专利名称：虫草菇工业化生产方法
技术领域：
本发明属于生物工程领域，具体涉及虫草菇工业化生产技术。
背景技术：
虫草菇是用蛹虫草菌种培养出来的菌丝体与子实体的结合体，菌丝体部份 似菇的菌盖，其上长出的子实体与蛹虫草子实体相同，故得名虫草菇。实际上 它是一种新型虫草，据中国科学院西北高原生物研究所分析测试部分析资料证
明，虫草菇的虫草素(3'—DeoqyadenDsine)、虫草多糖，SOD酶的含量高于冬 虫夏草而与蛹虫草近同，其中重要药用成分一虫草素的含量达13.13g/kg是冬虫 夏草的5倍以上。营养成分中，蛋白质、糖、脂肪含量与冬虫夏草近同，但氨 基酸的含量显著高于冬虫夏草，其中苏氨酸、赖氨酸、色氨酸等是冬虫夏草的 6.2-11.6倍，虫草菇的生产技术难度要小于冬虫夏草和蛹虫草以及它们的菌丝培 养，生产原料也较易得，因而，虫草菇是极具开发前景的珍稀生物资源，鉴于 目前冬虫夏草野生资源近于枯竭，人工栽培技术尚未过关，菌丝体的生产技术 复杂，设备庞大，耗水耗能多，蛹虫草虽能人工栽培，但其栽培技术要求较严 格，特别是温光条件不易控制，规模化生产尚有较大难度，主要问题是它的生 物学效率低，难以获得理想的经济效益。申请号为99123028.0的发明专利说明 书介绍的"冬虫夏草菌片的培育方法"，叙述了冬虫夏草菌片培育的培养基配方 和用于小规模的培育步骤，其成品上没有虫草子实体，缺少真正虫草燕的标志。 申请号为02108389.4的发明专利申请公开说明书，介绍了 "药食兼用型虫草菌 片"的培育方法，包括该虫草菌片的培养基配方和工艺步骤，与上述专利近同， 由北京吉蕈园科技有限公司经销的VCD光盘，录制了曾树生讲述的虫草菇的培育方法，经实验证明该方法培养不出虫草菇来，上述已有的技术方法远不能满 足虫草菇工业化生产的需要。由于人们生活水平的提高，对虫草的需求量越来 越大，供求予盾日益尖锐，冬虫夏草贵比黄金。以虫草为加工原料的企业单位， 面临着原料危机，所以开展虫草菇的工业化生产，为人们的饮食和医药、保健、 食品等相关行业提供虫草的替代品-虫草菇，是生活和生产的迫切需要，将会产 生巨大的社会经济、生态效益。
发明内容
本发明为了解决上述已有技术的不足，为人们的饮食和医药、保健、食品 等相关行业提供虫草的替代品-虫草菇，而提出了一种虫草燕工业化生产方法。
本发明的技术方案是 一种虫草菇工业化生产方法，包括优良菌株，液体菌 种生产、菌种检验与贮藏，虫草菇培养，培养基配方，培养基制备，培养基分 装，液体菌种接种方法，发菌出草管理，采收，干制，该生产方法的步骤如下
a采用优良虫草菇菌株该菌株系以野生蛹虫草为出发菌株，经多次选择分 离培养而成，其主要特征是菌丝贴面生长，健壮有力、转色快、易出草、子实 体粗壮，子囊壳棒状、金黄色，抗杂抗逆性强，丰产优质，生物学效率100%以 上，适于工业化培养，
b液体菌种生产其培养基配方为马玲薯淀粉3.5~7.5克，葡萄糖15~25 克，蛋白胨1 3克，磷酸二氢钾0.3-0.6克，硫酸镁0.5 1.2克，氯化钠0.5 L6 克，蚕蛹粉0.5-2.5克，自来水！ 000毫升；
c菌种检验(l)生物学检验法，取振荡培养60小时的菌液，于无菌条件下 接种于试管斜面上，置于培养箱25。C下培养48小时后检査菌丝有无污染和生长 情况；(2)形态检査法菌液透明无异味，菌球体积占总菌液的80%，且分散 度好，菌球直径0.5 1毫米；(3)显微镜检查法，检査①细菌，能发生位移的
杆状菌，菌液中有运动现象；②放线菌，菌丝分枝，其内无隔膜，③酵母菌， 园形或卵形较大的细胞，常沉于液体底部；④霉菌，菌丝内有隔膜，在一些隔 膜处产生锁状联合；
d液体菌种贮藏培养好的液体菌种放在保鲜库1 2'C下贮藏10~25天对菌 种质量无明显影响，但要在用前6小时放在20 25'C的温度下苏醒；
e虫草菇培养设备使用箱钵培养器，其结构包括培养箱盖(1)、海棉换气 缝(2)、培养箱体(3)、培养钵(4)，培养钵置于培养箱内，箱体密封性好，设 有海棉换气缝，培养基分装、灭菌、冷却、接种、培养都以整箱运作；
f虫草菇培养基配方马铃薯淀粉9 18克、玉米粉15 25克、大米粉25~45 克、葡萄糖15 30克、白糖10 20克、蛋白质5 15克、蛋白胨12 22克、酵母 膏15 20克，黄豆粉10 15克、VBi20 40毫克、硫酸镁0.5 1.1克，磷酸二氢 钾0.5-2.0克，水1000毫升;
g培养基制备将培养基各种组份分别溶于水中或搅成糊状，汇集搅拌桶内， 充份混匀后制成半固体培养基，分装到培养钵中，放进高压灭菌锅内12rC~125
"C下灭菌50分钟；
h培养基分装,运到灭菌室；
j液体菌种接种,在超净工作台或接种箱无菌条件下，使用连续注射器，将菌液 均匀撒于培养钵料面之上，接种量为培养基的10%;
k发菌出草管理接种后箱钵培养器放在发菌室，弱光、22 26'C下静培20 天，尔后转入出草室，依次进行10 15天确保每天散射光照10小时的转色管理， 10-15天确保5 10'C温差刺激的催蕾管理和20天确保温度20~25°C、湿度 70 80%的出草管理；
l采收历经60 70天的栽培管理，虫草燕与培养基分离而浮在培养基之上，
此时即可打开培养箱，用不锈钢宽型挟子将虫草燕轻轻挟出放在水中冲洗干净， 放在竹编盘中沥干水后放进冷库保鲜储存，
刚采收的鲜虫草菇特征是，呈园形，似菇的菌盖，菇厚1 2厘米，正面子实 体丛生，子实体高5 10厘米，金黄色或桔红色，虫草菇背面呈咖啡色或深咖啡 色，布满曲折蜿延的细小沟梁，像核桃仁一样呈人脑形结构；
m干制采取真空微波法干制，将新采收或保鲜贮藏的虫草菇使用真空微波 干燥机干制，含水率降为5~8%时，进行充氮包装。
本发明的优点是
1、 创新点多，科高技含量较高，机械化程度高，率先为虫草家族的新成员 一虫草菇的规模化、产业化生产提供了较为完善的生产工艺，是已有虫草菌片 培育方法所不具备的。
2、 本所选育的虫草菇优良菌株，菌丝健壮、生长迅速、转色快、易出草、 抗杂抗逆、高产优质、适应工业化生产的需求。
3、 自制的振型液体菌种生产设备，即本研究所专利申请技术"一种振荡型 液体菌种生产设备"(专利申请号200720126154.0)，振幅振频可调，实用性强， 抗污染，特制培养瓶每个容积达6.8升，适合规模化生产，节电节水无燥音。
4、 箱钵培养器，用耐高温透明材料制成，培养箱封闭性好，并设有过滤换 气缝，抗污染，箱内留有虫草菇生长空间， 一箱可装18个无盖培养钵，在灌装、 灭菌、冷却、接种、培养等环节都可整箱运作，大大提高工作效率，培养箱可 叠成花墙形进行虫草燕培养，可节省立体培养的设备费用。
5、 虫草菇培养基配方与曾树生的虫草菌片培养基有明显区别，不仅配方的 组份不同，培养料的形态也不同，本发明的培养基的主料如大米、玉米、黄豆、 马玲薯都是粉状的，容易被吸收利用，有利于提高生物学效率，产量较高，出草较多，出草较快，更用利于机械分装。
6、真空微波干制法，能保持虫草新鲜时的形态和营养药用价值，节能降耗， 快速，卫生安全。
以下结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步详细说明。
图1和图2为虫草菇正面特征图。
图3和图4为虫草菇背面特征图。
图5是箱钵培养器结构示意图。
图6是本发明的虫草菇工业化生产方法工艺流程图。
具体实施例方式
参照图1-6所示，本发明的虫草菇工业化生产方法，包括优良菌株，液体菌 种生产、菌种检验与贮藏，虫草菇培养，培养基配方，培养基制备，培养基分 装，液体菌种接种方法，发菌出草管理，采收，干制，该生产方法的步骤如下 a采用优良虫草菇菌株该菌株系以野生蛹虫草为出发菌株，经多次选择分 离培养而成，其主要特征是菌丝贴面生长，健壮有力、转色快、易出草、子实 体粗壮，子囊壳棒状、金黄色，抗杂抗逆性强，丰产优质，生物学效率100%以
上，适于工业化培养，
b液体菌种生产其培养基配方为马玲薯淀粉3.5~7.5克，葡萄糖15~25 克，蛋白胨1 3克，磷酸二氢钾0.3 0.6克，硫酸镁0.5-1.2克，氯化钠0.5~1.6 克，蚕蛹粉0.5 2.5克，自来水1000毫升；
c菌种检验(l)生物学检验法，取振荡培养60小时的菌液，于无菌条件下 接种于试管斜面上，置于培养箱25t:下培养48小时后检査菌丝有无污染和生长 情况；(2)形态检査法菌液透明无异味，菌球体积占总菌液的80%，且分散 度好，菌球直径0.5 1毫米；(3)显微镜检査法，检查①细菌，能发生位移的 杆状菌，菌液中有运动现象；②放线菌，菌丝分枝，其内无隔膜，③酵母菌， 园形或卵形较大的细胞，常沉于液体底部；④霉菌，菌丝内有隔膜，在一些隔 膜处产生锁状联合；
d液体菌种贮藏培养好的液体菌种放在保鲜库l-2t:下贮藏10~25天对菌 种质量无明显影响，但要在用前6小时放在20 25'C的温度下苏醒；
e虫草菇培养设备使用箱钵培养器，参见图5所示，其结构包括培养箱盖 (1)、海棉换气缝(2)、培养箱体(3)、培养钵(4)，培养钵置于培养箱内,箱 体密封性好，设有海棉换气缝，培养基分装、灭菌、冷却、接种、培养都以整 箱运作；
f虫草菇培养基配方^铃薯淀粉9 18克、玉米粉15 25克、大米粉25~45 克、葡萄糖15-30克、白糖10 20克、蛋白质5 15克、蛋白胨12 22克、酵母 膏15~20克，黄豆粉10-15克、VB! 20~40毫克、硫酸镁0.5-1.1克，磷酸二氢 钾0.5-2.0克，水1000毫升；
g培养基制备将培养基各种组份分别溶于水中或搅成糊状，汇集搅拌桶内， 充份混匀后制成半固体培养基；
h培养基分装,半固体培养基定量分装到箱钵培养器中，每个培养钵内的培养
基后度为3cm,分装完毕后将箱钵培养器运到灭菌室，放进高压灭菌锅内 125"C下灭菌50分钟；
j液体菌种接种，在超净工作台或接种箱无菌条件下，使用连续注射器，将菌液 均匀撒于培养钵料面之上，接种量为培养基的10%;
k发菌出草管理接种后箱钵培养器放在发菌室，弱光、22 26'C下静培20 天，尔后转入出草室，依次进行10~15天确保每天散射光照10小时的转色管理，
10~15天确保5-l(TC温差剌激的催蕾管理和20天确保温度20~25°C、湿度 70~80°/。的出草管理；
l采收历经60 70天的栽培管理，虫草燕与培养基分离而浮在培养基之上， 此时即可打开培养箱，用不锈钢宽型挟子将虫草菇轻轻挟出放在水中冲洗干净， 放在竹编盘中沥干水后放进冷库保鲜储存，
刚采收的鲜虫草菇特征是，呈园形，似菇的菌盖，菇厚1 2厘米，正面子实 体丛生，子实体高5 10厘米，桔红色或金黄色，虫草燕背面呈咖啡色或深咖啡 色，布满曲折蜿延的细小沟梁，像核桃仁一样呈人脑形结构；
m干制采取真空微波法干制，将新采收或保鲜贮藏的虫草燕使用真空微波 干燥机干制，含水率降为5~8%时，进行充氮包装。
实施例
取马玲薯淀粉25克，葡萄糖100克，蛋白胨10克，磷酸二氢钾2.5克，硫 酸镁5克，氯化纳5克，蚕蛹粉5克，VBilOO毫克，将上述原料溶于5000毫 升煮沸的自来水中，搅匀后，分装于25个500毫升的盐水瓶，每瓶装液200毫 升，用棉塞封口后放入高压灭菌锅于121 125-C下灭菌30分钟，取出冷却至30 °。以下，在无菌条件下，每瓶接入2块0.5平方厘米的虫草菇试管母种，放进培 养箱于25'C下静培48小时，经检验无污染、发菌良好的菌瓶放到振荡培养器上 保持23 25X:温度，每分钟振荡120-150次，振培96小时，用形态检验法和镜 鉴法检査合格的，即为一级液体菌种。接着进行2级液体菌种扩繁，培养基制 备方法同上，但要用容积7升左右的大培养瓶培养，每瓶装液2.5升，接入其 10%的1级液种，随后用本研究所研制的"一种振荡型液体菌种生产设备"(专 利申请号200720126154.0)振荡培养，温度振频同上，培养48-60小时取样进行 生物学鉴定，振培72小时取出逐瓶用形态检验法检査，抽样用镜鉴法检査，检验合格的即为二级液体菌种，液种的日生产量要按每天的接种量进行，当天下 线的菌种最好在当天或次日用完。
虫草菇液体培养基的制备方法是取马铃薯淀粉2公斤、玉米粉4公斤、大米
粉8公斤、萄萄糖4公斤、白糖2公斤，蛋白胨4公斤、蛋白质2公斤，酵母 膏3公斤，黄豆粉2公斤，VB,400毫克、硫酸镁1公斤，磷酸二氢钾2公斤、 自来水200升。准确称取各种原料，分别溶于水中，面粉类搅成糊状，尔后汇 集于搅拌桶中，充份搅匀，制成半固体培养基，分装到箱钵培养器中，每个培 养钵的装液量以达到钵体上的刻度为限， 一般厚度3厘米为宜。将装好料的培 养器放进高压锅内于121 125t下灭菌50分钟，然后取出放进冷却室充份冷却， 经二次灭菌后，在超净工作台或接种箱无菌条件下，用连续注射器将液体菌种 均匀撒于每个培养钵料面上，接种量为培养基量的10%，接种后的培养器封好 箱盖，放进培养室于23 25。C下弱光培养，经48小时菌丝即封住料面， 一周后 检査培养器内的发菌情况，剃除感染杂菌的培养钵。15 20天菌盖形成，菌丝开 始转黄，此时将培养器移入出草室20 25'C下，确保每天有IO小时的散射光照， 日通风1次，每次40分中，以促进转色，经10 15天，菌丝转为金黄色，加大 温差，温度调至18 25。C,日温差7。C左右，刺激燕蕾产生，经10 15天菇蕾普 遍滋生，有些长成幼草，温度调至20 25'C，幼草长至2 5毫米时，每天通风两 次，每次40分钟，增加氧的供应量，再经20天左右的培养，培养钵中的虫草 菇菌盖已与培养基分离，其上虫草子实体丛生，高5 10厘米，因受光程度的不 尽一致，子实体呈金黄色或桔红色，菌盖厚1~2厘米左右，菌盖背面为咖菲色 至深咖啡色，有着核桃仁样的人脑状结构，这些都标志着虫草菇已到采收期。 打开培养箱盖，用宽型夹子轻轻将虫草菇取出，放入清水中洗去培养基，放在 竹编盘中，沥干水后即放入真空微波机进行干制，含水量降至5~8%时，即可充氮包装。整个工艺流程如附图6所示。
权利要求
1.一种虫草菇工业化生产方法，包括优良菌株，液体菌种生产、菌种检验与贮藏，虫草菇培养，培养基配方，培养基制备，培养基分装，液体菌种接种方法，发菌出草管理，采收，干制，其特征在于该生产方法的步骤如下a采用优良虫草菇菌株该菌株系以野生蛹虫草为出发菌株，经多次选择分离培养而成，其主要特征是菌丝贴面生长，健壮有力、转色快、易出草、子实体粗壮，子囊壳棒状、金黄色，抗杂抗逆性强，丰产优质，生物学效率100％以上，适于工业化培养，b液体菌种生产其培养基配方为马玲薯淀粉3.5～7.5克，葡萄糖15～25克，蛋白胨1～3克，磷酸二氢钾0.3～0.6克，硫酸镁0.5～1.2克，氯化钠0.5～1.6克，蚕蛹粉0.5～2.5克，自来水1000毫升；c菌种检验(1)生物学检验法，取振荡培养60小时的菌液，于无菌条件下接种于试管斜面上，置于培养箱25℃下培养48小时后检查菌丝有无污染和生长情况；(2)形态检查法菌液透明无异味，菌球体积占总菌液的80％，且分散度好，菌球直径0.5～1毫米；(3)显微镜检查法，检查①细菌，能发生位移的杆状菌，菌液中有运动现象；②放线菌，菌丝分枝，其内无隔膜，③酵母菌，园形或卵形较大的细胞，常沉于液体底部；④霉菌，菌丝内有隔膜，在一些隔膜处产生锁状联合；d液体菌种贮藏培养好的液体菌种放在保鲜库1～2℃下贮藏10～25天对菌种质量无明显影响，但要在用前6小时放在20～25℃的温度下苏醒；e虫草菇培养设备使用箱钵培养器，其结构包括培养箱盖(1)、海棉换气缝(2)、培养箱体(3)、培养钵(4)，培养钵置于培养箱内，箱体密封性好，设有海棉换气缝，培养基分装、灭菌、冷却、接种、培养都以整箱运作；f虫草菇培养基配方马铃薯淀粉9～18克、玉米粉15～25克、大米粉25～45克、葡萄糖15～30克、白糖10～20克、蛋白质5～15克、蛋白胨12～22克、酵母膏15～20克，黄豆粉10～15克、VB120～40毫克、硫酸镁0.5～1.1克，磷酸二氢钾0.5～2.0克，水1000毫升；g培养基制备将培养基各种组份分别溶于水中或搅成糊状，汇集搅拌桶内，充份混匀后制成半固体培养基，分装到培养钵中，放进高压灭菌锅内121℃～125℃下灭菌50分钟；h培养基分装，运到灭菌室；j液体菌种接种，在超净工作台或接种箱无菌条件下，使用连续注射器，将菌液均匀撒于培养钵料面之上，接种量为培养基的10％；k发菌出草管理接种后箱钵培养器放在发菌室，弱光、22～26℃下静培20天，尔后转入出草室，依次进行10～15天确保每天散射光照10小时的转色管理，10～15天确保5～10℃温差刺激的催蕾管理和20天确保温度20～25℃、湿度70～80％的出草管理；l采收历经60～70天的栽培管理，虫草菇与培养基分离而浮在培养基之上，此时即可打开培养箱，用不锈钢宽型挟子将虫草菇轻轻挟出放在水中冲洗干净，放在竹编盘中沥干水后放进冷库保鲜储存，刚采收的鲜虫草菇特征是，呈园形，似菇的菌盖，菇厚1～2厘米，正面子实体丛生，子实体高5～10厘米，金黄色，虫草菇背面呈咖啡色或深咖啡色，布满曲折蜿延的细小沟梁，像核桃仁一样呈人脑形结构；m干制采取真空微波法干制，将新采收或保鲜贮藏的虫草菇使用真空微波干燥机干制，含水率降为5～8％时，进行充氮包装。
2.根据权利要求1所述的虫草燕工业化生产方法所制得的鲜虫草燕其特征 是呈园形，似菇的菌盖，菇厚1 2厘米，正面子实体丛生，乎实体高5-10厘 米，金黄色或桔红色，虫草菇背面呈咖啡色或深咖啡色，布满曲折蜿延的细小 沟梁，像核桃仁一样呈人脑形结构。
3.根据权利要求1所述的虫草菇工业化生产方法，其特征在于所述虫草菇培 养设备使用箱钵培养器，其结构由培养箱盖(1)、海棉换气缝'(2)、培养箱 体(3)、培养钵(4)构成。
全文摘要
本发明提供了虫草菇工业化生产方法，其工艺包括优良菌株，液体菌种生产、菌种检验、菌种贮藏，虫草菇培养设备，培养基配方，培养基制备、培养基分装，接种方法，发菌出草管理、采收，干制等环节。技术创新点多，先进实用，机械化程度高，适用于规模化、产业化生产。其中选用的优良菌株丰产性强，转色快、易出草，抗杂抗逆性突出，配以先进的液体菌种生产设备，半固体培养基和箱钵培养器等科学先进的生产技术，能够使虫草菇这一虫草家族的新成员实现规模化栽培的高产优质高效益。
文档编号C12N1/14GK101195806SQ20071019928
公开日2008年6月11日 申请日期2007年12月4日 优先权日2007年12月4日
发明者王爱真, 程大志, 程萧仁, 胡为民 申请人:西宁市城西区食用菌研究所