专利名称：用于改善禽畜肠道免疫力的饲料添加剂及工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于改善禽畜肠道微生态平衡，增强禽畜免疫力和提高饲料利用率的益生菌制成的饲料添加剂及制备这种添加剂的工艺。
背景技术：
已有的益生菌的研究也只限于对单个菌种的研究，没有针对益生菌群相互促进、共生，协调促进改善禽畜肠道免疫力，也没有协调促进改善禽畜肠道免疫力的益生菌群饲料添加剂及工艺。
发明内容
本发明就是要解决如何利用益生菌群协调促进改善禽畜肠道免疫力的问题，主要是利用从动物体内分离出具有生理作用的四种益生菌菌株经发酵分离菌体、干燥经合理组方混合成益生菌饲料添加剂，同时提供一种益生菌饲料添加剂的的制造工艺。
本发明的益生菌饲料添加剂，按重量称取蜡样芽胞杆菌菌粉5-15份，干酪乳杆菌菌粉5-15份，屎肠球菌5-15份，酿酒酵母粉2000-3000份，混合而成。还可以外加玉米粉或麦麸粉10000份-20000份。按以上配方制成的益生菌添加剂，每克含有益生菌数200-500亿/g。添加剂与饲料比为1∶1000。即每kg益生菌添加剂可配制1000-2000kg饲料(0.2-0.5亿/g)。
本发明的益生菌饲料添加剂的的制造工艺。按重量称取蜡样芽胞杆菌菌粉5-15份，干酪乳杆菌菌粉5-15份，屎肠球菌5-15份，酿酒酵母粉2000-3000份，玉米粉或麦麸粉10000-20000份。按以上配方制成的益生菌添加剂。每克含有益生菌数200-500亿/g。添加剂与饲料比为1∶1000。即每kg益生康添加剂可配制1000-2000kg饲料(0.2-0.5亿/g)。其中，单一菌粉制备工艺如下(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入2-4倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2-4小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉；(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25-40％的菌体加入含有重量3-5％的谷氨酸钠和5-15％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉；(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.1-0.5％Na2HPO4、0.1-0.5％KH2PO4的培养液中经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25-40％的菌体加入含有3-5％的谷氨酸钠、5-15％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉；(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入2-4倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2-4小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
本发明的优点4种菌分别定植于肠道上中下部位，可以抑制整个肠道中的有害菌的繁殖和入侵，清除肠道各部有害物质，抵抗感染，维护消化道菌群平衡。各菌种在肠道不同部位组成一个在不同条件下都能生长，作用快而持久的联合菌群，在整个肠道粘膜表面形成一道生物屏障，防止致病菌条件致病菌的生长繁殖，清除内毒素。4种菌联合使用，各菌种的生长特点和功能不同，有共性也有特异性，多菌种协同作用可以使其发挥到最佳，最大限度适宜各类宿主动物。本发明所述的四种益生菌已通过毒理学和药理学试验研究，证明每一菌株都是安全和无毒副作用的。
我们通过对蜡样芽胞杆菌和干酪乳杆菌及屎肠球菌共生关系进行研究如表1、表2、表3所示，结果表明蜡样芽胞杆菌在两种不同培养液中，一定时间条件下均对干酪乳杆菌和屎肠球菌具有促进生长作用。干酪乳杆菌和屎肠球菌两种菌混合培养时两菌株间相互影响较小。
表1蜡样芽胞杆菌和干酪乳杆菌在不同培养基和培养方式生长情况(X±S，log10n/g，n＝5)
表2蜡样芽胞杆菌和屎肠球菌在不同培养基和培养方式时两菌生长情况(X±S，log10n/g，n＝5)
表3干酪乳杆菌和屎肠球菌在不同培养基和不同培养方式生长情况(X±S，log10n/g，n＝5)
通过合作单位协作我们对本发明所涉及的益生菌菌株单独或联合使用，对种鸡肠内菌群、粪便pH、有害物质氨含量和硫化氢含量、含水量和生产性能进行研究，见表4、表5、表6。结果表明通过对种鸡饲喂5组不同益生菌制剂的动物学试验观察，在鸡肠内有毒物(硫化物、氨)和有机酸(乳酸、乙酸、丁酸、异丁酸)鸡肠内有益菌群(双歧杆菌、乳杆菌)及有害菌群葡萄球菌、肠球菌、肠杆菌、梭菌)、肠内容物水分含量等参数进行比较，结果显示采用4种菌混合制剂比干酪乳杆菌和蜡样芽孢杆菌两菌混合制剂及干酪乳杆菌或蜡样芽孢杆菌单一菌制剂效果好。而对蛋鸡的生产性能方面比较，四菌混合制剂要优于两菌混合制剂和单一菌制剂。4组菌制剂与对照柱之间无显著插在生产和孵化性能方面无显著差异。
表4试验第30天种鸡肠内容物理化指标状况(X±S，n＝6)
注试验分为5组，每组100只鸡，分开饲养。A、B、C、D、为实验组，E组为对照组。在试验第30天分别测定各项指标。A组在饲料中添加0.4亿/g的蜡样芽胞杆菌菌粉；B组在饲料中添加0.4亿/g的干酪乳杆菌菌粉；C组在饲料中添加分别含有0.2亿/g的蜡样芽胞杆菌菌粉和干酪乳杆菌菌粉；D组在饲料中添加分别含有0.1亿/g的蜡样芽胞杆菌菌粉、干酪乳杆菌菌粉、屎肠球菌菌粉和酿酒酵母菌粉；E组饲喂常规饲料。
表5试验第30天种鸡肠内菌群状况
表6试验第30天后种鸡生产性能性能状况
我们分别对蜡样芽孢杆菌、干酪乳杆菌及两种菌混合制剂进行小鼠免疫功能研究，研究结果表明干酪乳杆菌与蜡样芽孢杆菌的混合制剂的免疫调节作用指标分别高于干酪乳杆菌和蜡样芽孢杆菌的单一制剂。结果见表7。
表7几种益生菌制剂对小鼠免疫功能的影响
注试验分为5组，每组10只BALB/c小鼠，口服灌胃，分组给药。A、B、C、D、为实验组，E组为对照组。在试验第15天分别测定各项指标。A组相当于灌胃10亿/kg的蜡样芽胞杆菌菌粉；B组相当于灌胃10亿/kg的干酪乳杆菌菌粉；C组相当于灌胃分别含5亿/kg的蜡样芽胞杆菌菌粉和干酪乳杆菌菌粉；D组相当于灌胃分别含2.5/kg的蜡样芽胞杆菌菌粉、干酪乳杆菌菌粉、屎肠球菌菌粉和酿酒酵母菌粉；E组灌胃10ml/kg生理盐水。
具体实施例方式实施例1 蜡样芽胞杆菌菌粉6g，干酪乳杆菌菌粉10g，屎肠球菌14g，酿酒酵母粉3000g，玉米粉或麦麸粉15kg。按以上配方制成的益生菌添加剂，每克含有益生菌数200-500亿/g。添加剂与饲料比为1∶1000。即每kg益生康添加剂可配制1000-2000kg饲料(0.2-0.5亿/g)。用含此益生菌饲料添加剂喂养仔猪，可提高增重20.5％，提高饲料利用率9.5％，仔猪日增重较对照提高19.5％。制备工艺如下
(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量10％豆芽汁、0.4％葡萄糖、1％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入重4倍的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥4小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉。
(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨、1％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量40％的菌体加入含有重量5％的谷氨酸钠和15％多脂奶粉冻干保护液中，混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉。
(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.1％Na2HPO4、0.1％KH2PO4的培养液中，经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量40％的菌体加入含有5％的谷氨酸钠10％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉。
(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量10％豆芽汁、0.2％葡萄糖、0.5％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入2倍重的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
实施例2 蜡样芽胞杆菌菌粉10g，干酪乳杆菌菌粉5g，屎肠球菌5g，酿酒酵母粉2500g，乳糖或葡萄糖10kg。按以上配方制成的益生菌添加剂，每克含有益生菌数200-500亿/g。以1∶1000比例添加到饮用水中，直接供1-30日龄肉鸡饮用。结果试验组比对照组增重10.4％，生长速度提高5.12％，饲料消耗降低4.87％。制备工艺如下(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量8％豆芽汁、0.2％葡萄糖、0.5％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入2倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉；(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25％的菌体加入含有重量3％的谷氨酸钠和5％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉；(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.3％Na2HPO4、0.3％KH2PO4的培养液中经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25％的菌体加入含有3％的谷氨酸钠、5％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉；(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量5％豆芽汁、0.35％葡萄糖、1％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入2倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
实施例3 蜡样芽胞杆菌菌粉14g，干酪乳杆菌菌粉10g，屎肠球菌10g，酿酒酵母粉3000g，玉米粉或麦麸粉17kg。按以上配方制成的益生菌添加剂，每克含有益生菌数20-50亿/g。直接作为精饲料喂养肉犊牛，经过40天的喂养犊牛日增中提高25.7％，饲料利用率提高23.1％，发病率下降21.7％。制备工艺如下(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量5％豆芽汁、0.35％葡萄糖、1.5％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入3倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥3小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉；(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量30％的菌体加入含有重量4％的谷氨酸钠和10％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉；(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.3％Na2HPO4、0.3％KH2PO4的培养液中经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25-40％的菌体加入含有4％的谷氨酸钠、10％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉；(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量8％豆芽汁、0.35％葡萄糖、1％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入3倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥3小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
实施例4 蜡样芽胞杆菌菌粉12g，干酪乳杆菌菌粉15g，屎肠球菌15g，酿酒酵母粉3000g，玉米粉或麦麸粉20kg。按以上配方制成的益生菌添加剂，每克含有益生菌数200-500亿/g。用含此益生菌饲料添加剂喂养家兔，按日梁1％、1.5％、2％添加此制剂，饲料转化率分别提高5％、6.1％、6.6％，发病率和死亡率明显低于对照组。植被工艺如下(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量6％豆芽汁、0.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入3倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥3.5小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉；(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重3％葡萄糖、1.5％蛋白胨、1％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量40％的菌体加入含有重量5％的谷氨酸钠和14％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉；(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有3％葡萄糖、1.5％蛋白胨、1％酵母浸膏、0.5％Na2HPO4、0.5％KH2PO4的培养液中经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量40％的菌体加入含有5％的谷氨酸钠、15％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉；(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量10％豆芽汁、0.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入4倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥4小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
实施例5 蜡样芽胞杆菌菌粉5g，干酪乳杆菌菌粉5g，屎肠球菌14g，酿酒酵母粉2100g，玉米粉或麦麸粉15kg。按以上配方制成的益生菌添加剂，每克含有益生菌数200-500亿/g。用含此益生菌1％喷与饵料上，用于对虾生产上，试验组比对照组增种率提高16％，饲料转化率提高21.4％。成活率提高7.2％。制备工艺如下(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量7％豆芽汁、0.4％葡萄糖、0.8％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入2.5倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2.5小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉；(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量2％葡萄糖、1.2％蛋白胨、0.7％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量35％的菌体加入含有重量3％的谷氨酸钠和8％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉；(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有2％葡萄糖、0.8％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.4％Na2HPO4、0.4％KH2PO4的培养液中经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量30％的菌体加入含有4％的谷氨酸钠、8％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉；(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量8％豆芽汁、0.35％葡萄糖、0.9％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入2.5倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥3小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
权利要求
1.一种用于改善禽畜肠道免疫力的饲料添加剂，其特征在于含有按重量配比的蜡样芽胞杆菌粉5-15份，干酪乳杆菌粉5-15份，屎肠球菌粉5-15份，酿酒酵母菌粉2000-3000份。
2.如权利要求1所说的饲料添加剂，其特征在于还加有玉米粉或麦麸粉10000-20000份。
3.一种用于改善禽畜肠道免疫力的饲料添加剂生产工艺，按重量配比取蜡样芽胞杆菌粉5-15份、干酪乳杆菌粉5-15份、屎肠球菌粉5-15份、酿酒酵母菌粉2000-3000份，菌粉制备工艺如下(1)蜡样芽胞杆菌菌粉的制备蜡样芽胞杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培养基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体加入2-4倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2-4小时后即可得到蜡样芽胞杆菌菌粉；(2)干酪乳杆菌菌粉的制备干酪乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏培养基中经32℃-36℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25-40％的菌体加入含有重量3-5％的谷氨酸钠和5-15％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到干酪乳杆菌菌粉；(3)屎肠球菌菌粉的制备屎肠球菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.1-0.5％Na2HPO4、0.1-0.5％KH2PO4的培养液中经32℃-38℃厌氧发酵后，离心分离出的菌体，将占保护液重量25-40％的菌体加入含有3-5％的谷氨酸钠、5-15％多脂奶粉冻干保护液中混合冷冻干燥后即可得到屎肠球菌菌粉；(4)酿酒酵母菌菌粉的制备酿酒酵母菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培养液基中经32℃-36℃有氧发酵后，离心分离出的菌体，菌体加入2-4倍重量的碳酸钙或麦麸，混合制备成湿颗粒，在40℃-55℃条件下干燥2-4小时后即可得到酿酒酵母菌菌粉。
全文摘要
用于改善禽畜肠道免疫力的饲料添加剂及工艺，按重量配比的蜡样芽胞杆菌粉5－15份，干酪乳杆菌粉5－15份，屎肠球菌粉5－15份，酿酒酵母菌粉2000－3000份混合而成；上述4种菌经30－45℃分别发酵，24hr－36hr，离心分离菌体，50℃下干燥或冷冻干燥获得干燥菌粉，按比例添加到玉米粉或麦麸粉中，喂养禽畜能调节肠内菌群，提高饲料利用率，增重效果明显，增强动物免疫力。
文档编号C12N1/00GK101028037SQ20061004595
公开日2007年9月5日 申请日期2006年3月1日 优先权日2006年3月1日
发明者康白, 袁杰利 申请人:大连森佰澳科技有限公司