专利名称：微孔细胞培养载片及其使用方法
技术领域：
本发明涉及一种医学技术领域中的微孔细胞培养载片及其使用方法。
背景技术：
长期以来，传统的细胞免疫化学、原位杂交、各种特殊染色等研究方法建立在常规细胞片基础上。常规的细胞制片一般都为单种细胞片，一张玻片上只能载有限的一种细胞作一种测试。所以在进行大量细胞样本分析时，必须反复重复同一操作，造成大量时间、人力以及材料的浪费。
微孔细胞培养载片使科研人员一次就有可能同时对几百乃至近千种发展阶段不同、周期不同的原代培养细胞或细胞株以及用不同物理、化学方法处理的活细胞样本进行研究。而且将这些排列整齐的培养细胞通过化学方法固定制作成微缩的细胞片。这种微缩细胞片可以用各种酶、核素或荧光标记的不同基因、寡核苷酸、抗体进行杂交和标记染色，最后在显微镜(包括激光共聚焦显微镜等)下获取图像信息(或通过计算机处理所获的信息)，以研究目的基因或基因产物在不同细胞之间的表达差异以及研究药物的体外效应。主要用于科研领域中利用细胞进行药物研究筛选、基因表达分析、基因突变的确认、基因分型以及新基因的发现等，能够对数十、数百种不同生物细胞同时进行形态结构比较、基因和蛋白表达水平的定位检测。
发明内容
本发明的目的就是提供一种微孔细胞培养载片，可以由载玻片和凹孔构成，由所述载玻片的一侧、向内设置有所述的凹孔，该凹孔并不穿透所述载玻片的另一侧。
所述载玻片采用玻璃或医用无色塑料为材料制成。所述载玻片的长宽为25.4×76.2mm，厚度为1.8～5.0mm，还可以是1.8～2.2mm。
在所述载玻片上可以设置有从一面向内凹陷的、若干个圆形的凹孔，所述凹孔可以为圆柱形、底平的凹孔。该凹孔的微孔直径为1～10mm，孔深为0.8～4.0mm，各个凹孔之间的距离为2～10mm，所述凹孔的数目为10～1000个；所述凹孔的直径还可以为1～6mm，凹孔深度为0.8～1.4mm。
所述载玻片消毒后来使用，方法如下将各种细胞制成细胞悬液，可滴加到各凹孔中，使细胞悬液形成液体凸面，30min～1h后细胞贴壁，用70％乙醇或4％多聚甲醛固定细胞；或与已用核素、生物素或荧光染料标记的探针进行杂交，将放射自显影或激光共聚焦显微镜检测到的结果输入计算机，用相应的软件，对实验所得的数据、信息进行分析，最后得出结论，同时显示所有凹孔的测试结果。
因此，通过模具铸造一种和普通病理切片大小、形状相似的载玻片，不同之处在于载玻片上根据设计铸造有数十个至上千个小圆柱形的底平的凹孔，然后将活的细胞悬液整齐滴加到凹孔中培养，通过与而制成。这样，固定细胞后可用于靶DNA、RNA或蛋白分子的原位检测，通过一次化学染色或原位杂交，载玻片上所有标本的信号可以同时显示出来。与常规的细胞片相比，微孔细胞培养载片具有以下特点(1)常规的细胞制片一般都为单种细胞片，所以在进行大细胞样本分析时，必须反复重复同一操作，造成大量时间、人力以及材料的浪费，而微孔细胞培养载片由于能够同时对多个细胞样品进行研究，不仅提高了工作效率，还节省了大量的材料和试剂。
(2)体积小、信息含量高，在一张载玻片上可同时培养上百近干种不同的细胞样本，根据不同的需要进行组合和设计。
(3)由于在同一张微孔细胞培养载片上同时对不同的细胞标本进行检测，因此可以避免因检验时间的先后而造成的误差，极大地改善了实验条件的同质性，从而提高检测结果的可比性。
(4)最大限度地利用有限的细胞标本资源，尤其是原代培养的细胞标本。
(5)设计的灵活性大，既可以将不同细胞的标本列阵于同一块微孔细胞培养载片上，也可以将同种细胞周期不同、处理方法不同的细胞标本列阵在同一块微孔细胞培养载片上。
(6)不仅适用于形态学观察，还能用于免疫组织化学染色、原位杂交和各种原位组织、细胞学的观察和研究。
(7)高效、快速、低消耗、自身内对照和可比性强。在医学科学研究中用于基因及其产物表达水平的分析和基因功能的研究。
微孔细胞培养载片可根据实验的要求和目的，设计出不同的排列组合，可以应用在细胞生物学研究领域，也可以用于在科研、试剂检测、质量检查和标准化等方面应用。该载片是将数十个、数百个乃至上千个小的细胞标本按预先设计的顺序整齐地排列而成的微缩细胞片，其具有高效或高通量特点，并有节约经费和试验结果可比性强的优点，还大大减少了劳动力和劳动强度，缩短研究时间，提高检测效率，更重要的是减少实验误差。这样就使科研人员一次有可能同时对几百乃至上千种原代细胞或细胞株发展不同阶段的自然病理生理状态下的细胞样本进行某一个或多个特定的基因、或与其相关的表达产物的研究，而且将这些排列整齐的培养细胞通过化学方法固定制作成微缩的细胞片。这种微缩细胞片可以用各种酶、核素或荧光标记的不同基因、寡核苷酸、抗体进行杂交和标记染色，最后在显微镜(包括激光共聚焦显微镜等)下获取图像信息(或通过计算机处理所获的信息)，以研究目的基因或基因产物在不同细胞之间的表达差异以及研究药物的体外效应。
培养细胞用微孔载玻片通过细胞滴片以获得数百个圆柱状的样品，并使该样品按次序排列在一个新的细胞载玻片上，微孔细胞培养载片具有准确、快速、平行、高通量的特点，能够对数十、数百种不同生物细胞同时进行形态结构比较、基因和蛋白表达水平的定位检测。并从根本上解决了细胞生物研究的难题，是细胞生物学等研究领域的一项重大技术产品，在体外利用细胞进行实验、对某些基因和蛋白质与疾病关系的研究、疾病相关基因的验证、利用细胞进行新药的开发与筛选、基因表达分析、基因突变的确认、基因分型以及新基因的发现疾病的分子诊断、治疗过程的动态观察和预后的判断等方面具有重要的实际意义和广阔的市场前景。
图1为本发明实施例的立体示意图。
图2为本发明实施例的平面示意图。
图3为本发明实施例的A-A剖面示意图。
符号说明1载玻片或载片； 2凹孔；具体实施方式
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是通过模具铸造一种和普通病理切片大小、形状相似的载玻片1，不同之处在于载玻片1上根据设计铸造有数十个至上千个小圆柱形的底平的凹孔2，然后将活的细胞样本整齐滴加到凹孔2中培养而制成活细胞样本阵列。
微孔细胞培养载片1采用玻璃或医用无色塑料作为材料，通过模具铸造成医学病理用载玻片1长宽为25.4×76.2mm。微孔细胞培养载片1厚度为1.8～5.0mm，但为了细胞检测和观察的方便，一般设定为2.5mm。微孔细胞培养载片1上的微孔直径从1～10mm不等，但为了方便，一般设定为5mm。在载玻片1上铸造10～1000个凹型小孔2，小孔直径在1～10mm，凹孔2深度为0.8～4.0mm。在一个常规大小的载玻片1上最多可以检测1000个样本，由于样本排列过于紧密，有可能导致培养细胞用微孔载玻片1制作和研究的失败。对于大多数研究来说，10～100个样本就已经足够了。微孔细胞培养载片1上两个相邻的细胞培养用圆柱形凹孔2之间的距离从2～10mm不等，但为了方便，一般设定为4mm。
所述载玻片1消毒后来使用，方法如下各种细胞制成细胞悬液，可滴加到各凹孔2中，使细胞悬液形成液体凸面，30min～1h后细胞贴壁，这种活细胞样本阵列，用70％乙醇或4％多聚甲醛固定细胞，这种细胞片用于可进行免疫组化标记；或与已用核素、生物素或荧光染料标记的探针进行杂交，将放射自显影或激光共聚焦显微镜检测到的结果输入计算机，用相应的软件，对实验所得的数据、信息进行分析，最后得出结论。这样通过化学方法对细胞微阵列进行靶DNA、RNA或蛋白分子的原位检测，通过一次化学染色或原位杂交，载玻片上所有标本的信号可以同时显示出来。
权利要求
1.一种微孔细胞培养载片，由载玻片和凹孔构成，其特征在于，由所述载玻片的一侧、向内设置有所述的凹孔，该凹孔并不穿透所述载玻片的另一侧。
2.如权利要求1所述的微孔细胞培养载片，其特征在于，所述凹孔的微孔直径为1～10mm，孔深为0.8～4.0mm，各个凹孔之间的距离为2～10mm，所述凹孔的数目为10～1000个。
3.如权利要求2所述的微孔细胞培养载片，其特征在于，所述凹孔的直径为1～6mm，凹孔的深度为0.8～1.4mm。
4.如权利要求1～3任意一个所述的微孔细胞培养载片，其特征在于，所述凹孔为圆柱形、底平的凹孔。
5.如权利要求1所述的微孔细胞培养载片，其特征在于，所述载玻片的长宽为25.4×76.2mm，厚度为1.8～5.0mm。
6.如权利要求5所述的微孔细胞培养载片，其特征在于，所述载玻片的厚度为1.8～2.2mm。
7.如权利要求1所述的微孔细胞培养载片，其特征在于，所述载玻片采用玻璃或医用无色塑料为材料制成。
8.一种如权利要求1～7中任意一个所述微孔细胞培养载片的使用方法，其特征在于，将各种细胞制成细胞悬液，滴加到各所述的凹孔中，使所述细胞悬液形成液体凸面，30min～1h后细胞贴壁，用70％乙醇或4％多聚甲醛固定细胞；或与已用核素、生物素或荧光染料标记的探针进行杂交，将放射自显影或激光共聚焦显微镜检测到的结果输入计算机，用相应的软件，对实验所得的数据、信息进行分析，最后得出结论，同时显示所有凹孔的测试结果。
全文摘要
本发明提供一种微孔细胞培养载片，其是一种特殊的细胞片，由载玻片和凹孔构成，所述载玻片采用玻璃或医用无色塑料为材料制成，该载玻片的长宽可以为25.4×76.2mm，厚度为1.8～5.0mm，由所述载玻片的一侧、向内设置有圆柱形、底平的凹孔，该凹孔并不穿透所述载玻片的另一侧，该凹孔的微孔直径为1～10mm，孔深为0.8～4.0mm，各个凹孔之间的距离为2～10mm，所述凹孔的数目为10～1000个，通过该细胞培养载片能够同时对数十个、数百个、乃至近千个细胞样本进行分析，其克服了传统细胞片实验时步骤繁琐、试验速度慢和效率低的缺点，具有小体积、多样本、大信息、可同时分析数百种细胞样本的优点，且制造成本低、检测时可节约时间、载片易拿取、操作安全性高。
文档编号C12M3/00GK1699546SQ20051007312
公开日2005年11月23日 申请日期2005年5月31日 优先权日2005年5月31日
发明者杨世昕, 吴军, 卞修武, 姜军, 杨新华, 陈显春 申请人:中国人民解放军第三军医大学第一附属医院