一种兜兰种子萌发培养基及培养方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物种苗繁殖领域，具体涉及一种兜兰种子萌发培养基及培养方法与 应用。
【背景技术】
[0002] 兜兰（Paphiopedilum Pfitzer)为兰科兜兰属所有植物的统称，又称为仙履兰、拖 鞋兰等，属于兰科（Orchidaceae)中的一个较为原始的类群，全属约有76种，主要分布于亚 种热带地区至太平洋岛_，生长在热带雨林下，地生或附生。其中杏黄兜兰（P. armeniacum) 和白花兜兰（P. emersonii)为我国特有种。全属均列入《野生动植物濒危物种国际贸易公 约（CITES)》1级保护的珍稀濒危物种，同时也是我国一级保护珍稀植物。（罗毅波等，2003)
[0003] 兜兰花型独特，株型娟秀，色彩艳丽，花期长，是全球范围内最受欢迎的兰花种类 之一。兜兰的栽培和育种历史悠久，发展至今已拥有数量巨大的杂交品种，在全世界范围内 拥有最为众多的爱好者。兜兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖速度极慢，利用外植体扩增 的组培技术虽有一些报道，但还不能进行产业化运行。种子的离体非共生萌发技术，是目前 全球范围内普遍采用的兜兰种苗生产技术。兜兰种子微小，不含胚乳，自然条件下其萌发需 要与真菌共生，且萌发率极低。针对兜兰属的离体非共生萌发技术虽早有研究，但普遍存在 萌发数量低，萌发状况不稳定等问题；其无性繁殖，即克隆更是十分困难；故兜兰的商业化 生产主要通过人工授粉获得果实，并进行种子的离体非共生萌发获得实生苗的方式获得种 苗；受限于种子的萌发率低和稳定性差，规模生产具有一定的难度。
【发明内容】
[0004] 为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种兜兰种子萌发 培养基。
[0005] 本发明的另一目的在于提供一种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，该 培养方法能够有效提高兜兰种子的离体非共生萌发的萌发率，有效缩短萌发所用时间。
[0006] 本发明的再一目的在于提供上述兜兰种子萌发培养基的应用。
[0007] 本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
[0008] -种兜兰种子萌发培养基，以1/4MS培养基为基础培养基；
[0009] 所述的兜兰种子萌发培养基还包含的组分及其含量如下：
[0011] 所述的胺鲜酯的含量优选为1~8毫克/升；
[0012] 所述的胺鲜酯的含量进一步优选为8毫克/升；
[0013] -种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，包含如下步骤：
[0014] 将兜兰种子接入兜兰种子萌发培养基中，在22°C、黑暗的条件下培养至种子萌 发；
[0015] 所述的兜兰种子优选为红魔帝兜兰种子；
[0016] 所述的兜兰种子优选通过如下方式获得：选择授粉后180天（180DAP)的兜兰果 实，经过表面消毒后，切开果实，获得兜兰种子；
[0017] 所述的表面消毒的方式优选为采用0. 1% (w/v)的升汞溶液浸泡7~15分钟，期 间多次摇动，以保证表面消毒的效果；
[0018] 所述的培养的时间优选为50天；
[0019] 所述的将兜兰种子接入兜兰种子萌发培养基具体的操作为：将兜兰种子撒播在已 灭菌的兜兰种子萌发培养基表面；
[0020] 所述胺鲜酯化学名称为乙酸二乙胺基乙醇脂（Diethyl Aminoethyl Hexanoate)， 分子式 C12H25NO2，分子量 215. 33, CAS 编号为 10369-83-2 ;
[0021] 所述的兜兰种子萌发培养基在兜兰繁殖领域中的应用；
[0022] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0023] (1)本发明提供的兜兰种子萌发培养基成分简单、成本低，米用1/4MS培养基为基 础培养基，通过降低大量元素的离子浓度，有利于兜兰种子萌发，提高兜兰种子离体非共生 萌发率。
[0024] (2)本发明在1/4MS培养基为基础上，通过添加适量的胺鲜酯可显著提高兜兰种 子萌发率并缩短萌发时间，其中萌发率高达90%以上，添加过高或过低的胺鲜酯均不利于 兜兰种子的萌发。
[0025] (3)本发明在1/4MS培养基为基础上，通过添加活性炭、蛋白胨、胺鲜酯联合作用 于种子，有效吸附种子产生的酚类、醌类物质，抑制褐化，打破种子的休眠，促进种子萌发， 显著缩短萌发时间。
[0026] (4)本发明提供了一种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，该方法具有 操作简便、成本低、提高种子离体非共生萌发的萌发率的效果，可以用于兜兰的大规模繁殖 生产。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。 [0028] 实施例1
[0029] -种兜兰种子萌发培养基，以1/4MS培养基为基础培养基；
[0030] 所述的兜兰种子萌发培养基还包含的组分及其含量如下：
[0031]
[0032] -种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，包括以下步骤：
[0033] (1)外植体的获得：在红魔帝兜兰植株开花时，选取长势好的植株作为亲本进行 人工授粉，授粉后180天采收果实，以果实内种子作为外植体材料，进行无菌播种；
[0034] (2)将步骤⑴采收后的果实置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中进行消毒12分钟， 期间多次摇动，以保证表面消毒的效果；然后用无菌水漂洗3次；在超净工作台中切开果 实，将种子撒在已灭菌的兜兰种子萌发培养基表面；
[0035] (3)将接种后的培养瓶置于22°C、黑暗条件下培养50天，当种子萌发后，转入 20001UX的光照条件下培养至有2片真叶形成，即可转接；
[0036] 本实施例兜兰种子的萌发率为27. 2%。
[0037] 实施例2
[0038] -种兜兰种子萌发培养基，以1/4MS培养基为基础培养基；
[0039] 所述的兜兰种子萌发培养基还包含的组分及其含量如下：
[0041] -种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，包括以下步骤：
[0042] (1)外植体的获得：在红魔帝兜兰植株开花时，选取长势好的植株作为亲本进行 人工授粉，授粉后180天采收果实，以果实内种子作为外植体材料，进行无菌播种；
[0043] (2)将步骤⑴采收后的果实置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中进行消毒12分钟， 期间多次摇动，以保证表面消毒的效果；然后用无菌水漂洗3次；在超净工作台中切开果 实，将种子撒在已灭菌的兜兰种子萌发培养基表面。
[0044] (3)将接种后的培养瓶置于22°C、黑暗条件下培养50天，当种子萌发后，转入 20001UX的光照条件下培养至有2片真叶形成，即可转接；
[0045] 本实施例兜兰种子的萌发率为90. 1 %。
[0046] 实施例3
[0047] -种兜兰种子萌发培养基，以1/4MS培养基为基础培养基；
[0048] 所述的兜兰种子萌发培养基还包含的组分及其含量如下：
[0049]
[0050] -种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，包括以下步骤：
[0051] (1)外植体的获得：在红魔帝兜兰植株开花时，选取长势好的植株作为亲本进行 人工授粉，授粉后180天采收果实，以果实内种子作为材料，进行无菌播种；
[0052] (2)将步骤⑴采收后的果实置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中进行消毒12分钟， 期间多次摇动，以保证表面消毒的效果；然后用无菌水漂洗3次；在超净工作台中切开果 实，将种子撒在已灭菌的兜兰种子萌发培养基表面。
[0053] (3)将接种后的培养瓶置于22°C、黑暗条件下培养50天，当种子萌发后，转入 20001UX的光照条件下培养至有2片真叶形成，即可转接；
[0054] 本实施例兜兰种子的萌发率为4. 2%。
[0055] 对照实施例
[0056] -种兜兰种子萌发培养基，以1/4MS培养基为基础培养基；
[0057] 所述的兜兰种子萌发培养基还包含的组分及其含量如下：
[0059] -种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，包括以下步骤：
[0060] (1)外植体的获得：在红魔帝兜兰植株开花时，选取长势好的植株作为亲本进行 人工授粉，授粉后180天采收果实，以果实内种子作为材料，进行无菌播种；
[0061] (2)将步骤⑴采收后的果实置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中进行消毒12分钟， 期间多次摇动，以保证表面消毒的效果；然后用无菌水漂洗3次；在超净工作台中切开果 实，将种子撒在已灭菌的兜兰种子萌发培养基表面。
[0062] (3)将接种后的培养瓶置于22°C、黑暗条件下培养50天，当种子萌发后，转入 20001UX的光照条件下培养至有2片真叶形成，即可转接；
[0063] 本实施例兜兰种子的萌发率为2. 6%。
[0064] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种兜兰种子萌发培养基，其特征在于：以1/4MS培养基为基础培养基； 所述的兜兰种子萌发培养基还包含的组分及其含量如下： 纯椰汁 100毫升/升 活性炭 1克/升 蛋白胨 0.5克/升 胺鲜酯 1~16毫克/升。2. 根据权利要求1所述的兜兰种子萌发培养基，其特征在于： 所述的胺鲜酯的含量为1~8毫克/升。3. 根据权利要求2所述的兜兰种子萌发培养基，其特征在于： 所述的胺鲜酯的含量为8毫克/升。4. 一种提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，其特征在于包含如下步骤： 将兜兰种子接入权利要求1~3任一项所述的兜兰种子萌发培养基中，在22°C、黑暗的 条件下培养至种子萌发。5. 根据权利要求4所述的提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，其特征在于： 所述的兜兰种子为红魔帝兜兰种子。6. 根据权利要求4所述的提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，其特征在于： 所述的兜兰种子通过如下方式获得：选择授粉后180天的兜兰果实，经过表面消毒后， 切开果实，获得兜兰种子。7. 根据权利要求4所述的提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，其特征在于： 所述的表面消毒的方式为采用〇. 1% w/v的升汞溶液浸泡7~15分钟。8. 根据权利要求4所述的提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，其特征在于： 所述的培养的时间为50天。9. 根据权利要求4所述的提高兜兰种子离体非共生萌发率的培养方法，其特征在于： 所述的将兜兰种子接入兜兰种子萌发培养基具体的操作为：将兜兰种子撒播在已灭菌 的兜兰种子萌发培养基表面。10. 权利要求1~3所述的兜兰种子萌发培养基在兜兰繁殖领域中的应用。
【专利摘要】本发明属于植物种苗繁殖领域，具体涉及一种兜兰种子萌发培养基及培养方法与应用。所述的兜兰种子萌发培养基以1/4MS培养基为基础培养基；还包含的组分及其含量如下：纯椰汁100毫升/升；活性炭1克/升；蛋白胨0.5克/升；胺鲜酯1～16毫克/升。所述的培养方法，包含如下步骤：将兜兰种子接入兜兰种子萌发培养基中，在22℃、黑暗的条件下培养至种子萌发。该兜兰种子萌发培养基及其培养方法大幅度提高了萌发率，提高了生产效率。
【IPC分类】A01G31/00
【公开号】CN105325274
【申请号】CN201510732333
【发明人】谭剑锋, 刘伟, 刘运权, 王燕君, 韩一航
【申请人】华南农业大学, 广州华农大生物技术开发有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年10月30日