提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法
【专利摘要】本发明公开了一种可提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，是以虾夷扇贝雌贝与长肋日月贝作为亲贝，在水温18~19℃的条件下授精，精子、卵细胞受精率高，胚胎和幼虫发育速度快，发育到D形幼虫和稚贝的时间均显著缩短，可提供生长快、抗逆性强的杂交贝苗种，最终获得的扇贝以及子代杂交扇贝适应高温环境的能力有所增强，在海水达到26℃仍没有出现死亡现象，可扩大虾夷扇贝的养殖范围。
【专利说明】
提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法
技术领域
[0001]本发明涉及海产贝类遗传育种领域，特别是一种提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法。
【背景技术】
[0002]4下夷扇贝(Pai1f1joecie/? jessoe/jsis)个体大，生长快，系我国北方沿海主要养殖经济贝类。20世纪80年代，已成功将其自日本引入中国并实现人工扩繁技术。但由于虾夷扇贝原产于日本北海道，其生活水温不超过23 °C，如人工养殖水温达到23 °C时就会发生大规模死亡现象，给养殖户造成了巨大经济损失，也正因为此，虾夷扇贝目前只在辽宁大连长海等沿海养殖。
[0003]长肋日月贝jO_/et/_ro/3ecZies)隶属双壳纲(Bivalvia)、珍珠贝目(Pter1ida)、扇贝科(Pectinidae)、日月贝属。长肋日月贝个体大、生长快、营养丰富、肉味鲜美，其干制品为名贵海珍品“带子”。该贝雌雄同体，为暖水种，作为我国传统经济贝类，主要分布在海南、广东沿海等区域。
[0004]虾夷扇贝与长肋日月贝在分类上属不同属，不同种，长期地理隔离使二者在生物学方面存在显著差异。迄今为止，还没有关于虾夷扇贝和长肋日月贝远缘杂交育种的相关报道。
【发明内容】
[0005]本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，
本发明的技术解决方案是:一种提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是按如下步骤进行:
a.选取长肋日月贝和虾夷扇贝雌贝作为杂交亲贝；
b.人工培育使杂交亲贝性腺同时成熟；
c.催产得到虾夷扇贝雌贝卵子和长肋日月贝精子；
d.将卵子和精子进行交配，产生受精卵并将受精卵孵化至D形幼虫；
e.将D形幼虫培育至稚贝。
[0006]当长肋日月贝生长海域海水升至24?25°C，选取2龄以上的长肋日月贝为杂交亲贝；当虾夷扇贝生长海域海水升至2?3°C，选取2龄以上的虾夷扇贝雌贝为杂交亲贝。
[0007]将杂交亲贝洗净消毒后，分别放入不同的培育池中培养，培养密度均为10?15个/m3水体，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉与鼠尾藻粉发酵液，所述混合藻每天投喂量为10?15万个/ml水体，所述发酵液添加量为5?8 ppm/m3水体;长肋日月亲贝的培育水温从24?25°C开始，每天降温0.5 °C，直至降温至18±0.5 °C，恒温培育至性腺成熟，虾夷扇贝亲贝的培育水温从2?3°C开始，每天升温0.5 °C，直至升温至7±0.50C，恒温培育至性腺成熟。
[0008]将所述性腺成熟的杂交亲贝在常温条件下阴干2h，再流水刺激杂交亲贝0.5?Ih，将虾夷扇贝雌贝放入紫外线照射的12°C海水中，将长肋日月贝放入紫外线照射的20°C海水中，分别收集虾夷扇贝所产的卵和长肋日月贝排出的精子。
[0009]所述收集长肋日月贝排出的精子是当长肋日月贝亲贝排精时，将排精的长肋日月贝亲贝浸入盛装有紫外线照射20°C的海水容器中，长肋日月贝亲贝继续排精5?10 min,收集精子。
[0010]如向浸有长肋日月贝的紫外线照射的20°C海水中加氢氧化钠溶液将海水pH升高至9.0?9.2，可加速长肋日月贝亲贝排精。
[0011]所述收集长肋日月贝排出的精子是通过解剖方法获得长肋日月贝雄性生殖腺，将获得的生殖腺通过600目筛网过滤到0.2%。氨海水烧杯中，并向烧杯中加入终浓度为0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。
[0012]所述d步骤如下:将收集卵子中的海水温度缓慢升至18?19°C，将收集精子中的海水温度缓慢减至18?19°C，将长肋日月贝精子和虾夷扇贝卵细胞按10?15:1的比例混合受精，受精前将18?19°(:海水盐度调至33.5?34.0，受精过程中以低功率造浪栗搅动水体，使精、卵细胞分布均匀并最终形成受精卵，将受精卵在孵化池中孵化至D形幼虫，孵化期间微充气，每小时搅水一次。
[0013]所述e步骤如下:将所述D形幼虫用400目筛网选优，移到培育池中充气培养，培育池中D形幼虫培育密度为12?15 ind/ml，培育池中海水均经三级沙滤，培育水温18?19°C，pH为8.02?8.15，盐度为32.3?33.1，培育池每天早晚各换水一次，每天换水量为80?150%，所述D形幼虫开口饵料为金藻，每天投喂量为1.5?2.0万个/ml水体，待D形幼虫平均壳长为120 pm时，开始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量为2.0?2.5万个/ml水体，每天菱形藻投喂量为1.5?2.0万个/ml水体;待D形幼虫平均壳长为160 ym时，在所述投喂饵料的基础上补投扁藻，扁藻每天投喂量为0.5?1.0万个/ml水体，直至长成到稚贝。
[0014]本发明是以虾夷扇贝雌贝与长肋日月贝作为亲贝，在水温18?19°C的条件下授精，精子、卵细胞受精率高，胚胎和幼虫发育速度快，发育到D形幼虫和稚贝的时间均显著缩短，可提供生长快、抗逆性强的杂交贝苗种，最终获得的扇贝以及子代杂交扇贝适应高温环境的能力有所增强，在海水达到26°C仍没有出现死亡现象，可扩大虾夷扇贝的养殖范围。
【具体实施方式】
[0015]本发明提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，按如下步骤进行:
a.选取长肋日月贝和虾夷扇贝雌贝作为杂交亲贝:
在3月中旬，当长肋日月贝生长海域海水升至24?25°C，选取2龄以上的长肋日月贝为杂交亲贝；当虾夷扇贝生长海域海水升至2?3°C，选取2龄以上的虾夷扇贝雌贝为杂交亲贝。
[0016]b.人工培育使杂交亲贝性腺同时成熟:
将杂交亲贝洗净消毒后，分别放入不同的培育池中培养，培养密度均为10?15个/m3水体，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉与鼠尾藻粉发酵液，所述混合藻每天投喂量为10?15万个/ml水体，所述发酵液添加量为5?8 ppm/m3水体;长肋日月亲贝的培育水温从24?25°C开始，每天降温0.5 °C，直至降温至18±0.5 °C，恒温培育至性腺成熟，虾夷扇贝亲贝的培育水温从2?3°C开始，每天升温0.5 °C，直至升温至7±0.5 °C，恒温培育至性腺成熟。这样，可保证长肋日月亲贝性腺和虾夷扇贝亲贝性腺同时成熟。
[0017]c.催产得到虾夷扇贝雌贝卵子和长肋日月贝精子:
将所述性腺成熟的杂交亲贝在常温条件下阴干2 h，再流水刺激杂交亲贝0.5?I h，将虾夷扇贝雌贝放入紫外线照射的12°C海水中，将长肋日月贝放入紫外线照射的20°C海水中，分别收集虾夷扇贝所产的卵和长肋日月贝排出的精子，即发现长肋日月贝亲贝排精时，立即将排精的长肋日月贝亲贝浸入盛装有紫外线照射20°C的海水容器中，长肋日月贝亲贝可继续排精5?10 min，收集精子。
[0018]如长肋日月贝亲贝排精慢，可向浸有长肋日月贝的紫外线照射的20°C海水中加氢氧化钠溶液将海水pH升高至9.0 - 9.2,加速长肋日月贝亲贝排精。
[0019]还可以通过解剖方法获得长肋日月贝雄性生殖腺，将获得的生殖腺通过600目筛网过滤到0.2%。氨海水烧杯中，并向烧杯中加入终浓度为0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。
[0020]d.将卵子和精子进行交配，产生受精卵并将受精卵孵化至D形幼虫:
将收集卵子中的海水温度缓慢升至18?19°C，将收集精子中的海水温度缓慢减至18?19°C，将长肋日月贝精子和虾夷扇贝卵细胞按10?15:1的比例混合受精，受精前将18?19°(:海水盐度调至33.5?34.0，受精过程中以低功率造浪栗搅动水体，使精、卵细胞分布均匀并最终形成受精卵，将受精卵在孵化池中孵化至D形幼虫，孵化期间微充气，每小时搅水一次。
[0021]e.将D形幼虫培育至稚贝:
将所述D形幼虫用400目筛网选优，移到培育池中充气培养，培育池中D形幼虫培育密度为12?15 ind/ml，培育池中海水均经三级沙滤，培育水温18?19°C，pHS8.02?8.15，盐度为32.3?33.1，培育池每天早晚各换水一次，每天换水量为80?150%，所述D形幼虫开口饵料为金藻，每天投喂量为1.5?2.0万个/ml水体，待D形幼虫平均壳长为120 μπι时，开始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量为2.0?2.5万个/ml水体，每天菱形藻投喂量为1.5?2.0万个/ml水体;待D形幼虫平均壳长为160 ym时，在所述投喂饵料的基础上补投扁藻，扁藻每天投喂量为0.5?1.0万个/ml水体，直至长成到稚贝。而普通虾夷扇贝幼虫最适生长发育温度为15.0?17.5 °C，水温到达19.0 °C存活率明显降低。
[0022]按照常规方法对稚贝进行培育，获得生长快、个体大、耐高温等优良性状的子代杂交扇贝。当海水达到26°C仍没有出现死亡现象，所得成贝在外观、性状等方面接近虾夷扇贝，可将其扩大至山东等沿海水域养殖，扩大了虾夷扇贝的养殖范围。
【主权项】
1.一种提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是按如下步骤进行: a.选取长肋日月贝和虾夷扇贝雌贝作为杂交亲贝； b.人工培育使杂交亲贝性腺同时成熟； c.催产得到虾夷扇贝雌贝卵子和长肋日月贝精子； d.将卵子和精子进行交配，产生受精卵并将受精卵孵化至D形幼虫； e.将D形幼虫培育至稚贝。2.根据权利要求1所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是所述a步骤如下:当长肋日月贝生长海域海水升至24?25°C，选取2龄以上的长肋日月贝为杂交亲贝；当虾夷扇贝生长海域海水升至2?3°C，选取2龄以上的虾夷扇贝雌贝为杂交亲贝。3.根据权利要求1所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是所述b步骤如下:将杂交亲贝洗净消毒后，分别放入不同的培育池中培养，培养密度均为10?15个/m3水体，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉与鼠尾藻粉发酵液，所述混合藻每天投喂量为10?15万个/ml水体，所述发酵液添加量为5?8 ppm/m3水体;长肋日月亲贝的培育水温从24?25°C开始，每天降温0.5 °C，直至降温至18±0.5 °C，恒温培育至性腺成熟，虾夷扇贝亲贝的培育水温从2?3°C开始，每天升温0.5 °C，直至升温至7±0.5 °C，恒温培育至性腺成熟。4.根据权利要求3所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是所述c步骤如下:将所述性腺成熟的杂交亲贝在常温条件下阴干2 h，再流水刺激杂交亲贝0.5?I h，将虾夷扇贝雌贝放入紫外线照射的12°C海水中，将长肋日月贝放入紫外线照射的20°C海水中，分别收集虾夷扇贝所产的卵和长肋日月贝排出的精子。5.根据权利要求4所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征在于:所述收集长肋日月贝排出的精子是当长肋日月贝亲贝排精时，将排精的长肋日月贝亲贝浸入盛装有紫外线照射20°C的海水容器中，长肋日月贝亲贝继续排精5?10 min，收集精子。6.根据权利要求4所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征在于:向浸有长肋日月贝的紫外线照射的20°C海水中加氢氧化钠溶液将海水pH升高至9.0?9.2。7.根据权利要求4所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征在于:所述收集长肋日月贝排出的精子是通过解剖方法获得长肋日月贝雄性生殖腺，将获得的生殖腺通过600目筛网过滤到0.2%。氨海水烧杯中，并向烧杯中加入终浓度为0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。8.根据权利要求4、5、6、7所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是所述d步骤如下:将收集卵子中的海水温度缓慢升至18?19°C，将收集精子中的海水温度缓慢减至18?19°C，将长肋日月贝精子和虾夷扇贝卵细胞按10?15:1的比例混合受精，受精前将18?19°C海水盐度调至33.5?34.0,受精过程中以低功率造浪栗搅动水体，使精、卵细胞分布均匀并最终形成受精卵，将受精卵在孵化池中孵化至D形幼虫，孵化期间微充气，每小时搅水一次。9.根据权利要求8所述的提高虾夷扇贝高温耐受的杂交育种方法，其特征是所述e步骤如下:将所述D形幼虫用400目筛网选优，移到培育池中充气培养，培育池中D形幼虫培育密度为12?15 ind/ml，培育池中海水均经三级沙滤，培育水温18?19°C，pHS8.02?.8.15，盐度为32.3?33.1，培育池每天早晚各换水一次，每天换水量为80?150%，所述D形幼虫开口饵料为金藻，每天投喂量为1.5?2.0万个/ml水体，待D形幼虫平均壳长为120 μm时，开始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量为2.0?2.5万个/ml水体，每天菱形藻投喂量为1.5?2.0万个/ml水体;待D形幼虫平均壳长为160 ym时，在所述投喂饵料的基础上补投扁藻，扁藻每天投喂量为0.5?1.0万个/ml水体，直至长成到稚贝。
【文档编号】A01K61/00GK105875453SQ201610274831
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】常亚青, 宁军号, 张伟杰, 湛垚垚, 宋坚
【申请人】大连海洋大学