的控制效果，而这两种处理对公牛草具有相同的控制效果。仅在佛罗里达马齿苋上出现了用1磅/英亩的阿特拉津和BP01的控制效果比使用2磅/英亩阿特拉津处理的控制效果降低的现象。
类似地，在除了佛罗里达马齿苋和樱草以外的所有杂草中，与阿特拉津和作物油浓缩物的混合物相比，BP01能提高阿特拉津的控制效果。这种提高表明，该芽孢杆菌不是起着表面活性剂的作用，而是通过提高同时使用的试剂的代谢活性或转移特性或同时达到这两种目的而提高其效果。
以上说明的用意仅仅是对本发明进行说明，不应将其视为对所附权利要求范围的限定。
权利要求
1.一种用于提高农业上有效的活性成分的活性的组合物，包括(a)一种农业上有效的活性成分，该活性成分为植物生长调节剂、除草剂、内吸杀真菌剂、或内吸杀昆虫剂；(b)一种合适的芽孢杆菌属或土壤细菌的芽胞、培养物、或悬浮液强化成分，其前提是，当所述植物生长调节剂是一种植物生长抑制剂时，该组合物不含植物生长激素。
2.如权利要求1的组合物，其中，所述植物生长调节剂包括助壮素。
3.如权利要求1的组合物，其中，所述植物生长调节剂包括氯化矮壮素。
4.如权利要求1的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括除草剂。
5.如权利要求4的组合物，其中，所述除草剂是三嗪。
6.如权利要求4的组合物，其中，所述除草剂是glyphosate或sulfosage。
7.如权利要求1的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括内吸杀真菌剂。
8.如权利要求1的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括植物生长调节剂。
9.如权利要求1的组合物，其中，所述植物生长调节剂是植物生长抑制剂。
10.如权利要求1的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括内吸杀昆虫剂。
11.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种来自芽孢杆菌属的细菌菌株。
12.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种土壤细菌菌株。
13.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种蜡状芽孢杆菌。
14.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种具有ATCC55675的特征的蜡状芽孢杆菌。
15.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种枯草芽孢杆菌。
16.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种具有ATCC55675的特征的枯草芽孢杆菌。
17.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有一种巨大芽孢杆菌。
18.如权利要求1的组合物，其中，所述强化成分含有ATCC55675。
19.一种非液体组合物，包括(a)一种农业上有效的活性成分，该活性成分为植物生长调节剂、除草剂、内吸杀真菌剂、或内吸杀昆虫剂；(b)一种合适的芽孢杆菌属或土壤细菌的芽胞、或培养物强化成分，其前提是，当所述植物生长调节剂是一种植物生长抑制剂时，该组合物不含植物生长激素。
20.如权利要求19的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括植物生长调节剂。
21.如权利要求19的组合物，其中，所述植物生长调节剂是植物生长抑制剂。
22.如权利要求19的组合物，其中，所述植物生长调节剂包括助壮素。
23.如权利要求19的组合物，其中，所述植物生长调节剂包括氯化矮壮素。
24.如权利要求19的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括除草剂。
25.如权利要求24的组合物，其中，所述除草剂是三嗪。
26.如权利要求24的组合物，其中，所述除草剂是glyphosate或sulfosage。
27.如权利要求19的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括内吸杀真菌剂。
28.如权利要求19的组合物，其中，所述农业上有效的活性成分包括内吸杀昆虫剂。
29.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种来自芽孢杆菌属的细菌菌株。
30.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种土壤细菌菌株。
31.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种蜡状芽孢杆菌。
32.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种具有ATCC55675的特征的蜡状芽孢杆菌。
33.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种枯草芽孢杆菌。
34.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种具有ATCC55675的特征的枯草芽孢杆菌。
35.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有一种巨大芽孢杆菌。
36.如权利要求19的组合物，其中，所述强化成分含有ATCC55675。
37.一种增加结实植物的座果位点数的方法，该方法是将(a)农业上有效的活性成分植物生长调节剂；和(b)一种合适芽孢杆菌属或土壤细菌的芽胞、培养物、或悬浮液强化成分，喷施到所述植物的叶面上，其前提是，当所述植物生长调节剂是一种植物生长抑制剂时，该组合物不含植物生长激素。
38.如权利要求37的方法，其中，所述农业上有效的活性成分和所述强化成分是以组合物形式使用的。
39.如权利要求37的方法，其中，所述结实植物是棉花。
40.如权利要求37的方法，其中，所述植物生长调节剂是植物生长抑制剂。
41.如权利要求37的方法，其中，所述植物生长调节剂是植物生长促进剂。
42.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有来自芽孢杆菌属的细菌的菌株。
43.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有土壤细菌菌株。
44.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有蜡状芽孢杆菌。
45.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有具有ATCC55675的特征的蜡状芽孢杆菌。
46.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有枯草芽孢杆菌。
47.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有具有ATCC55675的特征的枯草芽孢杆菌。
48.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有巨大芽孢杆菌。
49.如权利要求37的方法，其中，所述强化成分含有ATCC55675。
50.一种增强除草剂的效果的方法，该方法是通过给植物喷施(a)一种农业上有效的活性成分植物生长抑制剂或除草剂；和(b)一种合适的芽孢杆菌属或土壤细菌的芽胞、培养物、或悬浮液强化成分。
51.如权利要求50的方法，其中，所述农业上有效的活性成分和所述强化成分是以组合物形式使用。
52.如权利要求50的方法，其中，所述农业上有效的活性成分是三嗪、glyphosate或sulfosage。
53.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有来自芽孢杆菌属的细菌菌株。
54.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有土壤细菌菌株。
55.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有蜡状芽孢杆菌。
56.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有具有ATCC55675的特征的蜡状芽孢杆菌。
57.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有枯草芽孢杆菌。
58.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有具有ATCC55675的特征的枯草芽孢杆菌。
59.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有巨大芽孢杆菌。
60.如权利要求50的方法，其中，所述强化成分含有ATCC55675。
61.一种提高植物生长调节剂的活性的组合物，该组合物含有一种合适的芽孢杆菌属细菌及其芽胞、培养物或悬浮液，还包括一种植物生长抑制剂，其中，该组合物不含有ATCC55675。
62.如权利要求61的组合物，其中，所述植物生长调节剂包括助壮素。
63.如权利要求61的组合物，其中，所述植物生长调节剂包括氯化矮壮素。
64.如权利要求61的组合物，其中，所述芽孢杆菌属细菌是蜡状芽孢杆菌。
65.如权利要求61的组合物，其中，所述芽孢杆菌属细菌具有ATCC55675的特征。
66.如权利要求61的组合物，其中，所述芽孢杆菌属细菌是枯草芽孢杆菌。
67.如权利要求61的组合物，其中，所述植物生长调节剂是植物生长抑制剂。
全文摘要
在施用一种强化成分之前、之后、或同时将一种农业上有效的活性成分施加到植物叶片上,所述强化成分含有一种选自芽孢杆菌属或土壤细菌的细菌的大体上纯的细菌培养物、悬浮液、芽胞、或细胞。
文档编号A01N57/00GK1244771SQ96180578
公开日2000年2月16日 申请日期1996年11月29日 优先权日1996年11月29日
发明者K·L·布朗利, R·R·阿特金斯 申请人:麦克罗弗罗公司