一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法
【专利摘要】本发明涉及生物防治领域中抑制病原菌的方法，尤其涉及一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，包括：一、制备PDA平板，即将融化的PDA培养基冷却倒板，直至培养基凝固；二、用无菌的打孔器在待测灰葡萄孢菌平板上取菌块，并放入步骤一中的PDA平板内；三、将无菌的滤纸片放在PDA平板盖子的内表面，在滤纸片上加入薰衣草精油；四、盖好所述PDA平板的盖子并将其封口，将所述PDA平板倒置，放入生化培养箱中培养，观察测量菌落直径并计算抑菌效果；本发明提供的薰衣草精油熏蒸法处理灰葡萄孢菌，以低剂量，达到对薰衣草精油更有效的利用，同时降低果蔬采摘后由病原菌造成的损失；该发明操作简单易行、低剂量、高效能，具有良好的应用景及市场价值。
【专利说明】
一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法
技术领域
[0001] 本发明属于生物防治领域，涉及一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，具 体涉及薰衣草精油在抑制灰葡萄孢菌中的应用。
【背景技术】
[0002] 葡萄是一种重要的经济作物，在农业经济中的占主导地位。中国作为主要葡萄生 产国之一，种植面积和产量的居世界前列。但是，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)作为一种 广寄主性的、能够引起200多种已知植物灰霉病的坏死营养型病原真菌，成为葡萄采后主要 的病原微生物，严重的缩短了葡萄采后的贮藏寿命，造成严重的经济损失，因此精油作为一 种天然无公害的抗菌素而被人们广泛的挖掘和研究。
[0003] 薰衣草精油，存在于芳香植体内的天然化合物，主要含有萜类化合物，包括芳樟 醇、乙酸芳樟酯、桉树脑、B-罗勒烯(包括顺式和反式）、萜-4-醇和樟脑。目前，其主要以干品 或精油形式应用于临床和化妆品行业。它可以被用于医学、食品和化妆品行业，具有杀菌、 抗真菌、松弛平滑肌、镇静、抗抑郁等作用，同时对灰葡萄孢菌引起的灰霉病的病害也有有 效的抑制作用。
[0004]传统上人们主要对薰衣草头状花序部分的精油进行分析，最近的研究焦点转移到 分析花的"香味"上，即只分析易挥发性成分而不是全部精油。对这些植物进行典型香味分 析的结果证实，法国薰农草和绵毛薰衣革的精油中樟脑含量较高，昆虫驱避作用明显;而狭 叶薰衣草和齿状薰衣草精油中的樟脑含量则很低（<2% )。低樟脑含量的薰衣草属植物中 往往萜烯（口水芹烯)和倍半萜烯(石竹烯）的含量较高。不同种薰衣草香味的微小差别是由 于所含精油成分的差异，特别是芳樟醇、乙酸芳樟酯和各种倍半萜的组成与含量不同，这种 差异将直接影响薰衣草精油对灰葡萄孢菌引起的灰霉病的抑制作用，而由于其组分的化学 及物理性质，使采用直接接触和熏蒸法的抑制效果明显不同。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术中利用直接接触法抑制灰葡萄孢菌中存在的抑制 率低的问题，提供一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种利用薰衣草精油抑制灰葡 萄孢菌的方法，用薰衣草精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，所述熏蒸是将薰衣草精油与灰葡萄 孢菌共置于同一密闭空间中。
[0007] 上述一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述用薰衣草精油对灰葡萄孢 菌进行熏蒸，具体包括如下步骤： 步骤一、制备PDA平板，即将融化的PDA培养基冷却倒板，直至PDA培养基凝固； 步骤二、用无菌的打孔器在待测灰葡萄孢菌平板上取菌块，并放入所述步骤一中的PDA 平板内； 步骤三、将无菌的滤纸片放入所述roA平板盖子的内表面中并在滤纸片上加入薰衣草 精油； 步骤四、盖好所述PDA平板的盖子并将其封口，将所述PDA平板倒置； 步骤五、将所述倒置后的PDA平板放入生化培养箱中培养，观察抑菌效果。
[0008] 上述一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步骤二中的待测病原菌在 培养七天后方进行取菌块动作，所述菌块的直径为5mm。
[0009] 上述一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步骤五中的生化培养箱的 温度为28 °C，培养时间为7天。
[0010] 上述一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步骤一中的融化的PDA培 养基冷却倒板温度为45°C至60°C。
[0011] 本发明的有益效果:本发明提供的这种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法， 薰衣草精油熏蒸法处理灰葡萄孢菌，以低剂量达到对薰衣草精油更有效的利用，同时降低 果蔬采摘后由病原菌造成的损失；薰衣草精油作为一种广谱高效、抑菌性强、安全无毒、性 能稳定的天然抑菌物质，自然成为生物防治研究的重要内容;该发明的优点在于:操作简单 易行、低剂量、高效能，具有良好的应用前景及市场价值。
【附图说明】
[0012] 下面通过附图并结合实施例具体描述本发明，本发明的优点和实现方式将会更加 明显，其中附图所示内容仅用于对本发明的解释说明，而不构成对本发明的任何意义上的 限制。
[0013] 图1是本发明中薰衣草精油的熏蒸法和直接接触法处理灰葡萄孢菌的精油用量与 抑制率的对比折线图。
【具体实施方式】
[0014] 下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程。应当指出的是，对本领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变型和改进，这些都属于本发明保护 范围。
[0015] 实施例1: 薰衣草精油熏蒸对灰葡萄孢菌菌落的抑制：用薰衣草精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，所 述熏蒸是将薰衣草精油与灰葡萄孢菌置于同一密闭空间，所述薰衣草精油对灰葡萄孢菌进 行熏蒸，具体包括如下步骤： 步骤一、制备两组roA平板，即将融化的TOA培养基冷却至50°C倒板，直至PDA培养基凝 固，两组PDA平板分别命名为A组PDA平板和B组PDA平板，每组中设置三个PDA平板，分别为 A1、A2、A3和B1、B2、B3; 步骤二、用无菌的打孔器在培养7天的待测灰葡萄孢菌平板上打取六块直径均为5mm的 菌块，并分别放入所述步骤一中的两组PDA平板内； 步骤三、取六片相同规格的无菌滤纸片，并分别放在所述两组PDA平板的六个盖子的内 表面； 步骤四、在所述步骤三中的A组PDA平板内的三片滤纸片上各加入lul薰衣草精油，B组 PDA平板内的三片滤纸片上不加薰衣草精油； 步骤五、盖好两组TOA平板的盖子并将其封口，将两组TOA平板倒置，放入28°c的生化 培养箱中培养； 步骤六、培养7天后，测量A组PDA平板内Al、A2、A3和B组PDA平板内Bl、B2、B3中各自的菌 落直径，通过抑制率公式分别对应计算抑制率，和抑制率的平均值，抑制率公式如下： 抑制率=(c-t)/cX100%， 其中，t为A组PDA平板中的菌落直径，即经过薰衣草精油熏蒸处理后的菌落直径，c为B 组PDA平板中菌落直径，即没有经过薰衣草精油熏蒸处理的菌落直径。
[0016] 实施例2: 在实施例1的基础上，另制备四组PDA平板，每组均设置三个PDA平板，与实施例1不同之 处在，步骤四中，另制备的四组PDA平板中滤纸片上加入的薰衣草精油分别为2ul、3ul、4ul、 5ul，培养7天后分别与实施例1中的B组PDA平板进行对比，并分别计算出另制备的四组PDA 平板中每一组分别对应的抑制率和抑制率的平均值，五组PDA平板的试验结果如表1所示：
表1 实施例3: 直接接触法处理灰葡萄孢菌的具体步骤如下： 融化的roA培养基冷却到50°C左右，加入一定体积的薰衣草精油到培养基中使其充分 混合并倒板，制作5组PDA平板，其浓度分别为100ul/L、200ul/L、300ul/L、400ul/L、500ul/ L，每一浓度均准备三个相同的PDA平板，待PDA平板内的培养基凝固后，在每个PDA平板中央 放入直径均为5mm的灰葡萄孢菌菌块，另准备三个培养基中不添加薰衣草精油的PDA平板为 对照，之后将所有TOA平板放入28°C生化培养箱中培养7天后观察抑菌效果，以实施例1步骤 六中的抑制率公式计算每一组抑制率和抑制率平均值，试验结果如表2所示：
表2 试验结论:熏蒸法中每个培养基的体积为30ml，添加薰衣草精油分别为lul、2ul、3ul、 4ul、5ul;直接接触法中薰衣草精油加入培养基中配成浓度分别为100ul/L、200ul/L、 300ul/L、400ul/L、500ul/L的Η)Α平板，每个PDA平板的体积为30ml，经换算每个Η)Α平板内 添加薰衣草精油分别为3ul、6ul、9ul、12ul、15ul，即直接接触法添加薰衣草精油为熏蒸法 的三倍，两者抑菌效果对比折线图如图1所示，经对比可知薰衣草精油熏蒸法能够以低剂 量，高功效达到抑菌效果。
[0017]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的 保护范围。
【主权项】
1. 一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于：用薰衣草精油对灰葡萄 孢菌进行熏蒸，所述熏蒸是将薰衣草精油与灰葡萄孢菌共置于同一密闭空间中。2. 根据权利要求1所述的一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述用薰衣草精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，具体包括如下步骤： 步骤一、制备PDA平板，即将融化的PDA培养基冷却倒板，直至PDA培养基凝固； 步骤二、用无菌的打孔器在待测灰葡萄孢菌平板上取菌块，并放入所述步骤一中的HM 平板内； 步骤三、将无菌的滤纸片放在所述PDA平板盖子的内表面，在滤纸片上加入薰衣草精 油； 步骤四、盖好所述PDA平板的盖子并将其封口，将所述PDA平板倒置； 步骤五、将所述倒置后的PDA平板放入生化培养箱中培养，观察抑菌效果。3. 根据权利要求2所述的一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步骤二中的待测灰葡萄孢菌在培养七天后方进行取菌块动作，所述菌块的直径为5mm。4. 根据权利要求2所述的一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步骤五中的生化培养箱的温度为28°C，培养时间为7天。5. 根据权利要求2所述的一种利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步骤一中的融化的PDA培养基冷却倒板温度为45 °C至60 °C。
【文档编号】A01N65/22GK105901023SQ201610291164
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】任雪艳, 宋丹丹, 孔庆军, 土丽丹, 江国山, 翟欣, 尹雪峰
【申请人】陕西师范大学