专利名称：乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及医用检测试剂技术领域，是一种用于检测乳酸脱氢酶同工酶的试剂盒。
背景技术：
临床上，对心血管系统、呼吸系统、消化系统等某些疾病的诊治中，常需对乳酸脱氢酶同工酶进行电泳检测，根据不同区带酶的活力变化，反映可能患有的相关疾病。目前所使用的乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒均从国外进口，如法国SIBER公司、美国HELENA公司的产品。试剂盒内包括琼脂糖凝胶板、底物与显色剂、显色液。琼脂糖凝胶板将血清中乳酸脱氢酶同工酶电泳分离呈不同电泳区带；底物与显色剂为粉剂，溶于显色液后铺于凝胶板上，酶与底物发生反应，其产物又与显色剂作用产生颜色，从电泳区带显色的深浅来判断酶的活力。它们的不足之处在于1、正常人或一般病人的血清可分离出五条电泳区带，对于濒临死亡的肝病患者，应该出现第六条区带，但上述试剂盒的琼脂糖凝胶板在电泳时仅能将血清中的乳酸脱氢酶同工酶分离成五条区带，不能把第六条区带，即提示肝脏代偿的濒亡标记物显示出来，而这第六条区带对肝病患者是十分重要的。况且区带之间有“桥”样阴影，条带不够清晰。2、显色剂不理想SIBER公司试剂盒采用重氮染料固蓝B作为显色剂，其对乳酸脱氢酶的酶反应有一定抑制作用，且在缓冲液中易产生沉淀，以致呈色较浅，显色灵敏度差；HELENA公司采用荧光染料，检测时必须用荧光扫描仪，荧光扫描仪不仅价格昂贵，而且1500-3000V的高压电易使琼脂糖凝胶板被击穿，也使仪器的使用寿命缩短。3、进口试剂盒均需与大型专用仪器配套使用，检测成本较高，操作步骤比较烦琐。
发明内容
本发明提供一种价格低廉、操作简便，能使电泳区带分离清晰、完全，检测灵敏度高的乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒。
本发明试剂盒包括琼脂糖凝胶板、底物和显色粉剂及显色液。
1、琼脂糖凝胶板按如下配比制备巴比妥1.2-1.5mg巴比妥钠6.0-6.5mg乙二胺四乙酸二钠0.98-1.1mg琼脂糖80.0-140.0mg蒸馏水8-10ml按上述量加热溶解后浇注成一块7×10×0.1(cm)3的凝胶板。也可根据需要按上述配比制成其他规格大小的凝胶板。密封后备用。
2、底物与显色粉剂按如下配比混合乳酸盐0.3-0.38mg氧化型辅酶I 0.072-0.08mg蔗糖0.15-0.2mg吩嗪二甲酯硫酸盐0.003-0.004mg加合混匀成粉剂装入小瓶。也可根据需要按此配比混合后分装备用。
3、显色缓冲液按如下配比制备氯化亚硝基四氮唑蓝0.04-0.07mg蒸馏水2.5-4.0ml相加溶解后装入小瓶，也可根据需要按上述配比制成显色缓冲液后分装备用。
本发明采用氢电子转移原理进行显色，反应过程如下
2、3、甲_为蓝色，电泳区带颜色的深浅与乳酸脱氢酶同工酶的酶活力成正比，即颜色越深表示酶活力越高，说明患者的组织损伤越严重。第一条区带若有异常升高，则提示可能患有心肌梗死；第三、四条区带若有异常升高，则提示可能有呼吸系统器官的恶变；第五条区带若有异常升高，则提示肝脏可能受损；如果出现第六条区带的异常升高，则提示肝脏已不能代偿，其为濒亡标记物。
使用本发明试剂盒时，将被检血清点样于琼脂糖凝胶板，按常规进行电泳，电泳完毕，将底物和显色剂溶于显色液后速将其铺于凝胶板上，各电泳区带的乳酸脱氢酶同工酶即与底物发生反应，进而使乳酸脱氢酶各区带显色。
具体实施例方式实施例1制备本发明试剂盒1、制备琼脂糖凝胶板取巴比妥1.02mg，巴比妥钠6.0mg，乙二胺四乙酸二钠0.98mg，溶于10ml蒸馏水，再加琼脂糖80mg，加热溶解后倾入7cm×10cm×0.1cm的硅胶模子，冷却后即成琼脂糖凝胶板，密封包装后备用；2、底物与显色粉剂取乳酸锂0.3mg、氧化型辅酶I 0.072mg、蔗糖0.15mg、吩嗪二甲酯硫酸盐0.003mg、混匀后装入小瓶备用；3、显色液取氯化亚硝基四氮唑蓝0.04mg，溶于2.5ml蒸馏水，装入小瓶备用。
将上述制备的琼脂糖凝胶板一块、底物与显色粉剂一瓶、显色液一瓶装入盒内，即成本发明试剂盒。此试剂盒可同时检测10份血清标本。
实施例2用本发明试剂盒检测乳酸脱氢酶同工酶取血清标本10份，按常规点样于琼脂糖凝胶板，置普通电泳槽电泳，电压150V，电泳16分钟；将底物与显色粉剂溶于显色液后均匀铺于凝胶板上，置37℃水浴箱孵育20分钟，凝胶板上可见清晰的电泳区带，置可见光扫描仪于波长570nm处扫描，得出各区带酶的活力测定结果，从而作出诊治判断。
本发明的优点1、本发明试剂盒不必借助特殊的仪器进行检测，操作简便，降低了成本；2、琼脂糖凝胶板分离的电泳区带清晰，区带间不形成桥状阴影，对于肝脏严重受损、失去代偿功能的患者，可分离出第六条电泳区带。
3、显色清晰，稳定，检测灵敏度高。
权利要求
1.一种乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒，包括琼脂糖凝胶板、底物和显色粉剂、显色液，其特征在于琼脂糖凝胶板的配比如下巴比妥1.2-1.5mg巴比妥钠6.0-6.5mg乙二胺四乙酸二钠0.98-1.1mg琼脂糖80-140mg蒸馏水8-10ml
2.按权利要求1所述的乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒，其特征在于所说的底物和显色粉剂配比为乳酸盐0.30-0.38mg氧化型辅酶I 0.072-0.08mg蔗糖0.15-0.2mg吩嗪二甲酯硫酸盐0.003-0.04mg所说的显色液配比为氯化亚硝基四氮唑蓝0.04-0.07mg蒸馏水2.5-4.0ml
3.按权利要求2所述的乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒，其特征在于所说的乳酸盐为乳酸锂。
4.权利要求1、2、3所述乳酸脱氢酶同工酶检测试剂盒用于检测乳酸脱氢酶同工酶的用途。
全文摘要
本发明涉及医用检测试剂技术领域，是一种用于检测血清中乳酸脱氢酶同工酶的试剂盒。本试剂盒包括琼脂糖凝胶板、底物和显色粉剂、显色液。琼脂糖凝胶板能清晰地分离出五条电泳区带，对于肝脏严重受损、失去代偿功能的患者，可清晰地分离出六条电泳区带。本发明采用氢离子转移原理进行显色，酶与底物反应产生还原型辅酶I和H
文档编号C12Q1/32GK1431315SQ03114790
公开日2003年7月23日 申请日期2003年1月9日 优先权日2003年1月9日
发明者宓庆梅 申请人:中国人民解放军第二军医大学