一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方法
【专利摘要】本发明公开了一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方法，包括以下步骤：1）播种小黑麦10行，拱棚保温；2）将带有黄矮病毒的自生麦苗和分蘖初期田间具有大麦黄矮病毒症状的植株，移栽到拱棚内；将蚜虫接到典型发病植株上进行扩繁；3）播种鉴定小黑麦材料，材料按鉴定编号于田间顺序排列；4）鉴定材料拔节期时，将已经扩繁有大麦黄矮病毒的小黑麦的病叶，以蚜虫饲毒并接种于鉴定材料上；5）进行抗性评价。本发明提供的一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方法，操作方便，简单易行，成本低廉，省去了室内保存和繁殖蚜虫的麻烦，可一次性鉴定数百份小黑麦材料对当地黄矮病毒所有流行株系的抗感性，针对性强，检测效率高，准确性好。
【专利说明】
一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及作物抗性育种技术领域，具体涉及一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方 法。
【背景技术】
[0002] 八、黑轰 QTr i t i ca 1 e h exap Ιο i de 轰 MsiTr i t i cum ae s t i vum L.)和黑麦属（Secaie cereaie L.)物种经属间有性杂交和杂种染色体数加倍而人工结 合成的新物种。我国在70年代育成的八倍体小黑麦，其特点是既表现出小麦的丰产性和种 子的优良品质，又保持了黑麦的抗逆性强和高赖氨酸，且能适应不同的气候和环境条件，是 一种很有前途的粮饲兼用型作物。小黑麦在国内的种植总面积已达15万hm 2以上，目前主要 集中在我国西北和西南山区，近年来四川、云南、山东、安徽、湖南、江苏等省也开始种植推 广。种植小黑麦可缓解畜牧业发展中冬季青饲料不足的矛盾，对促进我国畜牧业发展具有 十分重要的现实意义。
[0003] 大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus，BYDV)是世界上危害严重、流行广泛 的植物病毒之一，可造成巨大经济损失。其寄主范围非常广泛，包括燕麦属、冰草属、雀麦 属、鸭茅属、披碱草属、羊茅属、大麦属、黑麦草属、早熟禾属、狗尾草属、高粱属、小麦属、玉 蜀黍属的许多种植物。可造成叶片黄化病株严重矮化，不抽穗或抽穗很小，影响小黑麦后期 干物质积累和转运，使草产量和籽粒产量下降。
[0004] 近年来，通过随机抽样和实地调查相结合的方式，对小黑麦黄矮病的发生和为害 程度进行了调查，发现在我国西北小黑麦主产区，大麦黄矮病严重危害小黑麦，许多品种的 病株率为100%，叶片严重度在3级以上，给当地农户造成了较大的损失。有效控制黄矮病的 危害，是保障小黑麦安全生产的重要措施，而利用抗黄矮病品种是控制其发生和危害的最 安全、经济和有效的措施。优异的抗性种质资源是进行抗病育种的物质基础，然而，国内外 迄今尚未查阅到小黑麦抗黄矮病鉴定的评价标准及相关抗性鉴定的报道，因此，建立小黑 麦抗黄矮病种质资源的鉴定方法，对于开展小黑麦抗黄矮病种质资源的筛选以及抗性育种 研究具有重要的意义。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种小黑麦黄矮病抗性的 鉴定方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为:一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方 法，包括以下步骤： 1) 于每年秋季的10月1日-10月7日在试验地播种小黑麦10行，行长lm，待出苗后搭建小 拱棚，用塑料布覆盖拱棚保温，翌年开春的3月下旬，在拱棚里分阶段补种小黑麦，以保证小 黑麦麦苗的连续性； 2) 分别于立冬前的10月中旬到11月初采集带有黄矮病毒的自生麦苗和4月上旬采集分 蘖初期田间具有典型大麦黄矮病毒症状的植株，移栽到种植小黑麦的塑料拱棚内；待4月中 旬天气回暖，即大气温度15度，将拱棚塑料布换为具有小孔、透气的纱窗布，并采集麦二叉 蚜、禾谷缢管蚜和麦无网长管蚜200头接到拱棚内典型发病植株上进行扩繁； 3) 于每年3月25日-4月10日播种鉴定小黑麦材料，每个品种播种1行，行长lm，重复3次， 行距30 cm，材料按鉴定编号于田间顺序排列，每行播种100粒； 4) 待鉴定材料生长到拔节期时，将3种蚜虫定量500头混合放入两端具有纱布的玻璃筒 内饥饿12 h后，再将大量已经扩繁有大麦黄矮病毒的小黑麦的具有典型症状的病叶剪成5-l〇cm的小段，放入玻璃筒内盖严饲毒24 h，接种时用毛笔轻扫小黑麦叶片，使蚜虫落于鉴定 材料上，每株定量接种5头蚜虫，小黑麦品种为"农13号"； 5) 进行抗性评价，在步骤4)所述的用于鉴定的蚜虫取食叶片后，在小黑麦灌浆后期，根 据待鉴定小黑麦叶片的黄化面积，进行群体的平均严重度计算，按分级标准进行抗性评价。
[0007] 现有技术中，检索到《一种小麦抗黄矮病性表型鉴定方法》（专利申请号为 201410135693.5)，本发明与此专利的区别在于： (1) 作物种类不同，本发明作物为小黑麦，而此方法作物为小麦； (2) 传毒介体单一，仅为麦二叉蚜，本发明增加了传毒介体种类，分别为麦二叉蚜、禾谷 缢管蚜和麦无网长管蚜，操作简单易行； (3) 本发明将3种蚜虫定量500头混合放入玻璃筒内饥饿12 h后，再将大量扩繁在小黑 麦品种"农13号"的大麦黄矮病毒(BYDV)具有典型症状的病叶剪成5-lOcm的小段，放入玻璃 筒内盖严饲毒24 h，接种时在每株鉴定材料上用毛笔轻轻接种5头蚜虫，定量接虫； (4) 接种部位不同，本发明接种在小黑麦材料叶片上，而此技术接种在小麦茎基部； (5) 本发明鉴定群体数量较多，lm行长种植100粒种子，重复3次，而此技术种植2m行长， 播种30-40粒种子，群体数量较少。
[0008] 本发明的有益效果为:本发明提供的一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方法，操作方 便，简单易行，成本低廉，省去了室内保存和繁殖蚜虫的麻烦，可一次性鉴定数百份小黑麦 材料对当地黄矮病毒所有流行株系的抗感性，针对性强，检测效率高，准确性好，为大规模 田间筛选抗黄矮病的小黑麦资源提供了极大便利，利用该方法将筛选出抗黄矮病的小黑麦 种质，能够为小黑麦抗黄矮病遗传与育种研究提供有价值的抗性材料。
【具体实施方式】
[0009] 实施例1: 小黑麦对黄矮病抗性鉴定方法，对收集的25个小黑麦品种进行黄矮病抗性鉴定试验， 按如下步骤进行： 1、拱棚内小黑麦麦苗种植:选择田间向阳避风处，面积约8m2，土壤水肥条件中等，于每 年秋季播种10行感病小黑麦品种"农13号"，行长lm，行距30cm，定期播种，保证麦苗的连续 性。
[0010] 鉴定材料种植:于每年4月初进行人工条播，每个鉴定材料播种1行，行长lm，设3次 重复，行距30 cm，每行播种100粒，鉴定材料随机排列。
[0011] 2、毒源采集:分别在立冬前和4月上旬采集田间具有典型大麦黄矮病毒症状的植 株，移栽到种植小黑麦的塑料棚内。
[0012] 3、蚜虫及小黑麦所需温度：于4月上旬将拱棚的塑料布拆除，用具有小孔、透气的 纱窗布代替，使棚内温度保持在20°C左右，以免温度过高，造成蚜虫和小黑麦麦苗死亡。
[0013] 4、蚜虫采集:在4月中旬到下旬采集麦二叉蚜、禾谷缢管蚜和麦无网长管蚜，接到 典型发病植株上进行扩繁。
[0014] 5、网棚内毒源扩繁:采用间隔15天，定期在小黑麦行间播种小黑麦品种"农13号"， 以供带毒蚜虫取食，扩繁毒源。
[0015] 6、田间接种:待鉴定材料生长到拔节期时，将3种蚜虫定量500头混合放入两端具 有纱布的玻璃筒内饥饿12 h后，再将大量扩繁在小黑麦品种"农13号"上的大麦黄矮病毒 (BYDV)具有典型症状的病叶剪成5-lOcm的小段，放入玻璃筒内盖严饲毒24 h，接种时在鉴 定材料上用毛笔轻扫于小黑麦叶片上，每株定量接种5头蚜虫。
[0016] 7、抗性评价： 表1显示为小黑麦黄矮病成株期病级划分标准。
[0017] 表1
i 一平均严重度； i 一病级数(1~n); Z i -病情为i级的单元数； ?S i -病情为i级的严重度值。
[0018] 表2显示为小黑麦成株期对黄矮病的抗性评价标准。
[0019] 表2
若供试材料在初次鉴定中表现为中抗及以上时，次年进行重复鉴定，最终抗性评价以 两次鉴定结果中平均严重度最高者为准。
[0020] 8、结果： 利用上述方法对25份小黑麦品种进行了抗黄矮病鉴定评价，参见表2,筛选出4份中抗 材料，尚未发现免疫，高抗和抗病材料。在鉴定的25份品种中，中抗材料占16.0%，感病和高 感材料占84.0%。
[0021] 表3显示为小黑麦品种对黄矮病的抗性鉴定结果。
[0022] 表 3
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管 参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对 前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在 本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护 范围之内。
【主权项】
1. 一种小黑麦黄矮病抗性的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 于每年秋季的10月1日-10月7日在试验地播种小黑麦10行，行长lm，待出苗后搭建小 拱棚，用塑料布覆盖拱棚保温，翌年开春的3月下旬，在拱棚里分阶段补种小黑麦，以保证小 黑麦麦苗的连续性； 2) 分别于立冬前的10月中旬到11月初采集带有黄矮病毒的自生麦苗和4月上旬采集分 蘖初期田间具有典型大麦黄矮病毒症状的植株，移栽到种植小黑麦的塑料拱棚内；待4月中 旬天气回暖，即大气温度15度，将拱棚塑料布换为具有小孔、透气的纱窗布，并采集麦二叉 蚜、禾谷缢管蚜和麦无网长管蚜200头接到拱棚内典型发病植株上进行扩繁； 3) 于每年3月25日-4月10日播种鉴定小黑麦材料，每个品种播种1行，行长lm，重复3次， 行距30 cm，材料按鉴定编号于田间顺序排列，每行播种100粒； 4) 待鉴定材料生长到拔节期时，将3种蚜虫定量500头混合放入两端具有纱布的玻璃筒 内饥饿12 h后，再将大量已经扩繁有大麦黄矮病毒的小黑麦的具有典型症状的病叶剪成5-l〇cm的小段，放入玻璃筒内盖严饲毒24 h，接种时用毛笔轻扫小黑麦叶片，使蚜虫落于鉴定 材料上，每株定量接种5头蚜虫； 5) 进行抗性评价，在步骤4)所述的用于鉴定的蚜虫取食叶片后，在小黑麦灌浆后期，根 据待鉴定小黑麦叶片的黄化面积，进行群体的平均严重度计算，按分级标准进行抗性评价。
【文档编号】A01G7/06GK106069257SQ201610459156
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】郭成, 俆生军
【申请人】甘肃省农业科学院植物保护研究所