一种天麻的组培快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物细胞工程技术领域，具体地涉及一种天麻的组培快繁方法。
【背景技术】
[0002]天麻，据《神农本草经》记载，原名叫“赤箭”，最早见于《开宝本草》，在《本草纲目》里称为“定风草”，是著名的中药材。富含天麻素，香荚兰素，蛋白质，氨基酸，微量元素。其性辛、温、无毒，有抗癫痫，抗悸厥，抗风湿；镇静，镇痉，镇痛，补虚，平肝息风的功效。临床应用证明，对血管性神经性头痛、脑震荡后遗症等有显著疗效。
[0003]近年来，天麻属药材的市场需求量大幅度增长，但由于土地开发、环境污染及过度采挖等原因，野生天麻属药材资源日益枯竭。人工栽培天麻属药材目前普遍存在产量低、有效成分含量低等问题，严重制约了天麻属药材的产业化发展。
[0004]天麻正常的繁殖方式是块茎繁殖、种子繁殖，但由于天麻的种子体积小，采集不便，所以生产上一般采用块茎繁殖。但块茎繁殖效率很低，块茎、种子、珠芽的总繁殖效率约为1:15-1:20。采用传统的块茎繁殖越来越难以满足天麻植物规模化生产的需求。
[0005]通过组培快繁，利用优良单株作为扩繁的材料，可获得遗传基础和外观品质形状等重要性状均一的繁殖体，并进一步获得品质均一的原药材，同时通过无性繁殖可有效解决野生变家种过程中的种苗基数问题，保证规模化种植中的优质种苗批量生产问题。
[0006]天麻自身缺乏同化外界元素和获得矿质营养的能力。外界矿质营养大部分靠蜜环菌获得，蜜环菌可提供天麻全生育期的营养，天麻吸收矿质营养的关键就是蜜环菌的“泵”作用。经研究，蜜环菌起“泵”作用的物质是带负电荷的氨基酸，且主要是天冬氨酸和谷氨酸。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种天麻的组培快繁方法，该方法可快速高效地大规模繁殖天麻苗，从而移植大田，扩大天麻种植面积，提高天麻的产量和品质，推动天麻产业链的健康发展。
[0008]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现:
[0009]一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤:
[0010]⑴培养基配置:基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为:
[0011]基础培养基:用MS培养基，附加蔗糖2-3%，琼脂1-2%，pH5.5-6.0 ；
[0012]愈伤组织诱导培养基:1/2MS添加 KTl.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L和 Glu50-1000mg/L ；
[0013]分化培养基:1/2MS添加 KTl.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L 和Glul00-500mg/L ；
[0014]增殖培养基:1/2MS添加 ΚΤ0.5-1.0mg/L、LFS0.1-0.3mg/L、Asp50-200mg/L 和Glu200-800mg/L ；
[0015]生根培养基:1/2MS添加 KTl.0-3.0mg/L、LFS0.3-0.5mg/L、Aspl00-200mg/L 和Glu500-1000mg/L ；
[0016]⑵外植体选择及处理:取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70%酒精喷洒一遍，再用0.1%的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗4-5次，在超净工作台上将茎尖切成0.5-1.0cm 的小块；
[0017]⑶诱导愈伤组织:将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为23-27°C，光照1800-2300LX，光暗比为1:1的条件下培养；
[0018]⑷分化培养:将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
[0019](5)增殖培养:将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
[0020](6)生根培养:将步骤(5)增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
[0021](7)移栽:当步骤(6)的生根组培苗生长至4_6cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
[0022]上述的KT为激动素，是一种细胞分裂素，可调节植物生长。
[0023]上述的LFS为灵发素，是一种新型生长调节剂，它同时具有CTK和Auxin两类激素的生物活性。
[0024]上述的Asp为天冬氨酸，Glu为谷氨酸。
[0025]本发明的有益效果是:本发明可快速高效地大规模繁殖天麻苗，从而移植大田，扩大天麻种植面积，提高天麻的产量和品质，推动天麻产业链的健康发展。
【具体实施方式】
[0026]结合实施例进一步对本发明作阐述，不构成对本发明的限制。
[0027]实施例1
[0028]一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤:
[0029]⑴培养基配置:基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为:
[0030]基础培养基:用MS培养基，附加蔗糖2 %，琼脂I %，pH5.5 ；
[0031]愈伤组织诱导培养基:1/2MS添加 KTl.0mg/L,LFS0.5mg/L、Asp20mg/L和 Glu50mg/L ；
[0032]分化培养基:1/2MS添加 KTl.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp20mg/L 和 Glul00mg/L ；
[0033]增殖培养基:1/2MS添加 ΚΤ0.5mg/L、LFS0.lmg/L、Asp50mg/L 和 Glu200mg/L ；
[0034]生根培养基:1/2MS添加 KTl.0mg/L、LFS0.3mg/L、Aspl00mg/L 和 Glu500mg/L ；
[0035]⑵外植体选择及处理:取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70%酒精喷洒一遍，再用0.1 %的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗4次，在超净工作台上将茎尖切成0.5cm的小块；
[0036]⑶诱导愈伤组织:将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为23°C，光照2300Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
[0037]⑷分化培养:将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
[0038](5)增殖培养:将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
[0039](6)生根培养:将步骤(5)增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
[0040](7)移栽:当步骤(6)的生根组培苗生长至4cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
[0041]实施例2
[0042]一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤:
[0043]⑴培养基配置:基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为:
[0044]基础培养基:用MS培养基，附加蔗糖3 %，琼脂2 %，pH6.0 ；
[0045]愈伤组织诱导培养基:1/2MS添加 KT2.0mg/L、LFS0.5mg/L、Aspl00mg/L 和Glul000mg/L ；
[0046]分化培养基:1/2MS添加 KT2.0mg/L、LFS0.5mg/L、Aspl00mg/L 和 Glu500mg/L ；
[0047]增殖培养基:1/2MS添加 KTl.0mg/L、LFS0.3mg/L、Asp200mg/L 和 Glu800mg/L ；
[0048]生根培养基:1/2MS添加 KT3.0mg/L、LFS0.5mg/L、Asp200mg/L 和 Glul000mg/L ；
[0049]⑵外植体选择及处理:取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70%酒精喷洒一遍，再用0.1%的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗5次，在超净工作台上将茎尖切成1.0cm的小块；
[0050]⑶诱导愈伤组织:将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为27°C，光照1800Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
[0051]⑷分化培养:将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
[0052](5)增殖培养:将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
[0053](6)生根培养:将步骤(5)增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
[0054](7)移栽:当步骤(6)的生根组培苗生长至6cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
[0055]实施例3
[0056]一种天麻的组培快繁方法，包括以下具体步骤:
[0057]⑴培养基配置:基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为:基础培养基:用MS培养基，附加蔗糖2.5%，琼脂1.5%,pH5.8 ；
[0058]愈伤组织诱导培养基:1/2MS添加 KTl.5mg/L、LFS0.3mg/L、Asp50mg/L 和Glu500mg/L ；
[0059]分化培养基:1/2MS添加 KTl.5mg/L、LFS0.3mg/L、Asp50mg/L 和 Glu250mg/L ；
[0060]增殖培养基:1/2MS添加 ΚΤ0.8mg/L、LFS0.2mg/L、Aspl00mg/L 和 Glu500mg/L ；
[0061]生根培养基:1/2MS添加 KT2.0mg/L、LFS0.4mg/L、Aspl50mg/L 和 Glu800mg/L ；
[0062]⑵外植体选择及处理:取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70%酒精喷洒一遍，再用0.1 %的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗5次，在超净工作台上将茎尖切成0.8cm的小块；
[0063]⑶诱导愈伤组织:将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为25°C，光照2000Lx，光暗比为1:1的条件下培养；
[0064]⑷分化培养:将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽；
[0065](5)增殖培养:将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎；
[0066](6)生根培养:将步骤(5)增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养；
[0067](7)移栽:当步骤(6)的生根组培苗生长至5cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
【主权项】
1.一种天麻的组培快繁方法，其特征在于:包括以下具体步骤: ⑴培养基配置:基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含重量为: 基础培养基:用MS培养基，附加蔗糖2-3%，琼脂1-2%，pH5.5-6.0 ； 愈伤组织诱导培养基:1/2MS 添加 KTl.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L 和Glu50-1000mg/L ； 分化培养基:1/2MS 添加 KTl.0-2.0mg/L、LFS0.2-0.5mg/L、Asp20-100mg/L 和Glul00-500mg/L ； 增殖培养基:1/2MS 添加 ΚΤ0.5-1.0mg/L、LFS0.1-0.3mg/L、Asp50-200mg/L 和Glu200-800mg/L ； 生根培养基:1/2MS 添加 KTl.0-3.0mg/L、LFS0.3-0.5mg/L、Aspl00_200mg/L 和Glu500-1000mg/L ； ⑵外植体选择及处理:取正在生长的天麻，自来水冲洗干净，用70%酒精喷洒一遍，再用0.1 %的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗4_5次，在超净工作台上将茎尖切成0.5-1.0cm的小块； ⑶诱导愈伤组织:将处理过的天麻块茎小块接种在愈伤组织诱导培养基上，在温度为23-27。。，光照1800-2300LX，光暗比为1:1的条件下培养； ⑷分化培养:将步骤⑶诱导形成的愈伤组织移至分化培养基上使其分化出不定芽； (5)增殖培养:将步骤⑷诱导形成的不定芽移至增殖培养基上再分化，形成原球茎； (6)生根培养:将步骤(5)增殖形成的原球茎，接种在生根培养基中进行培养； ⑵移栽:当步骤(6)的生根组培苗生长至4-6cm时，移栽入基质，在温室中培养至成苗，炼苗后，直接移植大田。
【专利摘要】本发明公开一种天麻的组培快繁方法，属于植物细胞工程技术领域。该方法的具体步骤包括：培养基配置、外植体选择及处理、诱导愈伤组织、分化培养、增殖培养、生根培养和移栽。本发明可快速高效地大规模繁殖天麻苗，从而移植大田，扩大天麻种植面积，提高天麻的产量和品质，推动天麻产业链的健康发展。
【IPC分类】A01G1/00, A01H4/00
【公开号】CN105210863
【申请号】CN201410254106
【发明人】谢炯
【申请人】谢炯
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2014年6月9日