专利名称：抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基的制作方法
技术领域：
本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种抗万古霉素金黄色葡萄球菌的培养基。
背景技术：
在我国，滥用抗生素的情况十分普遍。细菌多次与药物接触后，对药物的敏感性减小甚 至消失，致使药物对抗药菌的疗效降低甚至无效。金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)在与抗生 素的"遭遇战"中，先后战胜了天然青霉素、氨苄青霉素、头孢菌素等，甚至出现了可对万古 霉素产生抗药性的金葡菌(vancomycin-resistant staphylococcus aureus, 縮写为VRSA)。细 菌抗药性的不断升级几乎将医生逼到了无药可用的尴尬境地。众多抗药菌的出现，对医院病 人也够成了巨大的威胁。因此，及时准确地了解病人感染的细菌种类和抗药情况是非常必要 和紧迫的。
选择培养基是根据某些微生物具有特殊营养要求或对某些化学物质具有抗性而设计的， 是鉴别、分离微生物的常用方法。例如，在培养基中加入某种化学药物，以限制对其敏感菌 的生长繁殖，从而将对其不敏感的目标微生物分离出来。为了进一步准确、方便地鉴别目标 微生物，可以在选择性培养基中加入目标微生物特征性酶的显色底物，将微生物的选择性培 养和特征性酶检测结合在一起。当目标微生物在培养基上生长时其菌落会呈现特定的颜色， 这是因为目标微生物所产生的特征性酶能够降解显色底物而释放显色原，显色原呈现特殊颜 色或使显色原的反应物显色。干扰菌或被抑制或不产生特征性酶而不显色，因而能被区别。 也即是说，利用这种培养基，只需通过观察菌落的颜色、形态变化以及一些简单试验就可以 轻松鉴别目标微生物。目前，虽然市场上已经出现了抗甲氧西林金葡菌的显色培养基，但还
未见适用于鉴别抗万古霉素金葡菌的显色培养基。
发明内容
本发明的目的在于为抗万古霉素金黄色葡萄球菌提供一种营养丰富的培养基，并将抗万 古霉素金葡菌的选择性培养和其特征性酶的检测结合在了一起，能够方便地鉴别、分离抗万
古霉素金葡菌。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为 一种抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基， 含有营养物质、凝固物质以及能够抑制金葡菌以外的杂菌生长的抑制剂，所述培养基中还含
有万古霉素。
每1000g所述培养基中含万古霉素7-32mg。
所述的培养基中还含有显色指示剂5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐和四唑氮蓝。 每1000g所述培养基中含5-溴-4-氯-3-tl引哚磷酸盐l-2g，含四唑氮蓝0.3-lg。 培养基中所使用的杂菌抑制剂为亚碲酸钾和氯化锂，每1000g培养基中含亚碲酸钾3-
8mg，含氯化锂2-8g;其中亚碲酸钾能够抑制革兰氏阴性菌的生长，与氯化锂协同作用能够
抑制金黄色葡萄球菌以外的杂菌的生长。
所述营养物质为胰酪胨、酵母粉、丙酮酸钠，凝固物质为琼脂，其在每1000g培养基中
的含量为胰酪胨12-18g、酵母粉2-8g、丙酮酸钠5-15g、琼脂10-18g;余量为水。其中胰酪胨、酵母粉为金黄色葡萄球菌提供了氮源和生长因子，丙酮酸钠有利于金黄色葡萄球菌的生 长，琼脂则起一定的凝固作用。
在本发明的技术方案中，胰酪胨、酵母粉、丙酮酸钠、琼脂及水为金黄色葡萄球菌的生 长提供了丰富的营养和适宜的环境。亚碲酸钾与氯化锂协同作用能够很好地抑制金黄色葡萄 球菌以外杂菌的生长，避免了杂菌对显色的干扰。向培养基中添加万古霉素，则对万古霉素 敏感的金葡菌被抑制生长，作为目标微生物的抗万古霉素金葡菌因此而被分离出来。为了进 一步确认抗万古霉素金葡菌，增加鉴别试验的直观性和准确性，本发明的培养基中还添加了 指示剂5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐和四唑氮蓝。当抗万古霉素金葡菌在培养基上生长时，5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐被抗万古霉素金葡菌分泌的碱性磷酸酶降解，产生蓝色的显色原。显色原与 四唑氮蓝作用，转变为紫红色。因此，抗万古霉素金葡菌菌落也会随之呈现由蓝色转变为紫 红色的现象，从而与其它抗药菌相区别。
本发明的培养基将抗万古霉素金葡菌的层层筛选培养和其特征性酶的检测结合在一起， 能够准确、直观地检测、鉴别抗万古霉素金葡菌，其可操作性强，适于在医院及其它研究机 构推广，有助于指导医生用药和新型抗生素的开发。
具体实施例方式
下面以每1000g培养基为例，对本发明培养基的组成作进一步说明。
实施例1
每1000g培养基中含有琼脂10g、胰酪胨18g、酵母粉7g、丙酮酸钠llg、氯化锂8g、 亚碲酸钾5mg、万古霉素24mg、 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐1.5g、四唑氮蓝0.7g，余量为水。上 述原料混合均匀后升温至100-110°C，加热10min后灌装在培养皿中即可。
实施例2
每1000g培养基中含有琼脂13g、胰酪胨14g、酵母粉2g、丙酮酸钠8g、氯化锂2g、 亚碲酸钾8mg、万古霉素7mg、 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐lg、四唑氮蓝0.3g，余量为水。上述 原料混合均匀后升温至100-110'C，加热15min后灌装在培养皿中即可。
实施例3
每1000g培养基中含有琼脂15g、胰酪胨16g、酵母粉4g、丙酮酸钠5g、氯化锂6g、 亚碲酸钾3mg、万古霉素15mg、 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐1.8g、四唑氮蓝0.5g，余量为水。上 述原料混合均匀后升温至100-110'C，加热15min后灌装在培养皿中即可。
实施例4
每1000g培养基中含有琼脂18g、胰酪胨12g、酵母粉8g、丙酮酸钠15g、氯化锂5g、 亚碲酸钾7mg、万古霉素32mg、 5-溴-4-氯-3-卩引哚磷酸盐2g、四唑氮蓝lg，余量为水。上述 原料混合均匀后升温至100-ll(TC,加热10min后灌装在培养皿中即可。
权利要求
1、一种抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基，含有营养物质、凝固物质以及杂菌抑制剂，其特征是所述培养基中还含有万古霉素。
2、 如权利要求1所述的抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基，其特征是每1000g所述培养基中 含万古霉素7-32mg。
3、 如权利要求1或2所述的抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基，其特征是所述的培养基中还 含有5-溴-4-氯-3-B引哚磷酸盐和四唑氮蓝。
4、 如权利要求3所述的抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基，其特征是每1000g所述培养基中 含5-溴-4-氯-3』引哚磷酸盐l-2g，含四唑氮蓝0.3-lg。
5、 如权利要求4所述的抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基，其特征在于培养基中所使用的杂 菌抑制剂为亚碲酸钾和氯化锂，每1000g培养基中含亚碲酸钾3-8mg，含氯化锂2-8g。
6、 如权利要求5所述的抗万古霉素金黄色葡萄球菌培养基，其特征在于所述营养物质为胰酪 胨、酵母粉、丙酮酸钠，凝固物质为琼脂，其在每1000g培养基中的含量为胰酪胨12-18g、 酵母粉2-8g、丙酮酸钠5-15g、琼脂10-18g;余量为水。
全文摘要
本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种鉴别抗万古霉素金黄色葡萄球菌的培养基。本发明的培养基不仅含有营养物质、凝固物质和杂菌抑制剂，还含有万古霉素以及显色指示剂5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐和四唑氮蓝。杂菌抑制剂能够抑制金葡菌以外的杂菌生长，万古霉素则能够抑制对其敏感的金葡菌。指示剂能够使抗万古霉素金葡菌菌落呈现紫红色，进一步与其它抗药菌相区别。本发明将抗万古霉素金葡菌的层层筛选培养和其特征性酶的检测结合在一起，能够准确、直观地检测、鉴别抗万古霉素金葡菌，其可操作性强，适于在医院及其它研究机构推广，有助于指导医生用药和新型抗生素的开发。
文档编号C12Q1/14GK101434983SQ20081023144
公开日2009年5月20日 申请日期2008年12月19日 优先权日2008年12月19日
发明者付光宇, 冯长城, 吴学纬, 崔晓晓, 康运凯, 杨红云, 王则宇, 罗江卫, 郑业焕 申请人:郑州安图绿科生物工程有限公司