专利名称：一种促进洋桔梗芽诱导和芽伸长的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种培养基，特别是涉及一种促进洋桔梗芽诱导和芽生长的培养基。
背景技术：
洋桔梗(Eustoma grandiflorum Shinn)又名草原龙胆，龙胆科龙胆属观赏植物。其植株妩媚多姿，花形别致可爱，花色典雅明快，是目前国际上十分流行的盆花和切花种类之一。为了迅速繁殖洋桔梗，可以采用洋桔梗体外再生的方法，但是找到更有效地促进洋桔梗体外再生的培养基是亟待解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的是提供一种促进洋桔梗芽诱导的培养基。
本发明的第二个目的是提供一种促进洋桔梗芽伸长的培养基。
本发明的技术方案概述如下一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.8～1.2mg和萘乙酸0.12～0.18mg。
6-苄基腺嘌呤优选为1.0mg，萘乙酸优选为0.15mg。
一种促进洋桔梗芽伸长的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.5mg和赤霉素0.5～0.7mg。
赤霉素优选为0.6mg。
本发明的一种促进洋桔梗芽诱导和芽伸长的培养基，提高了洋桔梗繁殖系数，降低了种苗的生产成本，为其大规模的工厂化生产奠定了理论基础。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤1.0mg和萘乙酸0.15mg。
MS培养基配制在配制1升(1000毫升)MS培养基时，加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钼酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖30克和琼脂7克。
一种促进洋桔梗芽诱导的培养基的配制1升MS培养基加入6-苄基腺嘌呤1.0mg和萘乙酸0.15mg制成。
MS(Marashige and Skoog Basal Salt Mixture)基本盐培养基。
实施例2一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.8mg和萘乙酸0.12mg。
实施例3一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤1.2mg和萘乙酸0.15mg。
实施例4一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤1.0mg和萘乙酸0.18mg。
实施例5一种促进洋桔梗芽伸长的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.5mg和赤霉素0.6mg。
实施例6一种促进洋桔梗芽伸长的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.5mg和赤霉素0.5mg。
实施例7一种促进洋桔梗芽伸长的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.5mg和赤霉素0.7mg。
实验本实验以洋桔梗Deep Blue品种叶片为材料，采取二因素完全随机设计，重点探讨了6-苄基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)对洋桔梗叶片愈伤组织诱导与不定芽分化的影响，系统地进行了以叶片为外植体诱导苗再生的研究，旨在为洋桔梗快繁技术提供理论依据，同时也为下一步开展洋桔梗的遗传转化奠定基础。
1材料与方法1.1材料由洋桔梗(Eustoma grandiflorum Shinn)种子在MS培养基+6-苄基腺嘌呤(6-BA)(0.5mg/ml)的培养基中萌发获得无菌苗，切取无菌苗转入无激素的MS培养基中，以消除原培养基中激素的影响，当苗长出5-6片叶时，将嫩叶剪成0.5×0.5cm的小块作为实验材料。
1.2方法1.2.1培养条件基本培养基为MS培养基，蔗糖3％，琼脂粉0.8％，温度25±2℃，光照强度3000Lx，光照时间16h/d。
1.2.2叶片愈伤组织与不定芽的诱导根据析因分析原理设计了6-BA和萘乙酸(NAA)两种激素12种组合，其中6-BA4个水平，NAA3个水平，共12个处理，每个处理接入30块叶片，重复3次。20天换一次培养基，40天后记录数据，(不定芽分化率＝诱导产生不定芽的叶盘数/每处理接种的叶盘数，愈伤诱导率＝诱导产生愈伤组织的叶盘数/每处理接种的叶盘数，平均不定芽数＝诱导产生的总的不定芽/每处理接种的总的叶盘数)。对不定芽分化率进行反正弦转化后做方差分析。
1.2.3不定芽的伸长当不定芽分化至1.5cm大小时，转入以MS+6-BA(0.5mg/L)为基本培养基，附加有5种不同浓度GA3的培养基中，每个处理接入15个不定芽，做3个重复，20天后观察不定芽促分化的情况。
1.2.4不定芽的生根将叶片诱导产生的高约3cm的不定芽切下，转入以1/2MS培养基为基本培养基，附加不同浓度的NAA或IBA(indole-3-butyric acid，吲哚乙酸)培养基中，每个处理接入10个不定芽，30天后观察生根情况。
1.2.5再生苗的移栽当大部分不定芽的主根长度达到4-5cm，较粗，其上着生大量根毛时敞瓶炼苗5天，移栽到腐殖土与蛭石1∶1的花钵中，20天后检查成活情况。
2结果与分析2.1植物激素对愈伤组织诱导与不定芽分化的影响将叶片放入有不同激素培养基中诱导培养40天后，观察并统计愈伤组织与不定芽诱导情况，结果见表1。
表1 激素浓度对洋桔梗愈伤组织诱导与不定芽分化的影响Table 1.Effects of different hormone concentration on the callus organogenesisand differentation bud of Eustoma grandiflorum Shinn
从表1可以看出，不同种类的植物激素均能诱导洋桔梗叶片产生愈伤组织与不定芽，但愈伤组织与不定芽的诱导率差异较大，我认为不定芽数是6-BA在1～1.5mg/L附加NAA小于0.15mg/L浓度时较高。同时发现当6-BA浓度小于1.5mg/L，NAA小于0.15mg/L时，大部分叶片从切口处产生绿色或淡绿色粒状的愈伤组织，这种愈伤组织生长力旺盛，有利于不定芽的产生。而当6-BA浓度大于1.5mg/L，NAA大于0.15mg/L时，整个叶片肥大变厚，逐渐形成肿状，半透明，呈淡黄色的愈伤组织，这种愈伤组织有玻璃化的趋势，不利于不定芽的产生，而且长时间的培养会导致植物组织的褐化死亡。
对不定芽分化率做反正弦转换后进行方差分析，结果表明6-BA与NAA对不定芽分化率的影响存在极显著性差异，它们二者的互作对不定芽分化率有着显著性差异。
表2 不同激素浓度对不定芽分化率的方差分析Table 2 The analysis of variance for frequency of differentation bud in differenthormone concentration
6-BA与NAA处理组合对洋桔梗不定芽分化的差异显著性测验结果见表3表3 不同激素组合对不定芽分化率差异显著性测验Table 3 The significance test for frequency of differentation bud with differenthormone combinations
由表3可以看出，当6-BA浓度为1.0mg/L，NAA浓度为0.15mg/L，0.1mg/L(组合5，4)时得到了最大分化数，并与其它处理组合存在着显著性差异。而当6-BA浓度为1.0mg/L，NAA浓度为0.15mg/L时，分化率则降至52.2％，可见6-BA与NAA对不定芽的诱导有着一定的互作。在低浓度的6-BA中不定芽较为粗壮，叶片宽大舒展，成对生，节间较长，芽成单株状，容易区分，当6-BA浓度太高时(2.0mg/L)分化数反而下降，且芽的叶片排列紧密，狭小，节间不抽长，成簇生状生长在叶片愈伤组织的表面。本实验中诱导效果最佳的为处理组合5，MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L。该培养基激素组合中的愈伤组织与不定芽诱导的诱导率分别达88.7％，74.5％。每个外植体平均不定芽达6.67个。
2.2赤霉素GA3对不定芽株高生长的影响GA3能使矮生突变型或生理矮生植株的茎生长。从表4以看出，随着GA3浓度的升高，洋桔梗不定芽的增高率增大。适宜浓度的GA3有利于改善不定芽的长势，使枝叶生长，提高单芽质量，但过量的GA3则会使不定芽过分向上徒长，茎节变细，整个植株细长，纤弱，叶片瘦小，严重影响其长势[6]。GA3浓度为0.6mg/L，不定芽茎节粗壮，叶片舒展，长势旺盛。
表4 赤霉素GA3对不定芽株高生长的影响Table 4 Effects of GA3on bud growth
注平均增高率＝(20天后平均株高-转入前平均株高)/转入前平均株高
权利要求
1.一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，其特征是由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.8～1.2mg和萘乙酸0.12～0.18mg。
2.根据权利要求1所述的一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，其特征是所述6-苄基腺嘌呤为1.0mg。
3.根据权利要求1所述的一种促进洋桔梗芽诱导的培养基，其特征是所述萘乙酸为0.15mg。
4.一种促进洋桔梗芽伸长的培养基，其特征由下述组分构成MS培养基1升，6-苄基腺嘌呤0.5mg和赤霉素0.5～0.7mg。
5.根据权利要求4所述的一种促进洋桔梗芽伸长的培养基，其特征是所述赤霉素为0.6mg。
全文摘要
本发明公开一种促进洋桔梗芽诱导和芽伸长的培养基，促进洋桔梗芽诱导的培养基是由下述组分构成MS培养基1升，6－苄基腺嘌呤0.8～1.2mg和萘乙酸0.12～0.18mg；促进洋桔梗芽伸长的培养基，由下述组分构成MS培养基1升，6－苄基腺嘌呤0.5mg和赤霉素0.5～0.7mg，本发明的一种促进洋桔梗芽诱导和芽伸长的培养基的使用，能提高洋桔梗繁殖系数，降低了种苗的生产成本，为其大规模的工厂化生产奠定了理论基础。
文档编号C12N5/04GK1844370SQ20061001348
公开日2006年10月11日 申请日期2006年4月19日 优先权日2006年4月19日
发明者王罡, 季静, 黄彬城 申请人:天津大学