专利名称：药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法
技术领域：
本发明涉及一种皱纹盘鲍新品种的培育方法，尤其是一种药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法。
背景技术：
鲍是海洋贝类的一种，曾被誉为海产八珍之一。产于我国辽宁、山东等地的皱纹盘鲍(Haliotis discushannai)、福建、广东、台湾、海南等地的九孔鲍鱼(H.diversicolor supertexta)最负盛名，其皱纹盘鲍被称为“软黄金”，在国际市场上每吨售价达4～6万美元。
我国从70年代开始了皱纹盘鲍的人工繁殖或增养殖研究，80年代在辽宁、山东等地开展人工增养殖工作，取得了可喜成就。全国鲍年产量已达3000吨以上，产值约10亿元。但是90年代初开始，鲍的养殖业出现滑坡现象，主要是由于多年人工自繁导致苗种质量下降、人工育苗期间稚鲍剥离后大量死亡、单位面积和总体出苗率降低，从而严重影响了养成用苗，同时养殖成鲍也出现死亡现象。
染色体倍性操作是水生生物细胞工程育种的一个行之有效的途径，自1956年首次诱导三棘刺鱼获得三倍体以来，已在20余种鱼类、30余种贝类和3种甲壳类上开展了三倍体诱导的研究。到目前为止，进行染色体倍性操作的方法主要有如下几种一种是用冷、热休克和静水压法等物理方法处理受精卵；另一种是用化学药剂处理发育到不同时期的胚胎。由于鲍养殖周期较长，三倍体育种技术是鲍人工育苗技术的首选技术之一。从1986年开始，我国也开始研究鲍的三倍体，主要是采用细胞松弛素B(CB)和温度休克法诱导鲍的多倍体，但效果不佳，主要问题是倍化率不稳定和胚胎畸形率高。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的倍化率不稳定和胚胎畸形率高等技术问题，提供一种以6-二甲基氨基嘌呤溶液处理皱纹盘鲍抑制第二极体的药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法。
本发明的技术解决方案是一种药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法，包括如下步骤a.制取6-二甲基氨基嘌呤溶液；b.用常规方法获得鲍鱼的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.将受精卵置于海水中，用6-二甲基氨基嘌呤溶液抑制皱纹盘鲍第二极体，6-二甲基氨基嘌呤溶液的最终浓度为75～150μmol/l，起始时间为第一极体出现30～50％时，持续时间为15～20min。
所述的制取6-二甲基氨基嘌呤溶液的溶质为蒸馏水或二甲基亚砜。
所述的所述水温最好为24～25℃，6-二甲基氨基嘌呤溶液的最终浓度最好为150μmol/l，持续时间最好为20min。
本发明是用6-二甲基氨基嘌呤溶液抑制皱纹盘鲍第二极体，合理的药物浓度、起始时间以及持续时间，使得鲍三倍体的倍化率稳定和胚胎畸形率低，即使在倍化率最高的条件下，其相对成活率也达到90.5％。最好是将水温控制在24～25℃，6-二甲基氨基嘌呤溶液的最终浓度为150μmol/l，持续时间为20min。由于三倍体鲍鱼的不育和低育性，使鲍鱼体内能量分配发生变化，在体细胞生长方面的能量相对增加，可加快养殖鲍鱼的生长速度、改善养殖性状、增强其抗逆性，以提高鲍鱼的产量，具有较高的经济效益及社会效益。
具体实施例方式实施例1a.将美国Sigma公司所产的6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)溶于蒸馏水或二甲基亚砜中，并储存于-20～4℃的温度中备用；b.采捕壳长8～12cm、无外伤、软体部明显突出于壳口的种鲍，种鲍促熟有效积温达1200℃以上，用常规方法获得鲍鱼的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.将受精卵置于温度为24～25℃的海水中，测试第一极体出现30～50％时，加入6-二甲基氨基嘌呤溶液，使海水中的6-二甲基氨基嘌呤最终浓度为75～150μmol/l，起始时间为第一极体出现30～50％时，持续时间为15min，抑制第二极体后取出种鲍；c.可用紫外线照射海水法对种鲍催产，幼体孵化。
实施例2a.将美国Sigma公司所产的6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)溶于蒸馏水或二甲基亚砜中，并储存于-20～4℃的温度中备用；
b.采捕壳长8～12cm、无外伤、软体部明显突出于壳口的种鲍，种鲍促熟有效积温达1200℃以上，用常规方法获得鲍鱼的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.将受精卵置于温度为24～25℃的海水中，测试第一极体出现30～50％时，加入6-二甲基氨基嘌呤溶液，使海水中的6-二甲基氨基嘌呤最终浓度为75～150μmol/l，起始时间为第一极体出现30～50％时，持续时间为20min，抑制第二极体后取出种鲍；c.可用紫外线照射海水法对种鲍催产，幼体孵化。
实施例1的结果如表1所示
实施例2的结果如表2所示
权利要求
1.一种药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法，包括如下步骤a.制取6-二甲基氨基嘌呤溶液；b.用常规方法获得鲍鱼的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.将受精卵置于海水中，用6-二甲基氨基嘌呤溶液抑制皱纹盘鲍第二极体，6-二甲基氨基嘌呤的最终浓度为75～150μmol/l，起始时间为第一极体出现30～50％时，持续时间为15～20min。
2.根据权利要求1所述的药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法，其特征在于所述的制取6-二甲基氨基嘌呤溶液的溶质为蒸馏水或二甲基亚砜。
3.根据权利要求1所述的药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法，其特征在于所述的水温为24～25℃，6-二甲基氨基嘌呤的最终浓度为150μmol/l，所述的持续时间为20min。
全文摘要
本发明公开一种药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法，包括如下步骤制取6－二甲基氨基嘌呤溶液；用常规方法获得鲍鱼的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；将受精卵将种鲍置于海水中，用6－二甲基氨基嘌呤溶液抑制皱纹盘鲍第二极体，6－二甲基氨基嘌呤的最终浓度为75～150μmol/l，起始时间为第一极体出现30～50％时，持续时间为15～20min。合理的药物浓度、起始时间以及持续时间，使得鲍三倍体的倍化率稳定和胚胎畸形率低，即使在倍化率最高的条件下，其相对成活率也达到90.5％。由于三倍体鲍鱼的不育和低育性，使鲍鱼体内能量分配发生变化，在体细胞生长方面的能量相对增加，可加快养殖鲍鱼的生长速度、改善养殖性状、增强其抗逆性，以提高鲍鱼的产量。
文档编号C12N5/06GK1733908SQ20051004683
公开日2006年2月15日 申请日期2005年7月5日 优先权日2005年7月5日
发明者王子臣 申请人:大连水产学院