一种利用杀真菌剂防治褐飞虱子代的新方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物防治技术领域，特别是涉及一种利用杀真菌剂防治褐飞虱子代的 新方法。
【背景技术】
[0002] 褐飞虱是亚洲地区的重要水稻害虫，也是我国长江流域、华南和西南稻区的主要 害虫，给我国水稻生产造成极大危害。现有的防治方法主要通过推广抗虫水稻品种或通过 喷施杀虫剂来控制褐飞虱。抗虫水稻品种在短期内对褐飞虱种群有一定的控制作用，但褐 飞虱对抗虫水稻品种具有很强的适应性，一般繁殖3代就能适应品种抗性，因而需要辅以 杀虫剂来防治褐飞虱。但是，由于化学杀虫剂的大量频繁使用使褐飞虱对其产生了抗药性， 导致防治效果明显下降。
[0003] 褐飞虱脂肪体内存在大量共生菌，其中，类酵母共生菌对褐飞虱的生长发育起着 不可或缺的作用，缺乏类酵母共生菌的褐飞虱将不能正常发育或存活。褐飞虱羽化后，类酵 母共生菌通过褐飞虱卵巢随卵垂直传播给子代褐飞虱。在垂直传播过程中，类酵母共生菌 从褐飞虱雌成虫的脂肪体游离到血淋巴中，再进入卵巢组织，最后通过内吞作用进入褐飞 虱的卵母细胞，从而完成从母代到子代的传播过程。在上述传播过程中，从褐飞虱雌成虫的 脂肪体游离到血淋巴中的类酵母共生菌，比在脂肪体内更容易受到杀真菌剂及其他外界因 子的影响。
[0004] 既然类酵母共生菌在褐飞虱代次间垂直传播，且类酵母共生菌与褐飞虱生长繁殖 关系十分紧密，因此，通过"抑制或阻止类酵母共生菌进入褐飞虱的卵巢，使褐飞虱产下的 卵缺少类酵母共生菌，最终导致褐飞虱卵难以孵化或子代褐飞虱难以存活"的手段来控制 子代褐飞虱发生以及减少褐飞虱为害，这必将成为今后防治褐飞虱的一种重要新手段。
【发明内容】
[0005] 本发明将杀真菌剂丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A用于抑制或阻止褐 飞虱雌成虫体内的类酵母共生菌在代次间的垂直传播，从而降低褐飞虱产卵量、卵孵化率 或使子代褐飞虱因缺菌无法存活来有效控制褐飞虱。所述的丰加霉素&四霉素 P&四烯菌 素 B&四霉素 A由淀粉酶产色链霉菌（SirepioffiiFce1S D合成。本发 明为水稻褐飞虱的有效防治提供了一种新的思路和方法。
[0006] 本发明淀粉酶产色链霉菌（5： i/iasiaiocAroffiogefles)，定名为淀粉酶产色链霉菌 D。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址北京市朝阳 区北辰西路1号院3号，保藏日期2007年5月25日，保藏登记号CGMCC No. 2060。
[0007] 本发明的目的是针对褐飞虱对常规化学杀虫剂产生抗药性，导致化学防治效果明 显下降的不足，提供一种利用杀真菌剂丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A抑制褐 飞虱雌成虫体内类酵母共生菌在代次间的垂直传播，进而引起子代褐飞虱因缺菌无法存活 的新思路；本发明的另一目的是提供了一种防治褐飞虱的新方法。
[0008] 本发明目的通过以下技术方案来实现： 将杀真菌剂27%丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A (其中丰加霉素质量百分 比5. 58%，四霉素 P质量百分比7. 09%，四烯菌素 B质量百分比4. 44%，四霉素 A质量百分比 9. 64%)用于褐飞虱子代的防治。
[0009] 本发明的有益效果：本发明提供了一种利用杀真菌剂防治褐飞虱子代的新方法。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1 : (27%丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A的制备方法） 按以下步骤进行： (1) 菌种的活化培养：将分离保存的淀粉酶产色链霉菌D菌种移至试管内高氏一号斜 面上，在28°C ±1°C条件下，培养至试管斜面长满孢子； (2) 发酵培养：发酵培养液为每1000 mL中含有黄豆饼粉20g，玉米粉15g，麸皮10g， NH4N033g，（NH4) 2S045g，CaC035g，MgS04lg，灭菌，待冷却至40°C，在无菌条件下接种一金属钼 丝环淀粉酶产色链霉菌D孢子至发酵培养液中，在28°C ±1°C条件下，培养5天； (3) 发酵物提取：发酵完毕后离心收集发酵液，加入等体积乙酸乙酯萃取，取下层，再用 等体积正丁醇萃取，取上层，在真空条件下浓缩至浸膏，该浸膏中包含丰加霉素&四霉素 P& 四烯菌素 B&四霉素 A，用自来水溶解浸膏，配制成终浓度为27%丰加霉素&四霉素 P&四烯 菌素 B&四霉素 A杀真菌剂。
[0011] 实施例2 :(27%丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A杀真菌剂在褐飞虱防 治中的应用） 按以下步骤进行： (1)分蘖拔节期TNl水稻植株，清除部分根和基部叶鞘后洗净，自然晾干； (2 )以清水作对照，0. 04g/L吡虫啉药液处理为阳性对照，喷施终浓度为27%丰加霉素& 四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A杀真菌剂，要求药液雾滴分布均匀，覆盖率高，药液量适当， 以湿润目标物表面不产生流失为宜，自然晾干； (3)经步骤（2)处理后的稻苗主茎放入事先注入20ml水稻培养液的大试管中，每个试 管一根水稻苗，12 h后分别于每支试管内放入发育期一致的褐飞虱1龄若虫1头，两层纱布 封口，每个处理重复150次，I h后，逐一观察试管内的若虫，替换物理损伤的虫体，保证试 管内没有因为物理损伤而死亡的褐飞虱若虫。
[0012] (4)褐飞虱从1龄若虫开始均在温度26±1 °C，湿度：70-80%，光照时间16 h，黑 暗时间8 h的人工气候室内培养。每天观察并记录褐飞虱的生长发育情况。将上述不同 处理组内已羽化的褐飞虱成虫雌雄一一配对，并相应的接入装有其对应处理组的稻苗的大 试管中，两层纱布封口。每天观察成虫的存活情况，并更换经过对应药剂处理的新鲜稻苗， 利用双筒显微镜对替换出的稻苗进行镜检，记录当天的产卵相关指标。成虫期更换下来的 稻苗镜检完毕后，将其放到新的试管内继续培养至卵块孵化，每天观察并统计孵化量、孵化 率、孵化总量等。
[0013] (5)取刚孵化的卵进行共生菌数量的测定，测定方法为：分别在体视镜下取各处 理组的褐飞虱卵50个，用75%的酒精消毒，无菌水漂洗，放入1.5ml离心管中，加入0.9% 的生理盐水10 μ 1，匀衆，然后取1 μ 1匀衆液滴于血细胞计数板上，盖上盖破片，在显微镜 (400 X )下统计共生菌数量。
[0014] 实施例3 : (27%丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A杀真菌剂对褐飞虱若 虫和成虫的防治作用） 按以下步骤进行： (1) 分蘖拔节期TNl水稻植株，清除部分根和基部叶鞘后洗净，自然晾干； (2) 以清水作对照，喷施终浓度为27%丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A，要 求药液雾滴分布均匀，覆盖率高，药液量适当，以湿润目标物表面不产生流失为宜，自然晾 干； (3) 经步骤（2)处理后的稻苗主茎放入事先注入20ml水稻培养液的大试管中，每管3 根稻苗，接入3龄褐飞虱若虫（或刚羽化的短翅雌成虫）30头，以喷施清水后的水稻苗处理 作为阴性对照，喷施〇. 〇4g/L吡虫啉药液处理为阳性对照，每个处理3次重复； (4) 在处理后4天统计褐飞虱死亡率。
[0015] 试验例1 :(本发明丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A与常规化学农药防 治效果对比试验） 试验结果见表1。从表1可以看出，丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A明显抑 制了褐飞虱产卵量、卵内共生菌的数量和卵的孵化率。
[0016] 表1丰加霉素&四霉素 P&四烯菌素 B&四霉素 A对卵共生菌数量、卵孵化率和产 卵量的影响
【主权项】
1. 一种利用杀真菌剂防治褐飞虱子代的新方法，所述杀真菌剂丰加霉素&四霉素P&四 烯菌素B&四霉素A的质量百分比为27% -54%。
2. 权利要求1所述的新方法，由以下方法获得：将杀真菌剂27%丰加霉素&四霉素P& 四烯菌素B&四霉素A用于阻止或者抑制类酵母共生菌从褐飞虱雌成虫的血淋巴中进入卵 巢组织，从而使得褐飞虱生殖系统受影响，产卵量减少，产出的卵也因缺少共生菌导致孵化 率显著降低，从而有效控制了褐飞虱次代的发生。
3. 权利要求2所述的杀真菌剂丰加霉素&四霉素P&四烯菌素B&四霉素A，由淀粉酶 产色链霉菌D合成。
4. 权利要求2所述的杀真菌剂，由以下方法获得： (1) 菌种的活化培养：将分离保存的淀粉酶产色链霉菌D菌种移至试管内高氏一号斜 面上，在28°C± 1°C条件下，培养至试管斜面长满孢子，所述的淀粉酶产色链霉菌D已在中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号 院3号，保藏日期2007年5月25日，保藏登记号CGMCCNo. 2060 ; (2) 发酵培养：发酵培养液为每1000 mL中含有黄豆饼粉20g，玉米粉15g，麸皮10g， NH4N033g，（NH4) 2S045g，CaC035g，MgS04lg，灭菌，待冷却至40°C，在无菌条件下接种一金属钼 丝环淀粉酶产色链霉菌D孢子至发酵培养液中，在28°C±1°C条件下，培养5天； (3) 发酵物提取：发酵完毕后离心收集发酵液，加入等体积乙酸乙酯萃取，取下层，再用 等体积正丁醇萃取，取上层，在真空条件下浓缩至浸膏，该浸膏中包含丰加霉素&四霉素P& 四烯菌素B&四霉素A，用自来水溶解浸膏，配制成终浓度为27%丰加霉素&四霉素P&四烯 菌素B&四霉素A杀真菌剂(其中丰加霉素质量百分比5. 58%，四霉素P质量百分比7. 09%， 四烯菌素B质量百分比4. 44%，四霉素A质量百分比9. 64%)。
【专利摘要】本发明涉及生物防治技术领域，特别是涉及一种利用杀真菌剂防治褐飞虱子代的新方法。本发明将27%丰加霉素&四霉素P&四烯菌素B&四霉素A（其中丰加霉素质量百分比5.58%，四霉素P质量百分比7.09%，四烯菌素B质量百分比4.44%，四霉素A质量百分比9.64%）用于褐飞虱子代的防治。本发明最显著的特征是杀菌剂丰加霉素&四霉素P&四烯菌素B&四霉素A阻止或者抑制了类酵母共生菌从褐飞虱雌成虫的血淋巴中进入卵巢组织，从而使得褐飞虱生殖系统受影响，产卵量减少，产出的卵也因缺少共生菌导致孵化率显著降低，从而有效控制了褐飞虱次代的发生。CGMCC No.206020070525
【IPC分类】A01P3-00, A01P7-04, A01N43-90
【公开号】CN104782639
【申请号】CN201510193541
【发明人】申屠旭萍, 俞晓平, 许益鹏
【申请人】中国计量学院
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月23日