一种家榆组培快繁技术的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种家榆组培快繁技术。
【背景技术】
[0002]家榆(W皿5.pumila Linn.)为榆科榆属落叶乔木,喜光,耐寒,耐旱,耐贫瘠,不择土壤，适应性很强。根系较发达，抗风力、保土力强；萌芽力强，耐修剪；生长快，寿命长，是绿化荒山，保持水土的优良树种。同时也是城市绿化、防护林、盐碱地改造的主要树种，即可单独种植，也可作为行道树、护林带等，同时其适应性强、便于管理、病虫害少，是多用途树种。尤其在盐碱地改造方面起到了不可替代的作用。
[0003]家榆繁殖主要采用的方法有播种繁殖、扦插、嫁接等方法进行，种子繁殖方式繁殖系数低，而且实生苗分化明显，个体之间各种性状差异大。另外，扦插生根困难，嫁接又会受到接穗数量的限制，而且还有技术上的要求，直接导致繁殖的数量和速度受到了很大的限制。近些年来，通过对不同外植体的诱导已经获得了一些品种榆树的再生植株，但是榆树的组织培养体系并不是完全成熟。而本发明以带腋芽茎段为外植体，建立了榆树组培快繁技术体系，获得高效率的试管苗，保持母本的稳定性，为今后榆树基因工程改良作物和工厂化育苗提供基础材料。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种家榆组培快繁技术，本发明包括外植体的消毒、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程，实现了家榆种苗的快速繁殖，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种家榆组培快繁技术，包括以下的步骤:
(I)外植体的采集与处理:选取植株生长旺盛且气温较凉爽的季节采摘枝梢部位，用湿润的脱脂棉包裹好切口，在-4°C冰箱保存备用。将茎段腋芽剪成2?3cm左右长，去掉叶片及顶芽，保留少许叶柄，洗衣粉水浸泡10?30min，刷净后自来水冲洗I?2h，再用75%乙醇消毒5?30s后用无菌水洗3?5次,再用0.1%升萊溶液消毒10?25min,用无菌水冲洗4?6次后用无菌滤纸吸去水分。
[0006](2)初代培养:将步骤(I)的茎段接种到初代培养基上，先在25?28°C条件下全暗培养15?30天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为1500?30001x，直至诱导形成不定芽。
[0007](3)增殖培养:将步骤(2)的不定芽伸长2.5?3.5cm时，去掉顶芽后转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养3?7天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养，20天左右继代一次。
[0008](4)生根培养:将步骤(I)或(2)高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根。
[0009](5)炼苗移栽:将高约8?1cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
[0010]上述步骤(2)所述的初代培养基为:MS+6-BA0.1?1.0mg/L+IBA0.01?0.5mg/L+Adl.0 ?3.0mg/L+ 鹿糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+6-BA0.5?1.0mg/L+NAA0.01?0.5mg/L+鹿糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:1/2MS+IBA0.01?0.5mg/L+PG10?40mg/L+鹿糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]本发明的优点是:一种家榆组培快繁技术,涉及家榆(WfiMAs pumila Linn.)通过无性快繁技术快速获得株性稳定家榆种苗的繁育方法。本发明包括外植体的消毒、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程，实现了家榆种苗的快速繁殖，为今后榆树基因工程改良作物和工厂化育苗提供基础材料。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1:
(I)外植体的采集与处理:选取植株生长旺盛且气温较凉爽的季节采摘枝梢部位，用湿润的脱脂棉包裹好切口，在-4°C冰箱保存备用。将茎段腋芽剪成2?3cm左右长，去掉叶片及顶芽，保留少许叶柄，洗衣粉水浸泡lOmin，刷净后自来水冲洗lh，再用75%乙醇消毒5s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分。
[0016](2)初代培养:将步骤(I)的茎段接种到初代培养基上，先在25°C条件下全暗培养15天，然后置于每天光照12小时，光照强度为15001x条件下培养28天后即诱导形成不定芽，诱导率为89.4%。所述的初代培养基为:MS+6-BA0.lmg/L+IBA0.0 lmg/L+ AdL 0mg/L+鹿糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L, pH 为 5.4。
[0017](3)增殖培养:将步骤(2)的不定芽伸长2.5?3.5cm时，去掉顶芽后转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25°C的条件下培养23天即可继代一次，增殖系数为4.5。所述的增殖培养基为:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.0 lmg/L+ 蔗糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L，pH 为 5.4。
[0018](4)生根培养:将步骤(I)或(2)高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25°C条件下全暗培养I天，然后置于每天光照14小时，光照强度为30001x，培养温度为25°C的条件下培养27天即可生根，生根率为87.3%，平均根长2.5cm。所述的生根培养基为:1/2MS+IBA0.01mg/L+PG10mg/L+蔗糖 15g/L+琼脂 3.5g/L，pH为 5.4。
[0019](5)炼苗移栽:将高约8?1cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5天后,将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基,栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为83.7%。
[0020]实施例2:
(I)外植体的采集与处理:选取植株生长旺盛且气温较凉爽的季节采摘枝梢部位，用湿润的脱脂棉包裹好切口，在-4°C冰箱保存备用。将茎段腋芽剪成2?3cm左右长，去掉叶片及顶芽，保留少许叶柄，洗衣粉水浸泡12min，刷净后自来水冲洗2h，再用75%乙醇消毒8s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒13min，用无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸去水分。
[0021](2)初代培养:将步骤(I)的茎段接种到初代培养基上，先在27°C条件下全暗培养17天，然后置于每天光照14小时，光照强度为20001χ条件下培养26天后即诱导形成不定芽，诱导率为84.5%。所述的初代培养基为:MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.02mg/L+ AdL 5mg/L+鹿糖 25g/L+ 琼脂 4.0g/L, pH 为 5.6。
[0022](3)增殖培养:将步骤(2)的不定芽伸长2.5?3.5cm时，去掉顶芽后转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在27°C条件下全暗培养5天，然后置于每天光照15小时，光照强度为25001x，置于培养温度为27°C的条件下培养25天即可继代一次，增殖系数为4.7。所述的增殖培养基为:MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.05mg/L+ 蔗糖 18g/L+ 琼脂 3.9g/L，pH 为 5.6。
[0023](4)生根培养:将步骤(I)或(2)高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为35001x，培养温度为27 V的条件下培养24天即可生根，生根率为90%，平均根长
2.4cm。所述的生根培养基为:1/2MS+IBA0.2mg/L+PG15mg/L+ 蔗糖 25g/L+ 琼脂 3.5g/L，pH为 5.6。
[0024](5)炼苗移栽:将高约8?1cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5天后,将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基,栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为88.5%。
【主权项】
1.一种家榆组培快繁技术，其特征在于包括以下步骤: (1)外植体的采集与处理:选取植株生长旺盛且气温较凉爽的季节采摘枝梢部位，用湿润的脱脂棉包裹好切口，在-4°C冰箱保存备用，将茎段腋芽剪成2?3cm左右长，去掉叶片及顶芽，保留少许叶柄，洗衣粉水浸泡10?30min，刷净后自来水冲洗I?2h，再用75%乙醇消毒5?30s后用无菌水洗3?5次,再用0.1%升萊溶液消毒10?25min,用无菌水冲洗4?6次后用无菌滤纸吸去水分； (2)初代培养:将步骤(I)的茎段接种到初代培养基上，先在25?28°C条件下全暗培养15?30天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为1500?30001x，直至诱导形成不定芽； (3)增殖培养:将步骤(2)的不定芽伸长2.5?3.5cm时，去掉顶芽后转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养3?7天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养，20天左右继代一次； (4)生根培养:将步骤(I)或(2)高度约为3?5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根； (5)炼苗移栽:将高约8?1cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5?7天后,将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基,栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
2.根据权利要求1所述的一种家榆组培快繁技术，其特征在于步骤(2)所述的初代培养基为:MS+6-BA0.1 ?1.0mg/L+IBA0.01 ?0.5mg/L+ Adl.0 ?3.0mg/L+ 蔗糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。
3.根据权利要求1所述的一种家榆组培快繁技术，其特征在于步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+6-BA0.5 ?1.0mg/L+NAA0.01 ?0.5mg/L+ 蔗糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L，pH 为 5.4 ?5.8。
4.根据权利要求1所述的一种家榆组培快繁技术，其特征在于步骤(4)所述的生根培养基为:1/2MS+IBA0.01 ?0.5mg/L+PG10 ?40mg/L+ 蔗糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L，pH 为 5.4 ?5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种家榆组培快繁技术，涉及家榆（Ulmus pumila Linn.）通过无性快繁技术快速获得株性稳定家榆种苗的繁育方法。本发明包括外植体的消毒、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程，实现了家榆种苗的快速繁殖，为今后榆树基因工程改良作物和工厂化育苗提供基础材料。
【IPC分类】A01H4-00, A01G17-00
【公开号】CN104663448
【申请号】CN201510090988
【发明人】陈凤佳
【申请人】陈凤佳
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月1日