专利名称：：一种菌种保藏方法
技术领域：
：本发明涉及一种菌种保藏方法。更具体地说，涉及一种根霉菌丝的保藏方法。
背景技术：
：目前微生物菌种通常采用麸皮保藏和冻干保藏法等进行保藏。麸皮保藏就是将菌体接种到灭菌后的含有一定水分的麸皮上，培养后用干燥箱干燥后置于干燥器中保存。麸皮保藏以往都是用干燥箱干燥，在干燥的过程中菌丝还会继续生长，不利于对需要控制菌龄的保藏，而且麸皮保藏时间较短，一般是2年，单纯的麸皮培养基的培养物由于营养较少，生长不是很好。冻干保藏法是在最适培养基中用最适温度培养出良好的培养物，然后分离出菌体后制备菌悬液，将样品置于冷冻干燥机中冷冻干燥，之后采用真空泵抽真空，并将容器的颈部加热熔封，最后置于低温下保藏。以往的根霉菌的保藏基本是使用麸皮进行保藏，或者使用孢子进行冻干保藏。麸皮保藏的保藏时间比较短，而且保藏效果不是很理想，而以往的冻干保藏用孢子进行保藏才行，没有直接使用菌丝进行保藏的，因为菌丝的保藏不好操作，即使简单的使用一般的保护剂进行保藏其效果也不是很理想。由于根霉产生孢子之后会增加菌种退化的几率，因此迫切需要有一种保藏方法，可以在根霉产生菌丝之前就停止其生长，并能有效地对菌丝进行保藏。
发明内容考虑到上述，本发明提供了一种菌种保藏方法，该方法首先通过一种专门设计的培养基获得比较强壮的菌丝，同时便于控制孢子的生长；然后加入有利于菌丝保藏的保护剂进行冻干保藏。本发明不需要专门把菌丝从培养基中分离出来后进行保藏，可以直接加入保护剂保藏，避免了对菌丝的伤害。本发明的一个方面，提供了一种菌种保藏方法，该方法包括以下步骤(l)将需要保藏的菌种接种到灭过菌的麸皮培养基中；其中培养基配方为50-60%麸皮、35-45%粉碎后的谷壳、1-2%硝酸钠、1_2%尿素、1-2%米粉、0.2_1%的生物素等营养添加剂，加入上述混合物相同重量的去离子水，混合均匀即可；(2)当菌丝长到需要的菌龄时，不需分离出菌丝制成菌悬液，直接将冻干液立即加入安瓿管中；其中冻干液配方为10-20克脱脂牛奶、0.2-0.5克琼脂粉、0.2-0.5克还原型谷胱甘肽、0.1-0.5克阿拉伯胶、0.5_1克的叔丁醇，用去离子水定容到100毫升；(3)然后以2°C/分钟的降温速率将安瓿管降温到_40°C，冷冻干燥；(4)冻干后对盛菌的安瓿管抽真空，然后封口；以及(5)将所得到的安瓿管置于4t:的低温下进行保藏。根据本发明的菌种保藏方法，其中，步骤(3)中的冻干时间为18-20小时。根据本发明的菌种保藏方法，其中，冻干后水份控制在4-5%。根据本发明的菌种保藏方法，其中，步骤(5)中所述的低温是1-1(TC，优选为2-6t:，最优选为4t:。根据本发明的菌种保藏方法，其中，在4t:下菌种可以保藏10年以上，优选10-20年。该方法对根霉菌丝的保藏很有效，可以长期(4t:保藏10-20年)对根霉菌丝进行保藏。具体实施例方式本发明的一个方面，提供了一种菌种保藏方法，该方法包括以下步骤(l)将需要保藏的菌种接种到灭过菌的麸皮培养基中；其中，培养基配方为50-60%麸皮、35-45%粉碎后的谷壳、1-2%硝酸钠、1_2%尿素、1-2%米粉、0.2_1%的生物素营养添加剂，加入上述混合物相同重量的去离子水，混合均匀即可；(2)当菌丝长到需要的菌龄时，不需分离出菌丝制成菌悬液，直接将冻干液立即加入安瓿管中；其中冻干液配方为10-20克脱脂牛奶、0.2-0.5克琼脂粉、0.2-0.5克还原型谷胱甘肽、0.1-0.5克阿拉伯胶、0.5_1克的叔丁醇，用去离子水定容到100毫升；(3)然后以2°C/分钟的降温速率将安瓿管降温到-4(TC，冷冻干燥；(4)冻干后对安瓿管抽真空，然后封口；以及(5)将所得到的安瓿管置于低温下保藏。根据本发明的菌种保藏方法，其中，步骤(3)中的冻干时间为18-20小时。根据本发明的菌种保藏方法，其中，冻干后水份控制在4-5%。根据本发明的菌种保藏方法，其中，步骤(5)中所述的低温是1-1(TC，优选为2-6t:，最优选为4°C。根据本发明的菌种保藏方法，其中，在4t:下菌种可以保藏10年以上，优选10-20年。该方法对根霉菌丝的保藏很有效，可以长期(fC保藏10-20年)对根霉菌丝进行保藏。实施例实施例1培养基的配制将60%麸皮、35%粉碎后的谷壳、1.5%硝酸钠、1.5%尿素、1.5%米粉、0.5%的生物素等营养添加剂进行混合，加入上述混合物相同重量的去离子水，混合均匀即可。然后，将需要保藏的菌种接种到灭过菌的培养基中，当菌丝长到需要的菌龄时，不需分离出菌丝制成菌悬液，直接将冻干液立即加入安瓿管中，其中冻干液配方为10克脱脂牛奶、2克琼脂粉、0.2克还原型谷胱甘肽、0.2克阿拉伯胶、0.6克的叔丁醇，用去离子水定容到100毫升。之后，以2°C/分钟的降温速率降温到-401:，然后进行冷冻干燥，冷冻干燥18小时。冻干后对盛菌的安瓿管抽真空，然后封口。最后，将所得到的安瓿管置于4t:下进行保藏。发明人采用上面相似的操作，对培养基和冻干液的组成进行变化，发现采用以下所列出的条件基本能够实施本发明。采用上述相同的步骤，按照表1中所列出的条件，进行实施例2-6的操作。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>按照本发明的菌种保藏方法，用上述实施例4中的培养基和冻干液对根霉菌丝进行保藏，发现在l-l(TC时可以保藏10年以上，优选10-20年。本发明不需要专门把菌丝从培养基中分离出来后进行保藏，可以直接加入保护剂保藏，避免了对菌丝的伤害。虽然已经通过具体实施例描述和说明了本发明，但应当理解，对本领域技术人员来说，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种修改和等同替换。因此，本发明不限于已经在本文中描述的具体实施例。更确切地，本发明的保护范围由所附的权利要求书限定。权利要求一种菌种保藏方法，包括以下步骤(1)将需要保藏的菌种接种到灭过菌的麸皮培养基中；培养基配方为50-60％麸皮、35-45％粉碎后的谷壳、1-2％硝酸钠、1-2％尿素、1-2％米粉、0.2-1％的生物素营养添加剂，加入上述混合物相同重量的去离子水，混合均匀即可；(2)当菌丝长到需要的菌龄时，不需分离出菌丝制成菌悬液，直接将冻干液立即加入安瓿管中；冻干液配方为10-20克脱脂牛奶、0.2-0.5克琼脂粉、0.2-0.5克还原型谷胱甘肽、0.1-0.5克阿拉伯胶、0.5-1克的叔丁醇，用去离子水定容到100毫升；(3)然后以2℃/分钟的降温速率将安瓿管降温到-40℃，进行冷冻干燥；(4)冻干后对安瓿管抽真空，然后封口；以及(5)将所得到的安瓿管置于冰箱中低温保藏。2.根据权利要求1所述的菌种保藏方法，其中，步骤(3)中的冻干时间为18-20小时。3.根据权利要求1或2所述的菌种保藏方法，其中，冻干后水份控制在4-5%。4.根据权利要求l所述的菌种保藏方法，其中，步骤(5)中所述的低温是l-l(TC。5.根据权利要求1所述的菌种保藏方法，其中，在4t:下菌种可以保藏10-20年。全文摘要本发明涉及一种菌种保藏方法，包括以下步骤(1)将需要保藏的菌种接种到灭过菌的麸皮培养基中；培养基配方为50-60％麸皮、35-45％粉碎后的谷壳、1-2％硝酸钠、1-2％尿素、1-2％米粉、0.2-1％生物素营养添加剂，加入上述混合物相同重量的去离子水，混合均匀即可；(2)当菌丝长到需要的菌龄时，不需分离出菌丝制成菌悬液，直接将冻干液立即加入安瓿管中与培养物混合均匀；冻干液配方为10-20克脱脂牛奶、0.2-0.5克琼脂粉、0.2-0.5克还原型谷胱甘肽、0.1-0.5克阿拉伯胶、0.5-1克叔丁醇，用去离子水定容到100毫升；(3)然后以2℃/分钟的降温速率降温，冷冻干燥；(4)冻干后对盛菌的安瓿管抽真空，然后封口；以及(5)将所得到的管置入低温下保藏。文档编号C12R1/845GK101768553SQ20081019085公开日2010年7月7日申请日期2008年12月31日优先权日2008年12月31日发明者余明华,俞学锋,姚鹃,李梅忠,李知洪,郑国斌申请人:安琪酵母股份有限公司