一种高精度bl(含固定介质)培养基质的规模化制作方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种高精度BL(含固定介质)培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。更具体地说是一种包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤，以期获得不同批次和批次之间误差极小的培养基质、减少试验误差的方法。
【背景技术】
[0002]植物组织培养技术或无土栽培技术通常需要配制培养基母液，即配制扩大一定倍数、含有各种类型试剂的液体。然而，由于母液含有不同类型试剂，常常分为大量元素、微量元素、铁盐和有机元素四大类，而四大类所扩大的倍数不同，导致药品使用质量不一致，一则容易出现计算误差；二则药品的厂家、质量不一致，即使计算、称量一致，也会影响试验结果；三则由于母液为液体状态，在春夏之交季节，由于气温上升以及湿度增大，极其容易导致母液感染细菌、霉菌，导致母液中呈现不同颜色或出现沉淀的现象，浪费了原料；四则会因称量者对容器刻度的认知(尤其是微量元素)、仪器精密度的不同而出现较大误差。
[0003]鉴于母液配制的上述缺点，用常规的母液配制培养基，常常会出现因称量者、药品、季节等因素而导致的试验结果失败或无法重复的现象，极大的影响了运用植物组织培养或无土栽培技术开展试验的进程，打击了试验者的信心。
【发明内容】
[0004]一种高精度BL (含固定介质)培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
[0005]根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六个步骤具体操作如下:
①准确计算:将BL基本培养基所含的17种元素扩大1000倍，即二水钥酸钠0.25g，烟酸0.5g，碘化钾0.83g，硼酸6.2g，七水硫酸锌10.6g，四水硫酸锰22.3g，乙二胺四乙酸钠铁36.5g，肌醇100g，天冬氨酰100g，磷酸二氢钾170g，七水硫酸镁370g，二水氯化钙440g，硝酸铵1650g，硝酸钾1900g，琼脂粉5000g ；2种元素六水氯化钴和五水硫酸铜扩大10000倍，即各0.25g ；
②精确称量:按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.25g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③先少后多地混合:按照量的少多进行先后混合，即按照二水钥酸钠，烟酸，碘化钾，硼酸，七水硫酸锌，四水硫酸锰，乙二胺四乙酸钠铁，肌醇，天冬氨酰，磷酸二氢钾，七水硫酸镁，二水氯化钙，硝酸铵，硝酸钾，琼脂粉的顺序混合均匀，共计9707.73g ；
④密封:将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤单独母液制备:六水氯化钴和五水硫酸铜各称量0.25g，溶于IL蒸馏水中，配制成10000倍母液； ⑥启封使用:根据需要，每IL蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质9.7g，加热待其完全溶解后加入10PL六水氯化钴和五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
[0006]本发明的有益效果:该高精密度培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于17种试剂都扩大了 1000倍，2种试剂扩大了 10000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小，精密度高；理论上，由于固体基质每次为1000倍的使用量(以每次IL计算)，即可以配制1000L的上述配方，液体母液每次仅需要ΙΟΟμ?，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的固体基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象，而液体基质仅为两种元素的混合。扩大10000倍后精密度高；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基石出O O
[0007]【具体实施方式】:
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。
[0008]本实施例中一种高精度BL(含固定介质)(含碳源和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
[0009]上述六个步骤具体操作如下:
①准确计算:将BL基本培养基所含的17种元素扩大1000倍，即二水钥酸钠0.25g，烟酸0.5g，碘化钾0.83g，硼酸6.2g，七水硫酸锌10.6g，四水硫酸锰22.3g，乙二胺四乙酸钠铁36.5g，肌醇100g，天冬氨酰100g，磷酸二氢钾170g，七水硫酸镁370g，二水氯化钙440g，硝酸铵1650g，硝酸钾1900g，琼脂粉5000g ；2种元素六水氯化钴和五水硫酸铜扩大10000倍，即各0.25g ；
②精确称量:按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各
0.25g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③先少后多地混合:按照量的少多进行先后混合，即按照二水钥酸钠，烟酸，碘化钾，硼酸，七水硫酸锌，四水硫酸锰，乙二胺四乙酸钠铁，肌醇，天冬氨酰，磷酸二氢钾，七水硫酸镁，二水氯化钙，硝酸铵，硝酸钾，琼脂粉的顺序混合均匀，共计9707.73g ；
④密封:将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤单独母液制备:六水氯化钴和五水硫酸铜各称量0.25g，溶于IL蒸馏水中，配制成10000倍母液；
⑥启封使用:根据需要，每IL蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质9.7g，加热待其完全溶解后加入10PL六水氯化钴和五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
[0010]将上述基质配制后的IL溶液加入30g的蔗糖，进而加入Iml的IN的Κ0Η，溶解完全后分装于30个200ml的玻璃瓶中，121 °C灭菌20min后。于超净工作台上接种甜叶菊茎段，25°C光照12h条件下培养28d后，出现腋芽并生根良好。
【主权项】
1.一种高精度BL(含固定介质)培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六个步骤具体操作如下: ①准确计算:将BL基本培养基所含的17种元素扩大1000倍，即二水钥酸钠0.25g，烟酸0.5g，碘化钾0.83g，硼酸6.2g，七水硫酸锌10.6g，四水硫酸锰22.3g，乙二胺四乙酸钠铁36.5g，肌醇100g，天冬氨酰100g，磷酸二氢钾170g，七水硫酸镁370g，二水氯化钙440g，硝酸铵1650g，硝酸钾1900g，琼脂粉5000g ；2种元素六水氯化钴和五水硫酸铜扩大10000倍，即各0.25g ； ②精确称量:按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.25g的六水氯化钴和五水硫酸铜； ③先少后多地混合:按照量的少多进行先后混合，即按照二水钥酸钠，烟酸，碘化钾，硼酸，七水硫酸锌，四水硫酸锰，乙二胺四乙酸钠铁，肌醇，天冬氨酰，磷酸二氢钾，七水硫酸镁，二水氯化钙，硝酸铵，硝酸钾，琼脂粉的顺序混合均匀，共计9707.73g ； ④密封:将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封； ⑤单独母液制备:六水氯化钴和五水硫酸铜各称量0.25g，溶于IL蒸馏水中，配制成10000倍母液； ⑥启封使用:根据需要，每IL蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质9.7g，加热待其完全溶解后加入10PL六水氯化钴和五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该高精密度培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于17种试剂都扩大了 1000倍，2种试剂扩大了 10000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小，精密度高；理论上，由于固体基质每次为1000倍的使用量(以每次IL计算)，即可以配制1000L的上述配方，液体母液每次仅需要100μ?，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的固体基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象，而液体基质仅为两种元素的混合；扩大10000倍后精密度高；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
【专利摘要】本发明公开了一种高精度BL(含固定介质和碳源)培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。首先计算基质所含的18种元素扩大1000倍后的需求量以及CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O扩大10000倍后的需求量；准确称取药品；将18种元素按照需求量的少多进行先后混合、密封；将10000倍的CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O需求量用1L蒸馏水溶解后备用；根据需要分别启封。通过该方法可制备出扩大的基质具有精度高、操作方便、快速、应用简单、不同批次以及批次内误差小的特点，且避免了人为操作以及外界因素影响导致出现误差大、沉淀、发霉等现象，可运用于植物组织培养等生物技术用途。
【IPC分类】A01G31-00, A01H4-00
【公开号】CN104663441
【申请号】CN201510082514
【发明人】钱家静
【申请人】钱家静
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月16日