专利名称：一种t－淋巴细胞培养方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞的培养方法，特别是一种淋巴细胞的培养方法。
现有技术中T-淋巴细胞的培养方法，需要进行细胞分离，操作过程复杂。
本发明的T-淋巴细胞培养方法克服了现有技术的不足，操作简单，而且用血量少。
本发明的T-淋巴细胞培养方法，适用于使用自制的T-淋巴细胞培养液进行的T-淋巴细胞培养，有关自制T-淋巴细胞培养液的组成、配方及其制备方法，已另行申请发明专利，所述自制T-淋巴细胞培养液的组成成分及配制1000克培养液的用量为N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(Hepes)3-6g碳酸氢钠 1-3gRPMI 1640培养基(以干粉量计) 5-10gL-谷氨酰胺(LG)0.1-0.3g肝素钠(150u/mg) 0.1-0.3g植物血凝素(PHA) 5-20mg胎牛血清 100-300ml青霉素(80万u/2ml) 0.1-0.5ml
链霉素(100万u/2ml) 0.1-0.5ml余量用蒸馏水补齐。
该培养液的PH值为6.5-7.5。
本发明的T-淋巴细胞培养方法及其步骤为(1)取上述冰冻的T-淋巴细胞培养液，在室温下解冻；(2)抽取静脉血注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀，血量与培养液的体积比为1∶8-12；(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中，48-96小时后即完成细胞培养。
在实施本发明的过程中，所使用的器皿及其它用具均需要消毒灭菌处理，而且所有操作均应符合无菌操作，消毒灭菌方法和无菌操作方法均属于本领域的公知技术。
本发明的T-淋巴细胞培养方法与现有技术相比具有如下优点(1)用血量少，仅需要0.4-0.5ml血样，而现有技术一般需要5-10毫升；(2)方法简便、省时、易操作、设备简单，而现有技术中需要用淋巴细胞分离液做淋巴细胞分离，而且需要较昂贵的二氧化碳培养箱，操作繁琐、费时、仪器昂贵。
下面结合实施例进一步说明本发明步骤一、取组成成分及配制1000克培养液的用量如下的T-淋巴细胞培养液
Hepes 4.76g碳酸氢钠 1.6gRPMI 1640培养基 8.32gL-谷氨酰胺(LG)0.3g肝素钠(150u/mg) 0.1g美国sigma生产的PHA-P 10mg青霉素(80万u/2ml) 0.35ml链霉素(100万u/2ml)0.3ml胎牛血清 200ml余量用蒸馏水补齐。
该培养液的PH值为7.0-7.2。
步骤二、依下列方法及步骤进行T-淋巴细胞的培养(1)室温下将上述4ml冰冻的淋巴细胞培养液解冻；(2)抽取静脉血0.4-0.5ml注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀；(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中，72小时后即完成细胞培养。
依此方法，T-淋巴细胞转化率达80％以上，而且胞核涨大，核仁分裂。
权利要求
1.一种T-淋巴细胞培养方法，其特征在于其是通过如下步骤实现的(1)室温下将冰冻的T-淋巴细胞培养液解冻；(2)抽取静脉血注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀，血与培养液的体积比为1∶8-12；(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中48-96小时。
全文摘要
本发明涉及一种T－淋巴细胞培养方法,其不需要进行淋巴细胞的分离,具有用血量少、操作简单的特点。
文档编号C12N5/0783GK1275618SQ0010966
公开日2000年12月6日 申请日期2000年6月21日 优先权日2000年6月21日
发明者张国庆 申请人:张国庆