专利名称：防霉型大肠菌群培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种防霉型大肠菌群培养基。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群在自然界分布较广，多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
大肠菌群是作为粪便污染指标提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度。在卫生检验中，它是评价产品卫生质量的重要指标和必检项目。
目前，对大肠菌群的检测普遍使用多管发酵法。其检测原理是利用大肠菌群在生长繁殖过程中分解乳糖，产酸产气，通过溴甲酚紫的颜色改变和发酵管中是否产气来推断样品中是否含有大肠菌群。使用发酵法检测大肠菌群需要配制大量培养基，检测过程需要经过初发酵、分离培养、复发酵等步骤，一般需要3天以上才能报告结果。而且，检验步骤、抑菌剂、产气量、pH值等因素均直接影响检测结果。特别是当样品数量较大时，发酵管的制作和洗刷给实际工作带来很大困难。
随着社会的发展，食品、饮料、卫生用品的种类越来越多，卫生监督监测的任务越来越大，对快速检验方法的需求更加迫切。因此，为了克服发酵法的这些缺点，找到一种操作简单、检验快速、灵敏度高和特异性强的检测大肠菌群的方法，满足实际工作中的需要，出现了系列大肠菌群快检纸片。它可用于食(饮)具、食品、生活饮用水、饮用天然矿泉水、瓶装饮用纯净水(总)大肠菌群和生活饮用水中粪大肠菌群的检验。以上两种方法中共同存在的问题是在进行大肠菌群的检验过程中，无论是发酵法，还是纸片法，都存在霉菌的污染问题。由于霉菌广泛存在于自然界，对营养条件要求不高，因此，霉菌污染是细菌检验过程中的主要问题，大量的霉菌污染常常造成细菌检验工作的失败。遍查有关大肠菌群培养基文献，尚未发现有防霉型大肠菌群培养基。
本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种能够有效地抑制所有霉菌的生长，同时对细菌的生长没有任何影响的防霉型大肠菌群培养基。
本发明的目的是这样实现的防霉型大肠菌群培养基其组分及重量含量为蛋白胨0.50％～10.00％；乳糖 1.00％～15.00％；氯化钠0.08％～3.00％；磷酸氢二钾0.25％～5.00％；3号胆盐 0.10％～2.00％；Delvocid抑制酶0.01％～2.00％；1.6％溴甲酚紫 0.50％～9.00％；TTC 0.10％～5.00％；琼脂 0,05％～1.00％；蒸馏水50.00％～96.00％。
本发明的一种改进，防霉型大肠菌群培养基其组分及重量含量为蛋白胨1％～9％；
乳糖 2.5％～15.00％；氯化钠0.08％～2.5％；磷酸氢二钾0.25％～4.00％；3号胆盐 0.50％～1.5％；Delvocid抑制酶0.01％～1.5％；1.6％溴甲酚紫 1.0％～9.00％；TTC 0.25％～4.00％；琼脂 0.1％～0.85％；蒸馏水60.00％～90.00％。
本发明的最佳方案为蛋白胨1.70％；乳糖 2.55％；氯化钠0.08％；磷酸氢二钾0.25％；3号胆盐 0.76％；Delvocid抑制酶0.01％；1.6％溴甲酚紫 8.49％；TTC 0.42％；琼脂 0.85％；蒸馏水84.89％。
下面是普通大肠杆菌培养基与本发明培养基进行的对比试验防霉型大肠菌群培养基与普通培养基细菌生长试验的比较
防霉型大肠菌群培养基与普通培养基霉菌生长试验的比较
通过比较可以发现，本发明防霉型大肠菌群培养基能够有效地抑制所有霉菌的生长，同时对细菌的生长没有任何影响。大大弥补了现有大肠菌群培养基由于大量的霉菌污染常常造成细菌检验工作失败的不足。由于Delvocid抑制酶通常使用在食品添加剂领域，将其应用在细菌培养基中尚属首次。通过Delvocid抑制酶与细菌培养基其他祖坟组合后，出现了既能有效地抑制所有霉菌的生长又不影响细菌生长的良好效果。故是对现有大肠菌群培养基组分上的一次大的改进。
实施例1蛋白胨 7.68％乳糖12.80％氯化钠 2.56％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 2.05％3号胆盐 1.15％Delvocid抑制酶 0.06％1.6％溴甲酚紫 8.96％TTC 0.64％琼脂0.06％蒸馏水 64.04％实施例2蛋白胨 1.70％乳糖2.55％氯化钠 0.08％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 0.25％3号胆盐 0.76％Delvocid抑制酶 0.01％1.6％溴甲酚紫 8.49％TTC 0.42％琼脂0.85％蒸馏水 84.89％实施例3蛋白胨 0.50％乳糖1.00％氯化钠 0.25％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 5.00％3号胆盐 2.00％Delvocid抑制酶 2.00％1.6％溴甲酚紫 10.00％TTC 5.00％琼脂1.00％蒸馏水 73.25％实施例4蛋白胨 10.00％乳糖15.00％氯化钠 3.00％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 2.50％3号胆盐 1.50％Delvocid抑制酶 1.00％1.6％溴甲酚紫 9.00％
TTC 1.00％琼脂 0.10％蒸馏水 56.90％实施例5蛋白胨 5.00％乳糖 10.00％氯化钠 1.00％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 2.50％3号胆盐 1.00％Delvocid抑制酶 1.00％1.6％溴甲酚紫5.00％TTC 2.50％琼脂 0.50％蒸馏水 71.50％实施例6蛋白胨 2.50％乳糖 7.50％氯化钠 1.50％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 3.00％3号胆盐 1.00％Delvocid抑制酶 0.50％1.6％溴甲酚紫4.50％TTC 2.00％琼脂 0.20％蒸馏水 77.30％实施例7蛋白胨 7.50％乳糖 7.50％氯化钠 2.00％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 1.00％3号胆盐 1.50％Delvocid抑制酶 1.00％1.6％溴甲酚紫3.00％TTC 3.00％琼脂 0.50％蒸馏水 73.00％实施例8蛋白胨 3.00％乳糖 12.50％氯化钠 1.50％磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O) 2.00％3号胆盐 2.00％Delvocid抑制酶 2.00％1.6％溴甲酚紫0.5％
TTC 0.1％琼脂 0.1％蒸馏水76.30％制法上述成分除溴甲酚紫和TTC外，其它成分加热溶解，冷却后用5mol/L的NaOH调pH至7.0-7.6，再按量加入溴甲酚紫，混匀，116℃ 15min灭菌。冷至60℃时按量加入TTC溶液即可。所述的Delvocid抑制酶采用荷兰产品；TTC为红四氮唑。
纸片的使用方法液体样品按国家标准方法进行，吸取3个10ml分别涂布于三张大纸片，再吸取1∶10、1∶100稀释液各3个1ml，分别涂布于三张小纸片，而后用手轻轻压平，置36±1℃温箱，培养18～24h观察结果。
结果判定1、纸片上出现紫红色菌落，其周围有黄圈者为阳性。
2、纸片为一种颜色，无菌落生长者为阴性。
根据纸片的阳性片数，查阅大肠菌群MPN检索表报告之。
权利要求
1.防霉型大肠菌群培养基其组分及重量含量为蛋白胨 0.50％～10.00％；乳糖 1.00％～15.00％；氯化钠 0.08％～3.00％；磷酸氢二钾 0.25％～5.00％；3号胆盐 0.10％～2.00％；Delvocid抑制酶 0.01％～2.00％；1.6％溴甲酚紫0.50％～9.00％；TTC 0.10％～5.00％；琼脂 0,05％～1.00％；蒸馏水 50.00％～96.00％。
2.根据权利要求1所述的防霉型大肠菌群培养基其组分及重量含量为蛋白胨1％～9％；乳糖 2.5％～15.00％；氯化钠0.08％～2.5％；磷酸氢二钾0.25％～4.00％；3号胆盐 0.50％～1.5％；Delvocid抑制酶0.01％～1.5％；1.6％溴甲酚紫 1.0％～9.00％；TTC 0.25％～4.00％；琼脂 0.1％～0.85％；蒸馏水60.00％～90.00％。
3.根据权利要求1或2所述的防霉型大肠菌群培养基其组分及重量含量为蛋白胨 1.70％；乳糖2.55％；氯化钠 0.08％；磷酸氢二钾 0.25％；3号胆盐 0.76％；Delvocid抑制酶 0.01％；1.6％溴甲酚紫 8.49％；TTC 0.42％；琼脂0.85％；蒸馏水 84.89％。
全文摘要
本发明公开了一种防霉型大肠菌群培养基。它由下列组分组成蛋白胨；乳糖；氯化钠；磷酸氢二钾(K
文档编号C12Q1/10GK1483835SQ0214237
公开日2004年3月24日 申请日期2002年9月22日 优先权日2002年9月22日
发明者申志新 申请人:申志新