一种利用茴香制备抗菌剂和细菌群体感应抑制剂的方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用茴香制备抗菌剂和细菌群体感应抑制剂的方法：将茴香粉碎，加入纯水，采用水蒸气蒸馏法提取茴香精油，得到的茴香精油为抗菌剂；将剩余的悬浊液离心分离，得到茴香水提液和茴香残渣；在茴香残渣中加入乙醇，进行超高压提取，得到茴香乙醇提取液；合并茴香水提液和茴香乙醇提取液，减压浓缩，进行柱层析，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到细菌群体感应抑制剂。本发明的方法提高了提取效率，分别制备出了抗菌剂和细菌群体感应抑制剂，并且产品安全、高效。
【专利说明】
一种利用茴香制备抗菌剂和细菌群体感应抑制剂的方法
技术领域
[0001]本发明属于微生物领域，涉及从茴香中筛选和制备抗菌剂与细菌群体感应抑制剂的方法。
【背景技术】
[0002]群体感应系统(quorumsensing，QS)是广泛存在于细菌内的一种信息传递系统，它是细菌调控多种生理活动最基本的系统，也是致病菌生物膜形成、毒力因子分泌、免疫逃逸和耐药性产生的重要调控系统。鉴于其重要功能，以群体感应系统为靶点的抑制剂已成为抗菌剂研发的新趋势。群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitors，简称QSI)与传统的抗生素等杀菌剂不同，它可以阻断细菌毒力因子的生成、干扰生物膜的形成，但不影响细菌的生长，在降低细菌致病力的同时又不致使细菌产生耐药性，有助于保护自然界微生物的多样性和防止体内菌群失调，这对于目前生物耐药性具有重大的意义。
[0003]目前研究较多的QS抑制剂主要是呋喃酮等，这些QS抑制剂能显著减少致病菌毒力因子的表达。但是，绝大多数QS抑制剂被发现具有毒性作用，不能广泛应用于医药、食品等领域。从植物资源中筛选群体感应抑制剂来干扰食源性致病菌的QS系统、降低毒害，有望成为新型抑菌剂研发的新策略。基于此，本发明将从日常食用的香辛料-茴香中分离制备QS抑制剂，从而得到安全、无毒副作用的群体感应抑制剂。
【发明内容】
[0004]—种利用茴香制备抗菌剂和细菌群体感应抑制剂的方法，其特征步骤为:
[0005](I)取茴香，粉碎，加入10-100倍质量的纯水，采用水蒸气蒸馏法提取茴香精油，得到的茴香精油为抗菌剂;将剩余的悬浊液进行离心分离，得到茴香水提液和茴香残渣，待用；
[0006](2)在茴香残渣中加入5-30倍的乙醇，进行超高压提取，提取压力为80_1000Mpa，提取时间为I _50min，得到茴香乙醇提取液；
[0007](3)合并茴香水提液和茴香乙醇提取液，减压浓缩至无溶剂;然后加入水，混匀，上大孔树脂柱进行柱层析，采用体积浓度为0-70 %的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，40-70 °C真空干燥，得到细菌群体感应抑制剂。
[0008]本发明的有益效果是:采用本方法可以同时制备得到抗菌剂-精油和细菌群体感应抑制剂;采用超高压的方法进行提取，比普通方法显著缩短了提取时间，提高了提取效率;并且采用柱层析的方法对茴香提取物进行纯化，得到了活性更强的细菌群体感应抑制剂;通过本方法制备的细菌群体感应抑制剂，安全，无毒副作用;本发明制备的细菌群体感应抑制剂，只干扰细菌群体感应调控的致病行为，不影响细菌自身的生长，因此理论上不会产生细菌耐药性;并且实验结果表明，该群体感应抑制剂还具有抑制致病菌生物膜形成和抑制致病菌毒力因子分泌的作用;本发明制备的细菌群体感应抑制剂可以用于食品工业、临床研究、农业生产等领域，对食品安全、人类健康、农业发展等具有重大的意义。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
[0010]取茴香100克，粉碎，加入5L纯水，采用水蒸气蒸馏法提取茴香精油，得到的茴香精油味为抗菌剂;将剩余的悬浊液进行离心分离，得到茴香水提液和茴香残渣，待用;在茴香残渣中加入SOOmL的乙醇，进行超高压提取，提取压力为500Mpa，提取时间为6min，得到茴香乙醇提取液;合并茴香水提液和茴香乙醇提取液，减压浓缩至无溶剂;然后加入水，混匀，上HPD200大孔树脂柱进行柱层析，采用水、体积浓度为10 %和30 %的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集30 %乙醇溶液的洗脱液，减压浓缩，55°C真空干燥，得到细菌群体感应抑制剂。
[0011]实施例2
[0012]取茴香2公斤，粉碎，加入60L纯水，采用水蒸气蒸馏法提取茴香精油，得到的茴香精油为抗菌剂;将剩余的悬浊液进行离心分离，得到茴香水提液和茴香残渣，待用;在茴香残渣中加入1L乙醇，进行超高压提取，提取压力为900Mpa，提取时间为35min，得到茴香乙醇提取液;合并茴香水提液和茴香乙醇提取液，减压浓缩至干;然后加入水混匀，上大孔树脂柱进行柱层析，采用水、体积浓度为5%和50%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集50%的乙醇溶液的洗脱液，减压浓缩，50 °C真空干燥，得到细菌群体感应抑制剂。
[0013]实施例3
[0014]取茴香10克，粉碎，加入600mL纯水，采用水蒸气蒸馏法提取茴香精油，得到的茴香精油为抗菌剂;将剩余的悬浊液进行离心分离，得到茴香水提液和茴香残渣，待用;在茴香残渣中加入200mL乙醇，进行超高压提取，提取压力为300Mpa，提取时间为4min，得到茴香乙醇提取液;合并茴香水提液和茴香乙醇提取液，减压浓缩至无溶剂;然后加入水混匀，上大孔树脂柱进行柱层析，采用水、体积浓度为15%和35%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集乙醇溶液的洗脱液，减压浓缩，60 °C真空干燥，得到细菌群体感应抑制剂。
【主权项】
1.一种利用茴香制备抗菌剂和细菌群体感应抑制剂的方法，其特征步骤为: (1)取茴香，粉碎，加入10-100倍质量的纯水，采用水蒸气蒸馏法提取茴香精油，得到的茴香精油为抗菌剂;将剩余的悬浊液进行离心分离，得到茴香水提液和茴香残渣，待用； (2)在茴香残渣中加入5-30倍的乙醇，进行超高压提取，提取压力为80-1000Mpa，提取时间为I _50min，得到茴香乙醇提取液； (3)合并茴香水提液和茴香乙醇提取液，减压浓缩至无溶剂;然后加入水，混匀，上大孔树脂柱进行柱层析，采用体积浓度为0-70 %的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，40-70 °C真空干燥，得到细菌群体感应抑制剂。
【文档编号】A01N65/10GK105851068SQ201610203509
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月1日
【发明人】娄在祥, 王洪新, 李雅芹
【申请人】江南大学