专利名称：多功能益生菌制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于畜禽养殖和水产养殖业的多功能益生菌制剂及其制备方法，属于生物菌制剂技术领域。
背景技术：
随着集约化养殖业的发展，畜禽及水产动物的各种疾病不断发生，而且日益严重，目前治疗和预防这些疾病的主要手段，是以饲料添加剂形式大量使用抗生素。近年来，随着对抗生素作用认识的深入，抗生素可能导致细菌耐药性、畜禽产品药物残留以及对生态环境的破坏越来越引起人们的关注。预防畜禽疾病、提高饲料质量、解决畜禽产品药物残留是畜牧业急需解决的问题。微生物添加剂作为一种天然的生物活性制剂无毒、无抗药性、无残留，并具有增强免疫、促进生长、提高饲料利用率的功效，可作为抗生素的替代品应用于畜牧养殖和水产动物的养殖中。
发明内容
针对养殖业大量使用抗生素的弊端，本发明提供一种多功能益生菌制剂及其制备方法，可作为抗生素的替代品用于畜禽养殖和水产养殖业。
多功能益生菌制剂，由下列组分组成，均为重量份丝孢酵母菌制剂，20-30份；枯草芽孢杆菌制剂，20-30份；干酪乳杆菌制剂，30-40份；坚强肠球菌制剂，30-40份。
上述各组分的制备所用菌株分别为丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、坚强肠球菌(Enterococcusdurans)，均为现有菌种，各组分菌制剂的制备方法可采用现有技术。上述各组分按比例混合均匀即得多功能益生菌制剂。
本发明提供的多功能益生菌制剂制备方法，步骤如下(1)丝孢酵母菌制剂的制备固体培养基(W/W)40％苹果渣，10％麸皮，40％麦芽根，10％无机盐溶液I，另加适量的水，使混合好的料充分湿润，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌的培养基上，以10％(W/W)接种量接入活化的丝孢酵母，30～32℃固体发酵36～48小时，中间翻料2～3次，得丝孢酵母菌制剂。
上述无机盐溶液I是1000ml溶液中含有(NH4)2SO440g，K2HPO40.2g，KH2PO40.8g，CaCI20.02g，MgSO40.08g。
(2)枯草芽孢杆菌制剂的制备液体培养基(W/V)2％淀粉，1％豆饼水解液，2％玉米浆，1％麸皮，K2HPO40.25％，KH2PO40.1％，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌培养基上，以2％(V/V)接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气发酵24小时，得枯草芽孢杆菌制剂。
(3)干酪乳杆菌制剂和坚强肠球菌制剂的制备干酪乳杆菌和坚强肠球菌均属于乳酸菌，其制备方法基本相同。
液体培养基(V/V)40％麦芽水解液，10％大豆水解液，10％无机盐溶液II，121℃灭菌30分钟。所述的无机盐溶液II是1000ml溶液中含有NaAc 5g，Cit(NH4)32g，K2HPO42g，MgSO40.58g，MnSO40.25g。
在上述灭菌的培养基中，以5％(V/V)接种量接入干酪乳杆菌，32～37℃静止培养24小时，得干酪乳杆菌制剂。
在上述灭菌的培养基中，以5％(V/V)接种量接入坚强肠球菌，32～37℃静止培养24小时，得坚强肠球菌制剂。
另一种方案是在上述灭菌的培养基中，分别以5％(V/V)接种量接入干酪乳杆菌和坚强肠球菌，32～37℃静止培养24小时，可得混合制剂。
(4)多功能益生菌制剂的制备按重量份，将上述丝孢酵母菌制剂20-30份、枯草芽孢杆菌制剂20-30份、干酪乳杆菌制剂30-40份和坚强肠球菌制剂30-40份，直接混合，即得多功能益生菌制剂(液体剂型)。
按重量份，将上述丝孢酵母菌制剂20-30份、枯草芽孢杆菌制剂20-30份、干酪乳杆菌制剂30-40份和坚强肠球菌制剂30-40份混合，再用麸皮或稻壳吸附，风干或45-50℃干燥后即为固体的多功能益生活菌制剂。
本发明的方法制备的多功能益生菌制剂，常温保存一年，活菌数不低于109cfu/g或109cfu/ml。
本发明的多功能益生菌制剂，以1％重量比的剂量添加到饲料或饮用水中，用于畜禽养殖和水产养殖业。
本发明选用的菌株特性及功能如下(1)丝孢酵母兼性厌氧发酵，偏酸条件生长良好。菌株在生长过程中产生一定的淀粉酶、脂酶和木聚糖酶，菌体蛋白氨基酸组成齐全，蛋氨酸含量较高，具有促进动物生长，提高饲料利用效率之功效。
(2)枯草芽孢杆菌具有淀粉酶和蛋白酶活性，生长过程产生芽孢，耐受高温，在饲料加工过程中保持较高的活力。具有促进动物生长，提高饲料利用效率的作用。
(3)干酪乳杆菌生长过程产生乳酸、乙酸、过氧化氢及短肽等抑菌物质，对肠道病原菌大肠杆菌、沙门氏菌等有抑制作用，能刺激肌体的免疫系统，增强动物抗病能力。
(4)坚强肠球菌产生胞外多糖，作为免疫佐剂，促进动物生长，提高动物抗病能力。
将上述不同生理功能的菌株培养后混合或混合培养，得到一种活菌制剂，具有抑制肠道病原菌、增强机体免疫力、提高饲料利用率的功能，可作为饲料中促生长和预防疾病的抗生素替代品。
本发明通过大量的微生物筛选，选出4株具有不同生理活性的菌株，经过不同菌株的配伍，优化得到具有多种生理活性的益生活菌制剂，其中含有酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌中的4种具有生理活性的微生物培养后而研制成一种活菌制剂，主要应用于畜禽养殖和水产养殖业。
具体实施例方式
实施例1(1)丝孢酵母菌制剂的制备固体培养基(W/W)40％苹果渣，10％麸皮，40％麦芽根，10％无机盐溶液I(1000ml溶液中含有(NH4)2SO440g，K2HPO40.2g，KH2PO40.8g，CaCI20.02g，MgSO40.08g)，另加适量的水，使混合好的料充分湿润，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌的培养基上，以10％(W/W)接种量接入活化的丝孢酵母，30～32℃固体发酵36～48小时，中间翻料2～3次，得丝孢酵母菌制剂。
(2)枯草芽孢杆菌制剂的制备液体培养基(W/V)2％淀粉，1％豆饼水解液，2％玉米浆，1％麸皮，K2HPO40.25％，KH2PO40.1％，均为重量百分比，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌培养基上，以2％(V/V)接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气发酵24小时，得枯草芽孢杆菌制剂。
(3)干酪乳杆菌制剂和坚强肠球菌制剂的制备干酪乳杆菌和坚强肠球菌均属于乳酸菌，其制备方法基本相同。
液体培养基(V/V)40％麦芽水解液，10％大豆水解液，10％无机盐溶液II(1000ml溶液中含有NaAc 5g；Cit(NH4)32g；K2HPO42g；MgSO40.58g；MnSO40.25g)，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌的培养基中，以5％(重量百分比)接种量接入干酪乳杆菌，32～37℃静止培养24小时，得干酪乳杆菌制剂。
在上述灭菌的培养基中，以5％(重量百分比)接种量接入坚强肠球菌，32～37℃静止培养24小时，得坚强肠球菌制剂。
将上述丝孢酵母菌制剂20份、枯草芽孢杆菌制剂20份、干酪乳杆菌制剂30份和坚强肠球菌制剂30份，直接混合，分装，即得液体剂型的多功能益生菌制剂。
实施例2(1)丝孢酵母菌制剂的制备固体培养基(W/W)40％苹果渣，10％麸皮，40％麦芽根，10％无机盐溶液(1000ml溶液中含有(NH4)2SO440g，K2HPO40.2g，KH2PO40.8g，CaCI20.02g，MgSO40.08g)，另加适量的水，使混合好的料刚挪不出水，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌的培养基上，以10％(W/W)接种量接入活化的丝孢酵母，30～32℃固体发酵36～48小时，中间翻料2～3次，得丝孢酵母菌制剂。
(2)枯草芽孢杆菌制剂的制备液体培养基(W/V)2％淀粉，1％豆饼水解液，2％玉米浆，1％麸皮，K2HPO40.25％，KH2PO40.1％，均为重量百分比，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌培养基上，以2％(V/V)接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气发酵24小时，得枯草芽孢杆菌制剂。
(3)干酪乳杆菌制剂和坚强肠球菌制剂的制备干酪乳杆菌和坚强肠球菌均属于乳酸菌，其制备方法基本相同。
液体培养基(V/V)40％麦芽水解液，10％大豆水解液，10％无机盐(1000ml溶液中含有NaAc5g；Cit(NH4)32g；K2HPO42g；MgSO40.58g；MnSO40.25g)，121℃灭菌30分钟。
在上述灭菌的培养基中，分别以5％(V/V)接种量接入干酪乳杆菌和坚强肠球菌，32～37℃静止培养24小时，可得混合制剂。
将上述丝孢酵母菌制剂20份、枯草芽孢杆菌制剂20份、干酪乳杆菌和坚强肠球菌混合制剂60份混合，再用麸皮或稻壳吸附，风干或50℃干燥后即为固体的多功能益生菌制剂。
权利要求
1.多功能益生菌制剂，其特征在于，由下列组分组成，均为重量份丝孢酵母菌制剂， 20-30份；枯草芽孢杆菌制剂， 20-30份；干酪乳杆菌制剂， 30-40份；坚强肠球菌制剂， 30-40份。
2.如权利要求1所述的多功能益生菌制剂的制备方法，步骤如下(1)丝孢酵母菌制剂的制备固体培养基W/W40％苹果渣，10％麸皮，40％麦芽根，10％无机盐溶液I，另加水使混合好的料充分湿润，121℃灭菌30分钟；在上述灭菌的培养基上，以10％W/W接种量接入活化的丝孢酵母，30～32℃固体发酵36～48小时，中间翻料2～3次，得丝孢酵母菌制剂；上述无机盐溶液I是1000ml溶液中含有(NH4)2SO440g，K2HPO40.2g，KH2PO40.8g，CaCI20.02g，MgSO40.08g；(2)枯草芽孢杆菌制剂的制备液体培养基W/V2％淀粉，1％豆饼水解液，2％玉米浆，1％麸皮，K2HPO40.25％，KH2PO40.1％，121℃灭菌30分钟；在上述灭菌培养基上，以2％V/V接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气发酵24小时，得枯草芽孢杆菌制剂；(3)干酪乳杆菌制剂和坚强肠球菌制剂的制备干酪乳杆菌和坚强肠球菌均属于乳酸菌，其制备所用液体培养基相同；液体培养基V/V40％麦芽水解液，10％大豆水解液，10％无机盐溶液II，121℃灭菌30分钟。所述的无机盐溶液II是1000ml溶液中含有NaAc 5g；Cit(NH4)32g；K2HPO42g；MgSO40.58g；MnSO40.25g；在上述灭菌的培养基中，以5％V/V接种量接入干酪乳杆菌，32～37℃静止培养24小时，得干酪乳杆菌制剂；在上述灭菌的培养基中，以5％V/V接种量接入坚强肠球菌，32～37℃静止培养24小时，得坚强肠球菌制剂；或者是在上述灭菌的培养基中，分别以5％V/V接种量接入干酪乳杆菌和坚强肠球菌，32～37℃静止培养24小时，可得混合制剂；(4)多功能益生菌制剂的制备按重量份，将上述丝孢酵母菌制剂20-30份、枯草芽孢杆菌制剂20-30份、干酪乳杆菌制剂30-40份和坚强肠球菌制剂30-40份，直接混合，即得多功能益生菌制剂的液体剂型；再用麸皮或稻壳吸附，风干或45-50℃干燥后即为固体的多功能益生活菌制剂。
全文摘要
多功能益生菌制剂及其制备方法，属于生物菌制剂技术领域。丝孢酵母菌制剂，枯草芽孢杆菌制剂，干酪乳杆菌制剂和坚强肠球菌制剂组成。上述各组分的制备所用菌株分别为丝孢酵母、枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、坚强肠球菌等菌种，各组分按比例混合均匀即得多功能益生菌制剂。将上述不同生理功能的菌株培养后混合或混合培养，得到一种活菌制剂，具有抑制肠道病原菌、增强机体免疫力、提高饲料利用率的功能，可作为饲料中促生长和预防疾病的抗生素替代品。
文档编号C12R1/125GK1800348SQ200510045358
公开日2006年7月12日 申请日期2005年12月14日 优先权日2005年12月14日
发明者孔健, 马桂荣 申请人:山东大学