一种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法
【专利摘要】本发明公开了一种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法，该方法包括以下步骤：(1)将脱毒处理的马铃薯幼芽经过灭菌处理后，放置于MS固体培养基上，培养，使茎段长超过7cm；(2)配制含有矮壮素的固体培养基；(3)将步骤(1)获得的马铃薯试管苗茎段截取3～5cm放置于步骤(2)获得的培养基中培养，待茎段增长了5～8cm；(4)取步骤(3)获得的马铃薯试管苗顶端3～5cm，放置于步骤(2)获得的培养基中培养，得到马铃薯试管苗。本发明的方法，而且可以通过对矮壮素浓度的控制对试管苗的长势(现象)进行调控，以便于扩繁时得到质量较好的试管苗从而保证大田种植时马铃薯的成活率。
【专利说明】
一种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养领域，特别是涉及一种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法。【背景技术】
[0002]马铃薯(Solanum tuberosum,Potato)，前科前属，属于中国五大主食之一，其营养价值高、适应力强、产量大，是全球第三大重要的粮食作物，仅次于小麦和玉米。近年来，随着我国农业产业结构调整和种薯、商品薯、加工用薯比例大幅度增加，马铃薯栽培正在成为种植业结构调整和农民增收的一项战略选择，而马铃薯种植逐步走向规模化、标准化、区域化。
[0003]大面积种植马铃薯时常采用无性繁殖对马铃薯种苗进行扩繁，因为植物组织过程中可能会出现一系列问题，导致试管苗在扩繁过程中常出现玻璃化现象，玻璃化现象是植物组织培养中特有的一种生理失调或生理病变。其试管苗的玻璃化引起试管苗的生理状态和生理生化的改变。如茎杆细弱呈半透明状态，节间过长且节数少，叶片小且颜色淡，从而导致光合作用不足、生长周期长、移栽成活率低和不易生根等现象。玻璃化苗的产生与多种原因相关，其中包括外植体材料、培养环境、培养基的类型等。与正常苗相比，玻璃苗RNA的含量有所降低，但是DNA的含量却保持不变，这表明玻璃苗的异常化过程不是发生在DNA复制过程中，而是发生在转录以后。蛋白质合成受阻，使分化不能正常启动，细胞器的分化发育异常并减少，整个玻璃化过程中光合作用，呼吸作用和蛋白质合成均受影响，使得蛋白质含量及酶活性降低，新陈代谢紊乱。玻璃化试管苗的乙烯含量明显提高，但是乙烯不会直接使试管苗发生玻璃化，而过量的乙烯致使叶绿素分解和细胞畸形，破坏了细胞的结构，细胞壁解离，细胞内积累大量纤维素及泡状物质，引起玻璃苗的产生。玻璃化现象严重影响马铃薯试管苗的扩繁以及后续的试验，因此亟需一种能改善马铃薯试管苗玻璃化现象的方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种促进快速生根且生根数多的转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法。
[0005]本发明的技术方案如下:
[0006]—种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法，包括以下步骤:
[0007](1)将脱毒处理的马铃薯幼芽经过灭菌处理后，放置于MS固体培养基上，培养，使茎段长超过7cm;[〇〇〇8] (2)配制含有矮壮素的固体培养基；
[0009](3)将步骤(1)获得的马铃薯试管苗茎段截取3?5cm放置于步骤(2)获得的培养基中培养，待茎段增长了 5?8cm;
[0010](4)取步骤(3)获得的马铃薯试管苗顶端3?5cm，放置于步骤(2)获得的培养基中培养，得到马铃薯试管苗。
[0011]含有矮壮素的固体培养基用下述方法制成:取4.74g MS培养基，加蒸馏水溶解，调节pH= 5 ? 8，加入80?100g琼脂、30?40g鹿糖和50mg?150mg矮壮素，加蒸馏水至1000ml，灭菌。[0〇12]本发明的优点:
[0013]本发明的方法，而且可以通过对矮壮素浓度的控制对试管苗的长势(现象)进行调控，以便于扩繁时得到质量较好的试管苗从而保证大田种植时马铃薯的成活率。【附图说明】
[0014]图1为玻璃化试管苗图。
[0015]图2为本发明的方法获得的试管苗图。
[0016]图3为本发明的方法获得的试管苗根系仰视图。【具体实施方式】
[0017]下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0018]实施例1
[0019]含有矮壮素的固体培养基的制备:
[0020]取4.74g MS培养基(商品化，不含琼脂和蔗糖)，加蒸馏水溶解，调节pH = 5.8，加入 90g琼脂、35g鹿糖和100mg矮壮素，加蒸馏水至1000ml，灭菌。[〇〇21] 实施例2
[0022]含有矮壮素的固体培养基的制备:[〇〇23]取4.74g MS培养基(商品化，不含琼脂和蔗糖)，加蒸馏水溶解，调节pH = 5.8，加入 80g琼脂、40g鹿糖和50mg矮壮素，加蒸馏水至1000ml，灭菌。[〇〇24] 实施例3
[0025]含有矮壮素的固体培养基的制备:[〇〇26]取4.74g MS培养基(商品化，不含琼脂和蔗糖)，加蒸馏水溶解，调节pH = 5.8，加入 l〇〇g琼脂、30g鹿糖和150mg矮壮素，加蒸馏水至1000ml，灭菌。[〇〇27] 实施例4[〇〇28] 一种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法，包括以下步骤:[〇〇29](1)将脱毒处理的中农303品种(商品化的)马铃薯幼芽经过灭菌处理后，放置于MS固体培养基上，在24°C，16h/8h光周期，光强为300wii〇l/(m2.S)的培养条件下培养，使茎段长超过7cm;
[0030](2)将步骤(1)获得的马铃薯试管苗茎段截取4cm放置于实施例2制备的培养基中培养，待茎段增长了 6cm;
[0031](3)取步骤(3)获得的马铃薯试管苗顶端4cm，放置于实施例2制备的培养基中培养，得到马铃薯试管苗。[〇〇32]以相同的品种，以MS固体培养基，在相同的条件及相同的步骤下培养，为对照组1。 观察对照组1得到的试管苗玻璃化严重，呈现半透明玻璃状，黄化严重且无叶片生长，生长速度慢，生根少。而实施例4组得到的试管苗无玻璃化现象，出现部分新生叶，茎段有芽，生长速度相对较快，开始生根。
[0033]实施例5
[0034]—种改善马铃薯试管苗玻璃化的方法，包括以下步骤:[〇〇35](1)将脱毒处理的大西洋品种(商品化的)马铃薯幼芽经过灭菌处理后，放置于MS固体培养基上，在25°C，16h/8h光周期，光强为300wii〇l/(m2.S)的培养条件下培养，使茎段长超过7cm;
[0036](2)将步骤(1)获得的马铃薯试管苗茎段截取3cm放置于实施例1制备的培养基中培养，待茎段增长了 5cm;
[0037](3)取步骤(3)获得的马铃薯试管苗顶端3cm，放置于实施例1制备的培养基中培养，得到马铃薯试管苗。[〇〇38]以相同的品种，以MS固体培养基，在相同的条件及相同的步骤下培养，为对照组2。 观察对照组2得到的试管苗玻璃化严重，呈现半透明玻璃状，黄化严重且无叶片生长，生长速度慢，生根少。而实施例5组得到的试管苗无玻璃化现象，出现部分新生叶，且叶绿素含量增加，叶的颜色变绿，茎段有芽，生长速度相对较快，开始生根。
[0039]实施例6
[0040]—种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法，包括以下步骤:
[0041](1)将脱毒处理的早大白品种(商品化的)马铃薯幼芽经过灭菌处理后，放置于MS 固体培养基上，在26°C，16h/8h光周期，光强为300wii〇l/(m2.S)的培养条件下培养，使茎段长超过7cm;
[0042](2)将步骤(1)获得的马铃薯试管苗茎段截取5cm放置于实施例3制备的培养基中培养，待茎段增长了 8cm;
[0043](3)取步骤(3)获得的马铃薯试管苗顶端5cm，放置于实施例3制备的培养基中培养，得到马铃薯试管苗。
[0044]以相同的品种，以MS固体培养基，在相同的条件及相同的步骤下培养，为对照组3。 观察对照组3得到的试管苗玻璃化严重，呈现半透明玻璃状，黄化严重且无叶片生长，生长速度慢，生根少(如图1)。而实施例6的方法得到的试管苗无玻璃化现象，茎段呈正常，叶片深绿色(如图2 )，生根快，生长速率快，后期长势较好(如图3)。
[0045]各实施例所用的MS固体培养基的制备:
[0046]取4.74g MS培养基(商品化，不含琼脂和蔗糖)，加蒸馏水溶解，调节pH = 5.8，加入 l〇g琼脂和20g鹿糖，加蒸馏水至1000ml，灭菌。
【主权项】
1.一种转换马铃薯脱毒玻璃化苗为正常苗的方法，其特征在于包括以下步骤:(1)将脱毒处理的马铃薯幼芽经过灭菌处理后，放置于MS固体培养基上，培养，使茎段 长超过7cm;(2)配制含有矮壮素的固体培养基；(3)将步骤(1)获得的马铃薯试管苗茎段截取3?5cm放置于步骤(2)获得的培养基中培 养，待茎段增长了 5?8cm;(4)取步骤(3)获得的马铃薯试管苗顶端3?5cm，放置于步骤(2)获得的培养基中培养， 得到马铃薯试管苗。2.根据权利要求1的方法，其特征是所述含有矮壮素的固体培养基用下述方法制成:取 4 ? 74g MS培养基，加蒸馏水溶解，调节pH = 5 ? 8，加入80?100g琼脂、30?40g蔗糖和50mg? 150mg矮壮素，加蒸馏水至1000ml，灭菌。
【文档编号】A01H4/00GK105993941SQ201610330915
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】季静, 朱雪瑞, 王罡
【申请人】天津大学