一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法
【专利摘要】本发明涉及食用菌培养技术领域，公开了一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法，在培养皿外用Parafilm封口膜封口，以实现在培养皿中栎松口蘑菌种长期培养，减少菌种培养过程中的污染，方便观察和测量栎松口蘑菌丝的生长。本发明方法操作简单，容易获得纯菌种，且操作成本低，又不易带入杂菌。
【专利说明】
一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及食用菌培养技术领域，特别涉及一种栎松口蘑子实体分离纯化的方 法。
【背景技术】
[0002] 栎松口蘑又称傻松茸、栎松茸、傻松口蘑、青红松茸或青闪菌等，是珍稀食用真菌， 典型的营养共生型外生菌根菌。由于难以合成代替活树根系的营养和生境，驯化栽培十分 艰难，菌种的分离和培养也是难题之一。松口蘑的菌丝体在人工条件下生长很缓慢，而且培 养基容易干燥且菌种易污染，因此寻找合适的培养方法尤为重要。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是在于提供一种栎松口蘑子实体分离 纯化的方法，在培养皿外用Parafi lm封口膜封口，实现在培养皿中栎松口蘑菌种长期培养， 减少菌种培养过程中的污染，方便观察和测量栎松口蘑菌丝的生长。
[0004] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。
[0005] -种栎松口蘑子实体分尚纯化的方法，其过程为：
[0006] (1)选取新鲜松口蘑子实体，在无菌室内无菌条件下将松口蘑子实体用70 %酒精 擦洗；
[0007] (2)将表面消毒过的子实体放在无菌培养皿内，用解剖刀把子实体纵向切开，从菌 肉、菌褶和菌柄处分别挑取黄豆粒大小的组织块，接种到母种培养基上，每个部位10个重 复，共30个培养皿，随后将培养皿用Parafi lm封口膜密封，最后将培养皿放置于20-25 °C的 恒温培养箱内避光培养20-60d，定期观察并做好记录；
[0008] (3)待菌落直径长到80-100mm，转皿进一步纯化。
[0009] 进一步地，所述母种培养基是将1000mL PDA培养基在121°C灭菌20min后加入 VBi〇 · 5mg 和烟酸 0 · 5mg。
[0010] 进一步地，所述PDA培养基包含葡萄糖20.0g、马铃薯200.0g、琼脂15.0g、自来水 1000 .OmL，pH值自然。
[0011] 进一步地，所述VBi使用前采用细菌过滤器过滤除菌。
[0012] 进一步地，所述烟酸使用前采用细菌过滤器过滤除菌。
[0013] 本发明中采用的Parafi lm封口膜是一种无色无味、半透明的热塑性塑料，具有良 好的柔软性、可塑性、自动密封性，容易切割，可以快速有效地密封实验器皿，具有防水防湿 的性能，能够有效阻止样品发挥和污染，适用于许多重要实验和技术方面的理想工具。
[0014] 本发明方法操作简单，容易获得纯菌种，且操作成本低，又不易带入杂菌。
【附图说明】
[0015] 以下结合附图与【具体实施方式】对本发明作进一步的详细说明。
[0016] 图1为实施例中栎松口蘑母种在固体平板上的分离情况，其中A是菌肉分离物，B是 菌褶分离物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
[0018] 实施例
[0019] (1)母种培养基的制作：将200g马铃薯去皮洗净，切成小块，加水煮沸30min后，纱 布过滤，取其滤液，补足水分至l〇〇〇mL，趁热加入20g葡萄糖和15g琼脂使之溶化，pH自然， 121°C灭菌20min后加入VB!和烟酸(VB!和烟酸采用细菌过滤器过滤除菌）。
[0020] (2)栎松口蘑子实体组织分离纯化:在超净工作台内无菌条件下将松口蘑子实体 用70%酒精擦洗，将表面消毒过的子实体放在无菌培养皿内，用解剖刀把子实体纵向切开， 从菌肉、菌褶和菌柄处分别挑取黄豆粒大小的组织块，接种到上述分离培养基上，10个重 复，随后将培养皿用Parafi lm封口膜密封，最后将培养皿放置于20-25 °C的恒温培养箱内避 光培养20-60d，定期观察并做好记录;待菌落直径长到80-100mm，转皿进一步纯化。
[0021] 对林芝市栎松口蘑子实体的菌肉、菌褶和菌柄进行组织分离，其萌发状况参照表 1。参照图1，菌褶组织块在培养25d后，开始萌发，长出白色菌丝，平均萌发率为50.0%，而菌 肉组织块在培养30d后开始萌发，长出白色菌丝，平均萌发率为10.0%，菌柄组织没有萌发。 [0022]表1栎松口蘑组织的萌发状况
[0023]
[0024]
[0025] 以上所述，仅是本发明的较佳案例，并不对本发明做出任何限制，凡是针对本发明 技术内容对以上实施案例所做的任何简单修改、变更、模仿均属于本发明技术方案的保护 范围。
【主权项】
1. 一种栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，其过程为： (1) 选取新鲜栎松口蘑子实体，在无菌室内无菌条件下将栎松口蘑子实体用70 %酒精 擦洗； (2) 将表面消毒过的子实体放在无菌培养皿内，用解剖刀把子实体纵向切开，从菌肉、 菌褶和菌柄处分别挑取黄豆粒大小的组织块，接种到母种培养基上，菌肉、菌褶、菌柄各做 10个培养皿，共30个培养皿；随后将培养皿用Parafilm封口膜密封;最后将培养皿放置于 20-25 °C的恒温培养箱内避光培养20-60d，定期观察并做好记录； (3) 待菌落直径长到80-100mm，转皿进一步纯化。2. 根据权利要求1所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述母种培养 基是将l〇〇〇mL PDA培养基在121°C灭菌20min后加入VBiO. 5mg和烟酸0.5mg。3. 根据权利要求2所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述PDA培养 基包含葡萄糖20.0g、马铃薯200.0g、琼脂15.0g、自来水1000.0 mL，pH值自然。4. 根据权利要求2所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述VBi使用前 采用细菌过滤器过滤除菌。5. 根据权利要求2所述的栎松口蘑子实体分离纯化的方法，其特征在于，所述烟酸使用 前采用细菌过滤器过滤除菌。
【文档编号】A01G1/04GK106069193SQ201610475226
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月24日
【发明人】何建清
【申请人】何建清