专利名称：一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂及制备方法,尤其涉及一种 利用枯草芽孢杆菌和两种乳酸菌生产饲料用多肽制剂及制备方法，在饲养动物中 添加，可提高动物的免疫能力，促进养殖动物消化吸收功能，提高动物应激性， 属于农业生物制品技术领域。
背景技术：
蛋白质是动物体细胞的结构和功能的基础物质，目前我们饲料中的蛋白有大 豆蛋白和动物蛋白两种，主要是通过动物消化道消化液作用后在小肠壁上以氨基 酸形式被动物体利用。现代生物代谢实验证明，肠道吸收短肽、多肽的速度比同 一组成的游离氨基酸快，大豆多肽具有溶解性好、低黏度、抗凝胶形成等物理特 性，尤其重要的是，大豆多肽具有免疫调节、恢复疲劳、增强肌肉力量、降血压、 降血脂、降胆固醇等特殊的生理活动功能。作为一种新型的功能因子，大豆多肽 在营养疗效食品、功能食品、动物营养、医药保健等领域具有广泛的应用价值， 在动物营养方面，多肽、短肽已成为动物营养学研究的热点。
目前，我国的大豆蛋白生产主要以酶解法制备为主，酶解生产具有成本低、 纯度高的特点，但这在饲料行业中并不适用，因为其控制条件要求高，设备投入 大，同时，下游技术中提纯步骤多，延长了生产周期和生产成本。而动物蛋白营 养需求并不专一，其纯度要求并不高。'
类似的一项国内多肽饲料添加剂专利，其专利号为97106988.3，题为"中 草药复合多肽饲料添加剂及其制作方法"，其制作方法为动物骨头—分选—蒸煮 —混合液—备用贮槽—混合液分离—多肽溶液—复合—过滤—干燥—产品。该添 加剂利于畜禽的消化吸收，可防病治病，改善畜禽产品的品质。其生产过程仅利 用物理的方法提取动物原料中的多肽，有一定的安全隐患，同时采用药物原料为 组分，其应用范围不广。 发明内容本发明的目的提供一种生产成本低、周期快，养殖后动物吸收快、日增重提 高，免疫力增强，应激性提高，养殖效果作用明显的微生物发酵制作饲料用多肽 制剂及制备方法。
为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种微生物发酵制作饲料用多肽
制剂，其特征在于，由以下重量百分比原料组成枯草芽孢杆菌40—55、植物 乳杆菌25—35、干酪乳杆菌10—35。
一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂的制备方法，其特征在于，生产菌种通
过微波诱导和射线诱导相结合，筛选产量高、产酶量大的生产菌种，生产工艺采 用液体单独培养和固体复合培养技术,培养基中添加产物促进剂,其生产工艺为
第一步发酵菌株选育
a. 菌株传代采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳
杆菌、干酪乳杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，选育生长速度快、
菌落特征明显的菌种，在o'c—4t:温度下保存菌种；
b. 菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌用0.9%的生理盐水稀释至10 一s—10—'，在微波炉中用低火处理菌悬液30S—50S，利用血球计数法计 数，将处理后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在30—401C温度下 倒置培养48小时，选育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比值大于 0.8的菌落，接种至营养琼脂试管中保存；
将干酪乳杆菌、植物乳杆菌和微波处理后的枯草芽孢杆菌分别稀释 至10—5—10—7,干酪乳杆菌、植物乳杆菌的悬浮液在40—50X:温度下水 浴5min，在30cm处用功率为.15—20W、波长为260nm的紫外灯处理10 —30分钟，处理后的菌悬液在营养琼脂平板中在30—40'C温度下倒置 培养48小时，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速 度；
C、生产菌种的制作将筛选出的枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌 分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35—40X:温度下培养 45—50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放 入2—6"C的冰箱中保存；
第二步有益菌株的液体培养
a. 按以下重量百分比称取各菌种枯草芽孢杆菌40—55、植物乳杆菌25— 35、干酪乳杆菌10—35;
b. 乳酸菌的液体培养将称取的植物乳杆菌和干酪乳杆菌混合在一起进行复
合培养将植物乳杆菌和干酪乳杆菌的混合菌苔按l: 25 — 30的比例接种 于120—130'C、 30—45min高温灭菌的液体培养基中，在发酵fiH^搅拌 30min,其转速为220—240r/min，搅拌均匀后放入消毒后塑料桶中静置5 一7天，静置过程中每天测定Ph值并释放产出的气体；发酵过程中抽样 3次，显微镜下检测菌体生长情况和测定Ph值，当活菌总数达到20亿/ml 浓度和Ph值达到3. 0-4. 0时停止发酵；
c. 枯草芽孢杆菌的液体培养将称去的枯草芽孢杆菌按l: 25—30的比例接 种于120—130'C、 30—45min高温灭菌的液体培养基中，在培养基中添加 0.1%-0.2%的吐温(Tween)作产物促进剂，发酵时通气量维持在1: 1， 发酵时间24—35小时；
第三步菌种的固体扩大培养
a. 将步骤2复合培养的菌液混合后按1: 25—30的比例接入120—13(TC、 30—45min高温灭菌的固体扩大培养基中，在培养基中添加0.05% — 0. 2%的植酸质作产物促进剂，搅拌30—45min至均匀，倒入消毒双层饲 料袋中密封发酵，温度30—35'C,时间8-10天；
b、 发酵过程中取样三次，测定水分和Ph值，发酵结束后取样，测定水分为 35-40% 、 Ph值为4.5—6.0;.
第四步粉碎添加载体
a. 干燥:将步骤3发酵完全的产品按时间先后放入培养箱干燥，温度控制 在40—45iC,时间14—16小时，干燥完成的物料水份控制在《12%;
b. 添加载体将干燥后的产品按1: 0.02-0.03的比例添加载体，倒入搅 拌机中搅拌均匀，然后转入粉碎机进行粉碎，物料温度控制在45'C以 下，粉碎后的物料过50目筛网，筛后粗料重新粉碎；
c. 过筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库
有序堆放；取样检测，主要参数水份《12%、活菌数20—30亿/g、总蛋白量
>68%;物理性状深黄色粉末状固体。
所述的步骤2液体培养基为无菌水再加豆粕粉、大豆粉、硫酸铵、玉米淀粉、 糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、无菌水的至少三种混合物，其重量百 分比为豆粕粉2—6、大豆粉l一3、硫酸铵0—0.8、玉米淀粉1—8、糖蜜8—20、 磷酸二氢钾0—1、磷酸二氢钠0—2、硫酸镁0—1、无菌水60—87。
所述的步骤3的固体扩大培养基为无菌水、植酸质、再加豆粕粉、大豆粉、 糖蜜、玉米粉、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、尿素中的至少四种混合物组 成，其重量百分比为豆粕20—25、大豆粉25—30、糖蜜8—12、玉米粉8—10、、 磷酸二氢钾0. 5—1、磷酸二氢钠1—2、硫酸镁0. 4—1、尿素l一2、无菌水16. 7 —36。
所述的载体由沸石粉、碳酸钙组成，其重量百分比为沸石粉40—50、碳酸 钙50—60。
本发明提供的微生物发酵生产大豆蛋白，可利用目前饲料行业中主要的蛋白 来源大豆及豆粕，在一般的发酵设备中生产，在产生大豆多肽功能因子的同时, 保留发酵过程中多种代谢酶、维生素、抗氧化肽聚糖等发酵产物，通过在饲养动 物的饲料中添加，可显著提高养殖动物免疫能力和消化吸收能力，提高养殖动物 的应激性，同时有很好的适口性，能同时提高动物的日采食量。
利用枯草芽孢杆菌发酵大豆在日本有较早的应用，在日本风靡一时的营养保
健食品——纳豆，就是利用枯草芽孢杆菌发酵而来，不过由于菌种未经过专门的 诱导，其酶解效果差，对大豆蛋白利用较低。本发明利用微波照射技术诱导枯草 芽孢杆菌，它的特点是设备要求简单、无需专门的操作空间，同时结合紫外线诱 导，能使得到高产酶能力的优秀菌株的得率大大提高，与化学诱导、营养缺陷型 选育相比，微波及射线诱导具有设备简单、操作方便、诱变周期短的特点，可以 在有限的时间内选育更多的优秀菌株。
乳酸菌对饲料原料发酵的效果早己被词料界所接受，但其热敏感度高，如何 在饲料制粒中防治失活是一个难题，本发明基本解决了这一难题,其主要做法是, 在菌株选育中进行耐高温实验， 一般乳酸菌最适的生长代谢温度是30—37'C,
在45'C左右代谢水平大大降低，而在育种时就进行水浴加热可改变其耐热突变 菌株产生的几率，本发明中就是利用多次水浴加热，筛选耐髙温的乳酸菌种，可 有效改变在饲料制粒中菌种失活的现象。同时由于本发明产品主要利用的是营养 多肽及各种发酵代谢产物，所以对活菌数量要求不高，所以饲料制粒时的短暂高 温对其效果影响不大。
在本发明产品的发酵过程中，采用了添加产物促进剂的办法，本产品中的营 养多肽主要由产品菌种产生大量的酸性蛋白酶、中性蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶 分解培养基而来，所以，加入产物促进剂是提高产物产量的一个有效方法，我们 在10多种产酶促进剂中进行了筛选，分别确定了一种液体培养基、 一种固体培 养基的产物促进剂，与未添加者相比，其产物中酶活分别增加15倍和4倍。
由于枯草杆菌是产芽孢菌，后期发酵液体呈碱性，而两种乳酸菌是典型的酸 性培养细菌，所以直接复合培养有很大的难度，所以本发明产品釆用了液体单独 培养，再进行固体驯化复合培养的办法，既保证了菌种活菌数量，又将代谢产物 的保留最大化，保证了产品的应用效果。同时在最终产品中添加载体，保证了菌 种在运输和保存过程中存活时间。
本发明的优点是
1. 菌种选育过程中采用独创的微波诱导和紫外诱导相结合的技术，操作设备简 单，诱导周期短，场地要求低。同时在乳酸菌菌种选育中采用高温水浴，保 证菌种在词料制粒中能大量存活；
2. 采用液体单独髙速培养和固体扩大结合的发酵技术，在保证菌种高速生长的 同时，进行固体驯化培养，既保证.了有益菌种的高速生长，又保证了其代谢 产物完全保留；
3. 在液体培养和固体培养中添加产物促进剂，大大提高发酵过程中酶活和产物 的数量；
4. 产品中的高浓度乳酸能显著提高水产动物的消化吸收功能，同时产生的肽聚 糖增加了水产动物对病原体的免疫能力；
5. 枯草芽孢杆菌和乳酸菌发酵营养丰富的固体培养基，在产生多肽的同时，产 生大量的纤维素酶、半纤维素酶、低聚肽、短肽混合物、抗生素、微量元素
及其它代谢产物，为养殖动物提供最佳的营养生长条件；
6. 采用粮食作物和常用饲料载体作为主要培养基原料，降低了生产成本，同时 使用常用的发酵及生产设备，易于在动物养殖中推广；
7. 本发明的产品采用农业部658公告允许添加的微生物菌种，在养殖动物体内 无有害残留，同时减少了抗生素在养殖中的使用量，是一种安全、绿色的微 生物产品。
具体实施例方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例l 第一步发酵菌株选育
a. 菌株传代采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳 杆菌、干酪乳杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，培养过程中作画线 分离，选育生长速度快、菌落特征明显的菌种，在4'C温度下保存菌种；
b. 菌种的复合诱导将步骤a保存的枯草芽孢杆菌用0.9X的生理盐水稀 释至It)—5,在微波炉中用低火处理菌悬液30S，利用血球计数法计数， 比较处理前后的活菌数量，将存活率较高的处理后的菌悬液在淀粉培养 基的平板上涂布，在35'C温度下倒置培养48小时，选育出培养基中透 明圈直径与菌落直径比值大于O. 8的菌落,接种至营养琼脂试管中保存， 将保存的菌种制作菌悬液，稀释至10—7，在30cm处用功率为15W的紫 外灯(波长为260nm)处理15s，处理后的菌悬液在营养琼脂平板中35 'C倒置培养48h,选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长 速度；
将步骤a中保存的千酪乳杆菌、植物乳杆菌制作菌悬液(其中枯草 芽孢杆菌制作孢子悬浮液)，稀释至10—6，用试管将干酪乳杆菌、植物 乳杆菌的悬浮液在45X:中水浴5niin,在30cm处用功率为15W的紫外灯 (波长为260nm)处理10—30s,处理后的菌悬液在营养琼脂平板中在 35'C温度下倒置培养48h,选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察 菌种生长速度；
C、生产菌种的制作将筛选出的枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌 转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，将酿酒酵母菌转接入酵母裔麦
芽汁琼脂作培养基的茄子瓶中，在35'C温度下培养45小时，待茄子瓶 表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2—6'C的冰箱中进行 保存；
营养琼脂培养基牛肉裔3g、蛋白胨10g、 NaC15g、琼脂15—20g、水 1000ml、 pH7.0-7.2。 121'C灭菌20min; 淀粉培养基蛋白胨10、 NaC15g、牛肉膏5 g、可溶性淀粉2 g、蒸馏 水、琼脂15—20克。121'C灭菌20min; 第二步有益菌株的液体培养
a.按以下重量百分比例称取各菌种枯草芽孢杆菌40、植物乳杆菌25、干 酪乳杆菌35。
b. 乳酸菌的液体培养将称取的植物乳杆菌和干酪乳杆菌按步骤a中比例 混合在一起进行复合培养:将混合菌苔按1:25的比例接种于121'C、30min 高温灭菌的液体培养基中，液体培养基重量百分比为豆粕粉3、大豆粉 1、硫酸铵0. 3、玉米淀粉2、糖蜜10、磷酸二氢钾0. 2、磷酸二氢钠0. 3、 磷酸镁0.2、无菌水83,接种后液体在发酵罐中搅拌30min,其转速为 220r/min,搅拌均匀后放入消毒后塑料桶中静置5—7天，静置过程中每 天测定Ph值并释放产出的气体；发酵过程中抽样3次，显微镜下检测菌 体生长情况和测定Ph值，当活菌总数达到20亿/ml浓度和Ph值达到 3. 0-4. 0时停止发酵；
c、 枯草芽孢杆菌的液体培养将称去的枯草芽孢杆菌按l: 25的比例接种 于121'C、 30min髙温灭菌的液体培养基中，培养基重量百分比为豆粕 粉2、大豆粉1. 5、硫酸铵0. 5、玉米淀粉3、糖蜜10、磷酸二氢钾0. 2、 磷酸二氢钠0.3、磷酸镁0.1、无菌水82.4,在发酵中加入0.1%的吐温
(TVeen)为促进产酶的产物促进剂，发酵时通气量维持在1: 1,发酵 时间28小时，待Ph值上升到7.5时停止发酵。 第三步菌种的固体扩大培养
a、 将步骤2复合培养的菌液混合按1: 25的比例接入121'C、 30min髙温灭 菌的固体扩大培养基中，固体扩大培养基重量百分比为豆粕20、大豆 粉25、糖蜜8、玉米粉8、磷酸二氢钾0.5、磷酸二氢钠l、硫酸镁0.4、 尿素l、无菌水36,同时加入植酸质0.05%为产物促进剂，搅拌35min至 均匀，倒入50—70kg消毒双层饲料袋中密封发酵，温度30—35'C，时间 8天；
b、 发酵过程中取样三次，测定水分和Ph值，发酵结束后取样，测定水分为 35-40% 、 Ph值为4. 5—6.0;
第四步粉碎添加载体
a. 干燥:将步骤4发酵完全的产品按时间先后放入培养箱干燥，温度控制 在40'C，时间15小时，干燥完成的物料水份控制在《12%;
b. 添加载体将干燥后的产品按1: 0.02的比例添加载体，其中沸石粉 40%、碳酸钙60%，倒入搅拌机中搅拌均匀，然后转入粉碎机进行粉碎, 物料温度控制在45'C以下，粉碎后的物料过50目筛网，筛后粗料重新 粉碎；
c、 筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有 序堆放；取样检测，主要参数水份《12%、活菌数20—30亿/g、总蛋 白量》68%;物理性状深黄色粉末状固体。
实施例2
第一步发酵菌株选育
a. 菌株传代同实施例l。
b. 菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌用0.9%的生理盐水稀释至10 一7，在微波炉中用低火处理菌悬液45S,利用血球计数法计数，将处理 后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在37t:温度下倒置培养48h, 选育出培养基中透明圏直径与菌落直径的比值(HC值)比较大的菌落， 接种至营养琼脂试管中保存。将保存的菌种稀释至10—7。在30cm处用 功率为20W的紫外灯(波长为260nm)处理25s,处理后的菌悬液在营 养琼脂平板中在35"C温度下倒置培养48h，选出生长速度快的菌落进行
摇瓶实验，观察菌种生长速度。
将保存的干酪乳杆菌、植物乳杆菌株制作菌悬液，稀释至10—7，在
50'C温度下中水浴5min，在30cm处用功率为20W的紫外灯(波长为 260nm)处理25s,处理后的菌悬液在营养琼脂平板中在35'C温度下倒 置培养48h，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速度。 C、同实施例l。 第二步有益菌株的液体培养
a.按以下重量百分比称取各菌种枯草芽孢杆菌55、植物乳杆菌32、干酪 乳杆菌13;
b.乳酸菌的液体培养按步骤a中比例将称取的植物乳杆菌和干酪乳杆菌 混合在一起进行复合培养按l: 30的比例接种于123'C、 45min高温灭 菌的液体培养基中，液体培养基重量百分比为豆粕粉6、大豆粉3、硫 酸铵0.8、玉米淀粉5、糖蜜15、磷酸二氢钾1、磷酸二氢钠1.8、硫酸 镁1、无菌水66.4。其余同实例l;
C.枯草芽孢杆菌的液体培养将称去的枯草芽孢杆菌按1: 30的比例接种
于123'C、 45min高温灭菌的液体培养基中，液体培养基重量百分比为 豆粕粉6、大豆粉3、硫酸铵0. 7、玉米淀粉5、糖蜜14、磷酸二氢钾0.8、 磷酸二氢钠2、硫酸镁1、无菌水67.5，发酵中加入吐温0.2%为产物 促进剂，其余同实施例l; 第三步菌种的固体扩大培养
a、 步骤2复合培养的菌液混合按1: 30的比例接入123'C、 45min高温灭 菌的固体扩大培养基中，固体扩大培养基重量百分比为:豆粕25、大豆 粉30、糖蜜12、玉米粉10、、磷酸二氢钾1、磷酸二氢钠2、硫酸镁0.8、 尿素2、无菌水17.2,在培养基中添加植酸质0.2%为产物促进剂，其 余同实施例l;
b、 同实施例l; 第四步粉碎添加载体
a .同实施例1
b. 添加载体将干燥后的产品按l: 0.03的比例添加载体，其中沸石粉 40%、碳酸钙60%。，其余同实施例l;
c. 同实施例l: 其余同实施例1 一样；
使用时按1-1.5%。比例添加到养殖动物饲料搅拌均匀后投喂，在动物发病期 间应加大使用量，按2-3%。比例添加使用至发病症状消失为止，本产品需在干燥
通风处密闭封存，开封后应尽快使用。本发明产品已在上海市闵行区技术质量监
督局备案并生产销售。在上海市科委领导的关心和支持下，于2002年开始在上 海市南汇区进行青虫下的立体卫生养殖研究，从实验数据可以看出，试验塘各塘的 平均亩产量为147斤，而对照塘的平均产量仅为70斤，试验塘的产量提高了 110%,差异相当明显，佴料系数平均降低了 17.1%。养殖周期中对照塘平均病害 1.8次，而试验塘平均病害0. 5次。且各试验塘青虾的个体比较大，体表光滑、 体色较青、卖价较高，而对照塘各塘青虾体表毛糙、淤积物较多，体色较白，出 售价较低。
权利要求
1. 一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂，其特征在于，由以下重鼉百分比原料组成枯草芽孢杆菌40—55、植物乳杆菌25—35、干酪乳杆菌10—35。
2. —种微生物发酵制作饲料用多肽制剂的制备方法，其特征在于，生产菌种通 过微波诱导和射线诱导相结合，筛选产量高、产酶量大的生产菌种，生产工艺 采用液体单独培养和固体复合培养技术，培养基中添加产物促进剂，其生产工艺为第一步发酵菌株选育a. 菌株传代采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株和植物乳杆菌、干酪乳杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，选育生长速度快、菌落特征明显的菌种，在O'C—4'C温度下保存菌种；b. 菌种的复合诱导将保存的枯草芽孢杆菌用0.9%的生理盐水稀释至10 一5—10—7,在微波炉中用低火处理菌悬液30S—50S,利用血球计数法计 数，将处理后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在30—40C温度下 倒置培养48小时，选育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比值大于 0.8的菌落，接种至营养琼脂试管中保存；将干酪乳杆菌、植物乳杆菌和微波处理后的枯草芽孢杆菌分别稀释 至10—5—10—7，干酪乳杆菌、植物乳杆菌的悬浮液在40—50'C温度下水 浴5迈in,在30cm处用功率为15—20W、波长为260nm的紫外灯处理10 一30分钟，处理后的菌悬液在营养琼脂平板中在30—40'C温度下倒置 培养48小时，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速 度；C、生产菌种的制作将筛选出的枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌 分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35—40'C温度下培养 45—50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放 入2—6X:的冰箱中保存； 第二步有益菌株的液体培养 a. 按以下重量百分比称取各菌种枯草芽孢杆菌40—55、植物乳杆菌25 — 35、千酪乳杆菌10—35;b. 乳酸菌的液体培养将称取的植物乳杆菌和干酪乳杆菌混合在一起进行复合培养将植物乳杆菌和干酪乳杆菌的混合菌苔按l: 25—30的比例接种 于120—130'C、 30—45min高温灭菌的液体培养基中，在发酵罐中搅拌 30min,其转速为220—240r/min，搅拌均匀后放入消毒后塑料桶中静置5 一7天，静置过程中每天测定Ph值并释放产出的气体；发酵过程中抽样 3次，显微镜下检测菌体生长情况和测定Ph值，当活菌总数达到20亿/ral 浓度和Ph值达到3. 0-4. 0时停止发酵；c. 枯草芽孢杆菌的液体培养将称去的枯草芽孢杆菌按l: 25—30的比例接 种于120—130'C、 30—45min高温灭菌的液体培养基中，在培养基中添加 0.1%-0.2%的吐温作产物促进剂，发酵时通气量维持在l: 1，发酵时间24 一35小时；第三步菌种的固体扩大培养a. 将步骤2复合培养的菌液混合后按1: 25—30的比例接入120—130'C、 30—45min高温灭菌的固体扩大培养基中，在培养基中添加0.05%—0.2% 的植酸质作产物促进剂，搅拌30—45min至均匀，倒入消毒双层饲料袋中 密封发酵，温度30—35°C,时间8—IO天；b、 发酵过程中取样三次，测定水分和Ph值，发酵结束后取样，测定水分为 35-40% 、 Ph值为4.5—6.0;第四步粉碎添加载体a. 干燥:将步骤3发酵完全的产品按时间先后放入培养箱干燥，温度控制 在40—45'C，时间14一16小时，干燥完成的物料水份控制在《12%;b. 添加载体将干燥后的产品按1: 0. 02-0. 03的比例添加载体，倒入搅 拌机中搅拌均匀，然后转入粉碎机进行粉碎，物料温度控制在45C以 下，粉碎后的物料过50目筛网，筛后粗料重新粉碎；c. 过筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库 有序堆放；取样检测，主要参数水份《12%、活菌数20—30亿/g、总 蛋白量》68%;物理性状深黄色粉末状固体。
3. 根据权利要求2所述的一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂的制备方法，其 特征在于，所述的步骤2液体培养基为无菌水再加豆粕粉、大豆粉、硫酸铵、玉米淀粉、糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、无菌水的至少三种混合物，其重量百分比为豆粕粉2-6、大豆粉1一3、硫酸铵0—0.8、玉米淀 粉1一8、糖蜜8—20、磷酸二氢钾0—1、磷酸二氢钠0—2、硫酸镁0—1、 无菌水60—87。
4. 根据权利要求2所述的一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂的制备方法，其 特征在于，所述的步骤3的固体扩大培养基为无菌水再加豆粕粉、大豆粉、 糖蜜、玉米粉、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、尿素中的至少四种混合 物组成，其重量百分比为豆粕20—25、大豆粉25—30、糖蜜8—12、玉米 粉8—10、、磷酸二氢钾0.5—1、磷酸二氢钠1一2、硫酸镁0.4—1、尿素l —2、无菌水16.7—36。
5. 根据权利要求2所述的一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂的制备方法，其 特征在于，所述的载体由沸石粉、碳酸钙组成，其重量百分比为沸石粉40 —50、碳酸钙50—60。
全文摘要
本发明涉及一种利用枯草芽孢杆菌和乳酸菌生产微生物多肽制剂的制备方法，其特征在于，生产菌种通过独创的微波诱导和射线诱导相结合，筛选产量高、产酶量大的生产菌种，生产工艺采用液体单独培养和固体复合培养技术，培养基中添加特殊产物促进剂，生产大豆多肽含量高，同时富含肽聚糖、微生物抗氧化物、代谢酶等代谢产物的产品，本发明的优点是生产成本低、周期快，养殖后动物吸收快、日增重提高，免疫力增强，应激性提高，养殖效果作用明显。是一种安全、高效的新型饲料添加剂。
文档编号A23J3/00GK101120724SQ200610029870
公开日2008年2月13日 申请日期2006年8月10日 优先权日2006年8月10日
发明者瀚 江 申请人:上海创博生态工程有限公司