一种梭梭再生苗和愈伤组织的获取方法
【专利摘要】本发明涉及一种梭梭再生苗和愈伤组织的获取方法，通过腋芽诱导途径获取再生苗，包括如下步骤：(1)种子消毒；(2)无菌苗培养；(3)腋芽诱导；(4)壮苗培养；(5)生根培养。本发明还公开了一种梭梭愈伤组织的获取方法，包括如下步骤：(1)种子消毒；(2)无菌苗培养；(3)愈伤组织诱导；(4)愈伤组织增殖。本发明的优点体现在：解决了梭梭无性繁殖生根难的问题，提高了优质梭梭种质资源的无性繁殖效率；梭梭愈伤组织的获得，为其抗逆突变体的筛选研究奠定了前期基础。
【专利说明】
一种梭梭再生苗和愈伤组织的获取方法
技术领域
[0001]本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种梭梭再生苗和愈伤组织的获取方法。
【背景技术】
[0002]梭梭是一种长在沙地上的固沙植物，也可以作为牲畜的饲料草，名贵中药肉苁蓉就寄生在梭梭的根部。梭梭属于国家二级保护植物，是温带荒漠中生物产量最高的植被类型之一。它既能耐旱，耐寒，抗盐碱，防风固沙，遏制土地沙化，改良土壤，恢复植被，又能使周边沙化草原得到保护，在维护生态平衡上起着不可比拟的作用。
[0003]但是，现有技术中梭梭苗木的培育方法为种子育苗，而梭梭种子的寿命很短，保存期仅为I年左右，第二年其种子生活力就会大幅下降；另外，通过扦插的方式繁殖梭梭存在生根难的问题，严重影响了梭梭苗木的培育效率。同时，愈伤组织诱导是梭梭抗逆突变体筛选的基础，在其抗逆性研究领域具有非常重要的地位。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种高效率的梭梭再生苗获取方法。
[0005]为实现上述目的，本发明公开了如下技术方案:
[0006]—种梭梭再生苗的获取方法，通过腋芽诱导途径获取再生苗，包括如下步骤:
[0007](1)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗301^11，然后用75%酒精消毒101^11;再用0.1 %HgCh对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗；
[0008](2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养10-20天；
[0009](3)腋芽诱导:以梭梭无菌苗的茎段为外植体，接种于腋芽诱导培养基，置于25°C、光照条件下培养，获得丛生芽；
[0010](4)壮苗培养:将丛生芽剪下，接种于壮苗培养基，置于25°C、光照条件下培养；
[0011](5)生根培养:将经过壮苗培养的芽段剪下，接种于生根培养基I/2MS + IBA
0.5mg.L—kNAA 0.2mg.L一S 添加5% 蔗糖;或 1/4MS+IBA 0.3mg.L_1+NAA 0.2mg.L—S 添加7%的蔗糖，置于25°C、光照条件下培养。
[0012I作为一种进一步的改进方案，所述步骤(I)中，用无菌水冲洗5次，每次5min。
[0013]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(I)中，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分。
[0014]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(2)中，在光照条件下培养15天。
[0015]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(3)中的腋芽诱导采用的培养基为MS+6-BA
1.5mg.L—hlBA0.5mg.L—1O
[0016]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(4)中，壮苗培养基为MS+6-BA1.5mg.L"1+GA31.0mg.L—1O
[0017]本发明还公开了一种梭梭愈伤组织的获取方法，包括如下步骤:
[0018](1)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗301^11，然后用75%酒精消毒101^11;再用0.1 %HgCh对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗；
[0019](2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养15天；
[0020](3)愈伤组织诱导:剪取梭梭无菌苗的子叶、茎尖或茎段，平行接种于愈伤组织诱导培养基表面，置于25 °C、黑暗条件下培养，获得愈伤组织；
[0021](4)愈伤组织增殖:将诱导出的愈伤组织转接于诱导培养基，进行愈伤组织的增殖培养。
[0022]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(3)中愈伤组织诱导采用的培养基为MS+2，4-D 1.0mg.L_1+6-BA l.0mg.!/1。
[0023]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(I)中，用无菌水冲洗5次，每次5min。
[0024]作为一种进一步的改进方案，所述步骤(I)中，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分。
[0025]本发明公开的一种梭梭再生苗和愈伤组织的获取方法，具有以下有益效果:
[0026]可通过腋芽诱导途径获取再生苗，提高了优质梭梭苗木的无性繁殖效率;通过植物组织诱导愈伤组织，可以为梭梭抗逆突变体的筛选提供前期基础。
【具体实施方式】
[0027]下面结合实施例对本发明作进一步描述。
[0028]实施例1
[0029]—种梭梭再生苗的获取方法，通过腋芽诱导途径获取再生苗，包括如下步骤:
[0030](1)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗301^11，然后用75%酒精消毒101^11;再用0.1 %HgCl2对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗5次，每次5min，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分；
[0031](2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养10天；
[0032](3)腋芽诱导:以梭梭无菌苗的茎段为外植体，接种于腋芽诱导培养基MS+6-BA1.5mg.L^+IBA 0.5mg.L—S置于25°C、光照条件下培养，获得丛生芽；
[0033](4)壮苗培养:将丛生芽剪下，接种于壮苗培养基MS+6-BA 1.5mg.L^+GAsl.0mg.L一1，置于25 0C、光照条件下培养；
[0034](5)生根培养:将经过壮苗培养的芽段剪下，接种于生根培养基I/2MS + IBA0.5mg.L^+NAA 0.2mg.L—S添加5%蔗糖培养。生根率平均为73%，培养I个月后根长0.5-1cm0
[0035]实施例2
[0036]—种梭梭再生苗的获取方法，通过腋芽诱导途径获取再生苗，包括如下步骤:
[0037](1)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗301^11，然后用75%酒精消毒101^11;再用0.1 %HgCl2对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗5次，每次5min，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分；
[0038](2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养20天；
[0039](3)腋芽诱导:以梭梭无菌苗的茎段为外植体，接种于腋芽诱导培养基MS+6-BA1.5mg.L^+IBA 0.5mg.L—S置于25°C、光照条件下培养，获得丛生芽；
[0040](4)壮苗培养:将丛生芽剪下，接种于壮苗培养基MS+6-BA 1.5mg.L^+GAsl.0mg.L一1，置于25 0C、光照条件下培养；
[0041](5)生根培养:将经过壮苗培养的芽段剪下，接种于生根培养基I/4MS + IBA
0.3mg.L^+NAA 0.2mg.L—1，添加7%的蔗糖，置于25°C、光照条件下培养。生根率平均为50%，培养I个月后根长0.5-1.2cm。
[0042]实施例3
[0043]—种梭梭愈伤组织的获取方法，包括如下步骤:
[0044](I)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗30min，然后用75%酒精消毒1min;再用
0.1 %HgCl2对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗5次，每次5min，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分；
[0045](2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养10天；
[0046](3)愈伤组织诱导:以梭梭无菌苗的子叶、茎尖或茎段为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D1.0mg.L^-BAl-Omg.L—1，置于25°C、黑暗条件下培养，获得愈伤组织;诱导率达90%以上。
[0047](4)愈伤组织增殖:将诱导出的愈伤组织转接于愈伤组织诱导培养基进行增殖培养。
[0048]实施例4
[0049]—种梭梭愈伤组织的获取方法，包括如下步骤:
[0050](I)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗30min，然后用75%酒精消毒1min;再用
0.1 %HgCl2对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗5次，每次5min，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分；
[0051](2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养10天；
[0052](3)愈伤组织诱导:以梭梭无菌苗的子叶、茎尖或茎段为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D l.0mg.L^+6-BA 0.5mg.L—S置于25 °C、黑暗条件下培养，获得愈伤组织;诱导率平均为70 %。
[0053](4)愈伤组织增殖:将诱导出的愈伤组织转接于愈伤组织诱导培养基进行增殖培养。
[0054]本发明中，步骤(2)无菌苗培养时，优选将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25 °C、光照条件下培养15天。
[0055]本发明可通过腋芽诱导途径获取再生苗，提高了优质梭梭苗木的无性繁殖效率；通过植物组织诱导愈伤组织，可以为梭梭抗逆突变体的筛选提供前期基础。
[0056]以上所述仅是本发明的优选实施方式，而非对其限制;应当指出，尽管参照上述各实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，其依然可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改，或对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改和替换，并不使相应的技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
【主权项】
1.一种梭梭再生苗培养的获取方法，其特征在于，通过腋芽诱导途径获取再生苗，包括如下步骤: (1)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗30min，然后用75%酒精消毒1min;再用0.1%HgCh对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗； (2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养10-20天； (3)腋芽诱导:以梭梭无菌苗的茎段为外植体，接种于腋芽诱导培养基，置于25°C、光照条件下培养，获得丛生芽； (4)壮苗培养:将丛生芽剪下，接种于壮苗培养基，置于25°C、光照条件下培养； (5)生根培养:将经过壮苗培养的芽段剪下，接种于生根培养基1/2MS+IBA0.5mg.L—1+NAA 0.2mg.L—S添加5%鹿糖；或 1/4MS+IBA 0.3mg.L-^NAA 0.2mg.L—S添加7%的鹿糖，置于25°C、光照条件下培养。2.根据权利要求1所述的一种梭梭再生苗培养的获取方法，其特征在于，所述步骤(I)中，用无菌水冲洗5次，每次5min。3.根据权利要求1所述的一种梭梭再生苗培养的获取方法，其特征在于，所述步骤(I)中，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分。4.根据权利要求1所述的一种梭梭再生苗培养的获取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，在光照条件下培养15天。5.根据权利要求1所述的一种梭梭再生苗培养的获取方法，其特征在于，所述步骤(3)中的腋芽诱导采用的培养基为MS+6-BA 1.5mg.L^+IBA 0.5mg.L一、6.根据权利要求1所述的一种梭梭再生苗培养的获取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，壮苗培养基为 MS+6-BA 1.5mg.L^+GAsl.0mg.L—1。7.一种梭梭愈伤组织的获取方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)种子消毒:将梭梭种子用流水冲洗30min，然后用75%酒精消毒1min;再用0.1%HgCh对种子深度灭菌1min，最后用无菌水冲洗； (2)无菌苗培养:将消过毒的梭梭种子接种于MS固体培养基表面，置于25°C、光照条件下培养15天； (3)愈伤组织诱导:剪取梭梭无菌苗的子叶、茎尖或茎段，平行接种于愈伤组织诱导培养基表面，置于25 °C、黑暗条件下培养，获得愈伤组织； (4)愈伤组织增殖:将诱导出的愈伤组织转接于诱导培养基，进行愈伤组织的增殖培养。8.根据权利要求7所述的一种梭梭愈伤组织的获取方法，其特征在于，所述步骤(3)中愈伤组织诱导采用的培养基为MS+2，4-D l.0mg.L^+6-BA l.0mg.T109.根据权利要求7所述的一种梭梭愈伤组织的获取方法，其特征在于，所述步骤(I)中，用无菌水冲洗5次，每次5min。10.根据权利要求7所述的一种梭梭愈伤组织的获取方法，其特征在于，所述步骤(I)中，经无菌水冲洗后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分。
【文档编号】A01H4/00GK105850735SQ201610214996
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月7日
【发明人】张莹花, 纪永福, 李德禄, 王方琳
【申请人】甘肃省治沙研究所