从血液、血浆和其它液体中除去朊病毒的制作方法

专利名称：从血液、血浆和其它液体中除去朊病毒的制作方法
技术领域：
本发明总的涉及纯化样品的方法，具体涉及从血液和血液制品里除去朊病毒的方法。
背景技术：
朊病毒是引起人体和动物体的中枢神经系统海绵状脑病的感染性病毒。朊病毒不同于细菌、病毒和类病毒。目前的主要假设是朊病毒蛋白的感染不需要，核酸成分。还有感染一类动物(如人)的朊病毒不会感染另一类动物(如小鼠)。
研究朊病毒和由其引起的疾病的主要步骤是发现和纯化称为朊病毒蛋白的蛋白质(″PrP″)[Bolton等，Science 2181309-11(1982)；Prusiner等，Biochemistry 216942-50(1982)；McKinley等，Cell，3557-62(1983)]。完整的朊病毒蛋白—编码基因已被克隆、测序和在转基因动物中表达。PrPC由一条单拷贝的宿主基因所编码[Basler等，Cell，46417-28(1986)]，通常在神经元外表面上发现。主导的假设是朊病毒疾病因PrPC转化为称为PrPSc的修饰形式而致。
显然朊病毒蛋白(PrPSc)的疯痒病(scrapie)异构形对于动物和人体可传播的神经退行性疾病的传播和致病是必需的。参见Prusiner，S.B.，″(朊病毒疾病的分子生物学)Molecular biology of prion disease″，Science2521515-1522(1991)。最常见的动物朊病毒疾病是绵羊和山羊的疯痒病和牛的海绵状脑病(BSE)[Wilesmith，J.和Wells，Microbiol.Immunol.17221-38(1991)]。业已鉴定了人的四种朊病毒疾病(1)库鲁病，(2)克罗伊茨费尔特—雅各布综合征克-雅病(CJD)，(3)Gerstmann-Strassler-Scheinker病(GSS)，和(4)致命的家族性失眠(FFI)[Gajdusek，D.C.，Science 197943-960(1977)；Medori等，N.Engl.J.Med.326444-449(1992)]。人体朊病毒疾病作为零星、遗传和传染性疾病存在形成了一个难题，业已通过PrP的细胞遗传起源对此进行了解释。
大多数CJD病例是个别发生的，但约10-15％作为常染色体显性疾病而遗传，由于人体PrP基因突变而引起〔Hsiao等，Neurology 401820-1827(1990)；Goldfarb等，Science 258806-808(1992)；Kitamoto等，Proc.R.Soc.Lond.343391-398]。医原性CJD由尸体垂体和硬膜移植物的人生长激素所引起[Brown等，Lancet 34024-27(1992)]。尽管人们试图将CJD与进食诸如疯痒病感染的羊肉等感染源联系起来，但除了医原性诱发的疾病外迄今没有证据支持该观点[Harries-Hones等，J.Neurol.Jeruosurg.Psychiatry 511113-1119(1998)]。另一方面，在Fore和New Guinea高地的邻近部落横行几十年的库鲁病据信是因食人尸仪式期间受感染而传播的[Alpers，M.P.，(神经系统的慢传播疾病(Slow transmissible Diseases of theNervous System)，第1卷，S.B.Prusiner和W.J.Hadlow编辑。(纽约Academic Press)，66-90页(1979)]。
CJD最初传播到实验室的灵长类动物有一定的历史，开始于WilliamHadlow认识到库鲁病和疯痒病之间的相似性。1959年，Hadlow提出，将从死于库鲁病的病人制备的提取物接种到非人类灵长目动物，在培养一长段时间后观察到所预见的疾病发生了[Hadlow，W.J.Lancet2289-290(1959)]。7年后，Gajdusek，Gibbs和Alpers证明，在培养18到21个月后，库鲁病传播给了黑猩猩[Gajdusek等，Nature 209794-796(1966)]。1968年〔Gibbs，Jr.等，Science 161388-389(1968)〕报道了用黑猩猩作的疾病传播类似实验提示库鲁病的神经病理学与CJD[Klatzo等，Lab Invest.8799-847(1959)]的相似。在最近25年中，约300例CJD、库鲁病和GSS已传播给各种猿和猴子。
这类实验的开支、资金缺乏和非人道性限制了此项工作，因此限制了知识的积累。虽然大多数可靠的传播数据据说是得自用非人灵长目动物作的研究，一些人体朊病毒疾病已传播给啮齿动物，但显然簋少有规律性[Gibbs，Jr.等，神经系统慢传播疾病(Slow Transmissible Diseases of the NervousSystem)，第2卷，S.B.Prusiner和W.J.Hadlow编辑(纽约AcademicPress)，87-110页(1979)；Tateishi等，人体和动物的朊病毒疾病(PrionDiseases of Humans and Animals)，Prusiner等编辑(伦敦EllisHorwood)129-134页(1992)]
Pattison在其研究疯痒病病因在绵羊和啮齿动物之间传播的研究中第一次揭示了人体朊病毒疾病不能经常地传播给啮齿动物，这称为“种属屏障”[Pattison，I.H.，NINDB Monograph 2，D.C.Gajdusek，C.J.Gibbs Jr.和M.P.Alpers编辑(华盛顿DC美国政府出版)，pp.249-257(1965)]。在这些研究中，朊病毒从一个种属到另一个种属的最初传播与延长培养时间有关，只有少数动物发病。在同一种属里的后代传播的特征是在相当短的培养时间后所有的动物都发病。
用转基因(Tg)小鼠显示了叙利亚仓鼠(SHa)和小鼠之间的种属屏障的分子基础存在于PrP基因序列中[Scott等，Cell 59847-857(1989)]；Locht等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 836372-6376(1986)]。用SHa朊病毒接种时，Tg(SHaPrP)小鼠表达SHaPrP培养时间缩短。当用小鼠表达人或绵羊的PrP转移基因进行相似的研究时，种属屏障并没有消失，即被感染动物的百分率不可接受地低，培养时间不可接受地长。因此，如对于人朊病毒，不可能用转基因动物(如含另一个种属的PrP基因的小鼠)来可靠地检定一个样品确定其是否被朊病毒感染。下面举例说明因缺乏这类试验所导致的危及健康的严重性。
以前用人垂体的HGH治疗过的45个年轻人产生了CJD〔Koch等，N.Engl.J.Med.313731-733(1985)；Brown等，Lancet34024-27(1992)；Fradkin等，JAMA 265880-884(1991)；Buchanan等，Br.Med.J.302824-828(1991)〕。幸运的是，现在使用重组的HGH，但高水平HGH刺激所致wtPrPc表达的增加看来可能会诱发朊病毒疾病〔Lasmezas等，Biochem.Biophys.Res.Commun1961163-1169(1993)〕。从垂体制备的HGH被朊病毒污染的事实得到以下实验的支持将受怀疑的一批HGH给猴子接种，66个月后猴子被传染了朊病毒疾病[Gibbs，JR.等，N.Engl.J.Med.328358-359(1993)]。与朊病毒疾病有关的长培养时间不能完全揭示几十年来世界范围用HGH治疗致数千人发生医原性CJD的程度。四个用污染的人垂体促性腺激素治疗的不育妇女[Healy等，Br.J.Med.307517-518(1993)；Cochius等，Aust.N.Z.J.Med.20592-593(1990)；Cochius等，J.Neurol.Neruosurg.Psychiatry551094-1095(1992)]和至少11个接受硬膜移植物的病人[Nisbet等，J.Am.Med.Assoc.2611118(1989)；Thadani等，J.Neurosurg.69766-769(1988)；Willison等，J.Neurosurg.Psychiatric 54940(1991)；Brown等，Lancet34024-27(1992)]也发生了CJD。这些医原性CJD病例强调了对可能被朊病毒污染的药物进行筛检的需要。
最近，法国两个医生被指控为用尸体提取的生长激素治疗过失杀害了一个儿童。该儿童发生了克-雅病。(参见New Scientist，1993，7月31日，p4)。根据巴斯德研究所报道，1989年以来，已有24例CJD报道的病例，患者是年轻人，在1983年和1985年中期之间曾接受人生长激素治疗。这些孩子中的15人已经死亡。目前，在法国好像有几百儿童冒着发生CJD的危险，因用过死尸提取的生长激素治疗(参见New Scientist，1993，11月20日，p.10)鉴于此，很清楚需要一种方便、合算的手段除去血液和血制品中引起CJD的朊病毒。本发明提供了这种方法。
发明概述通过使诸如血液和血浆等生物材料与能结合朊病毒的生物制剂(如抗体)或化学试剂(如由磷钨酸钠构成的底物)(等复合制剂)接触而从血液和血浆等生物材料中除去朊病毒。可采用能除去生物材料中任何构型朊病毒的底物，如用络合剂包被的球形聚合物珠，放置在柱里，让血液、血浆或怀疑含有朊病毒的其它材料流过此柱。
本发明的一个实施方案是通过使样品与由朊病毒络合剂，如磷钨酸钠接触，使血液中的朊病毒与络合剂结合而从诸如人血液样品中除去朊病毒的方法。
本发明的另一个实施方案是一种从液体样品中除去朊病毒的装置，该装置由底物，如用络合剂包被的聚合物铁磁珠构成，其中底物优选地位于管状壳体中，液体样品则流经其中。
本发明的一个目的是提供一种从材料中除去朊病毒的简单和经济的手段。
本发明的一个优点是可能含朊病毒的血制品通过本发明加工后能证明没有朊病毒。
本发明的一个特征在于朊病毒与化学试剂，如杂多酸或杂多酸的金属盐选择性地结合。用于本发明方法的优选的化学试剂是磷钨酸钠。
本发明的另一个特征在于朊病毒能选择性与生物试剂，如肽、小分子和选择性的PrPSc结合抗体结合。
本发明的一个方面是球形聚合物珠形式、其表面有络合剂包被的底物。在一个具体的实施方案中，球形珠具有铁磁金属核心，用磁场力可使珠子分离，该金属核心外包惰性聚合物，再用磷钨酸金属盐包被该聚合物。
本发明的另一个方面是已用本发明方法处理的血液和血制品，如血浆。
本发明的再一个方面是采用诸如血液过滤方法从生物材料中除去朊病毒的滤膜。
本发明的一个方面是一种由壳体(优选的是圆柱形壳体)构成的装置，其表面包被有结合PrPsc的组合物，如用磷钨酸钠包被向球形铅表面。
本技术领域的人员在阅读了以下对结合剂、装置和方法的详细叙述后将会清楚地了解本发明的这些和其它目的、各方面内容、优点和特征。
优选实施方案的详述在揭示和描述本发明方法和装置前，应当明白本发明不限于具体的络合剂、蛋白质、标记物试验或方法，它们当然是可以变化的。也应当明白，本文使用的术语仅用于阐述具体的实施方案，并非用于限定，因为本发明的范围只由权利要求书所限定。
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员共同理解的是相同的。虽然可采用与本文描述的相似或等价的方法和材料来实施或检验本发明，现仅描述优选的方法和材料。本文提及的所有出版物都纳入本文作参考以揭示和描述与引用的出版物有关的方法和/或材料。
本文讨论的出版物只是本申请的申请日前公开的内容，在此并非承认本发明依赖于以前的发明。还有，若发现确切的
公开日期不同于本文提供的
公开日期，则可改变为确切的
公开日期。
定义本文使用的术语“络合剂”是指与蛋白质的紧缩构型(如PrPsc)和/或与蛋白质的松弛构型(如PrPc)选择性结合或络合的任何材料。该络合剂可为生物分子，如肽或抗体，如对PrPSc有选择性的抗体，或化学试剂，如磷钨酸(PTA)，它可以盐形式，如磷钨酸钠形式加入。络合剂可单独使用或联合使用。例如，生物络合剂与化学络合剂可一前一后地使用，如使用肽和化学试剂。在另一个实施例中，可一起使用同类型的两种络合剂，如磷钨酸(和其盐)和三氯乙酸的混合物，形成的络合物必须提供将其与其余组成分离的某种手段，例如络合剂固定于底物表面时就可实现这种分离。优选的络合剂与PrPSc结合比与PrPC结合更容易，特别优选的试剂以高亲和力与PrPSc结合，而与PrPC没有明显的结合。客观地说，优选的结合剂与PrPSc结合的结合亲和力是与PrPC结合的两倍或以上，更优选的是比与PrPC结合的结合亲和力高五倍或以上。
本文使用的术语“蛋白质”意在涵盖任何氨基酸序列，包括修饰的序列，如糖蛋白。该术语包括天然形成的蛋白质和肽，以及重组或合成的蛋白质和肽。与本发明有关的术语“蛋白质”特别指天然形成的蛋白质，它们有至少两种不同的构型，其中两种构型都有相同或基本相同的氨基酸序列，但有两种或多种不同的三维结构。蛋白质的两种构型包括至少一种不涉及疾病状态的构型，和至少一种涉及疾病状态—致病性的构型。与本说明书相关的具体和优选的蛋白质例子是PrP蛋白，它包括非致病形式，称为PrPC形式，和与疾病相关的形式，称为PrPSc。虽然朊病毒蛋白或PrP蛋白的PrPSc形式是感染的且是致病的，但其它蛋白质的致病构型不是感染性的，但是致病性的。本文使用的术语“致病的”表示真正引起疾病的蛋白质，或它只简单地意味着蛋白质与疾病有关，因此在疾病存在时它是存在的。因此，与说明书中揭示有关的致病蛋白质不一定是蛋白质，它是具体疾病的致病因子(causativeagent)。
术语“PrP蛋白”、“PrP”等在本文可互换地使用，表示已知引起人和动物疾病(海绵状脑病)的感染颗粒形式PrPSc和非感染形式PrPC，后者在合适的条件下会转化为感染性PrPSc形式。
术语“朊病毒”、“朊病毒蛋白”和“PrPSc蛋白”等可互换使用，指PrP的感染性PrPSc形式，是“蛋白质”和“感染”二词的缩合。颗粒主要(若非排他地)由PrP基因编码的PrPSc分子构成。朊病毒一般是PrPSc的二聚体。朊病毒不同于细菌、病毒和类病毒。已知的朊病毒感染动物引起疯痒病(一种可传插的、绵羊和山羊的神经系统退化疾病)，以及牛海绵状脑病(BSE)，或“疯牛病”，和猫的猫科海绵状脑病。已知侵染人体的四种朊病毒疾病是(1)库鲁病，(2)Creutzfeldt-Jakob(克雅)病(CJD)，(3)Gerstmann-Straussler-Scheinker病(GSS)，和(4)致命的家族性失眠症(FFI)。本文使用的“朊病毒”包括引起动物(特别是人和家养的农场动物)中所有这些或其它疾病或其中之一的所有形式的朊病毒。
本文使用的术语“PrP基因”用来描述基因材料，所述基因材料表达包括已知多形性和致病性突变的蛋白质。术语“PrP基因”一般指能编码PrP蛋白质任何形式的任何动物种类的任何基因。Gabriel等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA899097-9101(1992)和美国专利5,565,186；5,763,740；5,792,901；和WO97/04814揭示了一些通常公知的PrP序列，纳入本文供参考以揭示和描述这类序列。PrP基因可来自任何动物，包括“宿主”和“试验”动物和其任何和所有的多形性和变化，据认为，该术语包括尚未被发现的其它PrP基因。由这类基因表达的蛋白质可为PrPC(非致病)或PrPSc(致病)形式。
术语“抗体”代表能与抗原结合的免疫球蛋白。本文的抗体意在包括整个抗体以及能与抗原决定基、感兴趣的抗原或抗原片段结合的抗体片段(如F(ab)’，Fab，Fv)。用于本发明试验的优选抗体是免疫反应活性或免疫特异性的，因此能对感兴趣的蛋白，如PrP蛋白，特别是PrPSc蛋白或PrPSc二聚体特异性或选择性地结合。可使用对两个天然非致病形式和致病形式(如对天然PrPC和天然PrPSc)具有免疫反应性的和免疫特异性的抗体。PrP抗体优选的是免疫特异性的，如与相关的材料没有实质性的交叉反应。已发表的PCT申请WO97/10505中揭示了本发明中使用的一些特定抗体，纳入本文作参考以揭示和描述这些抗体。该公开的PCT申请相应于美国专利5,846,533(1998，12，8颁布)，也纳入本文供参考。术语“抗体”涵盖所有类型的抗体，如多克隆、单克隆和噬菌体显示方法产生的那些抗体。本发明特别优选的抗体是对天然PrPC和PrPSc都有相当高亲和力的抗体，优选的是与PrPSc的结合亲和力更高的抗体。本发明的抗体是本文定义的一种“络合剂”。
用于结合PrPC的抗体是由杂种瘤(hybridoma)细胞系ATCC HB9222产生的单克隆抗体263K3F4，该杂交病1986年10月8日保藏在美国典型培养物保藏中心(美国MD 20852)，在美国专利4,806,627(1989年2月21日颁布)中有揭示和描述，在此纳入本文作参考以揭示与PrPC，但不与PrPSc选择性结合的抗体。
“纯化的抗体”指没有天然相伴随的其它蛋白质、碳水化合物和脂质的抗体。这类抗体“优先地”与PrPSc蛋白(或其抗原片段)结合，基本上不识别或不与其它抗原性不相关的分子结合。本发明的纯化抗体对其特定种类PrP是优先地免疫反应性的和免疫特异性的，对天然PrPSc更是优先免疫特异性的。
蛋白质的“抗原片段”(如PrP蛋白)指能与抗体结合的这类蛋白的一部分。
“特异性结合”指抗体对特定多肽，如蛋白质(如PrPSc)的抗原决定基，高亲合力或/和高亲和力结合。抗体对特定多肽上的其抗原决定基的结合，优选的比同一抗体对任何其它抗原决定基，特别是样品中相关分子或感兴趣的特定多肽中存在的其它抗原决定基的结合更强，如与诸如PrPSc的蛋白质的基因决定基片段的结合更强，这样通过调节结合条件，抗体几乎是排他地只与所需蛋白的抗原决定基位点或片段，如PrPSc的抗原决定基片段结合。
“可检测的标记抗体”、“可检测的标记抗PrP”或“可检测的标记抗PrP片段”指具有连接的可检测标记的抗体(或保留结合特异性的抗体片段)。通常通过化学交联连接可检测的标记物，但当标记物是多肽时，可另用基因工程技术来连接。制备可检测标记蛋白的方法是本技术领域公知的。本技术领域已知的可检测标记物通常是放射性同位素、荧光团、顺磁性标记物、酶(如，辣根过氧化酶)，或能发射可检测信号(如放射活性、荧光、颜色)或该标记物接触其底物后能发射可检测信号的其它分子或化合物。各种可检测标记物/底物对(如辣根过氧化酶/二氨基联苯胺，生物素/链霉视和素，荧光素酶/荧光素)，标记抗体的方法，和使用标记抗体的方法是本技术领域公知的(参见，如Harlow和Lane编辑(抗体实验室手册(1988)，Cold Spring HarborLaboratory Press，美国纽约))。铕是特别优选的标记物。
本文使用的缩写包括CNS中枢神经系统；BSE牛海绵状脑病；CJD克罗伊茨费尔特—雅各布结合征(克-雅征)FFI致命的家族性失眠病；GdnHCl盐酸胍；GSSGerstamnn-Strassler-Scheinker病；Hu人；HuPrP人朊病毒蛋白；Mo小鼠；MoPrP小鼠朊病毒蛋白；
SHa叙利亚仓鼠；SHaPrP叙利亚仓鼠朊病毒蛋白；PrPSc朊病毒蛋白的疯痒病异构形式；PrPC朊病毒蛋白的细胞所含的共同正常异构形式；PrPCJDPrP蛋白的CJD异构形式；FVB通常用于产生转基因小鼠的标准近交系小鼠，因为FVB小鼠的卵相当大，能相当好地耐受外源性DNA的显微注射；〔PrPβ〕-β-片层构型的朊病毒蛋白的缩写；〔DRC〕-蛋白质与疾病有关构型的缩写；PTA-磷钨酸；NaPTA-磷钨酸钠；TCA-三氯乙酸；AC-亲和层析发明概述检测朊病毒的试验正在发展中，但尚没有商品化。另外，尚未确定这类试验(大规模下)的成本、方便性或准确性。因此，当诸如人血浆等材料被怀疑含有朊病毒时，该材料即被销毁；参见华尔街杂志，1998，11月25日p.1，文章名为“‘Mad Cow’Fears Leads U.K.to Destroy Parts of all DonatedBlood”，它报道英国消毁了其人血浆供给。采取该戏剧性的行动是由于(1)朊病毒可能存在于英国的人血浆中，(2)朊病毒疾病是致命的，目前尚不可治疗，(3)目前没有测定朊病毒的商品化试验，和(4)目前没有商品化的从样品中除去朊病毒的方法。本发明包括了除去朊病毒的一种方法。
一些蛋白质，如由PrP基因表达的蛋白质有一个以上的构型。例如PrP蛋白可假设为其细胞形式，即PrPC形式，或其疯痒病形式，即PrPSc形式。该蛋白质的一个形式(如PrPC)是无害的，而该蛋白质的另一种形式(如PrPSc)是致病的。该蛋白质的致病形式，如PrPSc在动物中以极小数量存在时，动物不显示疾病症状。但是，动物会产生与该蛋白质致病形式相关的疾病—如，产生朊病毒病。为了避免疾病的发展和/或可能的传播，重要的是从生物性液体，特别是被输入患者体内的生物性液体(如血制品)中除存在的任何PrPSc。本发明用于(1)从样品中消除该蛋白质的致病形式，使材料“没有朊病毒”和/或(2)将材料里该蛋白质的致病形式的浓度减少到使该材料“无感染性”的水平。
本发明通过使样品接触络合剂，络合剂与PrPSc结合(优先选择性结合)来除去PrPSc，使得从生物性样品中除去朊病毒成为可能。本发明方法特别(但不是排他地)可用来处理全血和/或从全血中除去PrPSc。可通过与固定的络合剂络合来除去，即使样品接触带有固定络合剂的亲和柱、膜、滤器或珠。此络合剂能有效地从样品中除去PrPSc，而让样品保持基本相同的形式，以便合适地使用该样品，即保持合适的pH，细胞和蛋白质的结构完整性等等。
一般过程任何类型的样品可用本发明方法来除去其蛋白质的致病形式。虽然本发明可用来除去具有结束的和松弛形式的任何蛋白质中的受约束形式，但本发明特别涉及除去PrP蛋白的致病形式，即浓集和除去PrPSc。
待处理的生物性样品在室温下(15-30℃)是液体可流动的形式。溶液的pH应为约6.4-8.4，优选的是7.4，应不含过量的镁或钙。
下一步骤是本发明方法中最重要的步骤。使样品接触一络合剂，该络合剂固定于一固体表面，或采取能使结合的朊病毒络合剂与样品分开的方式。此络合剂形成了一种与样品中存在的该蛋白质的约束形式(一般是致病形式)优先或排他地结合的络合物。这样当样品接触固定的络合剂时就能有效地将样品中存在的PrPSc固定在固体表面。
在一个实施方案中，将诸如杂多酸(如PTA)或优选的其金属盐(NaPTA)等化学试剂固定在诸如膜过滤器、磁性珠等的固体表面上。在足以使样品中所有的PrPSc与PTA络合的时间里使样品与络合剂接触。例如，将样品在约30-45℃(优选约37℃)培养约1-16小时。络合剂形成了与PrPSc的络合物。重要的是形成的络合物可用一些手段，如过滤、使用磁场、沉积等，与样品的其余成分分开。
本发明的方法产生了一种生物性样品，其中PrPSc或其它致病蛋白质基本上从样品中除去，优选达到用常规手段不可检测到PrPSc的水平。除去PrPSc方法通过提供没有感染水平的朊病毒，即“无朊病毒”的生物性样品来预防PrPSc所介导疾病的传播。
络合剂用作本发明络合剂的化合物包括抗体、酶、肽、化学品、结合分子等。这些络合剂所应用的方式应能结合朊病毒，并从生物溶液中除去朊病毒，同时保留该生物材料完整性的必要元素，如保留分子形态和蛋白质的完整性。这类络合剂可用于全血，诸如血浆和血小板的血组分，和本技术领域人员了解的其它生物性液体。
化学试剂在本发明的一个实施方案中，从生物性材料中除去朊病毒的化合物是能沉淀PrPSc的化学试剂。本发明中用作络合剂的一类优选的化学试剂是杂多酸及其盐。杂多酸是全部或部分质子化的氧阴离子，具有至少一个中心元素和至少一个配位元素。杂多酸可有Keggin或Dawson结构。
一类特殊的杂多酸是质子化形式的杂多钼酸盐。这些阴离子含有2-18个六价的钼原子围绕着一个或多个中心原子。约36种不同的元素被确定为这些杂多钼酸盐的中心原子。这些阴离子都是高度氧化的。杂多钼酸盐的例子包括[PMo12O40]3，[As2Mo18O62]6，和[TeMo6O24]6，其中中心原子是各自是P5+、As5+和Te6+。在Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology第3版，15，688-689(1981)中提供了杂多钼酸盐更详细的讨论。
与杂多钼酸盐的质子形式类似的另一类杂多酸是杂多钨酸盐的质子化形式。在杂多钨酸盐中，配位元素是钨而不是钼。美国专利4,376,219讨论了各种杂多酸的制备，本文纳人其全文供参考。这些杂多酸的中心元素可选自P，Si，B，Ge，As，Se，Ti，Zr，Mn，F，V，Ce和Th。这些杂多酸的配位元素包括Mo和/或W。任选的配位元素包括V，Mn，Co，Ni，Cu，Zn，和Fe。配位元素数与中心元素数数目的比为2.5-12，优选9-12。特殊的杂多酸在美国专利4,376,219中有例举，包括磷钨酸，硅钨酸，10-钨-2-矾磷酸，6-钨-6-钼磷酸，磷钼酸，硅钼酸，锗钨酸，钨氟酸和18-钨-2-磷酸及其这些酸的所有或任何一种盐，如诸如Na，K，Mg和Ca盐等金属盐。用于本发明具体的杂多酸是磷钨酸，即H3PW12O40和其金属盐，特别是Na盐。这类络合剂能有效地与PrPSc结合。
这类化学试剂可单独使用，组合使用或与其它非生物活性的化学品，如缓冲液和惰性结合化学品一起使用。本发明的杂多酸(如PTA)优选的是(虽然不排他)以金属盐形式使用。金属盐包括，但不限于，钠，钾，钙等。
与支持材料组合的杂多酸或其盐的存在量应足以从生物性液体中显著除去PrPSc，优选的量应足以将PrPSc除去到不可检测水平，或至少非感染水平。杂多酸与支持材料的重量比可为，如约1∶20-1∶1。杂多酸与支持材料的组合采用的方式应使杂多酸充分分散，从而增加杂多酸的有效表面积。将这些组分组合的优选技术是用杂多酸浸渍支持材料。浸渍技术可能涉及将杂多酸水溶液吸入支持材料的多孔区域，然后干燥，除去水，留下被支持的杂多酸。可用本领域技术人员阅读了本说明书后能明白的其它固定杂多酸或其盐的方法来固定这些络合剂。
生物试剂在另一个实施方案中，络合剂是蛋白质、肽或其它与PrPSc选择结合的生物分子。
在一个实施方案中，络合剂是能与朊病毒选择性结合的肽类或其它小分子。优选的是，此肽类或小分子优先与PrPSc结合。“优先结合”表示肽类与PrPSc的结合此与生物溶液里其它蛋白质的结合至少高20倍或更多，优选50倍或更多，更好是100倍或更多，甚至1000倍或更多。本发明的肽优先地与PrPSc的天然形式(与变性形式相反)结合，因为生物性液体一般含有天然形式的PrPSc。正如本技术领域人员可预见地通过设计使肽更易于结合PrPSc而使其与最大程度结合PrPSc。美国专利5,846,533(1998，12月8日颁布)揭示和描示了结合PrPSc的有用的抗体，纳入本文以揭示和描述该抗体和制备抗体的方法。与PrPSc结合的这些抗体部分是肽，它们能与支持物表面结合，并用于本发明。
或者，肽类可设计成选择性地与PrPC结合，或与PrPSc和PrPC都能结合。虽然朊病毒的PrPSc形式是感染性部分，但除去正常细胞朊病毒蛋白也可有效地停止或减缓朊病毒介导疾病的进程。
本发明的络合剂也可是对朊病毒有选择性的抗体。该抗体可直接固定或与另一个组分(如高密度金属)结合。该抗体，如美国专利5,846,533揭示的抗体，可与PrPSc结合。为了除去样品中存在的PrPC，可使用选择地或排他地与PrPc结合的抗体。美国专利4,806,627(1989，2月21日颁布)揭示了这类抗体，它揭示由细胞系ATCC HB9222(1986，10月8日保藏)产生的单克隆抗体263K3F4，在此纳入本文供参考。产生该抗体的细胞系可从美国典型培养物保藏中心(ATCC，12301 Parklawn Drive，Rockville，MD 20852)获得。
一般来说，疯痒病感染不能产生免疫应答，宿主器官对来自同一种属的PrPSc有耐受性。美国专利5,846,533揭示了与PrPC结合、或与PrPSc结合的抗体。可使用与PrPC结合、与PrPSc不结合的任何抗体，本领域的技术人员可用已知方法来产生这些抗体，如参见美国专利5,223,409里的制备噬菌体展示抗体文库的方法。在用大量甲酸或SDS-变性的SHaPrP 27-30免疫后，兔子中出现了多克隆抗-PrP抗体[Bendheim，Barry等，(1984)Nature310418-421；Bode，Pocchiari等(1985).J.Gen Virol 662471-2478；Safar，Ceroni等(1990)Neurology 40513-517]。相似的是，在小鼠中也产生了抗PrP 27-30的少量抗-PrP单克隆抗体[Barry和Prusiner(1986)J.Infect Dis 154518-521；Kascsak，Rubenstein等(1987)J Virol 613688-3693]。这些抗体针对甲酸—或SDS-变性的PrP 27-30而产生，能识别SHa和人的天然的PrPC和处理过的或变性的PrPSc，但与MoPrP不结合。并不奇怪，；图示这些抗体识别的抗原决定基位于含有SHa-和MoPrP之间不同氨基酸序列的区域中[Rogers，Yehiely等(1993)Proc Natl Acad Sci USA 903182-3186]。
尚不完全清楚为何上述许多类型的抗体会与PrPC和处理过的或变性的PrPSc结合，而不与天然PrPSc结合。不受任何特定的理论所束缚，据信这可能是由于当该蛋白质是PrPC构型时，被暴露的抗原决定基在PrPSc构型中是不暴露的，或隐藏的此时该蛋白质相对不溶，更紧密地折叠在一起。
本发明中，没有结合发生表示平衡或亲和常数Ka是106升/摩尔或更低。另外，当Ka为107升/摩尔或更高，优选108升/摩尔或更高时，认为有结合存在。结合亲和力为107或更高可能是由于存在(1)一种单克隆抗体(即大量的一种抗体)或(2)多种不同的单克隆抗体(如大量五种不同单克隆抗体的每种)或(3)大量多克隆抗体。也可能使用(1)-(3)的组合。当与PrPSc天然构型的结合相比，所选的优选抗体与处理过的或变性的该蛋白质的PrPSc形式的结合是前者的至少四倍。可用几种不同的抗体，如上述(1)-(3)，得到结合亲和力的四倍差异，这类混合物里的一些抗体可能低于四倍差异。
一种或多种不同的抗体可用于各种不同的方法。本领域技术人员知道，抗体可用已知标记物标记，用于目前可得到的机器人技术，夹心试验，电子检测仪，流式细胞计数仪等等。进一步的是，抗体可直接与致密组分连接或通过其它中间体，如抗—抗体连接。
‘纯化方法本发明的络合剂可用于各种纯化方法，以从生物材料中有效除去朊病毒。以下综述了本发明中使用的许多方法。
亲和层析亲和层析(AC)依赖于朊病毒与固定化配体之间的相互作用。AC部分是依据连接于层析支持物的配体的相互作用。与基质偶联的疏水性配体本文称为AC支持物、AC凝胶或AC柱。进一步应当了解蛋白质和AC支持物之间的相互作用强度不仅是蛋白质上非极性与极性表面比例的函数，而且还受非极性表面分布的影响。
许多基质可用于制备AC柱。优选的是，这类基质是珠，更优选球形珠，用作本发明络合剂的支持表面。作为基质的建议性材料包括琼脂糖、交联糊精、多羟基异丁烯酸乙酯、聚丙烯酰胺、纤维素及其衍生物或其组合，优选多孔球形式。乙酸纤维素曾成功地用于纯化生物性液体的装置中，如体外血液纯化装置。聚氨酯与血液特别相容。硅胶和其衍生物也可特别用作与杂多酸一起使用的支持材料。参见美国专利5,475,178和5,366,945，在此纳入本文供参考。
用于本发明方法的优选材料是琼脂糖，一种天然形成的亲水性聚合物。通过改变琼脂糖的百分比可形成空隙率为90-96％的珠状凝胶。凝胶的分子量范围是对于10％琼脂糖为500,000到对于4％琼脂糖为20,000,000。市售颗粒的粒径为20-200微米。通过增加琼脂糖的百分比，或者，使用J.Porath等在Chromat 60，167(1971)中的方法，可用表氯醇或2，3-二溴丙醇交联珠来增加琼脂糖珠的机械强度。这可相应增加最大的操作压力(琼脂糖增加50％可致最大操作压力增加2-4倍)。
确定合适偶联方法的标准是最大程度减少支持物上的络合剂渗漏，保持化合物的热稳定性，和维持络合剂的最适量。该技术还必须不引起支持物材料破坏，或不引起支持物上反应性基团的产生，这些基团可能结合体内血组分。络合剂还必须在一定时间里保留其反应性。
在优化亲和层析偶联方法中必须考虑的其它因素是偶联剂在颗粒和/或柱里的分布程度；pH；温度；生物样品流经柱子的速度；结合的络合剂的大小；和/或具体支持物的直径和孔径。对于某具体方法、生物性样品和络合剂应优化这些条件的每个条件，本领域技术人员是懂得的。
本发明的AC组合物可装在过滤柱体内，以便易在生物性液体纯化方法中使用此组合物。当柱组合物装在一个柱体内时，当该组合物的纯化能力耗尽时可容易和方便地更换。或者，此柱体可为一纯化装置里的一个整合部分，一旦过滤组合物耗尽其效力后可更换整个装置。将带有络合剂的支持物颗粒装在柱体内，使能与络合剂反应的溶液通过柱体循环。用于透析、血液交换或氧化的市售单元适合用作纯化装置。
过滤方法可用于从生物样品中除去朊病毒的另一个方法涉及膜过滤。该膜上可具有朊病毒络合剂，该络合剂值接联接于膜，位于面对生物性液体的一面，或更佳的在离开生物性液体的一面上。或者，络合剂被划分到膜后面的区域里，它不能接近生物性材料的较大组分，如血细胞。在后一的实施例中，络合剂可与膜后面的不溶性基质结合。用于本发明的膜可以为平面形式、一个或多个空心纤维形式和/或平箔形式。参见美国专利4,361,484，在此纳入本文供参考。
膜的合适材料包括再生纤维素、乙酸纤维素、无纺丙烯酸共聚物、聚砜、聚醚砜、聚丙烯腈、聚酰胺等。将生物性活性材料固定在孔中和/或背离生物性液体的一面的膜表面上。因此，可预防诸如红血球等血组分与该活性材料接触。膜的孔通常大小为0.01-0.8微米，优选0.15-0.45微米。聚合物支持物必须在其计划使用的条件下稳定，即，不应被血液中的化学成分或酶成分所降解，支持物和固定络合剂必须与血液相容，在临床流动速率范围150-250毫升/分钟下，支持物应当有良好的流动特征和可压缩性低。
通过微孔膜的上述构建，即非对称性固定朊病毒络合剂，生物性液体不需要接触任何后续的过滤来除去可能遗留的有害残留物。分离和除去这些物质因此可在一个相同步骤里完成。
微孔半渗膜可为单纤维形式，成束并并包封入一个相同装置中，具有生物性液体的入口和出口。纤维末端用合适粘合剂胶合，以使单个纤维在包装里基本上平行。纤维或纤维束的一端与入口相连，而相反端与出口相连。
将生物材料通过入口泵入此装置，通过纤维的纵向空间，通过出口离开此装置。在该经此装置时，液体遭遇压力的变化，这样只有可渗透组分被迫在每个方向穿过纤维壁流入另一路径，，与朊病毒络合材料接触。实现压力变化的装置可由分别与单个纤维之间和纤维束之间的空间相连的膨胀室构成。由于通过液体穿过纤维壁实现了自动过滤，所以生物材料不再需要后续的过滤来除去可能的有害残留物。
压力变化可为-200到+200mmHg，优选-100到+100mmHg。例如，若朊病毒络合剂与膜后的不容性基质结合，血液的扩散距离越长，达到所需分离效果需要的补偿压力变化越高。在一相应的方法中，压力变化的频率可变化于0.05-10Hz，优选0.5-1Hz。在通过该处理单位后，生物材料，如全血可直接再输入人体，或可储存供将来使用。处理的血液可整体保存，或以其不同的组分，如血浆、血小板、红血球等进行保存。或者，在除去朊病毒前将血液分离成各个组分。
当络合剂是抗体时，常常需要一种分子澡隔片段形成将抗体与中空纤维膜多孔外侧面的壁隔开的装置。当抗原的分子量很大，如100,000道尔吨或更大时，这样的安排是优选的。例如，六个或八个碳的亚甲基能方便地作为抗体和膜表面之间的间隔或“把手”。当抗原很容易地被白蛋白吸附，或比滤膜表面的材料更易于与白蛋白发生化学反应时，间隔分子可为白蛋白芽蛋白质。膜的外表面与内表面相比可考虑采用相对多孔的材料，内表面通常是不对称类型，有时称为各向异性类型的超滤膜的有效过滤表面。因此，膜的多孔外侧面可用17％人白蛋白盐水溶液处理。白蛋白将包被在此膜结构的多孔区域(即，衬着膜屏障层的区域)的表面，此后，蛋白质溶液(如PrPSc抗体)可沉积在白蛋白上。通常需要(用稀戊二醛溶液或一些其它这类温和的交联诱导剂)稍微交联蛋白质；这有助于将材料固定在膜表面。
制备能除去血液致病因子的柱体的一种方法是用充分渗透性的纤维膜制作的体外循环系统，它能将血液致病因子通过膜除去，并进入隔离在纤维外空间的溶解的固定抗体。这涉及形成PrPSc抗体和PrPSc的高分子聚合性偶联物，它们不能穿越膜过滤面进入生物样品剩余部分(细胞保留在此)。
为了形成可溶的、固定的络合剂，免疫反应活性的络合剂分子量大小可增加到不会从纤维的外部多孔部分扩散并进入待纯化的血液中。这可通过使络合剂与高分子量、水溶性物质，如硅胶或右旋糖进行化学反应，或通过使免疫反应活性络合剂聚合而达到。由于增加了团块转移的极化作用速度和结合动力学，故使用这类带有大分子的抗体对于抗原的高吸附率是有利的。
或者，此膜可由机械上彼此相同、但化学上可由不同材料构成的两个半膜构成。在此情况下，若只有朝向生物材料离去的那半膜能与朊病毒络合剂结合就足够了。例如，两个半膜是一种彼此邻接的关系，其中PrPSc络合剂优选地结合在孔中和朝向生物材料离去的半膜的两个表面上。
络合剂(如NaPTA或抗-PrPSc抗体)也可固定在膜上，这样朝向生物材料的表面没有接触试剂。这避免了红血球和该试剂之间的接触，从而避免了热原反应和/或过敏的反应。因此，这是一种对称的固定形式，其中在膜的一个表面上(以及在孔中)固定有朊病毒络合剂。固定在膜的孔中的优点在于与肉眼可见的表面相比，可增加活性显微表面100倍以上。由于络合剂固定在朝向生物材料离去的部分膜上，生物材料不能与络合剂接触。结果，不需要后续的生物材料分离过滤。
或者，朊病毒络合剂被结合到膜后面的不溶性基质上。处理的方法很相似，但由于必须的扩散距离长约10倍，可能需要安排更实际的液流流经此膜。
不论朊病毒络合剂是否固定在孔中或固定在膜后面的不溶性基质上，优选的是固定过程，使朊病毒和络合剂的络合物保持被结合和固定，即，在纯化技术后不再存在于血液中。一般来说，共价偶联是最安全的固定。所用的共价偶联的性质取决于膜材料的选择和络合剂的性质。
磁性颗粒也可用由朊病毒络合剂构成的磁性颗粒除去生物材料中的朊病毒。本发明的磁性颗粒的主要组分是磁芯。芯材由氧化铁或其它磁性材料的颗粒构成。本发明的PrPSc结合剂可直接掺入磁芯，或如通过使用纤维材料和结合剂间接地掺入磁芯。纤维材料包括纤维形式的有机聚合物，如碳水化合物聚合物、脲甲醛或聚亚壬基脲，以及特别是纤维素纤维。结合剂是一种引入磁芯和纤维线之间的液体或溶液材料，在冻结、聚合或溶剂蒸发期间被固化。合适的结合剂的例子是琼脂糖、明胶环树脂或脲甲醛糠基醇。
用于该方法的磁性微粒可为各种形状，有规则或不规则的，优选的是使微粒的表面积最大的形状。磁微粒的大小应当能不困难地通过过滤或磁场分离而与溶液分开。另外，磁微粒不应大到使表面积最小或不适合微小规模操作。合适的粒径约为0.1-100μ的平均直径。优选的粒径约为1.0μ的平均直径。合适的磁微粒可购自PerSeptive Diagnostics，商品名BioMag COOH(分类号8-4125)。
可通过在含在纤维材料、朊病毒络合剂和结合剂的悬液中搅拌或混合芯颗粒来产生本发明包被的磁颗粒。与芯颗粒和结合剂连接的纤维填满了空隙。然后用上述的一种方法使结合剂固化，以这种方法朊病毒络合剂接近外表面。美国专利5,705,628描述了这类系统的一个例子，它使用氧化铁作为芯颗粒，纤维素纤维作为纤维材料，琼脂糖作为结合剂，在此纳入本文供参考。
在本发明的范围里也包括符复合的磁性树脂，它含有包埋在有机聚合物基质中的磁性颗粒，所述的有机聚合物或含有，或其上连接有对朊病毒有选择性的位点。
此复合物因此可含有包埋在含有可选择性吸附朊病毒的活性位点或化学物的聚合树脂中的磁性颗粒。例如，此聚合树脂具有其上连接有可选择性吸附物的小颗粒。选择性的吸附物可为，如磷钨酸的金属盐。
本发明的复合磁性颗粒可用于除去可流动性生物样品中的朊病毒的方法。可这样从人体产物中除去朊病毒使待处理的溶液与带有固定络合剂的复合磁性树脂颗粒接触，通过磁过滤将溶液与复合磁性树脂颗粒分开。这些磁性颗粒可使用一次即弃去，或重复用于纯化其它血液产品。用合适的再生溶液使分离的复合磁性树脂颗粒再生，将生溶液与再生的复合磁性树脂颗粒分开可重复使用这些颗粒。
带有结合的朊病毒的复合磁性树脂颗粒然后通过磁过滤，用本领域公知的技术从溶液中选择性地除去。然后从滤液中回收复合磁性树脂颗粒，用合适的再生溶液，如酸溶液除去其中的朊病毒。然后通过磁过滤从再生溶液中回收清洁的复合磁性树脂颗粒，清洁的颗粒重复用于其它用途。
病人的生物材料的纯化可通过体外处理单元进行，处理后，可保存纯化的液体，或将纯化的液体再输入病人体内。将病人的生物材料泵入一处理单元，该单元含有孔径为0.01-0.8微米，优选0.15-0.45微米的微孔半透膜。在通过该处理单元期间，生物材料被遭遇压力的变化(如从-200mmHg到+200mmHg，优选从-100mmHg到+100mmHg)，从而使该生物材料的可渗透组分，如血浆从每个方向穿过膜壁流入另一路径以接触络合剂。
实施例下列实施例旨在完整地揭示和描述，让本领域的普通技术人员能实施和应用本发明，并非用来限制本发明的范围，发明者认为他们的发明也并非由下列的实验(他们曾经做过的所有实验或仅有的实验)所代表。发明者已作出努力保证所用数字(如数量、温度等)的准确性，但也存在着一些实验偏差。除非另作指出，份数是重量份数，分子量是平均分子重量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。
实施例1在圆柱形金属层析设备中采用了硅酸盐衍生物组成的球形珠。在放入层析室前，用PTA浸渍珠来制备亲和层析用珠。通过由此开始的湿润方法，用25重量％H3PW12O40负载来浸渍约5毫米的珠。包被的珠在真空炉里干燥以除去过量的水。最后，将这些包被的珠在氮气中350℃煅烧1小时和空气中煅烧4小时。
将包被的球形珠冷却到约27℃，放在层析柱里，用pH 720mM磷酸钠液平衡。将人血浆制剂加入混合物中，以足以使朊病毒与固定的PTA结合的速度使其流过柱。然后用Western印迹分析测试等分纯化的血浆中朊病毒的存在。
实施例2按照美国专利4,361,484(纳入本文供参考)描述的方法来制备胺基取代尼龙膜。将对朊病毒有选择性的抗体交联于胺苯取代的膜用于过滤。将α-PrPSc分子的IgG部分用戊二醛固定在膜上。用2.5％戊二醛的pH＝6.8的0.1M磷酸缓冲液处理此膜，用蒸馏水淋洗，干燥。将含α-PrPSc的溶液溶于0.1mM磷酸缓冲液(pH＝6.0，4℃)中，将该溶液与处理过的膜一起培育。4℃使抗体与膜偶联15小时。培育后，膜用蒸馏水淋洗，收集未结合的α-PrPSc和第一次淋洗水供后面使用。
带有结合的α-PrPSc的膜然后用于血液过滤装置，以除去人血液中的PrPSc蛋白。将α-PrPSc-结合的滤膜放入血液过滤装置中，如美国专利5858,238、5,855,782和5,851,394所述，每个专利都纳入本文供参考。
实施例3纯化活体动物血液的一个方法涉及使血液通过体外分流器。用ID为200μl，内壁厚度为30微米的纤维素性中空纤维物建分流器用于该目的。所形成的柱体管内表面总面积为0.6平方米。
用抗-PrPSc抗体的硼酸盐缓冲液维持pH8.5灌注中空纤维。重复循环三小时后，柱体用盐水充分洗涤。为了评价纤维壁摄取抗体的程度，用本领域所知的免疫扩散技术，在重复循环步骤之前和之后分析了溶液里的抗-PrPSc抗体。接着以氮气流干燥此柱体，放在塑料袋子中并密封。
以“逆向”超滤模式，从外面经纤维壁泵入盐水溶液洗涤含1000根不对称中空纤维的柱体，所述的中空纤维截留孔径为500,000道尔吨分子量，内径为150-200微米。此后，为了将白蛋白的单分子层沉积在管状膜的外侧面的多孔表面上，以相同的方法将1％人血清白蛋白溶液泵入通过纤维壁。此后，使抗-PrPSc抗体溶液以“逆向”方向通过中空纤维壁过滤，让抗体在膜的外侧面或在接近膜的外部区域中直接结合。分析滤过前溶液和过滤离开内腔溶液的抗-PrPSc抗体的活性。其差额为沉积在柱体内的免疫活性抗体的量。用链霉素和盐水冲洗中空纤维内腔后，将柱体放入塑料袋并密封。这样制备的柱体可用于体外分流。
实施例4室温用针对天然PrPSc的单克隆抗体包被含有磁铁的超顺磁聚苯乙烯珠(平均直径0.8μm，67％磁含量--Sigma Chemical Co.)过夜。将所得的抗体包被珠放入注射器腔体的容器构成的装置中，该装置含有支持基质，被螺旋状缠绕的铜线包围，通过合适的开关装置连接合适的交流电。
将10毫升含有朊病毒蛋白的牛血加入珠中，培育10分钟(在施加磁场存在下)。对线圈施加A/C场(50Hz，50伏)以产生磁场，使磁性珠与血液分开。通过免疫-荧光染色技术，用抗-PrP荧光FITC偶联物(BradsureBiochemicals Ltd.)检验络合的珠中朊病毒的存在。用该方法检测的朊病毒络合物清楚地表明已实现了朊病毒的特异性捕获。
虽然本发明已参照具体的实施方案作了阐述，但本领域的技术人员应当明白，可进行的各种改变或用等价物替代的不脱离本发明的真正宗旨和范围。另外，可对本发明的目的、精神和范围做出许多修改以适合具体的情况、材料、组成、方法、加工步骤。这类修改均在本发明的权利要求的范围内。
权利要求
1.一种除去样品中朊病毒的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤使可流动液体状态的样品与朊病毒络合剂构成的固体底物接触；和让样品保持与底物接触一段时间以使样品中的朊病毒与该底物结合。
2.根据权利要求1所述的方法，其中络合剂选自杂多酸或其盐，磷钨酸的金属盐，肽和抗体。
3.根据权利要求1所述的方法，其中络合剂是抗体，和选择性地与PrPsc结合的抗体。
4.根据权利要求1所述的方法，其中样品包括人体体液。
5.根据权利要求4所述的方法，其中人体体液包括人血液。
6.根据权利要求4所述的方法，其中底物为球形珠形式，由其上包被有聚合物的磁铁金属组成，其中络合剂是磷钨酸的金属盐。
7.根据权利要求6所述的方法，该方法还包括通过施加磁能从与人体体液接触中取出该底物。
8.一种除去样品中朊病毒的装置，其包括水不溶聚合物；和包被在聚合物表面上的朊病毒络合剂。
9.根据权利要求8所述的装置，其包括磁铁金属，其中聚合物包被在磁铁金属上，络合剂选自磷钨酸或其盐，和能与PrPsc结合的抗体。
10.一种没有朊病毒的液体，其特征在于使其经过权利要求1所述的方法。
11.根据权利要求10所述的没有朊病毒的液体，其中该液体的进一步特征是来自人体。
12.根据权利要求11所述的没有朊病毒的液体，其中液体是人血液。
13.根据权利要求11所述的没有朊病毒的液体，其中液体是人血浆。
14.一种用于除去液体样品中朊病毒的流过装置，它包括一个供液体样品流过的壳体；和由朊病毒络合剂组成的底物表面。
15.根据权利要求14所述的装置，其中壳体是圆柱形的，底物是其表面包被有磷钨酸钠的聚合物珠。
全文摘要
本发明公开了流过柱的装置,制备球形聚合物珠的底物,和使用这类装置从液体样品中除去朊病毒的方法。底物的表面用朊病毒络合剂,如磷钨酸的金属盐(如钠盐)包被。使血液或血浆通过含有用朊病毒络合剂包被珠的柱后即去除了朊病毒。珠由铁磁芯组成,有利于从样品中取出珠。
文档编号A01N1/02GK1357109SQ99815767
公开日2002年7月3日 申请日期1999年12月17日 优先权日1999年1月20日
发明者S·B·普鲁赛纳, J·G·萨法 申请人:加利福尼亚大学董事会