专利名称：利用酵母菌生产纤维素酶的方法
技术领域：
本发明涉及一种纤维素酶的制备方法，尤其涉及一种利用酵母菌制备酸性纤维素酶的方法。
背景技术：
纤维素酶是指能水解β-1.4糖苷键，使纤维素降解为葡萄糖的酶系的总称，其中包括β-1.4糖苷酶，内切型β-1.4萄聚糖酶和外切型葡聚糖酶，不同的微生物产生的纤维素酶，其结构和功能差异较大，纤维素酶按作用最适pH不同可分为酸性纤维素酶(最适pH约为4.8)，它是目前研究较多和应用最广泛的纤维素酶，主要由康氏木霉，里氏木霉，绿色木霉，黑曲霉，青霉等产生。中性纤维素酶(最适pH 6～8)主要由长梗木霉，腐殖菌、芽孢杆菌等产生，碱性纤维素酶(最适pH 8～11)，主要由嗜热芽孢杆菌，腐殖菌等产生。自然界中存在的纤维素资源来源复杂，其结构和性能差异较大，不同来源的纤维素酶，对它们的降解效果也不尽相同，针对不同来源的纤维素寻找降解效果较高的纤维素酶，是当前纤维素酶领域的热点之一。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用酵母菌制备酸性纤维素酶的方法。
本发明的设计方案是在培养基中加入酵母菌种进行培养，然后经离心分离得到的上清液即为酶液，将酶液经沉淀分离可得粗酶，粗酶分离纯化，即得产品纤维素酶。所述培养基的成分为椰子水、水、糖、纤维素粉、无机盐。
本发明所提供的酸性纤维素酶的制备方法工艺简单，成本低，所得纤维素酶对细菌纤维素，其活性高，降解效果好。
图1是本发明利用酵母菌生产纤维素酶的方法的工艺流程图。
具体实施例方式
下面结合附图对发明作进一步描述。
在培养基中加入1-10％的假丝酵母菌种培养液，在摇床转速为50～200r/min，温度在20～30℃之间进行培养36～108h，得到菌种培养液；将菌种培养液在摇床转速为2000～4000r/min离心分离10～20min，取其上清液，即为酶液；将酶液经沉淀分离可得粗酶，粗酶分离纯化，即得产品纤维素酶。所述培养基的成分为椰子水、水、糖、纤维素粉、无机盐，其中按重量百分比计算椰子水占50～90％，水占0～40％，糖占3～8％，纤维素粉占0.1～1％，无机盐占0.4～1％。所述培养基的成分中糖是指蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨糖、木糖、果糖中的一种。所述培养基的成分中纤维素粉是指细菌纤维素粉、稻草粉、蔗渣粉、椰棕粉中的一种。所述培养基的成分中无机盐是指(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4、CaCl2。
实施例1按重量计算将椰子水50克，(NH4)2SO44克，KH2PO41克，MgSO40.5克，CaCl20.3克，细菌纤维素粉0.5克，蔗糖2克，以此作为培养基装入250ml三角瓶，加入5％假丝酵母(camdida)菌种培养液，在摇床转速150r/min，30℃培养72h得到菌种培养液。将菌种培养液于摇床转速为3000r/min离心分离10min，取其上清液即为酶液。酶液经沉淀分离即可得粗酶，粗酶经分离纯化，即得产品纤维素酶。
实施例2按重量计算将椰子水400克，水100克，(NH4)2SO44克，KH2PO41克，MgSO40.5克，CaCl20.3克，细菌纤维素粉1克，蔗糖粉0.5克，果糖20克，以此作为培养基，加入5％假丝酵母(camdida)菌种培养液，在摇床转速150r/min，30℃培养72h得到菌种培养液。将菌种培养液于摇床转速为3000r/min离心分离10min，取其上清液即为酶液。酶液经沉淀分离即可得粗酶，粗酶经分离纯化，即得产品纤维素酶。
权利要求
1.一种利用酵母菌生产纤维素酶的方法，其特征在于在培养基中加入1～10％的假丝酵母菌种培养液，在摇床转速为50～200r/min，温度在20～30℃之间进行培养36～108h，得到菌种培养液；将菌种培养液在摇床转速为2000～4000r/min离心分离10～20min，取其上清液，即为酶液；将酶液经沉淀分离可得粗酶，粗酶分离纯化，即得产品纤维素酶。所述培养基的成分为椰子水、水、糖、纤维素粉、无机盐，其中按重量百分比计算椰子水占50～90％，水占0～40％，糖占3～8％，纤维素粉占0.1～1％，无机盐占0.4～1％。
2.根据权利要求1所说的利用酵母菌生产纤维素酶的方法，其特征在于所述培养基的成分中糖是指蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨糖、木糖、果糖中的一种。
3.根据权利要求1所说的利用酵母菌生产纤维素酶的方法，其特征在于所述培养基的成分中纤维素粉是指细菌纤维素粉、稻草粉、蔗渣粉、椰棕粉中的一种。
4.根据权利要求1所说的利用酵母菌生产纤维素酶的方法，其特征在于所述培养基的成分中无机盐是指(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4、CaCl2。
全文摘要
本发明公开了一种利用酵母菌制备酸性纤维素酶的方法。其特征是在培养基中加入酵母菌种进行培养，然后经离心分离得到的上清液即为酶液，将酶液经沉淀分离可得粗酶，粗酶分离纯化，即得产品纤维素酶。本发明所提供的酸性纤维素酶的制备方法工艺简单，成本低，所得纤维素酶对细菌纤维素，其活性高，降解效果好。
文档编号C12N9/42GK1693456SQ200510070368
公开日2005年11月9日 申请日期2005年4月30日 优先权日2005年4月30日
发明者王锡彬, 吴周新, 林强, 尹学琼, 庞素娟, 冯玉红, 孙中亮 申请人:海南大学