专利名称：：利尿钠多肽的制作方法利尿钠多肽相关申请的交叉引用本申请要求2007年7月20日提交的美国临时申请系列号60/951,117的优先权益。联邦赞助研究的声明本发明由政府支持，在美国国家心脏、肺和血液研究所(NationalInstitutesofHeart,Lung,andBloodInstitute)授予的基金HL036634支持下进行。在本发明中，政府具有某些权利。背景入#顿'本文件涉及利尿钠多肽。例如，本文件提供涉及利尿钠多肽的方法和材料以及利尿钠多肽治疗心血管和肾脏疾患的用途。么^;f/t惑利尿钠多肽是可以引起尿钠排泄(增加尿的钠排泄)的多肽。脑、心脏、肾和/或血管组织可以产生所述多肽。概述本文件涉及利尿钠多肽。例如，本文件提供涉及利尿钠多肽的方法和材料以及利尿钠多肽治疗心血管疾患、肾脏疾患或心血管疾患和肾脏疾患两者的用途。在一些实例中，本文提供的多肽可以具有利尿活性、排钠利尿活性、活化cGMP的能力、增加肾小球过滤率的能力、减少肾素产生的能力、减少血管紧缩肽产生的能力、减少醛甾酮产生的能力、减少异常升高的心脏填充压的能力、优化肾脏血液流动的能力或其组合。在一些实例中，本文提供的多肽可以增加内源ANP、BNP和CNP水平。在一些实例中，本文提供的多肽可以缺少降低血压的能力并且可以缺少引起全身性低血压的能力。在一些实例中，本文提供的多肽可以是利尿钠肽受体A、利尿钠肽受体B或利尿钠肽受体A和利尿钠肽受体B两者的激动剂。通常，本文件的一个方面特征为少于44个氨基酸残基长度的多肽，其中所述多肽包括(以从氨基末端到錄末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失(subtraction)或取代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。在另一个方面中，本文件特征为编码少于44个氨基酸残基长度的多肽的分离的核酸，其中所述多肽包括(以从氨基末端到羧基末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。在另一个方面中，本文件特征为含有编码多肽的核酸的载体，所述多肽少于44个氨基酸残基长度，其中所述多肽包括(以从氨基末端到羧基末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基S吏取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。在另一个方面中，本文件特征为含有编码多肽的核酸的宿主细胞，所述多肽少于44个氨基酸残基长度，其中所述多肽包括(以从氨基末端到羧基末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序歹'J。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。宿主细胞可以是真核宿主细胞。在另一个方面中，本文件特征为含有药学可接受载体和少于44个氨基酸残基长度的多肽的药物组合物，其中所述多肽包括(以从氨基末端到羧基末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失或耳又代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序歹'J。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。在另一个方面中，本文件特征为增加哺乳动物排钠利尿活性且不降低血压的方法。所述方法包括向哺乳动物施用少于44个氨基酸残基长度的多肽，其中所述多肽包括(以从氨基末端到羧基末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添力口、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序歹'J。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。在另一个方面中，本文件特征为治疗具有心血管疾患或肾脏疾患的哺乳动物的方法。所述方法包括在其中降低心血管疾患或肾脏疾患表现的严重性的条件下，向哺乳动物施用少于44个氨基酸残基长度的多肽，其中所述多肽包括(以从氨基末端到羧基末端的顺序)(a)SEQIDNO:1所列的序列或SEQIDNO:1所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列；(b)SEQIDNO:2所列的序列或SEQIDNO:2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO:3所列的序列或SEQIDNO:3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。多肽可以包括排钠利尿活性。多肽可以缺少诱导全身性低血压的能力。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序列。多肽可以包括SEQIDNO:1所列的且不超过三个保守氣基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:2所列的且不超过五个保守氨基酸取代的序列。多肽可以包括SEQIDNO:3所列的且不超过三个保守氨基酸取代的序列。多肽可以是基本纯多肽。可以对哺乳动物施用多肽且使其不降低哺乳动物血压。除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的意思。尽管与本文描述的那些相似或相当的方法和材料可以用于实践本发明，仍然在下文描述了合适的方法和材料。本文提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用整体并入。在沖突时，以本说明书(包括定义)为准。此外，材料、方法和实施例仅为证明性的且不打算限制。本发明的一个或多个实施方案的细节列于附图和以下的描述中。本发明的其他特征、目的和优点将通过说明书和附图以及权利要求而明显。图1是32个氨基酸残基长度的CU-NP多肽(SEQIDNO:4)的示意图。SEQIDNO:4的前十个氨基酸残基相应于人尿舒张肽(urodilatin)氨基酸残基1到10并且被指定为SEQIDNO:1。SEQIDNO:4的氨基酸残基11到27相应于人成熟CNP的氨基酸残基6到22并且被指定为SEQIDNO:2。SEQIDNO:4的氨基酸残基28到32相应于人尿舒张肽氨基酸残基28到32并且被指定为SEQIDNO:3。图2是绘制用提到的CU-NP或URO处理的正常麻醉狗的肾灌注压(用RPP=MAP—RAP评估)的图(平均值±SEM;*=P<0.05vs.基线；*=PO.05,各组之间)。图3是绘制在分离的狗肾小球中cGMP应答等摩尔浓度CU-NP、CNP和UR()的图(n二3-7为空白，即对照；11=5-8为肾小球，t=P<0.0001vs.空白；*=P<0.01vs.空白)。图4是绘制在存在或缺少NPR-A拮抗物(lpMA71915)、NPR-B拮抗物(l(iMP19)或这两个拮抗物(先A71915再P:19，两者最终浓度为l(iM)下在分离的狗肾小球中评估cGMP应答等摩尔浓度CU-NP的图(n-2-4为空白；！1=3-6为肾小^求；*=PO.05vs.空白；t=P<0.01vs.空白；*=P<0.0001vs.空白)。图5是绘制在缺少或存在NPR-B抗体(l:100)下在人主动脉内皮细胞中评估cGMP应答CNP或CU-NP的图。详述本文件涉及利尿钠多肽。例如，本文件提供涉及利尿钠多肽的方法和材料以及利尿钠多肽治疗心血管疾患(例如，急性失代偿性心力衰竭、急性冠状动脉综合征和心肌梗塞后心室重构)和肾脏疾患(例如手术期间的肾功能障碍、心脏衰竭继发性肾功能障碍和糖尿病性肾病)的用途。在一些实例中，本文提供的多肽可以具有利尿活性、排钠利尿活性、活化cGMP的能力、增加肾小球过滤率的能力、减少肾素产生的能力、减少血管紧缩肽产生的能力、减少醛甾酮产生的能力、减少异常升高的心脏填充压的能力、优化肾脏血液流动的能力或其组合。在一些实例中，本文提供的多肽可以增加内源ANP、BNP和CNP水平。在一些实例中，本文提供的多肽可以缺少降低血压和SI起全身性低血压的能力。在一些实例中，本文提供的多肽可以是利尿钠肽受体A、利尿钠肽受体B或利尿钠肽受体A和利尿钠肽受体B两者的激动剂。本文提供的多肽可以具有任何序列并且可以具有任何长度。例如，本文提供的多肽可以包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所列的序列。在一些实例中，本文提供的多肽可以包括(a)与SEQIDNO:1所列的序列比对有三个或更少(如两个或更少、一个或零)的氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列；(b)与SEQIDNO:2所列的序列比对有五个或更少(如四个或更少、三个或更少、两个或更少、一个或零)的氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列；以及(c)与SEQIDNO:3所列的序列比对有三个或更少(如两个或更少、一个或零)的氨基酸添加、缺失、取代或其组合的氨基酸序列。例如，本文提供的多肽可以含有SEQIDNO:1所列的序列，除了SEQIDNO:1的第一个苏氨酸残基或最后的丝氨酸残基被缺失(deleted)或用不同的氨基酸残基取代。氨基酸取代可以是保守氨基酸取代。保守氨基酸取代可以是，例如作为酸性氨基酸的天门冬氨酸-谷氨酸；作为碱性氨基酸的赖氨酸/精氨酸/组氨酸；作为疏水氨基酸的亮氨酸/异亮氨酸、曱硫氨酸/缬氨酸、丙氨酸/缬氨酸；作为亲水氨基酸的丝氨酸/甘氨酸/丙氨酸/苏氨酸。保守氨基酸取代也包括基于侧链的分组。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含有酰胺的侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和曱硫氨酸。进行氨基酸取代后，使用本文所述的测定可以评估含有氨基酸取代的多肽的活性。在一些实例中，本文提供的多肽可以包括(a)SEQIDNO:1所列的或与SEQIDNO:1所列的序列比对有三个或更少(如两个或更少、一个或零)的氨基酸缺失、取代或其组合的第一氨基酸序列；(b)SEQIDNO:2所列的或与SEQIDNO:2所列的序列比对有五个或更少(如四个或更少、三个或更少、两个或更少、一个或零)的氨基酸添加、取代或其组合的第二氨基酸序列；以及(a)SEQIDNO:3所列的或与SEQIDNO:3所列的序列比对有三个或更少(如两个或更少、一个或零)的氨基酸缺失、取代或其组合的第三氨基酸序列。例如，本文提供的多肽可以包括SEQIDNO:4所列的序列或由SEQIDNO:4所列的序列组成。本文提供的多肽可以具有任何长度。例如，本文提供的多肽可以是在25个和45个之间(如26个和44个之间、27个和43个之间、28个和42个之间、29个和41个之间、30个和40个之间、31个和39个之间或30个和35个之间)的氨基酸残基长度。应理解，25个或45个氨基酸残基长度的多肽是具有25个和45个氨基酸残基之间的长度的多肽。在一些实例中，本文提供的多肽可以是基本纯多肽。如本文所用，涉及多肽的术语"基本纯"是指多肽基本不含与其天然締合的其他多肽、脂质、糖类和核酸。因此，基本纯多肽是从其自然环境中分离并且有至少60%纯度的任何多肽或任何化学合成多肽。基本纯多肽可以为至少约60、65、70、75、80、85、90、95或99百分比纯度。通常，基本纯多肽将在非还原聚丙烯酰胺凝胶上产生单个主要条带。编码多肽的重组核酸的表达或化学合成(例如使用固相多肽合成方法或肽合成仪，如ABI431A肽合成仪；AppliedBiosystems;FosterCity,CA)可以获得本文提供的多肽。例如，使用编码本文提供的多肽的表达载体的标准重组技术可以被应用。然后可以使用诸如亲和色谱技术和HPLC纯化获得的多肽。通过任何合适的方法可以测量纯化的程度，包括且不限于柱色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱。可以设计或构建本文提供的多肽使之含有标志序列(tagsequence)，其允许多肽被纯化(如捕获到亲和基质)。例如，可以使用诸如c-myc、红细胞凝聚素、多组氨酸或FlagTM标志(Kodak)的标志来帮助多肽纯化。所述标志可以被插入到多肽的任何地方，包括在羧基或氨基末端。可以使用的其他融合物包括帮助检测多肽的酶，如碱性磷酸酶。可以制备本文提供的多肽使之含有三个区，包括N末端(如来自人尿舒张多肽的N末端序列)的第一区、包括诸如人CNP多肽的成熟利尿钠多肽环状结构的第二区和包括C末端(如来自人尿舒张多肽的C末端序列)的第三区。可以使用本文提供的多肽治疗心血管疾病、充血性心力衰竭、心肌梗塞、冠心病、肾病、肝病、癌症、代谢疾病或其组合。例如，在其中减轻ii人冠心病症状的严重性的条件下，具有SEQIDNO:4所列的氨基酸序列的CU-NP多肽可以被施用于具有冠心病的人。通过与药学可接受无毒赋形剂或载体混合，可以将本文提供的多肽配制成药物组合物。可以以有效治疗诸如心、肝、肾或其他钠残留疾患的量向需要其的受治疗者施用所述组合物。可以制备药物组合物用于肠胃外施用，特别是生理学緩冲水溶液中的液体溶液或悬浮液的形式；用于口服施用，特别是片剂或胶嚢剂的形式；或用于鼻内施用，特别是粉剂、滴鼻剂或气溶胶的形式。可以使用合适的方法按照需要制备用于其他途径施用的组合物。用于肠胃外施用的制剂可以包括普通的赋形剂、无菌水、盐水、诸如聚乙二醇的聚烷撑二醇、植物源油、氢化萘和其组合。在一些实例中，生物相容的、生物可降解的交酯聚合物、交酯/乙交酯共聚物、聚氧乙烯(polyoxethylene)-聚氧丙烯共聚物或其组合可以被用作体内多肽控释的赋形剂。可以使用的其他合适的肠胃外给药系统包括但不限于乙烯醋酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可移植输注系统、脂质体和其组合。用于吸入施用的制剂可以包括诸如乳糖的赋形剂。吸入制剂可以是含有诸如聚氧乙烯-9-月桂醚、甘胆酸盐、脱氧胆酸盐或其组合的水溶液，或者它们可以是以滴鼻剂形式施用的油溶液。如果需要，含有本文提供的多肽的组合物可以配制成凝胶以在鼻内应用。用于肠胃外施用的制剂可以包括口腔施用的甘胆酸盐。为了口服施用，可以使用合适的方法和药学可接受赋形剂制备片剂或胶嚢剂，所述赋形剂如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基曱基纤维素)；填料(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠(sodiumstarchglycolate));或润湿剂(例如月才圭碌b酸钠(sodiumlaurylsulfate))。4吏用合适的方法可以包衣片剂。可以配制口服施用的制品以提供多肽的控释。鼻制品可以以液体形式或干燥产品提供。雾化含水悬浮液或溶液可以包括载体或赋形剂以调节pH和/或张力。薦竭,應W裙凝本文件还提供了编码一种或多种本文提供的多肽的分离的核酸。如本文所用，涉及核酸的术语"分离的"是指自然存在的核酸，其没有直接邻(一个在5'末端并且一个在3'末端)。例如，分离的核酸可以是但不限于任何长度的重组DNA分子，条件是通常发现直接在自然存在的基因组中的所述重组DNA分子侧翼的核IM列之一被移除或不存在。因此，分离的核酸包括但不限于作为独立于其他序列的单独分子(例如PCR或限制核酸内切酶处理产生的cDNA或基因组DNA片段)存在的重组DNA以及被整合入载体、自主复制质粒、病毒(如逆转录病毒、腺病毒或疱渗病毒)或原核生物或真核生物基因组DNA的重组DNA。此外，分离的核酸可以包括是杂交或融合核酸序列的部分的重组DNA分子。如本文所用，涉及核酸的术语"分离的"还包括任何非自然存在的核酸，这是由于在自然界中找不到非自然存在的核酸序列并且其没有在自然存在的基因组中直接邻接的序列。例如，诸如构建核酸的非自然存在的核酸被认为是分离的核酸。使用普通分子克隆或化学核酸合成技术可以制备构建核酸(例如编码多肽的核酸，所述多肽含有SEQIDNO:4所列的氨基酸序列或由SEQIDNO:4所列的氨基酸序列组成)。分离的非自然存在的核酸可以独立于其他序列或整合入载体、自主复制质粒、病毒(如逆转录病毒、腺病毒或疱渗病毒)或原核生物或真核生物基因组DNA。此外，非自然存在的核酸可以包括杂交或融合核酸序列的部分的核酸分子。认为存在于诸如cDNA库或基因组库中的数百至数百万的其他核酸中或含有基因组DNA限制酶切消化液的凝胶切片中的核酸不是分离的核酸。如本文所用，术语"核酸"是指RNA和DNA,包括mRNA、cDNA、基因组DNA、合成(例如化学合成的)DNA和核酸类似物。核酸可以是双链的或单链的，并且在单链时可以是有义链或反义链。此外，核酸可以是环状或线性的。可以在碱基部分、糖部分或磷酸主链修饰核酸类似物以提高诸如核酸的稳定性、杂交或溶解性。碱基部分的修饰包括脱氧尿苷替换脱氧胸苷以及5-曱基-2，-脱氧胞苷和5-溴-2，-脱氧胞苷替换脱氧胞苷。糖部分的修饰可以包括修饰核糖的2'羟基以形成2，-0-曱基或2，-0-烯丙基糖。可以修饰脱氧核糖磷酸主链以制备吗啉核酸，其中将每个碱基部分连接到六元吗啉环或肽核酸，其中假肽主链取代脱氧磷酸主链并且保留四个碱基。参见例^口,Summerton和WellerJwi&ewseiVwc'/e/cyic/di>wgDev.，7:187-195(1997);和Hymp等人，5/ow取".C/^附.，4:5-23(1996)。此外，可以用诸如硫代磷酸或二硫代磷酸主链、氨基磷酸酯(phosphoroamidite)或烷基磷酸三酯主链取代脱氧磷酸主链。本文提供的核酸可以包括编码SEQIDNO:4所列的氨基酸序列的序列或由编码SEQIDNO:4所列的氨基酸序列的序列组成。例如，所述核酸可以包括CNP和尿舒张肽的人核酸序列，其被构建为编码SEQIDNO:4所列的氛基酸序列。通常，本文提供的分离的核酸为至少IO个核苷酸长度(例如10、15、20、25、30、35、40、50、75、100、200、300、350、400或更多的核苷酸长度)。少于全长的核酸分子作为诸如诊断目的的引物或探针可以是有用的。标准技术可以制备分离的核酸分子，包括但不限于普通分子克隆和化学核酸合成技术。例如，可以使用聚合酶链式反应(PCR)技术。PCR指一种规程或技术，其中酶促扩增目标核酸。使用来自关注区域的末端或通常更多的序列信息设计寡核苷酸引物，其序列与被扩增的模板的相反链相同。可使用PCR从DNA以及RNA(包括来自总基因组DNA或总细胞RNA的序列)扩增具体序列。引物通常是15至50个核苷酸长度，但是其范围可以从10个核苷酸到数百核苷酸长度。例如，引物可以是12、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40或45个核苷酸长度。传统方法可以从限制酶切消化液中纯化引物，或可以化学合成引物。为了扩增中的最大效率，引物通常是单链的，但是引物可以是双链的。在用于扩增以前，首先使双链引物变性(例如加热处理)以分离链。普通PCR技术参见，例如PCRPrimer:ALaboratoryManual(PCR引物:实-验室手册)Dieffenbach和Dveksler编，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1995。当使用RNA作为模板资源时，可以使用逆转录酶合成互补DNA(cDNA)链。也可以使用连接酶链反应、链置换扩增、自主序列复制或基于核酸序列的增扩以获得如其他地方所述的分离的核酸(Lewis，Ge"e"c五"g^ee"'"gA^ws，12(9):1(1992);Guatelli等人，尸rac.Wa".爿cW.87:1874-1878(1990);以及Weiss,5We"ce，254:1292(1991))。还可以将分离的核酸化学合成为单核酸分子(例如使用3，到5'方向的自动化DNA合成，所述合成使用亚磷酰胺技术)或系列寡核苷酸。例如，可以合成一对或多对长寡核苷酸(例如>100个核苷酸)，其包含需要的序列，且每对含有互补短区段(例如约15个核苷酸)以致当寡核苷酸对退火时形成双链体。使用DNA聚合酶扩展寡核苷酸，产生每个寡核苷酸对的单、双链核酸分子，其然后可以连接到载体。诱变也可以获得分离的核酸。例如，使用诸如通过PCR的寡核苦酸定向诱变和/或定点诱变的标准技术可以突变编码多肽的核酸序列，所述多肽具有SEQIDNO:l、2、3或4所列的序列。参见ShortProtocolsinMolecularBiologyChapter8，(精编分子生物学实验指南第8章)，GreenPublishingAssociates和JohnWiley&Sons,Ausubel等人编辑，1992。所述突变包括添加、缺失、取代和其组合。戎谬，^fi勿/^本文件还提供了含有本文提供的核酸的载体。如本文所用，"载体"是复制子，如质粒、噬菌体或粘粒，其中可以插入另一个DNA区段以导致插入区段的复制。载体可以是表达载体。"表达载体"是含有一个或多个表达控制序列的载体，并且"表达控制序列"是控制和调节另一个DNA序列转录和/或翻译的DNA序列。在本文提供的表达载体中，所述核酸可以可操作地连接到一个或多个表达控制序列。如本文所用，"可操作地连接"是指整合入基因组构建体以至表达控制序列有效地控制关注的编码序列的表达。表达控制序列的例子包括启动子、增强子和转录终止区。启动子是包括DNA分子区的表达控制序列，通常在转录启始点上游的100个核苷酸内(通常在RNA聚合酶II的启始位点附近)。为了使启动子控制编码序列，必须将多肽翻译阅读框架的翻译启始位点置于启动子下游的一个和约五十个核苷酸之间。增强子提供有关时间、位置和水平的表达特异性。不像启动子，增强子在位于与距离转录位点不同距离时，增强子可以具有作用。增强子也可以位于转录启始位点的下游。当RNA聚合酶能够将编码序列转录成mRNA时，编码序列在细胞中"可操作地连接"并且在表达控制序列的"控制下"，然后将所述mRNA翻译成编码序列编码的多肽。15合适的表达载体包括但不限于源自诸如噬菌体、杆状病毒、烟草花叶病毒、疱渗病毒、巨细l包病毒、逆转录病毒、痘病毒、&泉病毒和腙_伴随病毒的质粒和病毒载体。许多载体和表达系统可以从诸如Novagen(Madison,WI)、ClontechLaboratories(MountainView,CA)、Stratagene(LaJolla,CA)和Invitrogen/LifeTechnologies(Carlsbad,CA)的公司商业获得。表达载体可以包括设计用于促进表达核酸序列的随后操作(如纯化或定位)的标志序列。标志序列，诸如绿色焚光蛋白(GFP)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)、多组氨酸、c-myc、红细胞凝聚素或FlagTM标志(Kodak,NewHaven:CT)序列，通常表达为与编码多肽的融合。所述标志可以插入到多肽的任何位置，包括羧基或氨基末端。术语"宿主细胞，，是指可以引入核酸分子或载体的原核细胞和真核细胞。可以使用任何方法将核酸引入细胞。例如，可以使用磷酸钙沉淀、电穿孔、热激、脂质转染、显微注射和病毒介导的核酸转移将核酸引入细胞。此外，在体内可以如其他地方所述将棵DNA直接传送到细胞(美国专利第5,580,859和5,589,466号)。本文件提供了检测本文提供的多肽的方法和材料。可以使用所述方法和材料监测接受作为治疗物的多肽的哺乳动物的多肽水平。例如，使用一种或多种抗体可以免疫检测本文提供的多肽(例如含有SEQIDNO^所列的氨基酸序列的CU-NP多肽)。如本文所用，术语"抗体"包括完整的分子和其片段，其能够结合到本文提供的多肽的表位决定子。术语"表位"是指抗体互补位结合的抗原上的抗原决定子。表位决定子通常由诸如氨基酸或糖侧链的分子的化学活性表面组群组成，并且通常具有特定三维结构特征和特定的电荷特征。表位通常具有至少五个连续的氨基酸(连续表位)，或者可选地，可以是限定特定结构的一组非连续氨基酸(例如构象表位)。术语"抗体，，包括多克隆抗体、单克隆抗体、人源化的或嵌合的抗体、单链Fv抗体片段、Fab片段和F(ab)2片段。多克隆抗体是免疫动物的血清包含的抗体分子的异源种群。单克隆抗体是抗原特定表位的抗体的同源种群。对本文提供的多肽(例如含有SEQIDNO:4所列的氨基酸序列的CU-NP多肽)具有特异性结合亲和力的抗体片段可以通过已知技术制备。例如，抗体分子的胃蛋白酶消化可以制备F(ab')2片段；减少F(ab')2片段的二硫键可以制备Fab片段。在一些实例中，可以构建Fab表达库。参见，例如Huse等人，5We"ce,246:1275(1989)。一旦制备抗体或其片段，可以用标准免疫测定方法(包括ELISA技术、放射性免疫测定和蛋白质印迹)^r测抗体或其片段对本文提供的多肽的识别。参见ShortProtocolsinMolecularBiology,Chapter11,(精编分子生物学实验指南，第11章)GreenPublishingAssociates和JohnWiley&Sons,Ausubel,F.M等人编辑，1992。在免疫学测定中，可以直接或间接标记对本文提供的多肽具有特异性结合亲和力的抗体或结合到所述抗体的次级抗体。合适的标记包括但不限于放射性核素(例如125I、131I、35S、3H、32P、"P或"C)、荧光部分(例如荧光素、FITC、PerCP、若丹明或PE)、发光部分(例如Invitrogen(Carlsbad,CA)提供的Qd0tTM纳米粒)、吸收确定波长的光的化合物或酶(例如-成性磷酸酶或辣根过氧化物酶)。通过与生物素结合可以间接标记抗体，然后用以上描述的分子标记的抗生物素蛋白或链霉抗生物素检测。检测或量化标记的方法依赖于标记的性质并为本领域所知。检测器的例子包括但不限于x射线胶片、放射性计数器、闪烁计数器、分光光度计、色度计、荧光计、照度计和比重计。可以使用本领域技术人员熟悉的这些方法的组合(包括"多层"测定)力。强测定的灵敏度。检测本文提供的多肽的免疫学测定可以以多种已知形式执行，包括夹心式测定、竟争测定(竟争性RIA)或桥免疫测定。参见，例如，美国专利第5,296,347、4,233,402、4,098,876和4,034,074号。检测本文提供的多肽的方法通常包括用结合到本文提供的多肽的抗体接触生物样品并且检测多肽与抗体的结合。例如，通过本领域所知的多种方法中的任何一种，可以将对本文提供的多肽具有特异性结合亲和力的抗体固定于固相基质，然后将其暴露于生物样品。通过利用表面等离子共振现象可以检测固相基质上多肽与抗体的结合，结合后导致表面等离子共振强度的变化，可以通过合适的i殳备(例长口Biacore4义(BiacoreInternationalAB,Rapsgatan,Sweden))定性地或定量地检测结合。在一些实例中，可以如上所述地标记和检测抗体。可以制作使用已知数量的本文提供的多肽的标准曲线帮助量化多肽水平。在一些实施方案中，"夹心式"测定可以被用于检测本文提供的多肽的存在、缺失或水平，在"夹心式"测定中捕获抗体被固定于固相基质。可以用生物样品接触固相基质以至样品中关注的任何多肽可以结合到固定抗体。使用对多肽具有特异性结合亲和力的"检测"抗体可以确定结合到抗体的多肽的存在、缺失或水平。在一些实施方案中，可以使用捕获抗体，其对CNP或尿舒张肽以及本文提供的多肽具有结合亲和力。在这一实施方案中，可以使用检测抗体，其对本文提供的特定多肽(例如含有SEQIDNO:4所列的氨基酸序列的CU-NP多肽)具有特异性结合亲和力。应理解在夹心式测定中，捕获抗体与检测抗体不应该结合到相同的表位(或多克隆抗体的实例中的系列表位)。因此，如果使用单克隆抗体作为捕获抗体，那么检测抗体可以是另一种单克隆抗体(其结合于与捕获单克隆抗体结合的表位物理分离的或仅部分重叠的表位)或结合到不同于或除了捕获单克隆抗体结合的表位以外的表位的多克隆抗体。如果使用多克隆抗体作为捕获抗体，那么检测抗体可以是单克隆抗体(其结合于与捕获多克隆抗体结合的任何表位物理分离的或部分重叠的表位)或结合到不同于或除了捕获多克隆抗体结合的表位以外的表位的多克隆抗体。夹心式测定可以被执行为夹心式ELISA测定、夹心式蛋白质印迹测定或夹心式免疫磁性检测测定。可以结合抗体(例如捕获抗体)的合适固相基质包括但不限于微量滴定板、管、诸如尼龙或硝化纤维膜的膜，以及珠或颗粒(如琼脂糖、纤维素、玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、磁性或可磁化的珠或颗粒)。当使用自动化免疫测定系统时，磁性或可磁化颗粒可以特别有用。通过标准方法可以制备对本文提供的多肽具有特异性结合亲和力的抗体。例如，多肽可以按以上所述来重组制备；可以从生物样品纯化(例如异源表达系统)；或可以被化学合成，并且用于免疫宿主动物，包括兔、鸡、小鼠、豚鼠(guineapig)或大鼠。例如，具有SEQIDNO:4所列的氨基酸序列的多肽或其片段(至少六个氨基酸长度)可以被用于免疫动物。可以用于增加免疫应答的各种佐剂依赖于宿主的种类并且包括弗氏佐剂(完全和不完全)、诸如氢氧化铝的矿物凝胶、表面活性物质(例如溶血卵磷脂、聚氧丙烯多元醇(pluronicpolyol)、聚阴离子、肽、油乳剂、钥孔虫戚血蓝蛋白和二硝基酚)。使用本文提供的多肽和标准杂交瘤技术可以制备单克隆抗体。特别是，通过用于由培养基中的连续细胞系(例如Kohler等人，Atow'e，256:495(1975)描述的)制备抗体分子的任何技术、人B细胞杂交瘤技术(Kosbor等人，/w附wwofogv7bdqy,4:72(1983);Cole等人，Prac.Ato/80:2026(1983))和EBV杂交瘤技术(Cole等人，"MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,"(单克隆抗体和癌症治疗)AlanR.Liss，Inc.,pp.77-96(1983))可以获得单克隆抗体。所述抗体可以是任何免疫球蛋白类，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD和其任何亚类。制备单克隆抗体的杂交瘤可以在体内和体外培养。电离(ESI)和基质辅助激光解吸电离(MALDI)。参见，例如Gevaert等人，五/e"rop/zoms'&,22(9):1645-51(2001);Chaurand等人，J!爿m.Soc.S/e"raw.，10(2):91-103(1999)。对所述应用有用的质谱仪可获自AppliedBiosystems(FosterCity,CA);BrukerDaltronics(Billerica,MA)和AmershamPharmacia(Sunnyvale,CA)。本发明将被进一步描述于以下的实施例，其不限制描述于权利要求的本发明的范围。实施例实施例1一CU-NP的合成使用ABI431A肽合成仪设计和合成含有图1所列的序列的多肽。所述多肽被称为CU-NP多肽(图1)。通过高效液相色谱/质谙确定合成的CU-NP多肽。其分子量为3535.09并且其氨基酸序列是Thr-Ala-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Leu-Lys-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Met-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Sei'-Phe-Arg-Tyr(SEQIDNO:4)具有连接Cys残基的二硫键(图1)。实施例2—CU-NP的体内效应评估三只正常麻醉的狗的心肾功能。在输注前、在以每个剂量水平45分钟静脉内输注10、50和100ngCU-NP/kg/分钟期间(即每只狗获得连续45分钟输注10、50和100ng/kg/分钟)和在输注后获得清除率。分别通过Li+和菊粉的清除率评估肾小管(tubular)Na+的重吸收和GFR。通过放射性免疫测定定量神经激素。通过重复测量的方差分析(ANOVA)，随后通过Dunnett检验来分析数据。结果(平均值土SEM)列在表1中。此外，血浆肾素活性从9±2减少到5土]，到3±l卞到3士卞ng/mL/小时,并且血管紧缩肽II的水平从18士1减少到10土0.4卞到5士0.4卞到7士l卞pg/mL。与输注前(323±6)比较，输注100ng/kg/分钟(329±5)结束时没有观察到QTc间隔(ms)的显著变化。这些结果证明含有CNP和尿舒张肽氨基酸序列的多肽可以以依赖剂量的方式(l)增加排钠利尿、利尿和GFR;(2)减少心脏填充压；以及(3)抑制肾素和血管紧缩肽且不诱导明显的低血压。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*=P<0.05;t=P<0.01;GFR=肾小球过滤率；PFRNa^钠的近端部分重吸收；0卩^^+=钠的远端部分重吸收；PCWP-肺毛细血管楔压；RAP-右房压；MAP:平均动a永压。实施例3—CU-NP的进一步生物效应CU-NP或CNP多肽以50ng/kg/分钟的速率75分钟静脉内输注于正常麻醉的狗。在输注前(pre-I),输注30和60分钟时以及输注后(post-I)收集血液和尿液样品。使用菊粉清除率评估肾小球过滤率(GFR)。使用锂清除技术测量Na+的近端和远端部分重吸收(分别为PFR他和DFRNa)。对比后三个时间点与pre-I。当比较两个时间点的结果时，使用Student'st检验，而使用重复测量的方差分析比较四个时间点。结果(平均值士SEM)列在表2A和表2B中。CU-NP多肽显著增加了血浆cGMP和尿cGMP的排泄。CU-NP也增加了尿流量和尿的Na+排泄，并且导致增加的肾小球过滤率。肺毛细血管楔压和右房压被降低且不减少全身性低血压。肺动脉压也显著降低，并且保持心输出量。CU-NP输注期间，血浆肾素活性、血管紧缩肽n的水平和醛甾酮水平被抑制，但是接着在CU-NP输注停止后升高或"反弹"。这些数据表明长期作用形式的CU-NP可以用于连续的抑制神经激素。CU-NP还显著地增加cGMP的肾脏产生和尿的K+排泄。PFR他+和DFRN針均显著减少。这些发现与重量调节的肾血流量的增加和肾血管阻力的减少有关。还观察到血细胞比容的增加。增加了血浆ANP、血浆BNP和血浆CNP,和ANP、BNP和CNP的尿排泄。这些结果证明CU-NP多肽可具有cGMP活化、利尿、排钠利尿、GFR增强、肾素-血管紧缩肽-醛甾酮系统(RAAS)抑制、心脏卸载(cardiac-unloading)和良好的肾血液动力学的活性，而缺少降低血压和引起全身性低血压的能力。此外，这些结果证明CU-NP多肽可以增加内源ANP和BNP的水平。合成的CU-NP多肽的肾小管效应与近端小管和内骨髓收集管道细胞的水平的作用一致。表2ACt/-7VP的萨;^心J&^炎条输注前30分钟60分钟ir注后GFR(mL/min)38.4±3.650.7±2.6'53.8±2.8n50.1±3.5'尿流量(mL/min)0.13±0.021.28±0.25卞，；U4士0.22卞，0.33±0.04Na+排泄(pLEq/min)8.0±3.3216.4±42.3"'237.7±35.8t，151.2±9.4KT排泄(ueq/min)14.9±4.568.3±2.5T74.6±15.3T32.9±3.0PFR歸(%)84.9±2.562.4±4.0T6U士1.9卞70.4±2.8TDFRNa+'(%)99.2±0.292.4±I.2"192.2±1.1"97.7±0.4cGMP的肾产生469.0±55.42168±531TS2987±622"1394±185血浆cGMP(pmol/mL)8.2±0.726.2±3"129.8±1.5'n]3.0±0.9T尿cGMP排泄('pmol/min)770±483508±574卞14591士664"i2052±208PCWP(讓Hg)5.6±0.93.9±0.7'2.9±0.9T4.3±0.8RAP(mmHg)1.士0.60.3±0.5-0.1±0.5'0.7±0.4全身性低血压(mm:Hg)135.9±3.9135.9±2.7]33.9±3.6142.3士2.7tPAP(mmHg)11.8±0.910.7±0.8'10.5±0.71"12.3±0.7心输出量(L/tnin)3.1±0.33.4±0.53.0±0.52.8±0.5血浆肾素活性(ng/mL/hour)8.8±22.5±0.81.5±0.4T4.0±1.3卞血管紧缩肽II(pg/mL)〗3.9±2.06.9±0.7T4.5±0.3T22.6±1.6T醛甾酮(ng/dL)15.8±2.74.2±2.212.1±2.〗调节RBF(mL/kg/min)10.8±0.811.64±0.512.21±0.4T11.60±0.5RVR(xl(T5mmHg，min,L國1)0.55±0.050.50士0.040.47±0.03卞0.53±0.04血细胞比叙％)37.8±1.340.3±.3T4U±1.4T40.3±1.8T血浆ANP(pg/mL)R]±0.816.7±0.9'16.6±i.r15.2±0.6血浆BNP(pg/mL)8.2±0.921.0±1.8T17.0±2.2，'10.1±1.4血浆CNP(pg/mL)4.0士0.315.4±0.9卞15.1±1.41.3.2±0.2ANP排泄(pg/min)3.2±1.521.9±9.528.3±13.610.4±2.5BNP排泄(pg/min)13.9士1.518.2±1.519.3±1.220土5.4'CNP排泄(pg/min)2.0±0.44.0±1.29.1±3.921.5±17.4*=P<0.05vs.pre-I;t=P<0.01vs.pre画I;i=P<0.05vs.CNP;§=P<0.01vs.CNP;1I=P<0.00]vs.CNP;GFR-肾小球过滤率；PFR他,钠的近端部分重吸收；DFRN壯-钠的远端部分重吸收；PCWP:肺毛细血管楔压；RAP-右房压；PAP=肺动脉压；R.BF-肾血流量；RVR^肾血管阻力。22表2B<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>*=P<0.05vs.pre-I;t=P<0.01vs.pre-I;GFR二肾小球过滤率；PFRNaf钠的近端部分重吸收；DFR他+:钠的远端部分重吸收。实施例3—人主动脉内皮细胞中和体内CU-NP的评估在人主动脉内皮细胞(HAEC)中检测CU-NP，确定体内cGMP活化的时间进程。在C02培养箱中，CU-NP以l(T10、10-8或10^M与HAEC(传代2-5,80-90%融合)培养10分钟。将CU-NP(n=6)或CNP(n=3)以14pmol/kg/min75分钟静脉内输注于正常麻醉狗。在输注前、输注期间(I)的25、30、45、60、75分钟和输注后(post-I)的1、2、4、6、10、20、30、45、60分钟收集血液。通过放射免疫测定定量环GMP。如表3所示，在HAEC中，CU-NP刺激了cGMP的产生(10-6]/[vs.未处理，PO.Ol)。此外，与pre-I相比，CU-NP增加了体内血浆cGMP(I和post-I期间的所有时间点，PO.Ol，除了post-I的45分钟，P<0.05)。与CNP比较，CU-NP更大程度地活化cGMP(PO.OOl，I的25分钟至post-I的30分钟)。因此，在HAEC中，CU-NP显著活化cGMP，并且在体内与CNP比较，CU-NP更大程度上显著刺激cGMP。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>1(TSM0.03±0.021(T6M0.571±0.05卞未处理0.003±0.002'NPO.Olvs,未处理实施例4一分离的狗肾小球中CU-NP的cGMP刺激作用进行实验以确定在分离的肾小球中CU-NP是否直接刺激cGMP并比较CU-NP与CNP、URO和CNP-C的cGMP活化作用，所述CNP-C由CNP的全长22-AA和融合在C末端位置的N末端的复制物组成。在收获正常狗的肾后分离肾小球。与对照比较，CU-NP、CNP、URO和CNP-C(1(T5M)与肾小球一起培养。用RIA和蛋白质水平的修正测量环GMP。与各自的对照比较，CU-NP和URO表现出更大的cGMP应答(PO.Ol)，但是组间没有差异。与CNP和CNP-C比较，CU-NP和URO刺激更大的cGMP应答(PO.OOl)。因此，与CNP相比，在肾小球中CU-NP更大程度地刺激cGMP,但是具有与URO相似的程度。CNP-C没有活化cGMP。这些数据表明潜在地;陂活化的增强cGMP可能需要NP受体-A的配体的N和/或C末端。表4处理cGMP(平均值±SEM,finol/貼)CU-NP0.73±0.09卞$CNP0.0019±0.0005URO0.69±0.07卞$CNP-C0.00597±0.0053卞=P<0.01vs.相应对照；*=P<0.001vs.CNP和CNP-C实施例5—CU-NP的血浓缩效应研究三种人NP(BNP、CNP、URO和CU-NP)以评估它们对血管渗透性的效应，其通过血细胞比容的增加表示。正常麻醉的狗接受以14pmol/kg/分钟静脉内输注BNP(n-7)、CNP(n=6)、URO(n=5)或CU-NP(n=6)。血液被收集到水上的EDTA管中并离心。报告了基线和输注60分钟后的数据。除了增加的血细胞比容(表5)，CU-NP减少了体内PCW压(基线6士0.9mmHg，60分钟3±0.9mmHg;P<0.05)。因此，CU-NP的血浓缩效应可以导致其体内的心脏卸载作用。表5Cf7-iVP^/^勿_^^容时妓/处理血细胞比容(二卜均值土SEM;%)基线60minBNP36±140±2*CNP36±137±1URO37±140±1*CU-NP38±141±l卞(*=P<0.05;t=P<0.01)实施例6—狗的试验性心力衰竭中CU-NP的心肾和神经元介质作用在狗心力衰竭(HF)中评估CU-NP以确定CU-NP是否活化第二信使cGMP并发挥有益作用且没有过度的低血压。通过起搏(180bpm,持续10天)诱导温和的HF。CU-NP以75ng/kg/分钟静脉内输注于6只麻醉的狗，持续75分钟。通过菊粉清除率测量GFR。通过Li+清除率评估Na+的部分重吸收(FRNa)。在输注前(pre-I)、I的30和60分钟和post-I收集数据。还测量血浆肾素活性、血管紧缩肽II、醛甾酮和cGMP。结果(平均值土SEM)列在表6中。CU-NP增加血浆cGMP、尿的cGMP排泄、网状(net)肾cGMP产生、尿流量和尿的Na+排泄。近端和远端FRNa减少。肾血流量和GFR增加，且MAP温和的减少。CO和SVR没有变化。PCWP和PAP减少。还抑制了血浆肾素活性、血管紧缩肽II和醛甾酮。因此，在狗的HF中CU-NP活化cGMP并且发挥肾素增强、心脏卸载和肾素-血管紧缩肽-醛甾酮系统抑制的作用，且没有过度的低血压。表6试-録朋CC/画,^萨和心j^#炎拔25<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>*=P<0.05vs.pre-I;t=P<0.01vs.pre-I;GFR^肾小球过滤率；PFRNaf钠的近端部分重吸收；DFR.Naf钠的远端部分重吸收；PCWP:肺毛细血管楔压；PAP-肺动脉压；RBF-肾血流量；MAP-平均动脉压；CC^心输出量；SVR=全身性血管阻力。实施例7—CU-NP对肾灌注压的体内效应由于RPP是肾功能的关键决定因素，因此进行研究以确定CNP、CU-NP和URO对肾灌注压(RPP，由MAP-RAP评估)的体内作用。考虑到CU-NP的GFR增强作用，还进行体外研究以检验CU-NP(不像CNP)还活化NPR-A(—种强力的肾作用NP受体)的假设。以14.14pmol/kg/分钟向17只正常麻醉的狗静脉内输注等摩尔剂量的CU-NP、人CNP或人URO,持续75分钟。在基线和输注60分钟评估RPP。数据用平均值±SEM表示。测量肽输注开始后从第16分钟到第45分钟和从第46分钟到第75分钟的清除率。在每组中，使用双尾配对t检验比较肽输注60分钟和基线的RPP。通过两因子方差分析和随后的Bonferroni后检验(post-test)进行各组之间的比较。在存在或缺少NPR-A拮抗物(A71.9153(l，M))或NPR-B拮抗物(P194(UiM)),或两种拮抗物依序加入(A71915接着是P194,两者最终浓度为1pM)下，在收获后从狗肾分离的肾小球中还评估了cGMP对3种肽的应答。为了确定NPR-B参与cGMP对CU-NP的应答，使用人主动脉内皮细胞(HAEC)进行附加实验。在缺少或存在NPR-B配体结合结构域的抗体下，通过持续10分钟培养CU-NP(10"，M)确定环GMP应答。通过单因子方差分析和随后的Bonferroni后;f企验分析体外数据(平均值±SEM)。统计显著定义为P<0.05。将GraphPadPrism4(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)用于统计分析。在体内研究中，与URO比较，CU-NP维持了RPP(mmHg)。当比较两组时，在肽输注60分钟时，使用URO的RPP显著低于CU-NP(P<0.05,图2)。CNP不改变RPP。表7Ct/-,,力i^尸^ti<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>承二P:0.05vs.基线体外，10-5MCU-NP7倍增加了cGMPvs.CNP(0.76±0.05*fmol/^igvs.0.11±0.05fmol/吗)，其具有甚至超过URO的活化cGMP的趋势(0.54±0.10fmolg;P=0.086)。这些结果表述于图3中。如图4所示，通过用A71915(0.31±0.05卞fmol/吗)阻断NPR陽A、用P19(0.28±0.04卞fmol4ig)阻断NPR-B或用A71915和P19(0.23±0.05卞fmol4ig)阻断NPR-A和NPR-B削弱CU陽NP的cGMP刺激作用。在HAEC中，1(T6MCU-NP和CNP分別将cGMP增加到0.30±0.02pmol/mL和0.17±0.04pmol/mL(CU-NPvs.CNP的P<0.01;CU-NPvs.对照的P〈0.001;CNPvs.对照的PO.OOl)。在存在NPR-B抗体(l:IOO)下，CU-NP的cGMP应答被削弱到0.19±0.02pmol/mL并且CNP的cGMP应答被削弱到0.08±0.01pmol/mL(CU-NPvs.无抗体的PO.01并且CNPvs.无抗体的P<0.05)。结果绘制于图5。这些数据表明NPR-B至少部分地参与了cGMP对CU-NP的应答。因此，在肾增强剂量下，CU-NP维持了RPP，相反，URO降低了RPP。此外，在分离的肾小球中，CU-NP的作用涉及NPR-A和NPR-B的共活化，代表肾中新型二元NP受体活化剂。在人主动脉内皮细胞中，NPR-B部分参与了cGMP对CU-NP的应答。因此，CU-NP代表新颖的新肽技术，其能够活化二元NPR-A和NPR-B。其他实施方案应理解，虽然已经结合其详迷描述了本发明，但先前的描述意在说明并且不限制本发明的范围，所述范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和调整属于以下权利要求的范围。权利要求1.一种少于44个氨基酸残基长度的多肽，其中所述多肽以从氨基末端到羧基末端的顺序包括(a)SEQIDNO1所列的序列或SEQIDNO1所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列；(b)SEQIDNO2所列的序列或SEQIDNO2所列的且不超过五个添加、缺失或取代的序列；以及(c)SEQIDNO3所列的序列或SEQIDNO3所列的且不超过三个添加、缺失或取代的序列。2.如权利要求l所述的多肽，其中所述多肽包含排钠利尿活性。3.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽缺乏诱导全身性低血压的能力。4.如权利要求l所述的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO:1所列的序列。5.如权利要求l所述的多肽，其中所述多肽包含SEQlDNO:2所列的序列。6.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO:3所列的序列。7.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO:1所列的序列、SEQIDNO:2所列的序列和SEQIDNO:3所列的序列。8.如权利要求l所述的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO:1所列的且有不超过三个保守氨基酸取代的序列。9.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO:2所列的且有不超过五个保守氨基酸取代的序列。10.如权利要求l所述的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO:3所列的且有不超过三个保守氨基酸取代的序列。11.如权利要求l所述的多肽，其中所述多肽是基本纯多肽。12.—种编码权利要求1所述的多肽的分离的核酸。13.—种载体，其包含编码权利要求1所述的多肽的核酸。14.一种宿主细胞，其包含编码权利要求1所述的多肽的核酸。15.如权利要求14所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核宿主细胞。16.—种药物组合物，其包括药学可接受载体和权利要求1所述的多肽。17.—种增加哺乳动物排钠利尿活性且不降低血压的方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物施用权利要求1的多肽。18.—种治疗具有心血管疾患或肾脏疾患的哺乳动物的方法，其中所述方法包括在其中降低所述心血管疾患或肾脏疾患表现的严重性的条件下，向所述哺乳动物施用权利要求1的多肽。19.如权利要求18所述的方法，其中向所述哺乳动物施用所述多肽不降低所述哺乳动物的血压。全文摘要本文件提供利尿钠多肽。例如，本文件提供具有排钠利尿活性的多肽。在一些实例中，本文提供的多肽可以具有排钠利尿活性，而缺乏降低血压的能力。本文件还提供了在哺乳动物中诱导排钠利尿活性的方法和材料。文档编号C12N15/00GK101541957SQ200880000708公开日2009年9月23日申请日期2008年7月18日优先权日2007年7月20日发明者C·Y·W·李,J·C·小伯内特申请人:梅约医学教育与研究基金会