专利名称：β－内酰胺酶检测试剂组合物、检测试剂盒及检测方法
技术领域：
本发明涉及一种β-内酰胺酶检测试剂组合物、β-内酰胺酶检测试剂盒以及β-内酰胺酶检测方法。
背景技术：
β-内酰胺酶是水解β-内酰胺类抗菌剂的分子内β-内酰胺环的一群酶，根据酶蛋白的氨基酸序列的同源性分为A类、B类、C类及D类。超广谱β-内酰胺酶(ESBL)是分解的底物(β-内酰胺类抗菌剂)的范围比以往的A类β-内酰胺酶更广的酶。这些β-内酰胺酶使β-内酰胺类抗菌剂的抗菌力失活，其中尤以ESBL作为院内感染的病原体而被视为问题。即使对显示β-内酰胺类抗菌剂耐性的细菌投以β-内酰胺类抗菌剂，不仅得不到治疗效果，甚至还成为使新的耐性菌蔓延的原因。因此，在确定正确的治疗方案方面，必须迅速且正确地检测β-内酰胺酶。
现在使用的β-内酰胺酶检测方法大致分为4种1)产色头孢菌素法、2)酸法、3)碘法、及4)UV法，此外还可以举出比较最低抑菌浓度(MIC)的培养法。作为以往市售的主要的β-内酰胺酶检测产品，可以列举出利用产色头孢菌素法判别β-内酰胺酶的有无的检测产品、利用酸法检测A类及C类β-内酰胺酶的检测产品、以及利用培养法检测B类β-内酰胺酶或ESBL的检测产品等。
产色头孢菌素法是使用头孢菌素的方法，当β-内酰胺环被β-内酰胺酶开环时头孢菌素就会变色，因为试剂本身变色，所以其特征是检测灵敏度高，但是以往市售的利用产色头孢菌素法的产品，作为检测底物使用头孢硝噻吩(3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-头孢环-4-羧酸、日本专利申请特开昭48-50787号公报)。该产品能够用30分钟左右的短的检测时间进行判别，但还不能与所有类别的β-内酰胺酶反应来判别其类别。并且，在利用产色头孢菌素法的产品中，以联用头孢硝噻吩与β-内酰胺酶抑制剂为特征的检测产品迄今为止未被所知。
另外，在国际公开第02/24707号小册子中，公开了可以利用产色头孢菌素法检测ESBL的新型化合物。但是，在该国际公开小册子中，并没有公开关于与特定的β-内酰胺酶抑制剂的联用，也没有启示能够检测ESBL以外的其它类别的β-内酰胺酶的可能性。
发明内容
本发明的目的是提供可以迅速地判别β-内酰胺酶的β-内酰胺酶检测试剂组合物、β-内酰胺酶检测试剂盒及β-内酰胺酶检测方法。
本发明者们发现了通过联用特定的β-内酰胺酶检测底物与β-内酰胺酶抑制剂、特别是作为β-内酰胺酶抑制剂组合特定的2种或3种，可以解决上述课题。
即，本发明提供在产色头孢菌素法中使用的β-内酰胺酶检测试剂组合物，该β-内酰胺酶检测试剂组合物含有β-内酰胺酶检测底物与β-内酰胺酶抑制剂。
本发明还提供β-内酰胺酶检测试剂盒，其包含选自由以下的(a)～(e)构成的群的1组或1组以上检测试剂组合物(a)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与乙二胺四乙酸的组合；
(b)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合；(c)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸的组合；(d)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与乙二胺四乙酸的组合；(e)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合。
本发明还提供β-内酰胺酶检测试剂盒，其包含选自由以下的(f)、(g)、(h)及(i)构成的群的1组或1组以上(f)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南；(g)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为克拉维酸；(h)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南；(i)检测试剂组合物，其包含β-内酰胺酶检测底物为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸的组合。
本发明还提供β-内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与上述β-内酰胺酶检测试剂组合物接触的步骤。
本发明还提供β-内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与上述β-内酰胺酶检测试剂组合物接触的步骤，该组合物固定在β-内酰胺酶检测试剂盒的试样固定部分。
本发明还提供β-内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与β-内酰胺酶检测试剂组合物接触的步骤，该组合物固定在上述β-内酰胺酶检测试剂盒的试样固定部分。
图1是本发明的β-内酰胺酶检测试剂盒的一例的概略立体图。
具体实施例方式
本发明是基于产色头孢菌素法的发明。
作为可以在本发明中使用的β-内酰胺酶检测底物，可以列举在日本专利申请特开昭48-50787号公报中公开的下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受盐、或在国际公开第02/24707号小册子中公开的下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物。另外，这些说明书的内容全部包含在本说明书中。
(通式(1)中，R是甲酰胺基或者是由式RuCH2CONH、RuOCH2CONH、RuCONH、RuCH(NH2)CONH或RuC(＝NOH)CONH(式中、Ru是噻嗯基、苯基或萘基)表示的基团；Ar是2-位、4-位或2，4-位被氰基或硝基取代的苯基；以及X1是-S-或-SO-。) (通式(2)中，R1和R2可以相同或不同，各表示氢原子、硝基或氰基；R3表示C1～C6的烷基，其也可以是羧基取代烷基；R4表示氢原子或氨基；以及X2表示-S-或-SO-，但是，R1与R2不会同时为氢原子。)。
作为通式(1)表示的化合物，β-内酰胺酶检测底物优选3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-头孢环-4-羧酸或其生理上可接受的盐。
作为通式(2)表示的化合物，优选式中X2为-S-的化合物；式中R3为甲基、也可以为羧基取代甲基、或为被羧基取代的丙基的化合物；式中R4为氨基的化合物；或式中X为-S-，R3为甲基、也可以为羧基取代甲基、或为被羧基取代的丙基，R4为氨基的化合物。
其中，优选以下的化合物或其羧酸盐衍生物7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，6-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；
7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(4-氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2-氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)-2-(噻唑-4-基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸-1-氧化物；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，6-二氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2-氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，6-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；
7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-4-(4-氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-4-(2-氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-羧基甲氧基亚氨基-2-(噻唑-4-基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸，或7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸-1-氧化物。
特别优选以下的化合物或其羧酸盐衍生物7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(4-氰基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；或7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸。
进一步特别优选以下的化合物7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸；或
7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亚氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸。
作为可以在本发明中使用的β-内酰胺酶抑制剂，只要是具有β-内酰胺酶抑制活性的化合物就没有特别的限定。作为可以优选使用的抑制剂，可以列举选自由克拉维酸或起到与其同等作用的化合物、氨曲南、氯唑西林、可以与锌离子螯合的螯合剂、舒巴坦、他唑巴坦、噻嗯霉素及卡芦莫南构成的群的至少1种。作为可以与锌离子螯合的螯合剂，可以列举乙二胺四乙酸(EDTA)、环己二胺四乙酸及巯基化合物等。作为巯基化合物，可以使用例如在日本专利申请特开2000-224998号公报及日本专利申请特开2001-299388号公报中公开的化合物。具体可以列举巯基乙酸、巯基丙酸、特别是2-巯基丙酸，及这些酸的钠盐、钾盐、钙盐、钡盐或季铵盐；以及巯基乙醇等有机硫醇化合物等的含硫化合物。作为可以与锌离子螯合的螯合剂，特别优选EDTA。
特别优选β-内酰胺酶抑制剂选自由克拉维酸，氨曲南，氨曲南与乙二胺四乙酸的组合，克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合，氨曲南与克拉维酸的组合，以及氨曲南与克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合构成的群。
作为本发明中可以优选使用的β-内酰胺酶检测底物与β-内酰胺酶抑制剂的组合，可以列举以下的组合β-内酰胺酶检测底物为上述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，且β-内酰胺酶抑制剂为至少1种选自由克拉维酸、氨曲南、乙二胺四乙酸及氯唑西林构成的群的检测试剂组合物；以及β-内酰胺酶检测底物为上述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，且β-内酰胺酶抑制剂为至少1种选自由克拉维酸、氨曲南、乙二胺四乙酸及氯唑西林构成的群的检测试剂组合物。
另外，还优选检测试剂组合物，其包含上述(c)组以及选自由以下(f)～(i)构成的群的1组或1组以上(f)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南；(g)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为克拉维酸；(h)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南；(i)检测试剂组合物，其包含β-内酰胺酶检测底物为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸的组合。
本发明的检测试剂组合物，优选在以质量比1∶10～100∶1的范围使用β-内酰胺酶检测底物与β-内酰胺酶抑制剂，更优选在1∶1～50∶1的范围使用，进一步优选在1∶1～1∶10的范围使用。
本发明的检测试剂组合物，可以将β-内酰胺酶检测底物与β-内酰胺酶抑制剂溶解在水、磷酸盐缓冲液、二甲亚砜以及这些的混合物等的溶剂中使用。其中，特别优选二甲亚砜与磷酸盐缓冲液的混合物。混合比没有特别的限定。具体地讲，溶解于溶剂中时，优选使β-内酰胺酶检测底物的浓度成为0.025mg/mL～62.5mg/mL、更优选为1.25mg/mL～12.5mg/mL，优选使β-内酰胺酶抑制剂的浓度成为0.0125mg/mL～12.5mg/mL、更优选为1.25mg/mL～12.5mg/mL，从而配制含有β-内酰胺酶检测试剂组合物的溶液。
本发明的检测试剂组合物，优选调节成pH6.0～8.0来使用。特别是作为β-内酰胺酶检测底物使用上述通式(1)表示的化合物时，优选调节成pH5.5～8.5左右。作为β-内酰胺酶检测底物使用上述通式(2)表示的化合物时，优选调节成pH6.0～8.0左右。
这样配制的含有检测试剂组合物的溶液中，还可以以不妨碍本发明效果的范围的量添加聚乙烯吡咯烷酮、羟甲基纤维素、聚氯乙烯、甲基丙烯酸共聚物等的高分子等。通过添加这些高分子等，提高本发明的含有检测试剂组合物的溶液的稳定性，所以优选。其中特别优选甲基丙烯酸共聚物。
本发明中使用的样品，可以例如使用棉棒等从患者的咽喉或鼻腔采样。也可以使用尿、痰、脓等。样品液可以溶解在水、磷酸盐缓冲液、生理盐水等的溶剂中来配制。样品液优选配制成该溶液中所含细菌的浓度成为104～1010CFU/mL。
在这样配制的样品液中，还可以以不妨碍本发明效果的范围的量添加低聚糖、表面活性剂、糊精等。
本发明的β-内酰胺酶检测试剂盒，只要是包含上述的检测试剂组合物的试剂盒，其形态就没有特别的限制，可以是圆盘形、圆盘与纸板联用形、板形、条形等。作为可优选使用的形态可以举出板形。
另外，本发明的试剂盒，也可以根据需要包含由包含β-内酰胺酶和本发明的检测试剂组合物的溶液构成的阳性对照液，由包含β-内酰胺酶检测底物的溶液构成的阴性对照液。
图1表示本发明的β-内酰胺酶检测试剂盒的概略立体图，但本发明并不特别限定于此。用图1说明本发明的检测试剂盒，则本发明的检测试剂盒包含试样容器1和基体3，其中，基体3收纳在该试样容器中、且具有多个试样固定部分2。试样固定部分2具有滴入所配试样(样品液和对照液)的开口部。另外，构成本发明的检测试剂盒的试样容器、基体及试样固定部分，形成它们的材料没有特别的限定。另外，它们的大小或形状也没有特别的限制。
本发明的试剂盒更优选作为必要组分含有上述(c)组的检测试剂组合物，还包含上述(a)、(b)、(d)或(e)组的任意1组或1组以上检测试剂组合物。
并且，也优选作为必要组分含有上述(d)组的检测试剂组合物，还包含上述(a)、(b)、(c)或(e)组的任意1组或1组以上检测试剂组合物的β-内酰胺酶检测试剂盒。
特别优选含有全部上述(a)～(e)组检测试剂组合物的β-内酰胺酶检测试剂盒。
另外，本发明的试剂盒也优选包含1组或1组以上选自由上述(c)及(f)～(i)构成的群的检测试剂组合物。
另外，本发明的试剂盒更优选作为必要组分含有上述(c)组的检测试剂组合物，还含有上述(f)、(g)、(h)或(i)组的任意1组或1组以上检测试剂组合物。
并且，还优选作为必要组分含有上述(h)组的检测试剂组合物，还含有上述(c)、(f)、(g)或(i)组的任意1组或1组以上检测试剂组合物的β-内酰胺酶检测试剂盒。
特别优选包含全部上述(c)及(f)～(i)组检测试剂组合物的β-内酰胺酶检测试剂盒。
作为本发明的检测试剂盒，在上述(a)～(i)组的本发明的检测试剂组合物中，特别优选作为β-内酰胺酶检测底物含有3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-头孢环-4-羧酸或7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸(以下称为HMRZ化合物)的检测试剂组合物。
利用这些本发明的试剂盒，可以一次性地迅速判别β-内酰胺酶的A类、B类、C类、D类及ESBL。其结果，使用本发明的试剂盒就可以选择适当的抗菌剂，从而可以得到更高的治疗效果。
本发明还涉及一种β-内酰胺酶的检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液添加到含有前文所述的任意一种β-内酰胺酶检测试剂组合物的溶液中的步骤。
本发明的方法包括以下步骤在如上所述地配制的含由检测试剂组合物的液体中添加含有分析目标物质的样品液。可以在规定的温度下、例如在室温下添加，经过规定的时间、例如经过30分钟左右后，根据色调是否从黄色变化为红色来进行阳性或阴性的判别。另外，也可以通过在特定波长下测定色调变化来定量其活性。
通过使用本发明的方法，可以迅速地判别例如由产β-内酰胺酶微生物引起的病患，如患有尿道感染和肺炎、由肺炎杆菌或大肠菌引起的院内感染症的患者的尿和痰中的β-内酰胺酶。
实施例1.包含β-内酰胺酶检测试剂组合物的溶液的配制将以下的表1中所示的β-内酰胺酶检测底物1.25mg和β-内酰胺酶抑制剂各1.25mg溶解在0.1mL二甲亚砜与0.9mL磷酸盐缓冲液的混合溶剂中，配制包含β-内酰胺酶检测试剂组合物的溶液。
表1
表中，头孢硝噻吩表示3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-头孢环-4-羧酸，HMRE化合物表示7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-头孢环-4-羧酸，AZT表示氨曲南，EDTA表示乙二胺四乙酸，CVA表示克拉维酸。
2.板的制作将配制的含有β-内酰胺酶检测试剂组合物的溶液涂布在微孔板上，使每个孔的β-内酰胺酶检测底物及β-内酰胺酶抑制剂的量各成为12.5μg。
3.含有分析目标物质的样品液的配制作为不产生β-内酰胺酶的菌、产A类β-内酰胺酶的菌、产B类β-内酰胺酶的菌、产C类β-内酰胺酶的菌及产ESBL菌，使用以下表2中记载的细菌，将其接种于磷酸盐缓冲液，各配制108CFU/mL的样品液。
表2
4.对β-内酰胺酶的反应性在前面配制的板上，微孔板的每个孔各接种50μL样品液。通过观察接种后经过30分钟之后的色调的变化，研究对β-内酰胺酶的反应性。
表3对β-内酰胺酶的反应性
+阳性从黄色变成为红色。
-阴性仍然是黄色，没有变化。
±看到少许变色。
利用本发明，可以迅速且容易地、并且以高灵敏度检测β-内酰胺酶。而且，因为本发明联用特定的检测试剂组合物与特定的抑制剂，所以连β-内酰胺酶的类别也可以判别，检测误差也小。特别是通过迅速的类别判别，可以选择适当的抗菌药，可以发挥高的治疗效果。
权利要求
1.一种β-内酰胺酶检测试剂组合物，在产色头孢菌素法中使用，其含有β-内酰胺酶检测底物与β-内酰胺酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述的β-内酰胺酶检测试剂组合物，其中，β-内酰胺酶检测底物为下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，或为下述通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物 (通式(1)中，R是甲酰胺基或者是由式RuCH2CONH、RuOCH2CONH、RuCONH、RuCH(NH2)CONH或RuC(＝NOH)CONH(式中Ru是噻嗯基、苯基或萘基)表示的基团，；Ar是2-位、4-位或2，4-位被氰基或硝基取代的苯基；以及X1是-S-或-SO-；) (通式(2)中，R1和R2可以相同或不同，各表示氢原子、硝基或氰基；R3表示C1～C6的烷基，其也可以是羧基取代烷基；R4表示氢原子或氨基；以及X2表示-S-或-SO-，但是，R1与R2不会同时为氢原子)。
3.根据权利要求1或2所述的检测试剂组合物，其中，β-内酰胺酶抑制剂是选自由克拉维酸或起到与其同样作用的化合物、氨曲南、氯唑西林、可以与锌离子螯合的螯合剂、舒巴坦、他唑巴坦、噻嗯霉素及卡芦莫南构成的群的至少1种。
4.根据权利要求3所述的检测试剂组合物，其中，β-内酰胺酶抑制剂选自由克拉维酸，氨曲南，氨曲南与乙二胺四乙酸的组合，克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合，氨曲南与克拉维酸的组合，以及氨曲南与克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合构成的群。
5.一种β-内酰胺酶检测试剂盒，其包含1组或1组以上选自由以下(a)～(e)构成的群的检测试剂组合物(a)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与乙二胺四乙酸的组合；(b)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合；(c)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸的组合；(d)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与乙二胺四乙酸的组合；(e)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸与乙二胺四乙酸的组合。
6.根据权利要求5所述的β-内酰胺酶检测试剂盒，其作为必要组分含有权利要求5所述的(c)组的检测试剂组合物，还包含权利要求5所述的(a)、(b)、(d)或(e)组的任意1组或1组以上检测试剂组合物。
7.根据权利要求5所述的β-内酰胺酶检测试剂盒，其作为必需组分含有权利要求5所述的(d)组的检测试剂组合物，还包含权利要求5所述的(a)、(b)、(c)或(e)组的任意1组或1组以上检测试剂组合物。
8.根据权利要求5所述的β-内酰胺酶检测试剂盒，其含有权利要求5所述的全部(a)～(e)组的检测试剂组合物。
9.一种β-内酰胺酶检测试剂盒，其包含选自由以下(f)、(g)、(h)及(i)构成的群的1组或1组以上(f)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南；(g)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的盐，和β-内酰胺酶抑制剂为克拉维酸；(h)检测试剂组合物，其含有β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南；(i)检测试剂组合物，其包含β-内酰胺酶检测底物为权利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸盐衍生物，和β-内酰胺酶抑制剂为氨曲南与克拉维酸的组合。
10.根据权利要求9所述的β-内酰胺酶检测试剂盒，还包含权利要求5所述的(c)组的检测试剂组合物。
11.根据权利要求9所述的β-内酰胺酶检测试剂盒，其作为必要组分含有权利要求9所述的(h)组的检测试剂组合物，还包含权利要求9所述的(f)、(g)或(i)组的任意1组或1组以上。
12.根据权利要求10所述的β-内酰胺酶检测试剂盒，其含有权利要求9所述的全部(f)～(i)组。
13.一种β-内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与权利要求1～4的任意1项所述的β-内酰胺酶检测试剂组合物接触。
14.一种β-内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与权利要求1～4的任意1项所述的β-内酰胺酶检测试剂组合物接触，该检测试剂组合物固定在β-内酰胺酶检测试剂盒的试样固定部分。
15.一种β-内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与β-内酰胺酶检测试剂组合物接触，该检测试剂组合物固定在权利要求5～12的任意1项所述的β-内酰胺酶试剂盒的试样固定部分。
全文摘要
本发明提供一种β－内酰胺酶检测试剂组合物，其作为β－内酰胺酶检测底物含有3－[2，4－二硝基苯乙烯基]－7－(2－噻嗯基乙酰胺基)－3－头孢环－4－羧酸或7－[2－(2－氨基噻唑－4－基)－2－(1－羧基－1－甲基乙氧基亚氨基)乙酰胺基]－3－(2，4－二硝基苯乙烯基)－3－头孢环－4－羧酸，作为β－内酰胺酶抑制剂含有选自由克拉维酸、氨曲南、乙二胺四乙酸及氯唑西林构成的群的至少一种，该组合物可以迅速且容易地、以高灵敏度判别β－内酰胺酶。本发明还提供包含该检测试剂组合物的检测试剂盒。本发明还提供一种β－内酰胺酶检测方法，其包括将含有分析目标物质的样品液与该组合物接触。
文档编号C12Q1/34GK1729299SQ20038010718
公开日2006年2月1日 申请日期2003年10月29日 优先权日2002年10月29日
发明者村田敦 申请人:昭和药品化工株式会社