专利名称：一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物的培育方法。
背景技术：
目前，葡萄糖酸钠的制备工艺是利用青酶或曲霉，采用通气搅拌深层发酵
技术，发酵时间48-60小时，转化率为90%。该方法的缺点是发酵周期比较长，
转化率不高。
发明内容
本发明的任务在于提供一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法，采用此方法 培育出的菌株具有糖酸转化率高和产酸周期短等优点。 其技术解决方案是
一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法，以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转 化率为100-120%的大罐中分离得来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后， 取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-109倍 数的稀释梯度，分别在60。C、 7(TC和80'C的温度下保温处理5分钟，然后进行 菌种平板涂布，于4(TC、 40%的相对湿度下恒温培养6-10h,待孢子萌芽时经40W 紫外灯30cm距离垂直照射1-3分钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养 箱于4(TC、 40%的相对湿度下恒温培养3_4天，待长出的菌落中心有黑色孢子长 出时，选取变色透明圈较大的菌落，将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上， 在35-4(TC、相对湿度40%的条件下，避光恒温培养5-6天，得到成熟饱满的斜 面孢子。
将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选在温度4(TC，转速200r/min，湿度70_80%的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、 二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰50%-60%，最终选出高转化率的葡 萄糖酸钠的菌种。
本发明的有益效果是本发明所述的菌株在高峰期降糖速率达到2.5%/h， 发酵罐生产中转化率达到117%以上，发酵周期14h以内，提取率95%以上，提 高了初糖浓度，縮短了发酵周期，降低了残糖，降低了生产成本。
具体实施例方式
为了便于理解本发明，下面结合实施例来更加详细的描述本发明。然而这 些实施例只是起到说明的作用，本发明并不局限于这些实施例。
实施例h以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100%的大罐中分离得 来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子 丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-109倍数的稀释梯度，分别在6(TC、 70°C 和8(TC的温度下保温处理5分钟，然后进行菌种平板涂布，于4(TC、 40%的相 对湿度下恒温培养6小时，待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1分 钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于4(TC、 40%的相对湿度下恒温 培养3天，待长出的菌落中心有黑色孢子长出时，选取变色透明圈较大的菌落， 将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上，在35°C、相对湿度40%的条件下， 避光恒温培养5天，得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选在 温度40'C，转速200r/min，湿度70%的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、 二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰50%，最终选出高转化率的葡萄糖 酸钠的菌种。
经测试，在500L小试自动罐上采用38%的糖浓度，无机盐MgS04 7H20含量为0. 25%， KH2P04含量为0. 18%， (NH4)2HP04含量为0. 14%， FeS04 7H20 含量 为0.1%， NH4N03含量为0. 1%，尿素含量为0. 1%的发酵培养基中，控制发酵温度 35°C，溶解氧10%，压力lMpa， PH值6.0，.葡萄糖酸钠菌种的发酵周期縮短为 14小时，初糖提高到38%，且残糖降低为0.4%，产品转化率达到117%，并且 从根本上改变了以往的随周期加长，钠离子浓度加大而降糖变缓的情况，不受 钠离子浓度的影响，在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。
实施例2:以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为110%的大罐中分离得 来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子 丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-109倍数的稀释梯度，分别在60°C、 70°C 和8(TC的温度下保温处理5分钟，然后进行菌种平板涂布，于4(TC、 40%的相 对湿度下恒温培养8小时，待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射2分 钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于4(TC、 40%的相对湿度下恒温 培养4天，待长出的菌落中心有黑色孢子长出时，选取变色透明圈较大的菌落， 将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上，在38°C、相对湿度40%的条件下， 避光恒温培养6天，得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选在 温度4(TC，转速200r/min，湿度75%的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、 二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰55%，最终选出高转化率的葡萄糖 酸钠的菌种。
经测试，在大生产1001113发酵罐上采用38%的糖浓度，无机盐MgS04 7H20 含量为0. 25%, KH2P04含量为0. 18%， (NH4)2HP04含量为0. 14%, FeS04 7H20含 量为0.1%， NH4N03含量为0. 1%,尿素含量为0. 1%的发酵培养基中，控制发酵温 度45X:，溶解氧60%，压力2Mpa， PH值6.3,葡萄糖酸钠菌种的发酵周期縮短为13小时，初糖提高到39%，且残糖降低为0.3%，产品转化率达到116%，并 且改变了以往的随周期加长，钠离子浓度加大而降糖变缓的情况，不受钠离子 浓度的影响，在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。
实施例3:以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为120%的大罐中分离得 来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子 丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-109倍数的稀释梯度，分别在6(TC、 70°C 和8(TC的温度下保温处理5分钟，然后进行菌种平板涂布，于40'C、 40%的相 对湿度下恒温培养10小时，待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射3 分钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于4(TC、 40%的相对湿度下恒 温培养5天，待长出的菌落中心有黑色孢子长出时，选取变色透明圈较大的菌 落，将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上，在40°C、相对湿度40%的条件 下，避光恒温培养6天，得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选在 温度40。C，转速200r/min，湿度80%的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、 二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰60%，最终选出高转化率的葡萄糖 酸钠的菌种。
经测试，在大生产1001113发酵罐上采用38%的糖浓度，无机盐MgS04 7H20 含量为0. 25%, KH2P04含量为0. 18%, (NH4)2HP04含量为0. 14%， FeS04 7H20 含 量为0. 1%， NH4N03含量为0. 1%,尿素含量为0. 1%的发酵培养基中，控制发酵温 度5(TC，溶解氧90%,压力3Mpa， PH值6.5,葡萄糖酸钠菌种的发酵周期縮短 为12. 8小时，初糖提高到38%，且残糖降低为0.36%，产品转化率达到117.4%， 并且改变了以往的随周期加长，钠离子浓度加大而降糖变缓的情况，不受钠离 子浓度的影响，在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。
权利要求
1、一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法，其特征在于以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100-120％的大罐中分离得来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-109倍数的稀释梯度，分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟，然后进行菌种平板涂布，于40℃、40％的相对湿度下恒温培养6-10h，待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1-3分钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40％的相对湿度下恒温培养3-4天，待长出的菌落中心有黑色孢子长出时，选取变色透明圈较大的菌落，将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上，在35-40℃、相对湿度40％的条件下，避光恒温培养5-6天，得到成熟饱满的斜面孢子；将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选在温度40℃，转速200r/min，湿度70-80％的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰50％-60％，最终选出高转化率的葡萄糖酸钠菌株。
全文摘要
本发明公开一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法，以葡萄糖酸钠生产中分离得来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象，经保温处理后进行平板涂布，经恒温培养和紫外线照射后以牛皮纸包扎再进行恒温培养，选取变色透明圈较大的菌落培养成成熟饱满的斜面孢子，经摇床筛选出高转化率的葡萄糖酸钠菌株。本发明所述的菌株在高峰期降糖速率达到2.5％/h，发酵罐生产中转化率达到117％以上，发酵周期14h以内，提取率95％以上，提高了初糖浓度，缩短了发酵周期，降低了残糖，降低了生产成本。
文档编号C12Q1/04GK101302477SQ20081001681
公开日2008年11月12日 申请日期2008年6月11日 优先权日2008年6月11日
发明者孙慧彬, 张希铭, 徐建春, 霞 李, 李悦明, 王道会, 薛元刚, 迟慎丽 申请人:青岛琅琊台集团股份有限公司