专利名称：一种双歧杆菌复合增菌培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种双歧杆菌复合增菌培养基，属于益生菌制品生产技术领域。
背景技术：
双歧杆菌(Bifidobacteria)作为典型的人体益生菌，其促进人体健康的功能性已被公认，研究并开发双歧杆菌及其制品已成为现代生物工程技术中的一大热点，在食品和医药领域中占有越来越重要的地位。双歧杆菌对营养要求十分苛刻，其营养成分除须满足一般的水、碳源、氮源、无机盐之外，还需要提供多种双歧因子及还原剂等。目前，实验室常用的双歧杆菌培养基，如改良MRS、TPY、PTYG等，成分复杂，价格昂贵，制作繁琐，给双歧杆菌的研究及其产品的研制开发与工业化生产带来了极大的不便。因此，利用资源优势，寻求来源广泛、经济易得、富含双歧因子的廉价原料，进而优化筛选适合双歧杆菌大量生长的增殖培养基，对于推动双歧杆菌的研究及其活菌制品的研制开发与工业化生产都具有显著的经济和社会意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种原料易得、经济廉价的双歧杆菌复合增菌培养基，实现了双歧杆菌的工业化规模培养。
本发明的构思是这样的。发明人在经过多年探索以及大量试验研究的基础上，首先确定了以廉价易得的中国主要蔬菜品种—番茄为主要原料的番茄汁基础培养基及其制备工艺，并以从健康人体中自行分离选育出的2株高活力双歧杆菌(两歧双歧杆菌Bbm和长双歧杆菌Blm)为试验菌株，研究了在番茄汁基础培养基中添加单一营养因子对双歧杆菌细胞生长量的影响，进一步利用正交试验优化筛选出双歧杆菌的番茄汁复合增菌培养基。具体地，本发明的双歧杆菌复合增菌培养基的组成表示为番茄汁基础培养基∶胰蛋白胨∶牛肉浸膏∶酵母膏∶玉米浆∶磷酸氢二钾＝100mL∶0.1-1.2g∶0.1-1.2g∶0.1-1.0g∶0.1-1.0g∶0.2g，其中的番茄汁基础培养基由纯番茄汁和水以1∶4比例混合而成。
利用本发明的番茄汁复合增菌培养基进行了以下实验两歧双歧杆菌Bbm和长双歧杆菌Blm经过改良MRS液体培养基活化后，以0.1％接种量接入番茄汁复合增菌培养基中，37℃培养12h，活菌数分别可达4.58×109cfu/mL和3.38×109cfu/mL，与实验室常用的改良MRS培养基的活菌数彼此相当，而成本较改良MRS培养基降低1300元(￥)/吨(t)培养基。
本发明的制备工艺如下(1)番茄汁基础培养基的制备新鲜番茄经过清洗、热烫软化、去皮破碎、榨汁、100目滤布过滤、以料水比1∶4比例稀释，制得番茄汁基础培养基；(2)双歧杆菌复合增菌培养基的制备在番茄汁基础培养基中按量添加胰蛋白胨、牛肉浸膏、酵母膏、玉米浆、磷酸氢二钾，用NaOH调节pH值至6.5～7.0，121℃15min灭菌，冷却即得成品。
本发明取得的技术效果是本发明以番茄为双歧杆菌增菌培养基的主要原料，来源广泛，价格经济；其增菌效果显著、成本低廉；易于浓缩分离菌体细胞，可广泛应用于双歧杆菌的研究及其活菌制剂的研制开发和工业化生产，尤其适合工业化大规模培养双歧杆菌。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明。但并不构成对本发明的限制。
实施例1一、双歧杆菌复合增菌培养基的组成番茄汁基础培养基100mL、胰蛋白胨0.3g、牛肉浸膏0.3g、酵母膏0.3g、玉米浆0.2g、磷酸氢二钾0.2g；二、制备(1)番茄汁基础培养基的制备取新鲜番茄，经过清洗、热烫软化、去皮破碎、榨汁、经100目滤布过滤、按料(番茄汁)水比1∶4(体积比)稀释后制得番茄汁基础培养基；(2)双歧杆菌复合增菌培养基的制备在番茄汁基础培养基中按量添加胰蛋白胨、牛肉浸膏、酵母膏、玉米浆、磷酸氢二钾，用NaOH调节pH值至6.5～7.0，121℃ 15min灭菌，冷却即得双歧杆菌复合增菌培养基成品。
两歧双歧杆菌Bbm经过改良MRS液体培养基活化后，以0.1％接种量接入所制备的双歧杆菌复合增菌培养基中，37℃培养12h，活菌数达到2.911×109cfu/mL。
实施例2一、双歧杆菌复合增菌培养基的组成番茄汁基础培养基100mL、胰蛋白胨0.3g、牛肉浸膏0.9g、酵母膏0.7g、玉米浆0.6g、磷酸氢二钾0.2g；二、制备番茄汁基础培养基的制备以及双歧杆菌复合增菌培养基成品的制备方法与实施例1相同。
两歧双歧杆菌Bbm经过改良MRS液体培养基活化后，以0.1％接种量接入本实施例所制备的双歧杆菌复合增菌培养基中，37℃培养12h，活菌数达到2.612×109cfu/mL。
实施例3一、双歧杆菌复合增菌培养基的组成番茄汁基础培养基100mL、胰蛋白胨0.6g、牛肉浸膏0.3g、酵母膏0.5g、玉米浆0.6g、磷酸氢二钾0.2g；二、制备番茄汁基础培养基的制备以及双歧杆菌复合增菌培养基成品的制备方法与实施例1相同。
两歧双歧杆菌Bbm经过改良MRS液体培养基活化后，以0.1％接种量接入本实施例所得的双歧杆菌复合增菌培养基中，37℃培养12h，活菌数达到1.230×109cfu/mL。
实施例4一、双歧杆菌复合增菌培养基的组成番茄汁基础培养基100mL，胰蛋白胨0.6g、牛肉浸膏0.6g、酵母膏0.7g、玉米浆0.2g、磷酸氢二钾0.2g；二、制备番茄汁基础培养基的制备以及双歧杆菌复合增菌培养基成品的制备方法与实施例1相同。
长双歧杆菌Blm经过改良MRS液体培养基活化后，以0.1％接种量接入本实施例所得的双歧杆菌复合增菌培养基中，37℃培养12h，活菌数达到4.581×109cfu/mL。
实施例5一、双歧杆菌复合增菌培养基的组成番茄汁基础培养基100mL，胰蛋白胨0.9g、牛肉浸膏0.6g、酵母膏0.3g、玉米浆0.6g、磷酸氢二钾0.2g；二、制备番茄汁基础培养基的制备以及双歧杆菌复合增菌培养基成品的制备方法与实施例1相同。
长双歧杆菌Blm经过改良MRS液体培养基活化后，以0.1％接种量接入本实施例所得的双歧杆菌复合增菌培养基中，37℃培养12h，活菌数达到2.432×109cfu/mL。
权利要求
1.一种双歧杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成表示为番茄汁基础培养基∶胰蛋白胨∶牛肉浸膏∶酵母膏∶玉米浆∶磷酸氢二钾＝100mL∶0.1-1.2g.∶0.1-1.2g∶0.1-1.0g∶0.1-1.0g∶0.2g，其中的番茄汁基础培养基由纯番茄汁和水以1∶4比例混合而成。
2.按权利要求1所述的双歧杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成表示为番茄汁基础培养基100mL、胰蛋白胨0.3g、牛肉浸膏0.3g、酵母膏0.3g、玉米浆0.2g、磷酸氢二钾0.2g。
3.按权利要求1所述的双歧杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成表示为番茄汁基础培养基100mL、胰蛋白胨0.3g、牛肉浸膏0.9g、酵母膏0.7g、玉米浆0.6g、磷酸氢二钾0.2g。
4.按权利要求1所述的双歧杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成表示为番茄汁基础培养基100mL、胰蛋白胨0.6g、牛肉浸膏0.3g、酵母膏0.5g、玉米浆0.6g、磷酸氢二钾0.2g。
5.按权利要求1所述的双歧杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成表示为番茄汁基础培养基100mL，胰蛋白胨0.6g、牛肉浸膏0.6g、酵母膏0.7g、玉米浆0.2g、磷酸氢二钾0.2g。
6.按权利要求1所述的双歧杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成表示为番茄汁基础培养基100mL，胰蛋白胨0.9g、牛肉浸膏0.6g、酵母膏0.3g、玉米浆0.6g、磷酸氢二钾0.2g。
全文摘要
本发明公开了一种经济廉价的双歧杆菌复合增菌培养基。其组成表示为番茄汁基础培养基∶胰蛋白胨∶牛肉浸膏∶酵母膏∶玉米浆∶磷酸氢二钾＝100mL∶0.1－1.2g∶0.1－1.2g∶0.1－1.0g∶0.1－1.0g∶0.2g，其中的番茄汁基础培养基由纯番茄汁和水以1∶4比例混合而成。该培养基增菌效果显著，两歧双歧杆菌Bbm和长双歧杆菌Blm在其中的活菌数分别可达4.58×10
文档编号C12N1/20GK1844355SQ20061001269
公开日2006年10月11日 申请日期2006年5月12日 优先权日2006年5月12日
发明者田洪涛, 种克, 孙纪录, 王占武 申请人:河北农业大学