专利名称：一种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法
技术领域：
本发明涉及木本植物组织培养技术，主要是一种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法。
背景技术：
欧洲野黑樱桃木(Wild Cherry、Prunus Avium wildstar)，是在英国发现的野生黑樱桃木中培育成的栽培品种，该树种是樱属中唯一具有商业用材价值的树种。该树种为高大乔木，树高最高可达39米，最大胸径为2.5米，树干通直圆满，主枝稀少，主干离地3～6米高无分枝。木材质量高，木材质轻、坚实，纹理直且细密，颜色浅红至浅红褐色，是做高级家具和胶合板贴面的优质用材，经济价值很高，原产地板材价格每立方米1500～2000美元。它还广泛应用于飞机、船舶、军工家具、雕刻、地板等。除作为优质用材外，樱桃木也可作观赏树种、药用树种，具有多方面的高级商业利用价值。在英国直到现在几乎所有的阔叶树都是用种子繁殖的，种子实际上是两个亲本杂交的结果，因此它们产生了大量的变异，一些是所希望的，一些是不希望的，所以它们的表型有非常大的差异。
浙江省农科院从英国引进欧洲野黑樱桃木品种，拟通过植物组织培养技术大量繁殖种苗，然后出口欧美国家。同时还可以在国内试种后加以推广。采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖率高，且因为其是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优良性状，近年来在生产上应用越来越广。但是不同的植物利用植物组织培养方法繁殖种苗的难易程度是不同的，特别是木本植物比较难。在欧洲野黑樱桃木的前期组培试验中，也出现了木本植物在组织培养中常出现的一些问题，如外植体接种污染率高、组培苗易玻璃化、黄化，组培苗生根难、移栽成活率低等问题，使其无法实现大规模工厂化生产。
发明内容
本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案。
这种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，按如下步骤进行1)、外植体的选取与灭菌剪取盆栽野黑樱桃木种苗的半木质化嫩枝，切取其顶芽和带腋芽的茎段，经表面灭菌处理后，作为组培用的外植体；2)、诱导培养在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体顶芽和带腋芽的茎段的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后分化丛芽；3)、增殖培养在无菌条件下将丛芽切成单株接入增殖培养基中进行增殖培养，诱导丛芽；4)、生根培养先将生长达2～3厘米的组培苗接种到生根培养基1中培养7天，再转入生根培养基2中培养，诱导其生根；5)、组培苗的驯化与移栽当组培苗生长达3～5厘米以上时，先进行组培苗的驯化，再移栽入泥炭、珍珠岩、蛭石的混合基质中。
本发明采用的组培快繁培养基，由基本培养基及不同组培阶段的培养基组成，基本培养基与各阶段培养基添加物含量为1)、诱导培养和增殖培养的基本培养基选用MS+蔗糖或白糖30g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；生根培养的基本培养基选用1/2MS+蔗糖或白糖为20g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；2)、诱导培养基MS+BA0.25～1.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L；3)、增殖培养基MS+BA0.25～1.0mg/L+NAA0.005～0.05mg/L；4)、生根培养基11/2MS+IBA1～3mg/L，生根培养基21/2MS。
本发明采用的组培快繁培养基，由基本培养基及不同组培阶段的培养基组成，基本培养基与各阶段培养基添加物含量为1)、诱导培养和增殖培养的基本培养基选用MS+白糖30g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；生根培养的基本培养基选用1/2MS+白糖为20g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；2)、诱导培养基MS+BA0.75mg/L+NAA0.1mg/L；3)、增殖培养基MS+BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L；4)、生根培养基11/2MS+IBA2mg/L，生根培养基21/2MS。
本发明采用的各组培阶段的培养条件是在诱导培养和增殖培养阶段温度22±2℃、光照12h/d、光照强度为3000lx左右；在生根培养阶段温度20±2℃、光照8h/d、光照强度为2000lx左右。
本发明采用的移栽基质由泥炭∶珍珠岩∶蛭石按体积比2∶1∶1配制而成。
本发明有益的效果是
1)、建立了欧洲野黑樱桃木组培快繁技术体系，采用了适合欧洲野黑樱桃木组培快繁的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，月增殖率可达3倍，组培苗无玻璃化和黄化，生根率达100％，组培苗生长健壮、叶色浓绿，移栽成活率可达95％，从而解决了外植体灭菌不易、组培苗易玻璃化、黄化、生根移栽难等关键技术，为工厂化生产奠定了基础。
2)、提出的组织培养快速繁殖方法得到的欧洲野黑樱桃木组培苗，遗传性状一致，克服了常规种子繁殖后代易变异、扦插繁殖系数低的缺点。
3)、利用植物组织培养技术繁殖的欧洲野黑樱桃木组培苗不仅可出口创汇，还可在国内推广应用，将会产生良好的经济社会生态效益。
4)、申请了发明专利保护，不仅有助于改变产品在国际市场上的形象，而且还有助于提高出口产品的市场占有率。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步介绍但本发明的内容并不局限于此。
实施例1这种欧洲野黑樱桃木组培快繁方法，具体步骤如下1)、外植体的选取与灭菌剪取盆栽野黑樱桃木种苗的半木质化嫩枝，切取其顶芽和带腋芽的茎段，外植体经75％酒精浸泡0.5～1.0min，用体积比为2％的次氯酸钠水溶液灭菌10～15min，然后无菌水冲洗3～5次。经表面灭菌处理后，作为组培用的外植体。
2)、诱导培养在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体顶芽和带腋芽的茎段的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在MS+BA0.25～1.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L的诱导培养基上，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后分化出丛芽。
3)、增殖培养再在无菌条件下将丛芽切成单株接入MS+BA0.25～1.0mg/L+NAA0.005～0.05mg/L的增殖培养基中进行增殖培养，诱导出丛芽。每6周继代增殖培养1次。
4)、生根培养先将生长达2～3厘米的组培苗接种到1/2MS+IBA1～3mg/L的生根培养基1中培养7天，再转入1/2MS无激素生根培养基2中培养，诱导其生根。
5)、组培苗的驯化与移栽当组培苗生长达3～5厘米以上时，先进行组培苗的驯化，再移栽入泥炭、珍珠岩、蛭石的体积比为2∶1∶1基质的营养钵中。
各组培阶段的培养条件是在诱导培养和增殖培养阶段温度22±2℃、光照12h/d、光照强度为3000lx左右；在生根培养阶段温度20±2℃、光照8h/d、光照强度为2000lx左右。
实施例2这种欧洲野黑樱桃木组培快繁方法，具体步骤如下1)、外植体的选取与灭菌剪取盆栽野黑樱桃木种苗的半木质化嫩枝，切取其顶芽和带腋芽的茎段，外植体经75％酒精浸泡0.5～1.0min，用体积比为2％的次氯酸钠水溶液灭菌10～15min，然后无菌水冲洗3～5次。经表面灭菌处理，作为组培用的外植体。
2)、诱导培养在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体顶芽和带腋芽的茎段的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在MS+BA0.75mg/L+NAA0.1mg/L的诱导培养基上，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后分化出丛芽。
3)、增殖培养再在无菌条件下将丛芽切成单株接入MS+BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L的增殖培养基中进行增殖培养，诱导出丛芽。每6周继代增殖培养1次。
4)、生根培养先将生长达2～3厘米的组培苗接种到1/2MS+IBA2mg/L的生根培养基1中培养7天，再转入1/2MS无激素生根培养基2中培养，诱导其生根。
5)、组培苗的驯化与移栽当组培苗生长达3～5厘米以上时，先进行组培苗的驯化，再移栽入泥炭、珍珠岩、蛭石的体积比为2∶1∶1基质的营养钵中。
各组培阶段的培养条件是在诱导培养和增殖培养阶段温度22±2℃、光照12h/d、光照强度为3000lx左右；在生根培养阶段温度20±2℃、光照8h/d、光照强度为2000lx左右。
权利要求
1.一种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，其特征在于1.1)、外植体的选取与灭菌剪取盆栽野黑樱桃木种苗的半木质化嫩枝，切取其顶芽和带腋芽的茎段，经表面灭菌处理后，作为组培用的外植体；1.2)、诱导培养在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体顶芽和带腋芽的茎段的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后分化丛芽；1.3)、增殖培养在无菌条件下将丛芽切成单株接入增殖培养基中进行增殖培养，诱导丛芽；1.4)、生根培养先将生长达2～3厘米的组培苗接种到生根培养基1中培养7天，再转入生根培养基2中培养，诱导其生根；1.5)、组培苗的驯化与移栽当组培苗生长达3～5厘米以上时，先进行组培苗的驯化，再移栽入泥炭、珍珠岩、蛭石的混合基质中。
2.根据权利要求1所述的欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，其特征在于，所述的组培快繁的培养基，包括基本培养基及不同组培阶段的培养基，基本培养基与各阶段培养基添加物含量为2.1)、诱导培养和增殖培养的基本培养基选用MS+蔗糖或白糖30g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；生根培养的基本培养基选用1/2MS+蔗糖或白糖为20g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；2.2)、诱导培养基MS+BA0.25～1.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L；2.3)、增殖培养基MS+BA0.25～1.0mg/L+NAA0.005～0.05mg/L；2.4)、生根培养基11/2MS+IBA1～3mg/L，生根培养基21/2MS。
3.根据权利要求2所述的一种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，其特征在于，所述的组培快繁的培养基，包括基本培养基及不同组培阶段的培养基，基本培养基与各阶段培养基添加物含量为3.1)、诱导培养和增殖培养的基本培养基选用MS+白糖30g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；生根培养的基本培养基选用1/2MS+白糖为20g/L+琼脂为7g/L，pH5.8；3.2)、诱导培养基MS+BA0.75mg/L+NAA0.1mg/L；3.3)、增殖培养基MS+BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L；3.4)、生根培养基11/2MS+IBA2mg/L，生根培养基21/2MS。
4.根据权利要求1或2或3所述的欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，其特征在于，所述的各组培阶段的培养条件是在诱导培养和增殖培养阶段温度22±2℃、光照12h/d、光照强度为3000lx左右；在生根培养阶段温度20±2℃、光照8h/d、光照强度为2000lx左右。
5.根据权利要求1所述的欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，其特征在于，所述的移栽基质由泥炭∶珍珠岩∶蛭石按体积比2∶1∶1配制而成。
全文摘要
本发明涉及一种欧洲野黑樱桃木组培快繁的方法，按如下步骤进行1)外植体的选取与灭菌；2)诱导培养将经表面灭菌后的外植体顶芽和带腋芽的茎段的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后分化丛芽；3)增殖培养将丛芽切成单株接入增殖培养基中进行增殖培养，诱导丛芽；4)生根培养接种到生根培养基1中培养，再转入生根培养基2中培养，诱导其生根；5)组培苗的驯化与移栽先进行组培苗的驯化，再移栽入泥炭、珍珠岩、蛭石的混合基质中。本发明有益的效果是月增殖率可达3倍，组培苗无玻璃化和黄化，生根率达100％，组培苗生长健壮、叶色浓绿，移栽成活率可达95％。
文档编号C12N5/04GK101027975SQ20071006784
公开日2007年9月5日 申请日期2007年3月29日 优先权日2007年3月29日
发明者徐刚, 汪一婷, 吕永平, 牟豪杰, 陈剑平 申请人:浙江省农业科学院