药物、饮料或食品的制作方法

专利名称：药物、饮料或食品的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗或预防由雌激素受体引起的疾病的药物组合物、饮料或食品。
近年来的研究表明，除与女性个体中子宫或性器官的功能有关外，具有许多内环境稳定作用。事实上，人们已知在男性个体中雌激素受体带有1个受体位置和1个DNA识别位置，具有形成许多分享雌激素的组织和心血管系统的能力。然而，由于该研究刚开始，在男性和女性个体中除在形成方面之外的雌激素的确切主要功能目前几乎不知道。
生物学活性雌激素产生其与细胞外受体结合的性质。受体和与其结合的配位转移到细胞核中，配合物在特异识别位置结合DNA以产生特异基因表达，从而显示活性。然而，有关与受体的结合和调节几乎什么也不知道。
另一方面，激素类活性物质或抗激素活性物质近年来观察到用于某些释放入环境的化学物质。该物质总体称为内分泌物破坏者(或环境激素)，例如，氯杀虫剂、用于动物的健康产品、塑料、焚化产生的副产物、抗菌剂、除草剂、工业化学物质，例如双酚A和壬基酚等已知影响有机体。已报道了由于该类物质对野生动物的生态系统的影响而产生的改变的生殖能力(尤其雄性向雌性的转化)、下降的生殖能力、下降的孵化能力、下降的后代存活率、不正常的生殖行为等。精子数目的降低、子宫内膜异位、不育症、卵巢癌、子宫癌、前列腺癌等已被预计是由这些物质对人体健康的影响产生的。
已报道，某些环境中的内分泌物破坏者结合雌激素(性激素)的受体以显示雌激素活性(或用作兴奋剂)。例如，对于降低的生殖能力，包括降低的人体精子的质量，已报道精子数目在超过50岁时已降低几乎一半(BMJ，305609-613，1992)。
使用幼年大鼠的子宫试验是用于测定可疑的物质的内分泌破裂活性(或所谓的环境激素活性)的常用动物试验之一，该试验利用子宫的生长受雌激素控制这样的事实。更具体地说，内生的雌激素，17β-雌二醇的血液浓度在青春期前的幼年大鼠中保持低水平，子宫响应于外生雌激素以剂量依赖方式增长(T.Inoue(ed.)，“Nailbunpitsukakuran kagaku busshitsu no seibutsu shiken kenkyuuhou”(Biological assays for endocrine-disrupting chemicalsubstances)(2000)Springer-Verlag Tokyo)。因此，当大鼠能够在出生后25天断奶时，该试验在出生后18天的有限时期内，即青春期之前进行。然而，OECD由于如下原因建议该试验时间短；不需要特殊技术；和得到可重复的结果(OECD VALIDATION WORK ON IN-VIVOUTEROTROPHIC SCREENING ASSAY，Protocol for demonstration ofdose-response of the utero-trophic assay using the referenceoestrogen athinyl oestradiol(1999))。使用该试验，据报道向幼年大鼠给药被预期具有内分泌破裂活性的双酚A或4-壬基酚增加子宫重量(Environ Health Perspect，106719-720，1998；Toxicological Sciences，54154-167，2000)。
另一方面，人们认为使用以对抗结合雌激素受体的物质方式结合雌激素受体和显示内分泌破裂活性的物质将有效避免内分泌破裂剂的影响。例如，来自大豆的异黄酮已知如内分泌破裂剂那样强地结合雌激素受体。当异黄酮口服时，它在活体内与内分泌破裂剂竞争，显示雌激素活性，产生类似于内分泌破裂剂的影响(Environ HealthPerspect，106369-373，1998)。
在Shutsung Liao等的专利和专利申请中描述了脂肪酸、儿茶素、没食子酸衍生物等抑制5α-还原酶的活性，有效用于治疗前列腺癌和前列腺肥大(Arch Development Corp.，USA；US5605929，WO99/22728，JP-A11-507022)。没有这些出版包含包括使用动物模型研究的治疗实验，仅根据现有技术方面推测效果(例如，P.K.Siiteri等，(1970)J.Clin.Invest.，491737-1745，P.C.Walsh等，(1983)J.Clin.Invest.，721772-1777，E.Stoner等，(1992)J.Urol.1471298-1302，G.J.Gormley等，(1992)N.Eng.J.Med.，3271185-1191，N.Bruchovsky等(1988)J.Clin.Endocrinol.Metab.，67806-816)。
5α-还原酶的两种已知异酶的分布在动物种类或组织之间是相当不同的(A.E.Thigpen等(1993)J.Clin.Invest.，92903-910；David W.Russell & Jean D.Wilson(1994)Annu.Rev.Biochem.，6325-61)。类型2的5α-还原酶在人体中与前列腺癌和前列腺肥大有关，而Liao等观察儿茶素或没食子酸衍生物抑制类型1的5α-还原酶。因此，根据Liao等的数据，未显示儿茶素或没食子酸衍生物对前列腺癌或前列腺肥大的效果。此外，在JP-A11-507022中描述了没食子酸衍生物或儿茶素中的没食子酸根与5α-还原酶的抑制没有关联，除没食子酸根之外，在儿茶素中部分结构是重要的。
此外，关于没食子酸衍生物或儿茶素抑制5α-还原酶的活性，Liao等报道除没食子酸根之外，在儿茶素中部分结构对于活性是重要的，而没食子酸衍生物没有抑制5α-还原酶的活性(US5605929)。Liao等还报道，5α-还原酶活性在整个细胞试验条件下不受抑制(WO99/22728)。
如上所述，至今儿茶素或没食子酸衍生物未已通过选择性地阻断雌激素受体控制通过雌激素受体的信号。发明目的本发明的主要目的是提供用于预防内分泌破裂剂影响的高度安全的药物组合物、饮料或食品。
本发明的第二方面涉及用于减轻由兴奋剂与雌激素受体结合引起的疾病症状或预防由兴奋剂与雌激素受体结合引起的疾病的饮料或食品，其含有对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，它通过向其中加入该物质生产和/或稀释该物质生产。
是不显示雌激素活性的拮抗剂的选自如下的物质式I的化合物 其中R1和R2表示-H，-OH或-O-R4；R3表示-H或-OH；R4表示式II的化合物 它们的衍生物或其盐；没食子酸；它们的衍生物；和它们的可药用的盐优选用作在第一或第二方面中对雌激素受体兴奋剂具有活性的拮抗活性的物质。
式I化合物由属于儿茶素的物质举例，例如可优选使用表儿茶素、表培儿茶素、表培儿茶素没食子酸盐、表儿茶素没食子酸盐、培儿茶素没食子酸盐、儿茶素没食子酸盐、儿茶素和培儿茶素。没食子酸的衍生物由没食子酸的酯举例，尤其是没食子酸与具有8个或以上碳原子的醇的酯是本发明优选的。
本发明的兴奋剂由内分泌破裂剂举例。例如二噁英、有机氯化合物、苯酚、对苯二甲酸酯、芳烃、杀虫剂、有机锡化合物、雌激素、灭蚁灵、毒杀芬、涕灭威和开蓬。更具体地说，举例折仑诺、金雀异黄素、拟雌内酯、o，p-DDT、开蓬、甲氧氯、玉米烯酮、二噁英、p-辛基苯酚、壬基苯酚、迪厄耳丁、丁基苄基对苯二甲酸酯和/或双酚A。
本发明的第三方面涉及酒精饮料，其含有属于儿茶素的物质，它通过向其中加入属于儿茶素的物质生产。表培儿茶素没食子酸盐优选用作在第三方面中属于儿茶素的物质。表培儿茶素没食子酸盐的含量优选为0.002-0.75％(w/w)。除属于儿茶素的物质外，本发明的酒精饮料可含有茶提取物。在本发明的酒精饮料中表培儿茶素没食子酸盐与咖啡因的比率优选为0.9或以上。根据本发明，现在可以提供酒精饮料，其中表培儿茶素没食子酸盐含量增加，而咖啡因含量降低。由于属于儿茶素的物质、茶提取物和酒精的协同效果，本发明的酒精饮料具有浓茶的感觉、良好的味道全幅面和平衡、改善的酒精的甜昧、苦味收紧的感觉和刺激味道。
本发明的第四方面涉及茶饮料，它通过包括发酵步骤的方法生产，其含有浓度为0.01-0.5％(w/w)的表培儿茶素没食子酸盐，其中表培儿茶素没食子酸盐与咖啡因的比率优选为0.9或以上。例如，第四方面的茶饮料是通过包括发酵步骤生产的罐装或瓶装茶饮料。例如，它是绿茶饮料、红茶饮料、乌龙茶饮料、大麦茶饮料或banaba茶饮料。
发明的详细描述用于本文的兴奋剂是指结合雌激素受体并显示雌激素活性的物质，显示雌激素活性的物质由内分泌破裂剂或雌激素举例说明。
用于本文的内分泌破裂剂(也称为外生内分泌破裂剂或环境激素)是指外生物质，它对在活体中自然显示的激素的正常活性进入动物活体产生影响。内分泌破裂剂包括保持、促进或抑制激素的正常活性的物质，也包括潜在地影响激素的正常活性的物质。用于本文的雌激素是指内生雌激素，它是在活体中进行产生的或合成产生的雌激素。与兴奋剂结合的雌激素受体可以是α型或β型，优选它是α型。
目前约70种物质(或物质组)被预计具有内分泌破裂活性。根据用于物质的分析方法，这些物质在24th Meeting of the Japan Societyfor Envirnmental Chemistry(1998)提要材料中分类如下(1)种类1有机氯化合物(例如普通有机氯化合物，多氯代联苯(PCB))；(2)种类2酚(例如普通苯酚，双酚A，2，4-二氯苯酚，五氯苯酚)，(3)种类3对苯二甲酸酯(例如普通对苯二甲酸酯)；(4)种类4芳烃(例如苯并芘，二-2-乙基己基己二酸酯(DEHA)，二苯甲酮，4-硝基甲苯，苯乙烯二聚物和三聚物，1，2-二溴-3-氯丙烷，苯乙烯，正丁基苯)；(5)种类5杀虫剂(例如普通杀虫剂，2，4，5-T(三氯苯氧基乙酸)，2，4-D(二氯苯氧基乙酸)，苯菌灵，杀草强，灭多虫)；(6)种类6有机锡化合物；(7)种类7雌激素；未分类入上述种类的二噁英；以及由上述种类排除的灭蚁灵、毒杀芬、涕灭威和开蓬。这些种类和物质示于表1，2和3中。
表1

表2

表3

内分泌破裂剂不限制上述物质，例如列举折仑诺、金雀异黄素、拟雌内酯、o，p-DDT、开蓬、甲氧氯、玉米烯酮、二噁英、对辛基苯酚、壬基苯酚、迪厄耳丁、丁基苄基对苯二甲酸酯和/或双酚A。
结合雌激素受体，不显示雌激素活性和在体内显示对兴奋剂的拮抗活性的任何物质可优选用作本发明的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质(下文也称为拮抗剂)。尽管不打算限制于本发明，但可优选使用例如儿茶素、没食子酸和/或其衍生物。
用于筛选兴奋剂或拮抗剂的方法没有特殊限制。体内筛选方法包括如下步骤。在第一步骤中，候选物质可根据已知方法，例如实施例7中描述的方法筛选它们结合雌激素受体的活性。更具体地说，测量带有荧光标记的候选物质结合雌激素受体的拮抗活性。在第二步骤中，判断被证实具有结合雌激素活性的候选物质是否是兴奋剂或拮抗剂。判断可根据已知方法通过测定物质是否具有雌激素活性进行。列举的方法是如Environ.Health Perspect.，103113-122(1995)中所述的E-SCREEN试验。在试验中，将候选物质加入一种人体乳腺癌得到的细胞，MCF-7的培养物中，测定其繁殖MCF-7的活性。
此外，尽管不打算限制本发明，但拮抗剂可例如根据实施例1中所述的方法在体内有效地筛选。具体地说，给药雌激素受体兴奋剂，再口服给药候选物质，随后测定子宫重量的变化。在该情况下，测定可在给药后通过将其溶解在乙醇中增加候选物质吸收性进行。
儿茶素由表儿茶素、表培儿茶素、表培儿茶素没食子酸盐、表儿茶素没食子酸盐、培儿茶素没食子酸盐、儿茶素没食子酸盐、儿茶素、培儿茶素和/或它们的衍生物。
本发明的儿茶素的衍生物没有具体限制，只要它们对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性。
可用于本发明的没食子酸衍生物包括，但不限于，在分子中具有没食子酸结构的化合物。列举由没食子酸中的羟基或羧基和另一分子中的官能团反应产生的化合物，例如酯、醚或酰胺。尤其是没食子酸中的羧基与带有羟基的化合物的酯优选用于本发明中。
酯包括没食子酸与带有醇或酚羟基的化合物的酯，列举没食子酸戊酯、没食子酸己酯、没食子酸庚酯、没食子酸辛酯、没食子酸壬酯、没食子酸癸酯、没食子酸十一烷基酯、没食子酸十二烷基酯、没食子酸十三烷基酯、没食子酸十四烷基酯、没食子酸十五烷基酯、没食子酸十七烷基酯和没食子酸十八烷基酯。没食子酸与含有8个或以上碳原子的脂族醇的酯，例如没食子酸与辛基醇、十二烷基醇或十六烷基醇的酯是本发明尤其优选的。脂族醇可含有侧链或不饱和烃链，只要保持拮抗兴奋剂结合雌激素的活性即可。此外，在烃链中的氢原子可被卤素或官能团，例如羟基、羧基、氨基或氧代基团取代。
本发明通过兴奋剂与雌激素受体引起的疾病由据报道由于雌激素的不正常响应产生的疾病列举，例如精子数目下降、雌激素相关的癌症、子宫纤维瘤、子宫内膜炎、平滑肌细胞增生和精液缺乏。使用本发明的药物组合物处理或预防的疾病包括前列腺肥大，对此，雌激素功能的抑制被预计是治疗有效的。
用于本文的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质是指与雌激素受体结合并显示对与雌激素受体结合的兴奋剂(例如内分泌破裂剂或雌激素)的拮抗活性的物质。
本发明的雌激素由具有雌激素活性的甾族化合物列举，例如17β-雌二醇、雌酮、共轭雌激素(Premarin(注册商标))、马雌激素或乙炔基雌二醇。
根据本发明，对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质由选自式I化合物、没食子酸、它们的衍生物和可药用的盐的化合物列举。本发明对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质还包括带有式I结构作为其基本骨架的聚合物和齐聚物。
衍生物由procyanidin B-2 3，3’-双没食子酸、procyanidinB-3、prodelphinidin B-43’-没食子酸盐、oolongbisflavan A、assamicadin A、theogallin和strictine。
此外，theaflavin、theaflavin没食子酸盐、theaflavin没食子酸盐B或theaflavin双没食子酸盐可用作本发明的活性成分。
可用于本发明的儿茶素由茶儿茶素列举。儿茶素是一组通常称为类黄酮颜料组分。茶已知含有8种类型的儿茶素，所使用的儿茶素是商业上可获得的。例如可使用由绿茶制备的物质，根据本发明，制备儿茶素的方法没有具体限制。例如它们可由化学合成法或由天然产物提取和纯化制备。主要用作本发明的活性成分的举例儿茶素是茶儿茶素。尽管不打算限制本发明，但它们可由天然产物，例如发酵茶(例如红茶)、半发酵茶(例如乌龙茶)或非发酵茶(例如绿茶)提取。茶提取物优选用作本发明的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质。
例如，尽管不打算限制本发明，但含有表培儿茶素没食子酸盐(下文还称为EGCG)的提取物如果是由可食原料提取的，则可以使用，优选物质的EGCG含量高。含有EGCG的提取物由使用水或有机溶剂，例如Sunphenon 100S、Sunphenon DCF-1、Sunphenon LA-50和SunphenonBG(均由Taiyo Kagaku获得)得到的茶提取物。上述提取物的EGCG含量分别是50、53、18和50％(w/w)，咖啡因含量分别是10％(w/w)、低于检测限、5％(w/w)和3％(w/w)。过量咖啡因的摄取已知导致毒性、致癌作用、高胆固醇含量、钙尿等。因此，含有降低数量的杂质，例如咖啡因的茶提取物可优选用于饮料或食品。此外，(味道)感觉评价可通过降低咖啡因含量而改善。
用于本文的“茶”是指茶(Cammellia sinensis，(L)O.Kuntze)整个植物或其部分(例如叶、木质部、根、种子等)的，经过或未经部分或全部发酵的粗或干燥产品。每个部分可单独使用或任何多个部分可结合使用，茶叶的若干形式可作为提取物的原料。例如，该形式包括由常规茶生产过程的任何步骤得到，例如原茶叶和最终茶(干燥的茶)。此外，未限制发酵程度。例如可使用谷粒茶，例如大麦茶、烘烤的米茶或荞麦茶，或叶茶，例如叶茶，例如绿茶、红茶、烘烤的绿茶、粉末绿茶、乌龙茶或banaba茶。
如果含有属于茶儿茶素的物质，茶提取物可用作本发明的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质。因此，可使用粗茶提取物，该粗茶提取物可通过用温(优选热)水或有机溶剂提取茶得到。例如，低级醇，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或丁醇，低级酯，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯，或酮，例如丙酮或甲基异丁基酮可用作有机溶剂。每种有机溶剂可单独地或任何多种有机溶剂可合适地结合使用，它们可以是无水的或优选含水的。
常规用于提取原药的方法可优选用于用水或有机溶剂的提取。例如优选在搅拌下在沸点或以下的温度下回流加热按重量计1份(干)茶叶和按重量计5-20份水或有机溶剂的混合物。提取步骤通常进行5分钟至7天，优选10分钟至24小时。选择性地，提取时间可通过辅助方法，例如搅拌而缩短。不溶解物质可通过合适方法，例如过滤或离心由水-或有机溶剂-提取物分离。除根据常规方法制备的热水-或有机溶剂-提取物之外，通过用各种有机溶剂、吸附剂等进一步处理提取物得到的产物也包括在可用作本发明的合成抑制剂的活性成分的茶提取物中，选择性地，茶提取物可浓缩或干燥和粉末化，或通过由冷水结晶。
如上所述得到的茶提取物含有在茶(尤其是茶叶)中所包含的儿茶素的混合物，即茶儿茶素，例如表儿茶素、表培儿茶素、表培儿茶素没食子酸盐、表儿茶素没食子酸盐、培儿茶素没食子酸盐、儿茶素没食子酸盐、儿茶素、培儿茶素，它还可含有由原料茶得到的杂质。
用于治疗或预防由兴奋剂与雌激素受体结合引起疾病的本发明药物组合物可使用对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质作为活性成分制备。
用于治疗或预防的本发明的药物组合物可通过使用用于本发明的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质作为活性成分和与已知药物载体一起配制而配制。为生产组合物，物质通常与可药用的液体或固体载体，和选择性地溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂。崩解剂、润滑剂等混合以进行配制。制剂可以是固体制剂形式，例如片剂、颗粒、粉末、撒布粉和胶囊，或液体制剂，例如正常溶剂、悬浮液和乳液。此外，它可配制入干燥的制剂，它可通过在使用前加入合适的载体重新构成液体制剂。
药物载体可根据上述具体给药途径和剂量形式选择。对于口服制剂，可以使用例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、流动促进剂、味觉剂、色素、香料等可包括在口服制剂中。此外液体口服制剂中包含的属于儿茶素的物质的吸收系数可通过包括浓度为0.2-40％(w/w)的乙醇变得杰出。
肠胃外制剂可根据常规方法通过将选自对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，它们的衍生物和其盐的化合物作为本发明的药物组合物的活性组分溶解或悬浮在载体中制备。稀释剂包括可注射的蒸馏水、生理盐水、含水葡萄糖溶液、可注射的植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、聚丙二醇和聚乙二醇。选择性地，杀菌剂、稳定剂、渗透调节剂、光滑剂等可加入溶液或悬浮液中。
用于治疗或预防的本发明的药物组合物通过对于组合物的剂量形式合适的途径给药。给药途径不限制于具体一种。组合物可内部或外部(或局部)或通过注射给药。可注射的制剂可例如静脉内、肌内、皮下、经眼等给药，外部制剂包括栓剂。
用于治疗或预防的本发明的药物组合物的剂量根据特定的剂量形式、给药途径和用途以及所治疗的患者的年龄、体重和症状合适的确定和改变。通常，包含在配方中用于本发明的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质的日剂量基于无毒给药含量，为约0.001g-约100g，优选约0.001g-约10g，更优选约0.001g-约5g。当然，剂量可根据各种因素改变，因此，在某些情况下，低于上述的剂量将是足够的，但在其它情况下，会需要超过上述的剂量。本发明的药物组合物可口服给药，或它可以通过加入选择的食品或饮料，例如酒精饮料或茶饮料每日食用。用于本发明的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质可用作用于缓解由于兴奋剂与雌激素受体的结合而导致的疾病症状或预防该疾病的饮料或食品的原料。
本发明的加入饮料或食品的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，由于容易操作或与其它添加剂混合，可以任何形式加入饮料或食品，例如液体、浆料、粉末、片状或颗粒。干燥可以根据常规干燥方法，例如喷雾干燥、转鼓干燥、真空干燥或冻干进行。
本发明的饮料或食品含有对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，它含有，通过稀释生产和/或通过向其中加入该物质生产。
在本发明的饮料或食品中对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质的含量没有特殊限制。饮料或食品可以0.0005-90％(w/w)的浓度含有该物质。
本发明的食品或饮料不限制于具体一种，其实例包括如下产品加工的谷类食品(例如小麦面粉产品、淀粉产品、预混合产品、面条、通心面、大豆酱、荞麦面条、小麦麸质面包、米粉、明胶条和小包装米饼)、加工的脂肪和油产品(例如塑料脂肪和油、“天麸罗”油、色拉油、蛋黄酱和调味品)、加工的大豆产品(例如豆腐、味噌和发酵大豆)、加工的肉产品(例如火腿、培根、模压火腿和香肠)、加工的海产品(例如冻粉碎的鱼、熟鱼浆、熟鱼浆的管状卷、碎鱼饼、鱼浆的深度干燥小馅饼、鱼丸、腱、鱼肉火腿或香肠、干狐鲣、加工的鱼籽产品、罐状海产品和在甜酱油中煮熟的鱼)、乳制品(例如牛奶、乳酪、酸乳酪、黄油、浓缩牛奶、奶粉和冰淇淋)、加工的蔬菜和水果产品(例如果酱、果子酱、泡菜、果汁、蔬菜饮料和混合饮料)、甜食(例如巧克力、饼干、甜小面包、蛋糕、甜米糕和甜米)、酒精饮料(例如清酒、中国酒、葡萄酒、威士忌酒、shochu、伏特加酒、白兰地、杜松子酒、朗姆酒、啤酒、果酒和利口酒)、奢侈品饮料(例如绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、软饮料和乳酸饮料)、调味品(例如大豆酱油、酱油、醋、甜清酒)、罐装、瓶装或袋装食品(例如各种熟食品，例如盖上熟牛肉和蔬菜的米饭、在小罐中与肉和蔬菜一起煮的米饭、带有红豆蒸米饭和咖喱菜饭)、半干或浓缩食品(例如肝浆、其它酱、用于荞麦面条的汤或udon和浓缩汤)、干食品(例如即食面、即食咖哩饭菜、速溶咖啡、果汁粉、汤粉、即食味噌汤、煮制食品、煮制的饮料和煮制的汤)、冷冻食品(例如寿喜烧、chawan-mushi、烤鳗鱼、牛肉汉堡、烧麦、装填碎肉的面团布丁、各种棒状食品和水果鸡尾酒)、固体或液体食品(例如汤)、加工的农业或森林产品(例如香料)、加工的家畜产品、加工的海产品等。
对于生产本发明的饮料或食品的方法没有具体限制，任何用于生产饮料或食品的包括烹调、加工和其它通常采用的方法的方法均可使用只要得到的饮料或食品含有作为活性成分的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质、通过向其中加入该物质而生产和/或通过稀释该物质而生产。例如，具有新颖香味和高EGCG含量的功能饮料或食品可通过以合适的比率混合含有EGCG的粉末(Sunphenon 100S)与绿茶生产。由于定义用于饮料的浓度的香味为1(标准)，茶浓度通常为0.05-4，优选0.1-2。增甜剂、酸化剂、香料等可选择性地加入得到的含有EGCG饮料或食品中，可加入还原剂。
例如，可将乙醇以0.5-20％(w/w)的浓度加入饮料中以制备含有EGCG的酒精饮料。可进一步加入二氧化碳以制备含有EGCG的碳酸酒精饮料。
本发明提供了其中增加了EGCG含量的饮料或食品。在该饮料或食品中EGCG含量优选为0.002-5％(w/w)，更优选0.01-0.5％(w/w)。EGCG可加入茶提取物或含有儿茶素的提取物，此外，可加入纯化的EGCG。
通过向饮料或食品加入EGCG以增加EGCG含量提供其中咖啡减少或由其除去咖啡因和不导致咖啡因的过量摄取的含有EGCG的饮料或食品。
本发明提供了酒精饮料，它通过向其中加入属于儿茶素的物质生产。用于本文的酒精饮料是指含有酒精的饮料，在酒精饮料中乙醇的含量是例如0.2-40％(w/w)。
可举例含有所加入的属于儿茶素的物质的清酒、中国酒、葡萄酒、威士忌酒、shochu、伏特加酒、白兰地、杜松子酒、朗姆酒、啤酒、软酒精饮料、果酒和利口酒。与相应的含有茶提取物的酒精饮料相比，在该酒精饮料中，属于儿茶素的物质的含量增加，相对于该物质的咖啡因的数量降低。
在酒精存在下属于儿茶素的物质的吸收率增加，因此，在本发明的酒精饮料中属于儿茶素的物质的吸收率是非常高的。由于现在能够仅增加属于儿茶素的物质，物质的选择性摄取成为可能。如果摄取大量的茶提取物，也摄取了大量咖啡因。然而，如果在本发明的酒精饮料中摄取属于儿茶素的物质，则避免了大量摄取咖啡因。因此，本发明的酒精饮料是用于选择性摄取用于改善健康的属于儿茶素的物质的杰出安全的酒精饮料。
由于感觉评价，在本发明的酒精饮料中属于儿茶素的物质的含量优选为0.004-1.5％(w/w)，更优选0.02-1％(w/w)。由于感觉评价，在本发明的酒精饮料中EGCG的含量优选为0.002-0.75％(w/w)，更优选0.01-0.5％(w/w)。
以0.01-0.5％(w/w)的浓度含有EGCG和其中EGCG与咖啡因的比率为0.9或更高的茶饮料(例如红茶饮料、绿茶饮料、乌龙茶饮料或大麦茶饮料)是具有新型香味的茶饮料，其中茶提取物的香味改善，咖啡因含量降低。用于本文的茶饮料是指饮料，它使用茶作为主要原料生产，它通过包括发酵步骤的方法产生，茶饮料例如通过加热发酵。
对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质可在烹调或加工之前、在过程中或之后加入。物质可通过将其加入烹调或加工产品或用于烹调或加工的产品中而稀释。物质可在生产饮料或食品的任何一个步骤中加入。物质可通过将其加入饮料或食品或它们所用的原料中，或将其包括在饮料或食品中而稀释。物质可加入一次或多次，因此，新饮料或食品可方便地生产。该饮料或食品含有有效量的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质。与所选择的生产步骤无关，含有对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，通过向其中加入该物质而生产的和/或通过稀释该物质而生产的饮料或食品定义为本发明的饮料或食品。
本发明的饮料或食品含有对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，通过向其中加入该物质而生产和/或通过稀释该物质而生产。该饮料或食品可以是浓缩的，饮料或食品的形式没有具体限制，只要对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质以显示其生理功能所需的数量包含即可。本发明的饮料或食品可以是可食形式，例如片剂、颗粒和胶囊。
作为浓缩产物提供并且在食用前合适稀释后使用的浓缩的饮料或食品包括在本发明的饮料或食品(包括酒精饮料和茶饮料)中。
当给药用于治疗或预防的本发明的药物组合物时，在药物组合物中所包含的拮抗剂拮抗具有内分泌破裂活性的物质的结合。因此，物质对活体的有害影响可治疗或预防。本发明的药物组合物可用于缓减或预防由于雌激素的拮抗而由雌激素引起的不合适的生理疾病症状。此外，如以下实施例所述，由具有内分泌破裂活性的物质引起的子宫的增大可根据本发明避免。因此，用于治疗或预防的本发明的药物组合物用于治疗或预防各种由于包含雌激素的不正常控制而引起的疾病或症状。
当本发明的饮料或食品食用时，在饮料或食品中所包含的拮抗剂拮抗具有内分泌破裂活性的物质，因此，可治疗或预防物质对活体的有害影响。此外，由于雌激素而引起的不合适生理疾病症状可由本发明的饮料或食品的雌激素的拮抗作用而减轻或预防。
实施例如下实施例进一步详细说明本发明，但不构成对其范围的限制。
实施例1检查EGCG对双酚A的抗雌激素活性(1)EGCG对未成熟大鼠子宫重量的影响17日龄的雌性SD大鼠(由Japan SLC购买)与其母亲一起得到，在20日龄断奶，在下一天进行实验。口服和强制给药悬浮在花生油(Nacalai Tesque)中的每kg体重5ml EGCG(Sigma)或双酚A(下文称为BisA，Tokyo Kasei Kogyo)，以类似方式向对照大鼠给药花生油。给药每日一次，持续三天，称重在最后给药后24小时后取出的子宫。
(2)检查兴奋(雌激素)活性给药BisA或EGCG(80或800mg/kg)，结果示于表4中。当给药800mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的137％，另一方面，给药EGCG不导致子宫重量的增加。
表4组 (n) 子宫重量(mg)比率％对照组 7 40.4±2.8 100BisA 800mg/kg 7 55.2±2.3** 137EGCG 80mg/kg 7 42.2±1.7 104800mg/k 6 39.3±3.2 97平均值±标准误差**相对于对照组p＜0.01(3)检查拮抗(抗雌激素)活性同时给药BisA(800mg/kg)和EGCG(800mg/kg)，结果示于表5中。
当给药800mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的147％，另一方面，给药EGCG时，增加抑制至116％。
表5组(n) 子宫重量(mg) 比率％对照组 5 37.2±2.4100BisA 800mg/kg 4 54.7±5.5* 147BisA+EGCG 800mg/kg6 43.0±2.7116平均值±标准误差**相对于对照组p＜0.05实施例2检查在乙醇中的EGCG溶液对双酚A的抗雌激素活性17日龄的雌性SD大鼠(由Japan SLC购买)与其母亲一起得到，在20日龄断奶，在下一天进行实验。称重BisA使得它以200或40mg/kg给药，溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物连续口服给药3天，在下一天取出子宫并称重。将EGCG通过加入乙醇溶解，向其中加入水以调节最终乙醇浓度为10％。在给药BisA前一天和每次连续给药BisA前30分钟口服给药该溶液，结果示于表6中。
表6组 (n) 子宫重量(mg)比率％对照组5 43.4±2.7 100BisA 200mg/kg6 57.7±5.2* 133BisA 200mg/kg+EGCG 100mg/kg 5 47.4±2.6 109BisA 200mg/kg+EGCG 200mg/kg 5 39.8±4.5 92BisA 40mg/kg 4 64.5±9.2* 149BisA 40mg/kg+EGCG 100mg/kg 5 41.2±2.2 95平均值±标准误差**相对于对照组p＜0.05当给药200mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的133％，另一方面，当附加地给药100mg/kg或200mg/kgEGCG时，增加分别抑制至109％或92％。此外，当给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的149％，另一方面，当附加地给药100mg/kgEGCG时，增加抑制至95％。
这说明当口服给药EGCG时，它不显示雌激素活性(即它不用作兴奋剂)，但对于BisA，它用作拮抗剂。此外，它说明溶解在合适数量的乙醇的EGCG抑制子宫重量的增加即使给药相对少量。在患有由于内分泌破裂剂引起的不合适生理疾病(例如精子数目降低或前列腺肥大)或由于不正常的雌激素活性引起的变质肿瘤、子宫内膜炎或子宫纤维瘤的个体中，使用EGCG作为对雌激素的拮抗剂能够提供预防或减轻疾病症状的药物组合物、饮料或食品。
实施例3检查在乙醇中的EGCG溶液对4-壬基酚的抗雌激素活性16日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在19日龄断奶，在下一天进行实验。
称重4-壬基酚(下文称为NP)使得它以50mg/kg给药，向其中加入花生油稀释。得到的混合物连续口服给药3天，在第3次给药后一天取出子宫并称重。将EGCG通过加入乙醇溶解，向其中加入水以调节最终乙醇浓度为10％。在给药NP前90分钟口服给药该溶液，结果示于表7中。
表7组 (n) 子宫重量(mg)比率％对照组 7 30.9±2.1 100NP 50mg/kg 7 44.4±3.2* 144NP 50mg/kg+EGCG 200mg/kg7 33.7±1.9 109平均值±标准误差**相对于对照组p＜0.05结果，当给药50mg/kg NP时，子宫重量增加至到对照组(100％)的144％，另一方面，当附加地给药200mg/kgEGCG时，增加分别抑制至109％。
实施例4检查乙醇浓度对EGCG抗雌激素活性的影响16日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在19日龄断奶，在下一天进行实验。
称重BisA使得它以40mg/kg给药，溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物皮下给药连续3天，在第三次给药后一天取出子宫并称重。将EGCG(200mg/kg)通过加入乙醇溶解，向其中加入水以调节最终乙醇浓度为10、5、1、0.5或0％。在给药BisA前90分钟口服给药该溶液，结果示于表8中。
当给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的186％，，当附加地给药没有乙醇的200mg/kgEGCG时，增加仅抑制至161％。另一方面，当乙醇以5％或10％的浓度包括时，增加分别抑制至140％或138％。因此，与不包括乙醇的情况相比，子宫重量的增加明显抑制。
表8组 (n) 子宫重量(mg)比率％对照组7 26.9±2.3 100BisA 40mg/kg 7 49.9±2.1* 186BisA+在10％中的EGCG 7 37.0±1.3* 138**BisA+在5％中的EGCG7 37.6±1.8* 140*BisA+在1％中的EGCG7 40.1±2.0* 149BisA+在0.5％中的EGCG 7 40.9±1.8* 152BisA+在0％中的EGCG7 43.3±1.8* 161平均值±标准误差*相对于对照组p＜0.05**相对于乙醇0％p＜0.05根据结果，可以预期，同样在皮下给药BisA的情况下，以5％或以上的浓度给药在乙醇中的EGCG与给药没有乙醇的EGCG观察的结果相比，将产生较强的抗雌激素活性。
实施例5检查乙醇中EGCG溶液的抗雌激素活性16日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在19日龄断奶，在下一天进行实验。
称重BisA使得它以40mg/kg给药，溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物皮下给药连续3天，在第三次给药后一天取出子宫并称重。将EGCG(200mg/kg)通过加入乙醇溶解，向其中加入水以调节最终乙醇浓度为10或0％。在给药BisA前30分钟口服给药该溶液，结果示于表9中。
当给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的162％，，当附加地给药没有乙醇的200mg/kgEGCG时，未抑制增加。另一方面，当在10％乙醇溶液中给药EGCG时，增加抑制至118％。
表9组(n) 子宫重量(mg)比率％对照组 6 30.8±3.1 100BisA 40mg/kg 6 50.0±2.7* 162BisA+在10％中的EGCG7 36.4±1.4* 118**BisA+在0％中的EGCG 7 50.9±2.2* 165平均值±标准误差*相对于对照组p＜0.05**相对于乙醇0％p＜0.05实施例6在乙醇中EGCG溶液的抗雌激素活性的剂量关系16日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在19日龄断奶，在下一天进行实验。称重BisA使得它以40mg/kg给药，溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物皮下或口服给药连续3天，在第三次给药后一天取出子宫并称重。将EGCG通过加入乙醇溶解，向其中加入水以调节最终乙醇浓度为10％。在给药BisA前30分钟口服给药该溶液，结果示于表10中。
当口服给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的140％，另一方面，当附加地给药在含有10％乙醇的溶液中的EGCG时，增加抑制至106％，即仅给药低至40mg/kg BisA。此外，当皮下给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组的160％，另一方面，通过给药EGCG溶液(40mg/kg)，增加抑制至136％。
表10组 (n) 子宫重量(mg)比率％对照组6 32.7±1.0 100BisA 40mg/kg，口服 6 45.7±2.3* 140BisA+EGCG 40mg/kg6 34.8±2.8 106**BisA+EGCG 100mg/kg5 33.0±4.4 101*BisA 40mg/kg，皮下 5 52.2±2.9* 160BisA+EGCG 40mg/kg5 44.4±1.5* 136***BisA+EGCG 100mg/kg 5 39.6±1.0* 121***平均值±标准误差*相对于对照组p＜0.05**相对于口服BisA40mg/kg，p＜0.05***相对于皮下BisA40mg/kg，p＜0.05实施例7使用FP Screen-for-Competitors装置，ER-α，高灵敏度装置(V2577PanVera)试验各种没食子酸衍生物与雌激素受体的结合。试验基本上根据在装置所附的手册中所述的方法进行。将各种没食子酸衍生物中的一种(正辛基没食子酸酯(没食子酸正辛基酯)、正十二烷基没食子酸酯(没食子酸正十二烷基酯)和正十六烷基没食子酸酯(没食子酸正十烷基酯))溶解在DMSO中，无菌稀释以制备稀释的样品(0.5M-0.0000000005M)。将49μl装置所附的筛选缓冲液加入1μL的稀释样品之一中，充分搅拌。向其中加入装置所附的50μL的10nM-15nMES1-ER(α)配合物(ES1(结合ER的荧光配位体)和ER(α)(雌激素受体α)的配合物)，得到总共100μL体积。在室温下静置1小时后，使用Full-Range BEACON2000(PanVera)在360nm的兴奋波长和535nm发射波长下测量荧光偏振。
结果示于附


图1和表11中。在附图中，正方形(■)、三角形()和菱形(◆)分别表示正十六烷基没食子酸酯、正辛基没食子酸酯和正十二烷基没食子酸酯的结果。每种没食子酸衍生物与雌激素受体的结合强度表示浓度，此时，衍生物显示在配合物中通过与ES1竞争，抑制50％的ES1-ER(α)配合物结合的活性(IC50)。它显示尽管结合强度不同，但没食子酸衍生物(正辛基没食子酸酯、正十二烷基没食子酸酯和正十六烷基没食子酸酯)具有结合雌激素受体的活性。
表11样品 IC50(M)正辛基没食子酸酯 3.38×10-6正十二烷基没食子酸酯 3.11×10-7正十六烷基没食子酸酯 4.76×10-8实施例8用于培养的细胞增生的试验根据在Ana M.Soto等(Environ.Health Perspect.103113-122(1995))中描述的称为E-SCREEN试验的方法进行。简单地说，将体积100μl的4.0×103人体乳腺癌得到的MCF-7细胞在96孔板的每个孔中接种，将板培养过夜。随后向其中加入BisA或BisA和正辛基没食子酸酯的混合物，没有添加的孔用作对照组。细胞进一步在培养基，没有酚红的补加5％FCS并用活性炭-葡萄聚糖处理的Dulbecco改性Eagle培养基中培养4天，使用MTT方法测量细胞数量。
结果示于表12中，在BisA存在下细胞增生的数量超过对照组的1.8倍，另一方面，它显示当加入BisA和正辛基没食子酸酯时，细胞增生抑制至与对照组几乎相同的程度。
表12添加 细胞数量增加的相对比率(％)无添加剂(对照组) 100BisA 180BisA+正辛基没食子酸酯 91实施例9正辛基没食子酸酯对BisA的抗雌激素活性16日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在19日龄断奶，在下一天进行实验。将正辛基没食子酸酯(Tokyo Kasei Kogyo)溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物向20日龄的雌性大鼠口服给药连续3天，称重在最后一次给药后一天取出的子宫。含有5％乙醇的花生油用作载体给药组。将BisA溶解在少量体积的乙醇中，向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。在给药正辛基没食子酸酯后1.5小时口服给药该溶液，结果示于表13中。
当口服给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的161％，另一方面，当附加地给药126或25mg/kg正辛基没食子酸酯时，增加明显抑制至108％，即相当于对照组。
表13组 (n) 子宫重量(mg)比率％对照组 5 30.4±0.7 100BisA 40mg/kg+载体 7 48.9±2.1* 161BisA+正辛基没食子酸酯25mg/kg6 32.7±3.5 108*BisA+正辛基没食子酸酯 7 32.9±3.6 108**126mg/kg平均值±标准误差*相对于对照组p＜0.05**相对于载体p＜0.05正辛基没食子酸酯显示对BisA的抗雌激素活性，当考虑剂量相比时，效果相当于或强于EGCG。
实施例10正辛基没食子酸酯对NP的抗雌激素活性16日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在19日龄断奶，在下一天进行实验。将正辛基没食子酸酯(Tokyo Kasei Kogyo)溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物向20日龄的雌性大鼠口服给药连续3天，称重在最后一次给药后一天取出的子宫。含有5％乙醇的花生油用作载体给药组。称重NP使得它以50mg/kg给药，通过加入花生油稀释。在给药正辛基没食子酸酯后1.5小时口服给药该溶液，结果示于表14中。
当口服给药50mg/kg NP时，子宫重量增加至到对照组(100％)的144％，另一方面，当附加地给药126mg/kg正辛基没食子酸酯时，增加明显抑制至117％。
表14组(n) 子宫重量(mg)比率％对照组 7 33.1±1.2 100NP 50mg/kg+载体 7 47.6±2.3* 144NP+正辛基没食子酸酯25mg/kg 5 40.4±3.6 122NP+正辛基没食子酸酯126mg/kg5 38.6±2.4 117**平均值±标准误差*相对于对照组p＜0.05**相对于载体p＜0.05正辛基没食子酸酯也显示对NP的抗雌激素活性，当考虑剂量相比时，效果相当于或强于EGCG。
实施例11正辛基没食子酸酯或正十六烷基没食子酸酯对皮下给药的BisA的抗雌激素活性17日龄的雌性SD大鼠(Japan SLC)与其母亲一起购买，在20日龄断奶，在下一天进行实验。将正辛基没食子酸酯或正十六烷基没食子酸酯(均来自Tokyo Kasei Kogyo)溶解在少量体积的乙醇中。向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度。得到的混合物向21日龄的雌性大鼠口服给药连续3天，称重在最后一次给药后一天取出的子宫。含有5％乙醇的花生油用作载体给药组。将BisA溶解在少量体积的乙醇中，向其中加入花生油得到5％的最终乙醇浓度，混合物皮下给药，结果示于表15中。
当口服给药40mg/kg BisA时，子宫重量增加至到对照组(100％)的145％，另一方面，当附加地给药5或25mg/kg正辛基没食子酸酯时，增加分别明显抑制至117或102％。此外，当附加地给药1或5mg/kg正十六烷基没食子酸酯时，增加分别明显抑制至109或104％，即在每种情况下相当于对照组。
表15组(n)子宫重量(mg)比率％对照组 7 4.1±3.7100BisA 40mg/kg+载体 7 59.7±2.7* 145BisA+正辛基没食子酸酯5mg/kg7 48.3±1.5 117**BisA+正辛基没食子酸酯25mg/kg 7 42.1±1.9 102**BisA+正十六烷基没食子酸酯1mg/kg7 45.1±2.3 109**BisA+正十六烷基没食子酸酯5mg/kg7 43.1±2.0 104**平均值±标准误差*相对于对照组p＜0.05**相对于载体p＜0.05正辛基没食子酸酯和正十六烷基没食子酸酯显示对BisA的抗雌激素活性。
实施例12将用作含有EGCG的提取物的Sunphenon DCF-1以0.001、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0或1.5％的浓度加入商业获得的大麦茶。得到的产品进行感觉评价，由10人组成专题小组，用于味、香、色和总评价的感觉评价通过比较本发明的含有的含有EGCG的提取物的大麦茶饮料和没有添加的对照大麦茶进行。5个等级用于感觉评价(1良好；5差)，结果用平均值表示，结果示于表16中。
表16加入含有EGCG的提取物的效果含EGCG 感觉评价提取物(％)味香色总 评价0 4.0 3.5 2.8 3.8 正常(对照组)0.001 3.6 3.3 2.8 3.5 味道的轻微良好平衡收紧味道的弱效果0.004 3.3 3.2 2.8 3.3 全幅面味道收紧味道效果味道平衡0.02 3.2 3.0 2.8 3.1 全幅面味道收紧味道效果味道平衡0.05 3.2 3.0 2.8 3.1 轻微刺激味道浓厚感觉0.1 3.0 3.0 2.8 3.0 刺激味道浓厚感觉0.5 3.1 3.0 2.8 3.0 刺激味道浓厚感觉1.0 3.2 3.0 2.8 3.1 强刺激味道良好全幅面和平衡浓厚感觉1.5 3.4 3.0 2.8 3.3 强刺激味道良好全幅面和平衡浓厚感觉2.0 3.6 3.2 2.8 3.5 腐败刺激味道的平衡浓厚感觉如表16所示，含有浓度为0.02-1.0％(w/w)的含有EGCG提取物的产品被评价为具有良好浓厚感觉、全幅面和味道平衡，是优选的。对于含有浓度为0.004-1.5％(w/w)的含有EGCG提取物的每个产品总评价得分为3.3或以下，说明这些经评价是优选的。
实施例13在实施例12中制备的大麦茶饮料(含有浓度为0.05％(w/v)的Sunphenon DCF-1作为含有EGCG提取物)中以1、2、4、8、16、20或35％(v/v)的最终浓度加入乙醇。如实施例12中所述进行感觉评价，结果示于表17中。
表17加入含有EGCG的提取物的效果乙醇 感觉评价 总 评价(％，v/v) 味香色0 3.2 3.0 3.0 3.1全幅面味道的良好平衡2 2.8 2.7 2.6 2.7柔和香和味提高的苦味4 2.5 2.6 2.5 2.5柔和的香和味提高的香提高的苦味8 2.2 2.6 2.5 2.4同上16 2.6 2.7 2.6 2.6同上20 3.0 2.7 2.7 2.7轻微可注意的酒精气味味道深度35 3.0 2.8 2.7 2.8可注意的酒精无味味道深度如表17所示，以浓度为2-35％(v/v)含有乙醇和EGCG的茶饮料，与没有乙醇的产品相比，通常评价为具有柔和香味和味道，平滑的结构、改善的苦味和突出的茶香味。因此，观察到通过结合EGCG和乙醇的改善香味和味道的协同效果。对于含有浓度为2-35％(v/v)的乙醇的每个产品总评价得分为2.8或以下，说明这些产品经评价是优选的。
通过结合EGCG和乙醇，本发明提供了带有改装的香味和味道的协同效果的高EGCG含量的可口酒精饮料。
实施例14(1)使用Sunphenon DCF-1作为含EGCG提取物制备含有含EGCG提取物和具有如表18中所示的组成的茶饮料。根据常规方法制备商业可获得的banaba茶、绿茶、乌龙茶或大麦茶用作茶。本发明的产品含有浓度为0.1％(w/v)的含EGCG提取物，而对照组没有。如实施例12所述进行感觉评价，结果示于表19中。
表18Banaba 茶绿茶乌龙茶荞麦茶PC P C P C P C加EGCG的量0.1 0 0.1 0 0.1 0 0.1 0(％，w/v)P本发明的产品；C对照组。
表19感觉评价含EGCG饮料项总味 香 色Banaba P 2.9 2.7 3.4 3.1茶 C 3.4 3.6 3.8 3.6绿茶P 2.7 3.1 3.2 3.0C 3.5 3.7 3.4 3.6乌龙茶 P 3.0 3.0 3.1 3.0C 3.5 3.7 3.5 3.6荞麦茶 P 3.1 3.2 3.2 3.1C 3.7 3.6 3.6 3.6P本发明的产品；C对照组。
如表19所示，结合混合茶与含EGCG提取物制备的本发明的饮料评价为新饮料，均具有协调的香味，具有良好平衡的茶味道，单独的茶不是提供的新全幅面评价，达到香和味的平衡，带有兴奋性感觉的苦味。
本发明的banaba茶饮料、绿茶饮料、乌龙茶饮料和荞麦茶饮料的EGCG含量和咖啡因含量分别是0.05％(w/v)和低于检测限度、0.068％(w/v)和0.015％(w/v)、0.05％(w/v)和0.004％(w/v)、和0.05％(w/v)和低于检测限度。
在4％(v/v)的最终浓度在本发明的茶饮料中加入乙醇制备的酒精饮料显示良好香味。
含有乌龙茶的商业可获得的酒精饮料的EGCG含有为0.001％(w/v)。
(2)制备具有如表20所示组成的茶饮料。每种饮料含有浓度为0.05％(w/v)的含EGCG提取物(Sunphenon BG)，并含有或不含浓度为4％(v/v)的乙醇。具体地说，得到500ml两倍浓缩的商业可获得的红茶提取物，在表20中所示的组分加入提取物中以制备含有或不含酒精的1000ml柠檬茶饮料。本发明的产品含有含EGCG提取物(SunphenonBG)，而对照组不含。产品装入200ml的罐中，在83℃下消毒1分钟以制备罐装饮料。如实施例12所示进行感觉评价。评审小组由10个成员组成，使用5个等级用于感觉评价(1良好，5差)。结果用平均数值表示，结果示于表21中。
表20含乙醇不含乙醇(％) (％)茶 50 501/5柠檬汁 0.10.1柠檬酸或柠檬酸钠s.a. s.a.维生素C 0.02 0.02糖(甘蔗)4.54.5Sunphenon BG0.05 0.05酒精含量(v/v) 4.00pH 3.73.7s.a.适量表21柠檬茶 项 总味 香 色本发明含酒精柠檬茶产品2.8 2.9 3.22.9对照组 3.3 3.6 3.53.4本发明不含酒精柠檬茶产品2.9 3.1 3.23.0对照组 3.5 3.7 3.53.6如表21所示，含有含EGCG提取物，含有或不含酒精的本发明的柠檬茶饮料被评价为新饮料，每种具有中等刺激的味道和收紧的味道，比对照组具有较好味、香和色的平衡。
此外，通过制备绿茶饮料、乌龙茶饮料、大麦茶饮料和红茶饮料生产各种茶饮料，其中EGCG与咖啡因的比率为0.9或以上，EGCG含量为0.01-0.2％(w/v)，并消毒。
每种茶饮料是具有中等刺激感觉的绿茶饮料、乌龙茶饮料、大麦茶饮料或红茶饮料，其中EGCG的香味加入茶提取物的香味中。
商业可获得的无菌茶饮料的EGCG与咖啡因的比率为0.7-0.8，EGCG含有低于0.01％(w/w)。
商业可获得的的无菌红茶饮料的EGCG与咖啡因的比率为0.6，EGCG含量为0.004％(w/w)。
实施例15使用Sunphenon LA-10作为含EGCG提取物制备汤。本发明的产品含有提取物，而对照组不含。含有EGCG提取物的汤的组成示于表22中，制备具有该组成的汤，装入200ml的罐中，通过在120℃加热15分钟消毒以制备罐装产品。如实施例12中所示进行感觉评价。评审小组由10个成员组成，使用5个等级用于感觉评价(1良好，5差)。结果用平均数值表示，结果示于表23中。
表22含有EGCG的提取物的汤的组成本发明产品对照组(％，w/v)(％，w/v)含有BGCG提取物 0.15 0低浓度琼脂* 0.25 0.25乳清矿物 0.60 0.60提取物 0.13 0.13糖 0.10 0.10胡椒 0.00050.0005维生素C 0.02 0.02pH 5.0白利糖度 1.1酸度(相对柠檬酸) 0.025*来自Ina Shokuhin KogyopH用柠檬酸或柠檬酸钠调节。
表23感觉评价项汤 总味 香 色本发明产2.62.8 3.1 2.8对照组 3.23.6 3.5 3.4如表23所示，本发明的产品与对照组相比，被评价为具有全幅面和浓厚感觉，含EGCG提取物与猪肉提取物的香和味配合良好，具有单独的猪肉提取物不能提供的新味道，和其中蔬菜和肉味彼此协调的柔和香味。含EGCG提取物在调节得和味中作为隐藏的香味是有效的。对照组趋向于失去香和味的平衡。如上所述，这说明本发明的含EGCG提取物作为调味品用于基于其特性香和味的烹调是杰出的。
实施例16“furikake”(撒在米饭上的美味调味干食品)通过将2.4kg鱼肉、0.5kg盐和0.3kg谷氨酸钠(总共3.2kg)以每公斤混合物3g的比率与(本发明的产品)或不与(对照组)冻干的含EGCG提取物混合，和根据常规方法造粒得到的混合物制备。将0.4kg紫菜和1.2kg芝麻与约3.2kg造粒产品均匀混合。将furikake撒在熟米饭上，如实施例12中所述进行感觉评价。结果，与对照组相比，本发明的产品被评价为具有抑制的由鱼肉产生的鱼味，味道和收紧味道的全幅面评价。这说明作为隐藏的香味，有类似香料功能。因此，本发明的furikake的总质量被明显改善。
实施例17通过向根据常规方法制备的100ml清酒加入0.02g含EGCG提取物(Sunphenon 100S)制备本发明的产品。不添加EGCG的清酒用作对照组。如实施例12进行感觉评价，结果示于表24中。
表24感觉评价本发明产品 对照组味平衡 2.8 3.5全幅面 2.7 3.6余味 3.0 3.6香 2.9 3.2总 2.8 3.4如表24所示，与对照组相比，本发明的产品被评价为具有改善的香和味，良好平衡的味道、收紧味道和杰出全幅面的豪华产品。
实施例18通过向根据常规方法制备的100ml甜清酒或发酵调料加入0.05g含EGCG提取物(Sunphenon 100S)制备本发明的产品。不添加EGCG的产品用作对照组。如实施例12进行感觉评价，结果示于表25中。
表25；感觉评价甜清酒发酵调料P C P C平衡 2.9 3.0 2.93.2香 2.7 3.0 3.03.4色 2.7 3.0 3.13.5总 2.8 3.0 2.93.3P本发明的产品；C对照组。
如表25所示，与对照组相比，本发明的产品被评价为是新的甜清酒和发酵调料，它具有刺激感觉，味道的总体上改善的平衡，尤其是改善的甜味，和改善的香和味。
工业应用如上详细说明，对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，以及含有该物质的饮料或食品能够有效减轻或避免由于过量雌激素或内分泌破裂剂引起的不合适生理疾病，即具有雌激素受体的恶性瘤、子宫纤维瘤、子宫内膜炎、精子数量降低、前列腺肥大等。
此外，本发明提供了饮料或食品，其中增加了属于儿茶素的物质，它具有带有刺激感觉的苦味、收紧的味道以及良好平衡的味道。
权利要求
1.用于治疗或预防由兴奋剂与雌激素受体结合引起的疾病的药物组合物，其含有作为活性物质的对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质。
2.权利要求1的药物组合物，其中对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质是至少一种选自如下的化合物式I的化合物 其中R1和R2表示-H，-OH或-O-R4；R3表示-H或-OH；R4表示式II的化合物 它们的衍生物或其盐；没食子酸；它们的衍生物；和它们的可药用的盐。
3.权利要求1或2的药物组合物，其中对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质是属于儿茶素的物质。
4.权利要求3的药物组合物，其中属于儿茶素的物质是至少一种选自如下儿茶素(a)-(h)、它们的衍生物和其盐的物质(a)表儿茶素；(b)表培儿茶素；(c)表培儿茶素没食子酸盐；(d)表儿茶素没食子酸盐；(e)培儿茶素没食子酸盐；(f)儿茶素没食子酸盐；(g)儿茶素；和(h)培儿茶素。
5.权利要求2的药物组合物，其中没食子酸的衍生物没食子酸的酯。
6.权利要求5的药物组合物，其中没食子酸的酯是没食子酸与具有8个或以上碳原子的醇的酯。
7.权利要求5的药物组合物，其中没食子酸的酯是辛基没食子酸酯、十二烷没食子酸酯或十六烷基没食子酸酯。
8.权利要求1-7的任何之一的药物组合物，其中兴奋剂是内分泌破裂剂。
9.权利要求8的药物组合物，其中内分泌破裂剂是至少一种分类于如下种类(1)-(9)的化合物(1)二噁英；(2)有机氯化合物；(3)苯酚；(4)对苯二甲酸酯；(5)芳烃；(6)杀虫剂；(7)有机锡化合物；(8)雌激素；和(9)灭蚁灵、毒杀芬、涕灭威或开蓬。
10.权利要求9的药物组合物，其中内分泌破裂剂是至少一种选自折仑诺、金雀异黄素、拟雌内酯、o，p-DDT、开蓬、甲氧氯、玉米烯酮、二噁英、p-辛基苯酚、壬基苯酚、迪厄耳丁、丁基苄基对苯二甲酸酯和双酚A的物质。
11.用于减轻或避免由于兴奋剂与雌激素受体结合引起的疾病的饮料或食品，它含有对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质，它通过加入该物质生产和/或通过稀释该物质生产。
12.权利要求11的饮料或食品，其中对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质是至少一种选自如下的化合物式I的化合物 其中R1和R2表示-H，-OH或-O-R4；R3表示-H或-OH；R4表示式II的化合物 它们的衍生物或其盐；没食子酸；它们的衍生物；和它们的可药用的盐。
13.权利要求11或12的饮料或食品，其中对雌激素受体兴奋剂具有拮抗活性的物质是属于儿茶素的物质。
14.权利要求13的饮料或食品，其中属于儿茶素的物质是至少一种选自如下儿茶素(a)-(h)、它们的衍生物和其盐的物质(a)表儿茶素；(b)表培儿茶素；(c)表培儿茶素没食子酸盐；(d)表儿茶素没食子酸盐；(e)培儿茶素没食予酸盐；(f)儿茶素没食子酸盐；(g)儿茶素；和(h)培儿茶素。
15.权利要求12的饮料或食品，其中没食子酸的衍生物没食子酸的酯。
16.权利要求15的饮料或食品，其中没食子酸的酯是没食子酸与具有8个或以上碳原子的醇的酯。
17.权利要求16的饮料或食品，其中没食子酸的酯是辛基没食子酸酯、十二烷没食子酸酯或十六烷基没食子酸酯。
18.权利要求11-16的任何之一的饮料或食品，其中兴奋剂是内分泌破裂剂。
19.权利要求18的饮料或食品，其中内分泌破裂剂是至少一种分类于如下种类(1)-(9)的化合物(1)二噁英；(2)有机氯化合物；(3)苯酚；(4)对苯二甲酸酯；(5)芳烃；(6)杀虫剂；(7)有机锡化合物；(8)雌激素；和(9)灭蚁灵、毒杀芬、涕灭威或开蓬。
20.权利要求19的饮料或食品，其中内分泌破裂剂是至少一种选自折仑诺、金雀异黄素、拟雌内酯、o，p-DDT、开蓬、甲氧氯、玉米烯酮、二噁英、p-辛基苯酚、壬基苯酚、迪厄耳丁、丁基苄基对苯二甲酸酯和双酚A的物质。
21.含有属于儿茶素的物质的酒精饮料，它通过向其中加入属于儿茶素的物质生产。
22.权利要求21的酒精饮料，其中属于儿茶素的物质是表培儿茶素没食子酸盐。
23.权利要求21的酒精饮料，它含有茶提取物。
24.权利要求22或23的酒精饮料，它以表培儿茶素没食子酸盐与咖啡因的比率为0.9或以上含有咖啡因。
25.权利要求21-24的任何之一的酒精饮料，它含有浓度为0.002-0.75％(w/w)的表培儿茶素没食子酸盐。
26.权利要求21-25的任何之一的酒精饮料，它具有茶的浓厚感觉以及良好全幅面和味道平衡。
27.通过包括发酵步骤的方法生产的茶饮料，它以0.01-0.5％(w/w)的浓度含有表培儿茶素没食子酸盐，其中表培儿茶素没食子酸盐与咖啡因的比率是0.9或以上。
全文摘要
用于由于兴奋剂(内分泌破裂剂等)与雌激素受体结合引起的疾病的药物或预防药，其特征在于作为活性成分，它含有对雌激素受体兴奋剂具有拮抗作用的拮抗剂，例如儿茶素(例如表培儿茶素没食子酸盐)。
文档编号A23L1/39GK1413117SQ00817506
公开日2003年4月23日 申请日期2000年10月23日 优先权日1999年10月29日
发明者西山英治, 大野木宏, 近藤昭宏, 大屋敷春夫, 佐川裕章, 水谷滋利, 加藤郁之进 申请人:宝酒造株式会社