鲁克斯杨与青杨杂种f1代优良单株叶片再生植株的生产方法
【专利摘要】本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生根的生产方法。本发明所述鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法由外植体的选择与消毒，愈伤组织的诱导，不定芽的诱导和根的诱导组成。本发明培养周期短，变异少，培养条件可以人为控制，操作方法简单，为鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株作为优良的科研材料进行遗传转化和品种改良等研究奠定基础，从而为杨树人工林大面积生产提供耐盐碱地的优良品种。
【专利说明】
鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法一
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法。二技术背景
[0002]杨树因其生长速度快、世界分布广、人工林栽植面积大，已经成为21世纪改善人类生存环境，满足人类生活需求最有潜力的树种之一。目前已经成为世界木本植物育种、栽培等模式树种。
[0003]近年来，杨树人工林面积持续扩大，出现了可用土地资源不足的问题，而我国存在大面积的盐碱滩涂地，面积达到〇.27亿hm2，如何加强对盐碱滩涂地的利用，成为杨树育种中关注的焦点。三
【发明内容】
[0004]本发明需要解决的问题是针对杨树优良种质资源耐盐碱育种中的需求，发明了一种鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法，为杨树优良种质资源的遗传转化和品种改良快速提供研究材料。
[0005]本发明所述鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法由以下步骤构成:
[0006](1)外植体的选择与消毒:
[0007]选择生长健壮无病害的鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株的幼嫩叶片作为外植体，将材料经流水冲洗lh，去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用灭菌的无菌水冲洗3 遍，再用75%无水乙醇消毒30s，接着用无菌水冲洗3遍，然后用0.1 %氯化汞消毒处理5-7min，最后用灭菌的无菌水冲洗4遍；
[0008](2)愈伤组织的诱导:
[0009]在超净工作台上，将消毒好的叶片切成6mm大小的方块，接种于诱导愈伤培养基上 (配方为:MS+0.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂;Ph调为5.8)，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件12h/d，2000lux，温度23-28 °C ;
[0010](3)不定芽的诱导:
[0011]将经过继代培养1次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上(配方为:MS+0 ? 5mg/L 6-BA+0 ? 05mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂；Ph调为5 ? 8)，诱导光照条件 12h/d，光照强度约20001ux，温度23-28°C ;
[0012](4)根的诱导:
[0013]经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度0.8-1.2cm高时可转入生根培养基诱导生根(配方为:1/2MS+0 ? 6mg/LIBA+0 ? 2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂； Ph调为5.8)，诱导光照条件12h/d，光照强度20001ux，温度23-28°C ;。[〇〇14]本发明所述鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株培养周期为45-55天。
[0015]本发明与现有技术相比，其有益效果是:本发明使用鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片作为材料，取材方便，数量充足，接种后在较短时间内形成愈伤组织直至生根形成幼苗植株，所得植株生长健壮，平均根长均明显增大。繁殖系数约为8.6,培养条件可人为控制。利用本方法，可以提高鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株的幼苗繁殖系数和成活率， 培养周期短，变异少，培养条件可人为控制，操作方法简单，为鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株作为优良的科研材料进行遗传转化和品种改良等研究奠定基础，从而为杨树人工林大面积生产提供耐盐碱地的优良品种。四【附图说明】
[0016]图1鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株再生植株的叶片外植体
[0017]图2鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的愈伤组织
[0018]图3鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的丛生芽
[0019]图4鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生根幼苗五【具体实施方式】
[0020]1，繁殖材料的选择
[0021]试验材料取自金陵科技学院杨树基地上的鲁克斯杨与杂交青杨杂种F1代优良单株。[〇〇22]2,繁殖材料的消毒[〇〇23]将材料经流水冲洗lh去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用无菌水冲洗3遍， 再用75%无水乙醇消毒30s，接着无菌水冲洗3遍，然后用0.1 %氯化汞消毒处理5-7min，最后用灭菌的无菌水冲洗4遍;见附图1。[〇〇24]3,愈伤组织的诱导
[0025]在超净工作台上，将消毒好的叶片切成6mm大小的方块，接种于愈伤诱导培养基上，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件12h/d，光照强度20001UX，温度23-28 °C;见附图2 [〇〇26] 4,不定芽的诱导
[0027]将经过连续继代培养2-3次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上，诱导光照条件12h/d，光照强度20001UX，温度23-28°C ;见附图3 [0〇28]5,根的诱导
[0029]经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度lcm高时可转入生根培养基诱导生根，诱导光照条件12h/d，光照强度20001UX，温度23-28°C。幼苗生根情况，见附图4。
【主权项】
1.一种鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法，其特征是由以下 步骤构成:(1)外植体的选择与消毒选择生长健壮无病害的鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株的幼嫩叶片作为外植体，将 材料经流水冲洗lh，去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用灭菌的无菌水冲洗3遍，再用 75%无水乙醇消毒30s，接着用无菌水冲洗3遍，然后用0.1%氯化汞消毒处理5-7min，最后 用无菌水震荡冲洗4遍；2)愈伤组织的诱导在超净工作台上，将消毒好的叶片切成6mm大小的方块，接种于诱导愈伤培养基上，培 养基的配方为:MS+0.5mg/L的6-BA+0.15mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂;Ph调为5.8，叶的 背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件12h/d，光照强度20001UX，温度23-28°C;3)不定芽的诱导将经过继代培养1次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上，培养基的 配方为:MS+0 ? 5mg/L的6-BA+0 ? 05mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂;Ph调为5 ? 8，诱导光照条 件 12h/d，光照强度20001ux，温度23-28°C ;4)根的诱导经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度0.8-1.2cm高时转入生根 培养基诱导生根，培养基的配方为:1/2MS+0.6mg/L的IBA+0.2mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L 琼脂;？11调为5.8，诱导光照条件1211/(1，光照强度200011?，温度23-28°(:。2.根据权利要求1所述一种鲁克斯杨与青杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方 法，其特征是繁殖系数为8.6，培养周期为45-55天。
【文档编号】A01H4/00GK105993937SQ201610312866
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月12日
【发明人】马艳, 金凤, 朱云华, 田野, 宋紫玲, 章丽梅
【申请人】金陵科技学院