专利名称：：一种高活性营养纳豆的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种高活性营养纳豆的制备方法及其应用，属于生物
技术领域：
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背景技术：
：目前，高血压、高血脂、糖尿病等现代文明病已经取代传染性疾病成为人类的头号杀手。WHO的报告指出，世界上每年有约2000万人死于血液循环系统疾病，其中卯0万人死于冠心病，600万人死于中风，500万人死于其他心脑血管疾病。据卫生部统计，我国心脑血管疾病患者人数己达2亿多，高血压患者已达1.5亿，并以每年400万人的速度增加。开发具有调节三高的保健品是预防三高的重要手段，同时也大大节约了大量的治疗费用和抢救费用。纳豆源于中国，唐代传入日本，作为日本人的主要佐餐食品已有上千年的历史，目前纳豆已成为盛行于日本、韩国、加拿大、美国和欧洲一些国家的一种保健食品。现代研究发现纳豆具有调节血压、降低血液胆固醇的功能，并对高血压、高血脂、血栓病等有辅助治疗作用。纳豆的预防心脏病的功能也已经得到美国FDA的认可。普通纳豆虽然已被公认具有上述保健功能，但活性成分含量很低，需要长期大量食用才能发挥作用。纳豆是230种食品中唯一能溶解血栓的食品，其中含有的纳豆激酶(NattoKinase)是目前唯一具有口服溶解血栓作用的活性成份；而药用尿激酶、链激酶只有静脉注射才有效。纳豆中特有的纳豆多肽含有大量L-精氨酸，进入人体后能释放出一氧化氮，发挥信号分子作用，起到降低血压的作用。纳豆中的小分子多肽有降血脂的作用，小分子多肽具有高效脂质乳化剂的作用，能够将血液中的甘油三脂、胆固醇乳化成细小颗粒，加速血液中的甘油三脂和胆固醇的代谢，并具有提高高密度脂蛋白的作用。
发明内容本发明的主要目的是提高纳豆中的活性营养成分的含量，特别是提高纳豆激酶活性和纳豆多肽的含量。本发明的另一个目的是高活性营养纳豆在生产保健食品中的应用。本发明的实施方案如下高活性营养纳豆包括以下制备步骤a)精选大豆，清洗，粉碎脱皮；b)在3—4倍2050°C营养液中浸泡1040小时后，清洗；c)沥干后蒸汽灭菌3060分钟，冷却接种纳豆菌；d)在温度3040。C，相对湿度8095%，发酵1248小时。其中，步骤a中大豆脱皮率在80X以上；步骤b中所述的营养液是含有CrCl3，MgS04，NaCl以及亚硒酸钠的水溶液。具体的说，营养液是CrCl3或/和MgS04或/和NaCl或/和亚硒酸钠的水溶液。优选的，0.010.05%的CrCl3，0.10.5%的MgS04、0.10.7%的NaCl，0.010.05%的亚硒酸钠的水溶液；更优选的为0.010.02%的CrCl3，0.30.5%的MgS04、0.40.7%的NaCl，0.010.02%的亚硒酸钠的水溶液。浸泡时温度在20-40°C，浸泡时间在20-30小时。浸泡萌发后用清水冲洗除去营养液，大豆中的大分子蛋白发生水解转化为多肽，从而提高纳豆多肽的含量。步骤d中，优选的温度30。C，相对湿度80%，发酵24小时。本发明的活性营养纳豆，生产工艺合理，多肽含量和纳豆激酶活性均得到了很大程度的提高。本发明的活性营养纳豆经过真空冷冻干燥制成纳豆冻干粉，可以作为主要原料加入制备不同剂型时所需要的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂、矫味剂等，以常规的制剂方法制备成胶囊、片剂和颗粒剂，作为保健食品，用于辅助溶解血栓、降血脂、和保护肝损伤等具有明显效果。本发明的活性营养纳豆应用在保健食品的具体方案1.辅助溶解血栓、降血脂的活性营养纳豆保健品配方本发明的活性营养纳豆冻干粉6090%，绞股蓝提取物(总皂苷含量大于80%)1040%。混合均匀后，用l号胶囊充填，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。纳豆有溶解血栓，净化血液的作用，而绞股蓝提取物所总含总皂苷有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗衰老、保护肝脏及增强肌体免疫功能等作用。优选的，辅助溶解血栓、降血脂的活性营养纳豆保健品配方本发明的活性营养纳豆冻干粉70%，绞股蓝提取物(总皂苷含量大于80%)30。％。1)溶栓降脂纳豆胶囊对犬动脉血栓的溶解作用试验取杂种犬30只，雌雄兼用，体重10土1.5kg，随机分为5组，用戊巴比妥股静脉注射麻醉(30mg/kg)，在股动脉两端用动脉夹夹住，中间留约3cm长血管，用缝衣针在血管内穿一根丝线，线长约1.5cm，用棉球压迫血管止血，开放动脉夹，让血液自由流过，形成血栓。2小时后，在X光机监视下，在股动脉的上端向血管内注射动脉造影液泛影普胺，确定血管无血液通过，血栓形成。生理盐水对照组的犬灌胃等容积的生理盐水，阳性对照组经口灌胃市场购普通纳豆胶囊200mg/kg，给药组分别经口灌胃溶栓降脂纳豆胶囊50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg，5小时后，再次在X光机监视下注射动脉造影液泛影普胺，确定血管无血液通过。结果溶栓降脂纳豆胶囊中剂量组(100mg/kg)和高剂量组(200mg/kg)6只犬血栓全部被溶解，造影显示血液顺利通过；低剂量组(50mg/kg)3只犬血栓全部被溶解，1只血栓部分被溶解。对照组1只血栓全部被溶解，1只血栓部分被溶解。结果表明，本发明溶栓降脂纳豆胶囊具有明显溶解血栓的作用。2)溶栓降脂纳豆胶囊调节血脂作用试验动物分组体重160190g雌雄兼有的SD大鼠(中国科学院上海实验动物中心)50只，随机等分为5组，分别为正常对照组、高脂模型组、溶栓降脂纳豆胶囊高剂量组(180mg/kg)、中剂量组(90mg/kg)、低剂量组(45mg/kg)。正常对照组大鼠给予普通饲料，其他各组给予高脂饲料，普通饲料和高脂饲料的组成如下-基础饲料符合中华人民共和国国家标准GB14924.3—2001。高脂饲料79%基础词料，1%胆固醇，10%蛋黄粉和10%猪油。溶栓降脂纳豆胶囊高剂量组(180mg/kg)、中剂量组(90mg/kg)、低剂量组(45mg/kg)每天给药1次，连续30天。各组动物分别于给药前、给药后第15天和第30天取空腹静脉血，分离血清，用酶法测定(卫生行业标准"血清总胆固醇的酶法测定"(WS/T120-1999))甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量，并且对试验结果采用方差分析及配对t检验作统计学处理，结果如表l所示。表l对大鼠血脂的影响(n=10，x±S)mmol/L<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与正常对照组相比AP<0.01;与高脂模型组相比:"PO.Ol，'PO.05;结果表明，本发明溶栓降脂纳豆胶囊具有明显调节血脂的作用。2.具有保肝作用的活性营养纳豆保健品配方本发明的活性营养纳豆冻干粉6090%，葡萄籽提取物(原花青素含量大于90%)1040%。混合均匀后，用1号胶囊充填，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。纳豆有溶解血栓，净化血液的作用，而葡萄籽提取物是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。优选的，具有保肝作用的活性营养纳豆保健品配方本发明的活性营养纳豆冻干粉80%，葡萄籽提取物(原花青素含量大于90%)20%。1)保肝纳豆胶囊对小鼠四氯化碳急性肝损伤的保护作用昆明种小白鼠60只，体重20士2g，雌雄兼用，随机分为6组。l组正常对照，2组灌服生物盐水，3、4、5组分别灌服本发明保肝纳豆胶囊260mg/kg、130mg/kg，650mg/kg的水溶液，6组灌服联苯双酯0.2g/kg的水混悬液，每日一次，连续给予6日。于末次给药后1小时，后5组分别腹腔注射0.2%(^14油溶液10ml/kg，禁食不禁水20小时后，各组小鼠眼眶静脉采血，按改良的赖氏法测定丙氨酸氨基转换酶(ALT)，并摘取肝脏做病理形态学检査。从结果可见，各给药组都可使病理性升高的ALT明显降低(PO.Ol)，显微镜下看到肝小叶结构基本清晰，肝细胞仅见轻度浊肿，肝窦略窄，散在点状坏死灶，CCU模型组则肝细胞大部分空泡变性或广泛浊肿，多数撒在点片状坏死灶，个别血管周围形成大片状浸润，汇管区炎细胞浸润明显。2)保肝纳豆胶囊对小鼠D-半乳糖胺盐酸盐(D-Gal)急性肝损伤的保护作用昆明种小白鼠60只，体重18-22g，雌雄兼有，随机分为6组。l组正常对照，2组灌服生物盐水，3、4、5组分别灌服本发明保肝纳豆胶囊260mg/kg、130mg/kg，650mg/kg的水溶液，6组给予联苯双酯0.2g/kg的水悬液，均为每日灌胃1次，共6次。末次灌胃后1小时，后5组腹腔注射D-Gal0.65g/kg生理盐水液，20小时后，眼眶静脉丛采血，取血清测ALT与AST(门冬氨酸氨基转换酶)。剖取肝脏，固定，送病理检査。从结果可见，模型组的ALT与AST，和正常对照组比较，显著升高，说明肝脏能受到严重损害。与模型组比较，本保肝纳豆胶囊高、中剂量组可使ALT与AST明显降低(PO.Ol)，低剂量组亦显著降低ALT的活力。病理组织学结果显示，高、中、低剂量用药组小鼠肝之病理改变基本上与正常对照组相同，与D-GAL模型组相比，肝细胞的损伤程度明显减轻。结果表明，本发明保肝纳豆胶囊具有保护肝损伤的作用。具体实施例方式下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。实施例1精选大豆，清洗，粉碎脱皮(脱皮率大于80%)，在4倍30。C营养液(0.01%的0€13，0.3。/。的MgS04、0.02%的亚硒酸钠的水溶液)中浸泡20小时后，清洗除去营养液；沥干后蒸汽灭菌60分钟；冷却接种纳豆菌，在温度30。C，相对湿度80%，发酵24小时；将发酵物新鲜纳豆真空冷冻干燥(30帕，-40°C)，制得高活性营养纳豆冻干粉。实施例2精选大豆，清洗，粉碎脱皮(脱皮率大于80%)，在3倍40。C营养液(0.02%的0€13，0.5。/。的MgS04、0.01%的亚硒酸钠的水溶液)中浸泡20小时后，清洗除去营养液；沥干后蒸汽灭菌60分钟；冷却接种纳豆菌，在温度40。C，相对湿度85%，发酵24小时；将发酵物新鲜纳豆真空冷冻干燥(30帕，-40°C)，制得高活性营养纳豆冻干粉。实施例3精选大豆，清洗，粉碎脱皮(脱皮率大于80%)，在4倍30。C营养液(0.01的0€13，0.4。/。的NaCl，0.01%的亚硒酸钠)中浸泡20小时后，清洗除去营养液；沥干后蒸汽灭菌30分钟；冷却接种纳豆菌，在温度30。C，相对湿度80%，发酵48小时；将发酵物新鲜纳豆真空冷冻干燥(30帕，-40°C)，制得高活性营养纳豆冻干粉。实施例4精选大豆，清洗，粉碎脱皮(脱皮率大于80%)，在3倍40。C营养液(0.01的CrCl3，0.3。/。的MgS04、0.4%的NaCl，0.01%的亚硒酸钠)中浸泡20小时后，清洗除去营养液；沥干后蒸汽灭菌60分钟；冷却接种纳豆菌，在温度30。C，相对湿度80%，发酵48小时；将发酵物新鲜纳豆真空冷冻干燥(30帕，-40°C)，制得高活性营养纳豆冻干粉。表2不同制备工艺纳豆营养成份含量比较营养液纳豆激酶(FU/g)纳豆多肽含量(％)本方法纳豆特殊250035普通纳豆无30010实施例5一种辅助溶解血栓、降血脂保健品的配方纳豆冻干粉(制备方法同实施例4)150g，绞股蓝提取物(总皂苷含量大于80%)100g，混合均匀后，用1号胶囊充填制成1000粒胶囊，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。实施例6一种辅助溶解血栓、降血脂保健品的配方纳豆冻干粉(制备方法同实施例4)175g，绞股蓝提取物(总皂苷含量大于80%)75g，混合均匀后，用l号胶囊充填制成1000粒胶囊，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。实施例7一种辅助溶解血栓、降血脂保健品的配方纳豆冻干粉(制备方法同实施例4)200g，绞股蓝提取物(总皂苷含量大于80%)50g，混合均匀后，用l号胶囊充填制成1000粒胶囊，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。实施例8一种保肝保健品的配方纳豆冻干粉(制备方法同实施例4)150g，葡萄籽提取物(原花青素含量大于90%)100g，混合均匀后，用1号胶囊充填制成1000粒胶囊，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。实施例9一种保肝保健品的配方纳豆冻干粉(制备方法同实施例4)200g，葡萄籽提取物(原花青素含量大于90%)50g，混合均匀后，用1号胶囊充填制成1000粒胶囊，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。实施例10一种保肝保健品的配方纳豆冻干粉(制备方法同实施例4)225g，葡萄籽提取物(原花青素含量大于90%)250g，混合均匀后，用1号胶囊充填制成1000粒胶囊，每粒装250mg。用法与用量一日2次，每次2粒。权利要求1.一种高活性营养纳豆的制备方法，可以显著提高纳豆多肽的含量和纳豆激酶的活性。具体步骤是精选大豆，清洗，粉碎脱皮；在营养液中浸泡；蒸汽灭菌；冷却接种纳豆菌，发酵；真空冷冻干燥制得高活性营养纳豆。其特征是，所述的营养液是含有CrCl3或/和MgSO4或/和NaCl或/和亚硒酸钠的水溶液。2.如权利要求1所述的一种高活性营养纳豆的制备方法，其特征是，所述的营养液是0.010.05%的CrCl3，0.10.5。/。的MgS04、0.10.7%的NaCl，0.010.05%的亚硒酸钠的水溶液。3.如权利要求1所述的一种高活性营养纳豆的制备方法，其特征是，所述的营养液是0.010.02%的0€13，0.30.5%的MgS04、0.40.7%的NaCl，0.010.02%的亚硒酸钠的水溶液。4.如权利要求1所述的一种高活性营养纳豆在生产保健食品中的应用。5.—种辅助溶解血栓、降血脂的活性营养纳豆保健品，其包含下述重量份的组分本发明的活性营养纳豆冻干粉6090%和绞股蓝提取物1040%。6.如权利要求5所述的一种辅助溶解血栓、降血脂的活性营养纳豆保健品，其特征在于所述组分的含量为本发明的活性营养纳豆冻干粉70%和绞股蓝提取物30%。7.如权利要求5所述的一种辅助溶解血栓、降血脂的活性营养纳豆保健品，其特征在于所述绞股蓝提取物中总皂苷的含量为50-99%。8.—种具有保肝作用的活性营养纳豆保健品配方，其包含下述重量份的组分本发明的活性营养纳豆冻干粉6090%和葡萄籽提取物1040%。9.如权利要求8所述的一种具有保肝作用的活性营养纳豆保健品配方，其特征在于所述组分的含量为本发明的活性营养纳豆冻干粉80%和葡萄籽提取物20%。10.如权利要求8所述的一种具有保肝作用的活性营养纳豆保健品配方，其特征在于所述葡萄籽提取物的原花青素含量为50-99%。全文摘要本发明公开了一种高活性营养纳豆的制备方法，可以显著提高纳豆多肽的含量和纳豆激酶的活性。具体步骤是精选大豆，清洗，粉碎脱皮；在营养液中浸泡；蒸汽灭菌；冷却接种纳豆菌，发酵；真空冷冻干燥制得高活性营养纳豆。本发明还公开了高活性营养纳豆在生产保健食品中的应用，制备得到含有该种纳豆粉的保健食品具有辅助溶解血栓、降血脂、和保护肝损伤的功效。文档编号A23L1/202GK101664136SQ200810043760公开日2010年3月10日申请日期2008年9月4日优先权日2008年9月4日发明者孔迎春,斌王申请人:上海申畅生物科技有限公司