专利名称：引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂，特别是最常见的在外环境 中生活力较强，在水、牛乳及肉类食品中能生存几个月，最适温度下繁殖迅速的鼠伤寒沙门 氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、付伤寒甲、乙沙门氏菌的快检试剂。沙门氏菌食物 中毒多由动物性食品，特别是肉类引起(如病死牲畜肉、熟肉制品)，也可由家禽、蛋类、 奶类食品引起。以急性胃肠炎为主，主要症状有呕吐，腹泻，腹痛，粪便为黄绿色水样便。 发热3 8'C—4 crc。重病人出现寒战，惊厥，抽搐和昏迷。老人，儿童和体弱者如不及时
进行急救处理也可导致死亡。传统常规检测诊断方法为细菌培养分离，选择标准典型菌株再
进行血清学鉴定检测。整个检测确诊过程耗时长、 一般需要72-120小时，灵敏度不高，对快 速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手段，在快速鉴别诊 断食物中毒致病菌沙门氏菌属的应用上具有明显的优势。从而减少由于检测手段落后而造成 对人体健康的危害，具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方法更具有应用价值，对指 导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。
背景技术：
本发明的目的在于提供一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂，引起食物中毒 沙门氏菌属，常见的有鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、付伤寒甲、乙型沙 门氏菌、都柏林沙门氏菌。全年都可发生，多由动物性食品如肉类引起，也可由鱼、蛋、奶 及家禽引起。其致病原因是用病死畜、禽的肉制成的食品；病死畜、禽的粪便污染了食物； 带菌者在食品加工过程中污染了食品。传统常规检测诊断方法是要经过标本采集、分离鉴定、 小白鼠喂饲实验、双份血清凝集实验、沉淀实验等鉴定实验才能确诊。传统生化鉴定试验周 期长，操作繁琐，试剂质量无法保证，严重影响了致病菌确认丁作、选择性分离培养的培养 基上挑选可疑菌落需要经验，存在漏检的可能，而沙门氏菌属的肠毒素稳定性很高，加工后 的食物虽然有时检不出，但仍有可能存在肠毒素，而肠毒素的常规检验方法需要做动物实验， 难度大，周期长。整个检测确诊过程耗时长约4-15天。本发明是将增菌液中增加了特异性的 沙门氏菌属多价及单价血清，使检测确诊过程縮短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的 血清凝集反应，鉴定的准确率均在97%以上。检测致病菌时耗时少、灵敏度高，准确性强
发明内容
本发明的要点在于选择合适的培养基组分，并进行合理混配，经加温、溶解、 混合、冷却、分装、高温灭菌、无菌制备血清等工艺而成一种引起食物中毒沙门氏菌属快检 试剂。
本发明选择的快检试剂配方如下(克/每升蒸馏水)蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5; 磷酸氢二钠4.0-5.0;磷酸二氢钠5. 0-6. 0;复合生长因子10. 0-20.0;亚硒酸氢钠3.5-4. 5;无菌沙门氏菌属多价及单价血清10-20ml:蒸馏水加至1000 mL，调pH7. 1
快检试剂呈无色或淡黄色透明液体，无任何沉淀物。将质控菌做生长的灵敏度试验，伤 寒沙门菌达10-3 (稀释度)，鼠伤寒、副伤寒沙门齒达10-7;食物源性中毒样品在接种培养 2-6小时时，液面交界有处有白色沉淀凝集，镜下有凝集包团，为阳性，即可确诊。亚硒酸 盐有生殖毒性，使用时应特别注意。亚硒酸盐对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用，而对沙门菌则无明显的抑制性，在磷酸盐缓冲作用下，这种差异更显著。也可用亚硒酸钠，但不及亚 硒酸氢钠效果好。大肠埃希菌等细菌能使乳糖发酵产酸，它中和因亚硒酸盐被细菌还原而产 生的碱。磷酸盐为缓冲剂，保持培养基PH稳定，有利肠道致病菌的生长繁殖。两者的用量比 例可根据蛋白胨的酸碱度及缓冲容量调整，总量为10g/L。.此培养基中的蛋白胨品种很重要， 因此无论国产或国外蛋白胨在使用前必须先作细菌学检测。用于分离伤寒沙门菌及乙型副伤 寒沙门菌效果更好。配好的培养基超过9(TC数分钟既有红色沉淀物形成，应贮于2 8。C度冰 箱，保存2周。如时间超过二周或贮于室温，特别是夏季，易出现棕色或红色沉淀，增菌效 果减退。粪便标本接种量约占培养基体积的1A0，或将含有粪便的棉拭子插入培养基中，尿 液标本可等量加入双倍浓度增菌液中。增菌时间应根据标本污染情况而定，污染严重的在2h 以内，反之可适当延长增菌时间，但不得超过12h，即行转种于选择性分离培养基，因延长 增菌时间可使大肠菌群迅速生长繁殖，影响沙门菌凝集包团检出。
本发明产品的制备方法是
1) 、先将亚硒酸氢钠加入100 mL无菌蒸馏水中，充分振荡溶解；
2) 、将蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、复合生长因子混合于900 mL蒸馏水加热
溶解，调pH7. 1， 12rC15min高压灭菌;
3) 、冷却后以无菌操作将两液合并，加无菌沙门氏菌属多价及单价血清混匀，分装于灭菌容
器内备用。
本发明具有以下优点(1)快检试剂营养丰富、配制简单；(2)临床应用效果满意，解 决了床边接种的困难，污染小；(3)检测方法简单、时间短、选择性强、检出率高；(4) 接种样本2-6小时后，即能得到液体筛选增菌凝集包团，便于观察菌落生长情况，稳定性好; (5)对快速准确诊断，抢救病人对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明
按照下表所列数据(克/每升蒸馏水)及其所述步骤进行配置
配方一
蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5;磷酸氢二钠4.0-5.0;磷酸二氢钠5.0-6. 0;复合生 长因子10. 0-20. 0;亚硒酸氢钠3.5-4 5;无菌沙门氏菌属多价及单价血清10-20ml;蒸馏 水加至1000 mL，调pH7. 1
配方二:蛋白胨6.0-8.0;乳糖4.0-4.5;磷酸氢二钠4.5-5.0;磷酸二氢钠5. 5-6. 0;复合生 长因子14.0-20.0;亚硒酸氢钠4.0-4.5;无菌沙门氏菌属多价及单价血清14-20ml;蒸馏 水加至1000 mL，调pH7. 1
配方三
蛋白胨6.0-9. 0;乳糖3.5-4.0;磷酸氢二钠4.0-4.5;磷酸二氢钠5. 0-5. 5;复合生 长因子12.0-19.0;亚硒酸氢钠3.6-4.2;无菌沙门氏菌属多价及单价血清11-19ml;蒸馏 水加至1000 mL，调PH7, 权利要求
1、本发明涉及一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂，特别是最常见的食物源性的鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、付伤寒甲、乙沙门氏菌的快检试剂及其制备方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸馏水)蛋白胨5.0-10.0；乳糖3.5-4.5；磷酸氢二钠4.0-5.0；磷酸二氢钠5.0-6.0；复合生长因子10.0-20.0；亚硒酸氢钠3.5-4.5；无菌沙门氏菌属多价及单价血清10-20ml；蒸馏水加至1000mL，调pH7.1；
2、 一种权利要求l所述引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1) 、先将亚硒酸氢钠加入IOO mL无菌蒸馏水中，充分振荡溶解；2) 、将蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、复合生长因子混合于900 mL蒸馏水 加热溶解，调pH7. 1， 121°Cl5min高压灭菌;3) 、冷却后以无菌操作将两液合并，加无菌沙门氏菌属多价及单价血清混匀，分装于灭 菌容器内备用。
全文摘要
本发明涉及一种引起食物中毒沙门氏菌属快检试剂，特别是食源性鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、付伤寒甲、乙沙门氏菌的快检试剂及其制备方法。该快检试剂具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方法更具有应用价值，对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。本发明是将增菌液中增加了特异性的沙门氏菌属多价及单价血清，使检测确诊过程缩短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的血清凝集反应，鉴定的准确率均在97％以上。检测致病菌时耗时少、灵敏度高，准确性强。
文档编号C12Q1/10GK101565737SQ200810093449
公开日2009年10月28日 申请日期2008年4月21日 优先权日2008年4月21日
发明者于维森 申请人:于维森