一种脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法及沼虾类种内杂交育种方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产动物繁殖和育种技术领域，涉及沼虾类杂交育种中人工授精的关键步骤，特别是涉及电脉冲刺激提取沼虾类雄虾精荚的技术。
【背景技术】
[0002]沼虾类是我国的重要的经济虾类，尤其是沼虾中的青虾和罗氏沼虾，是我国重要的淡水养殖虾类。据《中国渔业年鉴》公布，2013年我国青虾和罗氏沼虾养殖年产量分别为25.1和11.7万吨.养殖省份分别达21个和16个，但随着养殖规模的不断扩大，集约化程度的不断提高，均出现了严重品种退化现象，个体变小，病害增多，养殖效益逐年下滑。品种退化已成为沼虾类养殖业的瓶颈，严重制约了其养殖业的发展，迫切需要对其进行遗传改良，培育经济性状优良的新品种。杂交选育是有效的传统育种手段。沼虾类的杂交需要从成熟雄虾中提取成熟精荚，最早提取精荚是采用杀虾取精的方法，这样一只雄虾只能用一次。1980年Sandifer等用低压交流电剌激提取罗氏沼虾精荚取得成功；1997年邱高峰用4 一 6V的低压交流电提取青虾精荚取得成功，并将用该方法提取的精荚移植到16只已完成生殖蜕皮的青虾雌虾中，只有10只顺利产卵，所产虾卵受精率71 %。
【发明内容】
[0003]本发明目的在于针对现有技术的缺陷提供一种高效、可靠而对雄虾无损伤的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法及沼虾类种内杂交育种方法。
[0004]本发明为实现上述目的，采用如下技术方案:
一种脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法，其特征在于包括下述步骤:
(1)将两个脉冲电极头紧靠两第五步足基部后侧放置，让两电极头间的连线与雄虾头胸部和腹部连接部环线平行，使电极头与雄虾的腹面基本垂直，轻点脉冲电源开关I至2下，用脉冲电对雄虾进行刺激；
(2)密切注意雄虾第五步足基部内侧排精孔，发现精荚立即用眼科摄子取下。
[0005]其进一步特征在于:所述电极头为头部球形的圆柱形铜线，铜线直径Φ2mm，电极头长17mm，后部15mm套有绝缘护套，头部露出2mm，两电极头间距6mm。
[0006]优选的:所述脉冲电参数为脉冲电压控制在30~35V，脉冲宽度30?70yS。
[0007]在水温20°C~30°C时，再次获得正常成熟精荚的时间间隔为48-72小时。
[0008]—种沼虾类种内杂交育种方法，其特征在于包括下述步骤:将采用上述的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法提取的沼虾类精荚，快速粘贴到刚完成生殖脱壳的同种雌虾第四、第五步足基部中央，让雌虾自行产卵、孵化。
[0009]本发明能快速有效和安全地将精荚从雄虾上提取出来，其采用脉冲电提取精荚，不仅对雄虾无损伤，而且提取成功率、移植成功率和受精率等均比普通交流电刺激有显著提高，成熟雄虾的精荚提取成功率93%以上，精荚移植试验的成功率和所产虾卵受精率均在82%以上。用该方法提取精荚，处理过的雄虾的成活率与未经处理的雄虾没有差异，在水温20°C~30°C时，间隔48-72小时再刺激，可再次获得正常成熟精荚，且精荚提取率、精荚移植成功率和受精率与第一次均无差异。
【附图说明】
[0010]图1为本发明电极头示意图。
【具体实施方式】
[0011]本发明的具体技术方案如下:
I)电剌激专用电极头1:如图1所示，电极头I用圆柱形铜线做成，铜线粗Φ2Π1Π1，铜线伸出部分17mm，绝大部分(15mm)用绝缘护套2护住，仅露出头部2mm左右，顶端部做成球形，两电极头I间的距离6mm。
[0012]2)脉冲电参数确定:脉冲电发生器可自制，也可用其它细胞电融合仪或电穿孔仪等，脉冲电压控制在30~35 V，脉冲宽度30?70yS，具体操作时可按沼虾的品种及个体大小适当调整，一般个体越大、壳越厚，使用的脉冲电压和脉冲宽度就越大。
[0013]3)精荚提取操作方法:左手持虾，用左手大拇指、食指夹住虾体头胸部，中指、无名指和小指及掌心握住虾体尾部，使其固定不致伸屈跳跃，右手将电剌激专用电极头紧靠两第五步足基部后侧放置，让两电极头间的连线与雄虾头胸部和腹部连接部环线平行，使电极头与腹面基本垂直，一人操作时可同时用左手大拇指和中指稳住电极，轻点脉冲电源开关I至2下，同时密切注意雄虾第五步足基部内侧排精孔，发现精荚立即用眼科摄子取下。
[0014]4)沼虾类种内杂交育种方法:将采用上述的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法提取的沼虾类精荚，快速粘贴到刚完成生殖脱壳的同种雌虾第四、第五步足基部中央(粘贴前用吸水纸吸干水)，让雌虾自行产卵、孵化。统计精荚移植成功率和受精率。
[0015]实施例1:
青虾精荚提取和移植:使用本发明设计的电极头，使用30V脉冲电压，脉冲宽度35yS，精荚提取率96%，精荚移植到雌青虾体上的成功率87%，受精率92%。
[0016]实施例2:
海南沼虾精荚提取和移植:使用本发明设计的电极头，使用31V脉冲电压，脉冲宽度40μS，精荚提取率94%，精荚移植到雌海南沼虾体上的成功率85%，受精率90.5%。
[0017]实施例3:
罗氏沼虾精荚提取和移植:使用本发明设计的电极头，使用34V脉冲电压，脉冲宽度60μS，精荚提取率93%，精荚移植到雌罗氏沼虾体上的成功率83%，受精率89%。
[0018]以上实施例仅说明本发明建立的沼虾精荚提取方法和沼虾类种内杂交育种方法，但本发明并不仅限于此。值得注意的是，通过电脉冲刺激提取精荚的方法均在本发明所要求的保护范围之内，这里不再对其它的具体实施例进行一一列举。
【主权项】
1.一种脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法，其特征在于包括下述步骤: (1)将两个脉冲电极头紧靠两第五步足基部后侧放置，让两电极头间的连线与雄虾头胸部和腹部连接部环线平行，使电极头与雄虾的腹面基本垂直，轻点脉冲电源开关I至2下，用脉冲电对雄虾进行刺激； (2)密切注意雄虾第五步足基部内侧排精孔，发现精荚立即用眼科摄子取下。2.根据权利要求1所述的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法，其特征在于:所述电极头为头部球形的圆柱形铜线，铜线直径Φ 2mm，电极头长17mm，后部15mm套有绝缘护套，头部露出2mm，两电极头间距6mm。3.根据权利要求1或2所述的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法，其特征在于:所述脉冲电参数为脉冲电压控制在30?35 V，脉冲宽度30?70yS。4.根据权利要求3所述的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法，其特征在于:在水温20°C?30°C时，再次获得正常成熟精荚的时间间隔为48-72小时。5.一种沼虾类种内杂交育种方法，其特征在于包括下述步骤:将采用权利要求1-3任一项所述的脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法提取的沼虾类精荚，快速粘贴到刚完成生殖脱壳的同种雌虾第四、第五步足基部中央，让雌虾自行产卵、孵化。
【专利摘要】本发明公布了一种脉冲电击法提取沼虾类精荚的方法及沼虾类种内杂交育种方法，将两个脉冲电极头紧靠两第五步足基部后侧放置，让两电极头间的连线与雄虾头胸部和腹部连接部环线平行，使电极头与雄虾的腹面基本垂直，轻点脉冲电源开关1至2下，用脉冲电对雄虾进行刺激；密切注意雄虾第五步足基部内侧排精孔，发现精荚立即用眼科摄子取下，快速粘贴到刚完成生殖脱壳的同种雌虾第四、五步足基部中间，让雌虾自行产卵、孵化。本发明能快速有效和安全地将将精荚从雄虾上提取出来，其采用脉冲电提取精荚，不仅对雄虾无损伤，而且提取成功率、移植成功率和受精率等均比普通交流电刺激有显著提高。
【IPC分类】A01K61/00
【公开号】CN105532537
【申请号】CN201610005939
【发明人】龚永生, 傅洪拓, 蒋速飞, 熊贻伟, 乔慧, 金舒博, 张文宜
【申请人】中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月5日