专利名称：蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法。
背景技术：
冬虫夏虫是一种极其珍贵的药用食用真菌，近年来，随着人们生活水平的不断提高，医疗保健科学的发展和对虫草认识领域的不断扩大，以虫草为主要材料的药品、保健食品、饮料、化妆品的开发层出不穷，不仅国内市场对草虫的需求日趋扩大，东南亚、日本、美国等国际市场的需求量也在不断增加。由于野生虫草资源非常稀缺，采控不易，常常出现供不应求，价格不断上涨、攀升，已使虫草价格倍增，无度采挖，既导致野生资源的几近枯竭，又造成对自然生态环境的破坏。因此，蛹虫草作为唯一可以代替野生冬虫夏草的替代品，已受到国内外的广泛关注。
目前，蛹虫草子实体的人工培养技术已获得成功，市场发展前景看好，但蛹虫草子实体培养工序复杂，实现规模化和产业化生产过程中还存在一些不容忽视的制约因素，保证优良菌种的供应是最基本的前提，也是技术上最大的难题之一。要解决这一技术难题，首选必须获得高产优质的优良菌株，然后顺利繁殖，获得足量的优良菌种供生产使用。
目前，获取优良菌种的一般做法是A、取野生或栽培的蛹虫草子实体。采用野生虫草的效果较好，但有时不一定能获得野生虫草，而采用栽培虫草分离获得优良菌株的几率较低，盲目性大。B、用75％的酒精或0.1升汞进行表面消毒。消毒时间不易控制，消毒时间不够长，常造成消毒不彻底，容易污染，消毒时间过长，又容易造成细胞损伤甚至死亡，而造成失败。C、用无菌水漂洗3-4次，有时由于漂洗不彻底，有药物残留。D、切开子实体，取一小块组织，接种到斜面培养基上，培养获得候选菌株。但由于取样位置不确定，获得优良菌株的几率较低，存在较大的盲目性。E、栽培试验，鉴别菌种生产性能。F、淘汰劣质菌株，保留优良菌株作为生长用种。但由于a、d两步操作的原因，大量的候选菌株只能获得少量的可用菌株，加大了栽培试验和筛选的工作量，有些菌株本身生产性能较好，也可能由于b、c的原因导致实际表现不佳而被落选。
一般情况下，即使获得质量较好的菌株，经传代2-3次后，菌种生产性能也会明显退化。因此，生产上的一般做法是选用优良菌株，连续繁殖2-3代之后将获得的菌种作为生产用种。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种能大大提高优良菌种筛选效率和稳定繁殖优良菌种的方法。
本发明中提高优良菌种筛选效率的目的是通过下述途径来实现的a、选用同时具备下列特征的子实体成熟度达到6-8成；橙黄或金黄色；长度6cm以上；无分叉；粗细适中、直径为3-5mm、；直立；截面圆形；顶端明显膨大。b、不作表面消毒，在无菌操作环境中的超净工作台上用手术刀将选用的子实体切成上下两截，取上截，再从切开处纵向切开一个小口，然后徒手从切口处沿子实体纵向将子实体撕开成两边，以露出子实体内部组织。c、在无菌操作环境条件下用接种针在子实体上截中间或中间偏向顶端的地方，挑取一小块子实体内部组织。d、将子实体内部组织接种到斜面培养基上，进行培养。e、抽样进行栽培试验，剩余菌种放3～5℃的冰箱中保存。f、鉴别菌钟生产性能后，淘汰劣质菌株，保留优良菌株作为生长用种。
本发明中的蛹虫草优良菌种的稳定繁殖方法还在于使用高效复合PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基)作为斜面培养基。该培养基是在每升PDA培养基的基础上添加以下成分磷二氢钾1克，硫酸镁0.5克，带鱼蛋白胨2.5克，酵母粉3克，少量维生素和微量元素，PH值调至为6.2。
本发明的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法，可大大提高优良菌种筛选的命中率，获得更多的优良菌株，并有效地解决了蛹虫草菌种繁殖过程中容易退化的难题，使优良菌株在高效培养基上可以传代6-7次，仍然保持良好的生产性能，大大提高优良菌种的生产能力，可推动我国蛹虫草的产业化发展。
具体实施例方式
本发明的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法a、选用同时具备下列特征条件的子实体成熟度达到6-8成；橙黄或金黄色；长度6cm以上；无分叉；粗细适中、直径为3-5mm、；直立；截面圆形；顶端明显膨大。b、不作表面消毒，在无菌操作环境中的超净工作台上用手术刀将选用的子实体切成上下两截，取上截，再从切开处纵向切开一个小口，然后徒手从切口处沿子实体纵向将子实体撕开成两边，以露出子实体内部组织。c、在无菌操作环境条件下，用接种针在撕开的子实体上截中间或中间偏向顶端的地方，挑取一小块子实体内部组织。d、将挑取的子实体内部组织接种到高效斜面培养基上，进行培养。e、抽样进行栽培试验，剩余菌种放3～5℃的冰箱中保存f、鉴别菌钟生产性能后，淘汰劣质菌株，保留优良菌株作为生长用种。
本发明的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法还在于使用高效复合PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基)作为上述斜面培养基。该培养基是在每升PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基)的基础上添加以下成分磷二氢钾1克，硫酸镁0.5克，带鱼蛋白胨2.5克，酵母粉3克，PH值调至为6.2。其中还包括少量维生素和微量元素。
权利要求
1.一种蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法，其特征在于a、选用成熟度达到6-8成，橙黄或金黄色，长度6cm以上，无分叉，粗细适中、直径为3-5mm，直立、截面圆形，顶端明显膨大的子实体；b、不作表面消毒，在超净工作台上用手术刀将选用的子实体切成上下两截，取上截，再从切开处纵向切开一个小口，然后徒手从切口处沿子实体纵向将子实体撕开成两边，露出子实体内部组织；c、用接种针挑取一小块子实体内部组织；d、将子实体内部组织接种到斜面培养基上，进行培养；e、抽样进行栽培试验，剩余菌种放3～5℃的冰箱中保存；f、鉴别菌种生产性能，淘汰劣质菌株，保留优良菌株作为生长用种。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法，其特征在于b、c两步操作必须在无菌环境中进行。
3.根据权利要求1所述的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法，其特征在于挑取子实体内部组织的取样位置为子实体上截中间或中间偏向顶端的地方。
4.根据权利要求1所述的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法，其特征在于所述斜面培养基是在每升PDA培养基的基础上添加以下成分磷二氢钾1克，硫酸镁0.5克，带鱼蛋白胨2.5克，酵母粉3克，PH值调至为6.2。
全文摘要
本发明的蛹虫草优良菌种的筛选和稳定繁殖方法选用同时具备，选用成熟度达到6－8成；橙黄或金黄色；长度6cm以上；无分叉；粗细适中；直立；截面圆形；顶端明显膨大的子实体，不作表面消毒，用刀将子实体切成上下两截，取上截从切开处纵向切开一个小口，然后徒手沿子实体纵向撕成两边，用接种针在子实体上截中间或中间偏向顶端处挑取一小块子内部组织，接种到高效PDA培养基上培养获得候选菌株，然后栽培试验，鉴别菌钟生产性能，保留菌优良菌株作为生长用种。该发明有效解决了蛹虫草开发中菌种容易退化的难题，同时采用高效PDA培养基，以实现菌种稳定繁殖，可筛选获得更多的优良菌株，大大提高菌种生产能力。
文档编号C12N1/14GK1710063SQ200510034370
公开日2005年12月21日 申请日期2005年4月29日 优先权日2005年4月29日
发明者郑贵朝, 胡事君 申请人:东莞市生物技术研究所