专利名称：：与慢性骨髓增殖性疾病相关的突变型核酸和慢性骨髓增殖性疾病的评价方法
技术领域：
：本发明涉及与慢性骨髓增殖性疾病(chronicmyeloproliferativedisorder;CMPD)相关的新的突变型核酸和CMPD的评^介方法。
背景技术：
：近年来，尝试了通过基因分析对各种疾病进行诊断。通过这种方法，通过例如分析特定基因是否有特定突变，可以评价是否发病以及发病的可能性。因此，对于所有疾病，进行显示与该发病有相关性的基因突变的鉴定。据报道，JAK2(Janus激酶2)基因中的特定突变是与真性红细胞增多症(polycythemiavera;PV)，原发性血小板增多症(essentialthrombocythemia;ET),原发性骨髓纤维化症(idiopathicmyelofibrosis;IMF)等慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)有相关性的突变(非专利文献l~4)。该突变是JAK2蛋白质的第617位的缬氨酸(V)被苯丙氨酸(F)替代的突变(JAK2V617F)，存在于JAK2基因的JH2区域，外显子12的第73位的鸟噤呤即除去内含子的ORF(开放阅读框)的序列中的第2343位的鸟噤呤被胸腺嘧啶替代。而且，据称该突变引起与造血细胞的增加相关的JAK-STAT途径的活化，实际上，已有报道称，在西方各国，PV患者的6599。/0、ET患者的23。/。~72%、和IMF患者的35%~57%都有突变JAK2V617F。然而，患者中存在着尽管显示出JAK2V""阴性，但也患有CMPD的情况。尤其是，在日本人和西方人中，例如PV患者和ET患者等的血栓现象、出血现象、发展为急性白血病等临床特征不同，而且据报道日本人的JAK2V""阳性患者的CMPD发病的概率比西方人要低。非专利文献1:TeffedA.HematologyAmSocHematolEducProgram.2006;240-245.非专利文献2:BaxterEJ,ScottLM,CampbellPJ等人，Lancet.2005;365:1054-1061.非专利文南史3:KralovicsR，PassamontiF，BuserAS等人,NEnglJMed.2005;352:1779-1790.非专利文献4:LevineRL，WadleighM,CoolsJ等人，CancerCell.2005;7:387-397.
发明内容因此，本发明的目的在于提供一种与CMPD相关的新的突变基因，尤其是在JAK2V617F阴性患者中与CMPD相关的新的突变基因，以及通过检测该基因来评价CMPD的CMPD评价方法。为了实现前述目的，本发明的突变型核酸的特征在于，由选自于下述(i)~(iii)构成的组中的至少一种核酸构成(i)由具有下述(a)和(b)中的任意一种突变的JAK2基因或具有前述突变的其片段构成的核酸(a)序列号l中所述的碱基序列中的第2116位的G突变成A(b)序列号l中所述的碱基序列中的第2121位~第2126位的核苷酸残基缺失(ii)由具有下述(c)突变的EPOR基因或具有前述突变的其片段构成的核酸(c)序歹'j号4中所述的碱基序列中的第1641位的C突变成G(iii)由与前述(i)的核酸和(ii)的核酸中的至少一者互补的石成基序列构成的核酸。本发明的突变型多肽的特征在于，由下述(I)或(II)中的任意一种多肽构成(I)由具有下述(A)和(B)中的任意一种突变的JAK2蛋白质或具有前述突变的其片段构成的多肽(A)序列号2中所述的氨基酸序列中的第541位的Arg突变成Lys(B)序歹'J号2中所述的氨基酸序列中的第543位的Glu和第544位的Asp缺失(II)由具有下述(C)突变的EPOR蛋白质或具有前述突变的其片段构成的多肽(C)序列号5中所述的氨基酸序列中的第502位的Pro突变成Arg。本发明的CMPD的标记物的特征在于，其含有本发明的突变型核酸或本发明的突变型多肽。本发明的CMPD评价方法是一种通过检测生物试样中的核酸和多肽中的至少一者的突变来评价CMPD的可能性的评价方法，其特征在于包括下述(X)和(Y)中的任意一个工序(X)检测前述试样中有无本发明的突变型核酸的工序(Y)冲企测前述试样中有无本发明的突变型多肽的工序。本发明的评价用试剂盒是用于评价CMPD的评价用试剂盒，其特征在于，其包括下述探针或引物中的至少一种探针，所述探针为含有选自于前述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的碱基序列构成的多核苷酸，且所述探针能与本发明的突变型核酸杂交；引物，所述引物为含有选自于前述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核香酸或由与其互补的碱基序列构成的多核苷酸，且所述引物能与本发明的突变型核酸杂交。而且，本发明的评价用试剂盒的特征在于，其含有以本发明的突变型多肽作为抗原的抗体。本发明人等进行了积极研究，结果在人JAK2(Janus激酶2)基因和人EPOR(erythropoietinreceptor,促红细月包生成素受体)基因中发现了与CMPD相关的新突变，从而完成了发明。本发相关，因此可作为CMPD的标记物使用。而且，通过检测该突变，可评价CMPD发病的可能性。尤其是，由于在以往报道的JAK2V""为阴性的CMPD患者中能检测到这些突变，因此通过本发明的突变型核酸和突变型多肽的4全测，对于即使在JAK2V617F的检测中无法评价的JAK2V617F阴性患者，也可以评价CMPD发病的可能性。因此，例如通过将JAK2V""和本发明中的突变组合在一起进行一企测，可以更准确地进行评价。因此，本发明在临床医疗等领域中，可以说是极为有用的技术。而且，本发明人等首次发现了本发明中的突变、以及突变与疾病的相关性。图l是本发明的实施例l中的JAK2基因的模式图和突变位点的示意图。图2是本发明的实施例1中的EPOR基因的模式图和突变位点的示意图。具体实施方式本发明中，作为慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)，可以列举例如原发性骨髓纤维化症(idiopathicmyelofibrosis;IMF)、原发性骨髓纤维化症(primarymyelofibrosis;PMF)等骨髓纤维症(myelofibrosiswithmyeloidmetaplasis;MMM),真寸生纟工纟田胞增多症、真性多血症(PV)、继发性绝对性红细胞增多症、继发性红细月包增多症(secondaryabsolutepolycythemia)、应激性红细胞增多症、应激性多血症(stresspolycythemia)等红细胞增多症、多血症(polycythemia),原发性血小板增多症(essentialthrombocythemia;ET),高嗜酸性粒细胞综合征(hypereosinophilicsyndrome:HES)等。<突变型核酸和标记物〉本发明的突变型基因，如前所述，其特征在于，由选自于下述(i)~(iii)构成的组中的至少一个核酸构成(i)由具有下述(a)和(b)中的任意一种突变的JAK2基因或具有前述突变的其片段构成的核酸(a)序列号l中所述的碱基序列中的第2116位的G突变成A(b)序列号l中所述的碱基序列中的第2121位~第2126位的核苷酸残基缺失(ii)由具有下述(c)突变的EPOR基因或具有前述突变的其片段构成的核酸(c)序列号4中所述的碱基序列中的第1641位的C突变成G(iii)由与前述(i)的核酸和(ii)的核酸中的至少一者互补的；咸基序列构成的核酸。本发明人等新发现的基因突变(a)~(c)分别是(a)人JAK2基因的置换突变、(b)人JAK2基因的缺失突变、和前述(c)EPOR基因的置换突变。前述序列号1的碱基序列是JAK2基因的DNA序列(有义《连)，为除去内含子的cDNA序列。在前述序列号l的碱基序列中，碱基t为碱基u的序列是JAK2基因的内含子被剪切了的成熟mRNA的序列。在前述序列号l的碱基序列中，第495位~第3893位的区域为CDS。前述CDS的碱基序列示于序列号3。JAK2基因的序列例如登录于NCBI，登录号为No.NM—004972。另一方面，前述序列号4的碱基序列为EPOR基因的DNA序歹'J(有义链)，是除去内含子的cDNA序列。在前述序列号l的碱基序列中，碱基t为碱基u的序列是EPOR基因的内含子被剪切了的成熟mRNA的序列。在前述序列号4的碱基序列中，第137位~第1663位的区域是CDS。前述CDS的碱基序列示于序列号6。在序列号6中，第1~第72位的碱基序列是编码EPOR蛋白质信号部分的序列，第73~第1527位的石威基序列是编码成熟EPOR蛋白质的序列。EPOR基因的序列例如登录于NCBI,登录号为No.NM—000121。在本发明的突变型核酸被翻"^争时，由于前述(a)突变，JAK2蛋白质的全长氨基酸序列中的第541位的Arg变为Lys,由于前述(b)突变，JAK2蛋白质的全长氨基酸序列中的第543位的Glu和第544位的Asp缺失。而且，在本发明的突变型核酸被翻译时，由于前述(c)突变，EPOR蛋白质的全长氨基酸序列中的第502位的Pro变为Arg。以下，将前述(a)突变称为"R541K"或"JAK2R541K"，将前述(b)突变称为"E543-D544del"或"JAK2E543-D544del",将前述(c)突变称为"P478R"或"EPORP47811，，。在前述(a)~(c)中，序列号1或4的碱基序列用于规定JAK2基因或EPOR基因中的新的突变位点，本发明的突变型核酸的序列不限于它们的全长序列。因此，本发明的突变型核酸只要具有前述任意一个突变即可，可以是序列号1或4的碱基序列构成的全长基因，也可以是其部分序列构成的多核苷酸。作为具体例子，还可以列举例如由序列号3或序列号6所示的CDS或其部分序列构成的多核苷酸。作为前述(i)的片段，可以列举例如序列号1中所述的碱基序列中含有第2116位的碱基(A)的5~10000个连续的碱基序列构成的多核苷酸，优选8~1000个连续的石威基序列构成的多核苷酸，更优选IO~100个连续的石威基序列构成的多核苷酸。而且，作为前述(ii)的片段，可以列举例如序列号4中所述的碱基序列中含有第2121位~第2126位的核苷酸残基缺失的5~1OOOO个连续的石威基序列构成的多核苷酸，优选8~1000个连续的碱基序列构成的多核苷酸，更优选10~100个连续的碱基序列构成的多核苷酸。而且，本发明的突变型核酸例如可以是JAK2基因的反义链或其片段构成的核酸，也可以是EPOR基因的反义链或其片段构成的核酸。此时，作为本发明的突变型核酸，如前述(iii)所示，可以列举由与前述(i)的核酸和(ii)的核酸中的至少一者互补的碱基序列构成的核酸。另外，本发明中的突变型核酸只要具有前述任意一个突变即可，不仅可以是序列号l所示的碱基序列构成的基因、序列号3所示的不含内含子序列的碱基序列构成的基因、它们的片段、以及由序列号4所示的碱基序列构成的基因、序列号6所示的不含内含子序列的碱基序列构成的基因或它们的片段，还可以是例如含有内含子的基因、其片段或它们的互补碱基序列构成的核酸。此外，本发明的突变型核酸不限于DNA,例如还可以是RNA。本发明的突变型核酸是突变型RNA时，例如，如前所述，序列号l、序列号3、序列号4或序列号6的碱基序列中，"t"为"u"。而且，前述突变型核酸例如可以是原本包含于前述试样中的DNA或RNA。而且，DNA例如可以是由原本包含于前述试样中的DNA通过PCR等核酸扩增法合成的DNA,也可以是由原本包含于前述试样中的RNA(总RNA、mRNA等)通过RT-PCR(逆转录PCR)等合成的cDNA。其次，本发明的慢性骨髓增殖性疾病标记物的特征在于，其含有本发明的突变型核酸。如前所述，由于本发明的突变型核酸中的突变显示出与慢性骨髓增殖性疾病发病的相关性，因此本发明的突变型核酸可作为慢性骨髓增殖性疾病的标记物使用。因此，如后所述，通过例如检测其是否存在，可以评价前述疾病的发病和发病可能性。<突变型多肽>本发明的突变型多肽，如前所述，其特征在于由下述(I)或(II)的任意一种多肽构成。该突变型多肽是例如前述的本发明的突变型核酸的表达产物。(I)由具有下述(A)和(B)中的任意一种突变的JAK2蛋白质或具有前述突变的其片段构成的多肽(A)序列号2中所述的氨基酸序列中的第541位的Arg突变成Lys(B)序列号2中所述的氨基酸序列中的第543位的Glu和第544位的Asp在夬失(II)由具有下述(C)突变的EPOR蛋白质或具有前述突变的其片段构成的多肽(C)序列号5中所述的氨基酸序列中的第502位的Pro突变成Arg。本发明人等新发现的多肽的突变(A)~(C)分别是(A)13人JAK2蛋白质的置换突变、(b)人JAK2蛋白质的缺失突变、和前述(c)EPOR蛋白质的置换突变。前述序列号2的氨基酸序列是JAK2蛋白质的氨基酸序列，该序列例如登录于NCBI，登录号为No.NM—004972。前述序列号5的氨基酸序列是EPOR蛋白质的氨基酸序列，例如登录于NCBI,登录号为No.NM—000121。在前述序列号5中，第l位~第24位的氨基酸序列是EPOR蛋白质的信号序列，第25~第508位是除去信号序列的成熟EPOR蛋白质的序列。在前述(A)~(C)中，序列号2或5的氨基酸序列是用于规定突变的位点，本发明的突变型多肽的序列不限于它们的全长序列。因此，本发明的突变型多肽只要具有前述任意一个突变即可，可以是序列号2或5的氨基酸序列构成的全长多肽(蛋白质)，也可以是其部分序列构成的多肽片段。而且，作为具体例子，还可以列举序歹'J号5的第25~第508位的成熟EPOR蛋白质或其部分序列构成的多肽片段。其次，本发明的慢性骨髓增殖性疾病标记物的特征在于含有本发明的突变型多肽。如前所述，由于本发明的突变型多肽中的突变显示出与慢性骨髓增殖性疾病发病的相关性，因此本发明的突变型多肽可作为慢性骨髓增殖性疾病的标记物-使用。因此，如后所述，通过例如检测其是否存在，可以评价前述疾病的发病和发病可能性。〈CMPD评价方法〉本发明的CMPD评^介方法是一种通过一全测生物试样中的核酸和多肽中的至少一者的突变来评价CMPD的可能性的评价方法，其特征在于包括下述(X)和(Y)中的任意一个工序(X)检测前述试样中有无本发明的突变型核酸的工序，(Y)检测前述试样中有无本发明的突变型多肽的工序。本发明中，可以进行本发明的突变型核酸和突变型多肽中的任意一者的检测。在检测到本发明的突变型核酸或突变型多肽时，例如可以判断为是CMPD,或者有患CMPD的可能性，在检测不到时，例如可以判断为患CMPD的可能性低，或者没有患CMPD可能性。而且，检测本发明的突变型核酸的方法和检测突变型多肽的方法都没有特别限制，可以采用以往7>知的突变的一全测方法。供于本发明的试样没有特别限定，可以列举例如白细胞等血细胞试样、全血试样、骨髓试样等。而且，前述试样优选例如是人或人以外的哺乳类等的生物试样。以下，对(X)工序和(Y)工序分别进行说明，但其只是一个例子，并不限制本发明。(第l实施方式)作为第l实施方式，对前述(X)工序，即检测前述试样中有无本发明的突变型核酸的工序的其中一例进行说明。对于前述试样中有无突变型核酸，例如可以通过对前述试样中的核酸^r测选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变来进行。(a)序列号1中所述的碱基序列中的第2116位的G突变成A(b)序列号l中所述的碱基序列中的第2121~第2126位的核苷酸残基缺失(c)序列号4中所述的碱基序列中的第164H立的C突变成G前述突变的一企测可以对任意一者进4亍，也可以对两种以上或全部突变进^"。而且，优选同时冲企测前述(a)和(b)突变。前述突变例如可以使用能与含有前述突变的区域特异性杂交的探针，通过进行前述探针与前述试样中的核酸的杂交来检测。此时，在确认了前述纟采针与前述试样中的核酸杂交时，可以判断为有突变，在没有确认到杂交时，可以判断为没有突变。作为前述探针，可以列举，例如所述探针为含有前述(a)~(c)中任意一个突变的多核苷酸或与由其互补的石咸基序列构成的多核苷酸，且所述探针能与含有前述突变的突变型核酸杂交。作为这种检测方法，可以列举例如侵入#r测法(Invader)法、Tm分析法等。而且，前述突变例如可以使用能与含有前述突变的区域特异性杂交的引物，通过进行以前述试样中的核酸作为模板的核酸扩增反应来检测。此时，通过核酸扩增反应得到扩增产物时，可以判断为有突变，在没有获得扩增产物时，可以判断为没有突变。作为前述引物，可以列举，例如所述引物为含有选自于前述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的碱基序列构成的多核苷酸，且所述引物能与含有前述突变的突变型核酸杂交。作为这种方法，可以列举例如ASP(allelespecificprimer,等位基因特异性引物)-PCR法等。此时，作为前述引物，优选使用例如在其3，区域，尤其优选3，端或3，端起的第l个碱基或第2个碱基的位点上具有前述突变碱基或与前述突变石成基互补的石威基的引物。此外，可以列举对于前述试样中的核酸，扩增出含有发生检测目的的突变的位点的区域，分析扩增产物的全碱基序列的直接测序法、焦磷酸测序法，在温度梯度柱中对前述扩增产前述核酸扩增方法没有任何限制，可以列举例如PCR法、NASBA(基于核酸序列的扩增)法、TMA(转录介导的扩增)16法、SDA(链取代扩增)法等。而且，核酸扩增反应的条件没有特别限制，可以通过以往^^知的方法进4亍。(第2实施方式)作为第2实施方式，对于前述(Y)工序，即纟全测前述试样中是否有本发明的突变型多肽的工序的其中一例进行说明。前述试样中有无突变型多肽，例如可以通过对前述试样中的多肽外企测选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变来进行。(A)序列号2中所述的氨基酸序列中的第541位的Arg突变成Lys(B)序列号2中所述的氨基酸序列中的第543位的Glu和第5444立的Asp缺失(C)序列号5中所述的氨基酸序列中的第502位的Pro突变成Arg前述突变的纟企测可以对任意一者进行，也可以对两种以上或全部突变进行。而且，优选同时检测前述(A)和(B)突变。多肽中的突变例如可以使用以本发明的突变型多肽作为抗原的抗体，通过前述抗体与前述试样中的多肽的抗原抗体反应来4全测。此时，在确认了前述抗体与前述试样中的多肽的抗原抗体反应时，可以判断为有突变，在没有确认到抗原抗体反应时，可以判断为没有突变。抗体的种类没有特别限定，可以使用单克隆抗体、多克隆抗体等。作为抗原抗体反应的方法，没有限制，可以列举免疫印迹法、免疫细胞化学法等。〈CMPD评价用试剂盒>作为本发明的CMPD评价用试剂盒，可以列举例如可以在本发明的突变型核酸的检测中使用的第l评价用试剂盒和可以在本发明的突变型多肽的检测中使用的第2评价用试剂盒。本发明的第l评价用试剂盒，如前所述，是用于评价慢性骨髓增殖性疾病的评价用试剂盒，其特征在于其包括下述探针或引物中的任意一者探针，所述探针为含有选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的磁<基序列构成的多核苷酸，且所述探针能与本发明的突变型核酸杂交；引物，所述引物为含有选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的石威基序列构成的多核香酸，且所述引物能与本发明的突变型核酸杂交。另夕卜，本发明的第2评价用试剂盒，如前所述，其特征在于含有以本发明的突变型多肽作为抗原的抗体。通过使用这些本发明的评价用试剂盒，可以简便且容易地进行本发明的CMPD评价方法。而且，引物、J笨针和抗体与前述相同。前述本发明的第l评价用试剂盒的构成没有特别限制，例如，还可以含有核酸扩增所必需的引物、DNA聚合酶、dNTPs、各种添加剂等。而且，本发明的第2评价用试剂盒的构成也没有特别限制，例如，还可以含有用于才全测前述抗体的二抗、用于检测抗体所带有的标记的酶和底物等。另外，本发明的评价用试剂盒还可以再含有使用说明书。实施例下面，对本发明的实施例进行说明。但是，本发明不受下述实施例的限制。[实施例1]从通过公知的基准诊断的PV患者(n=52)、ET患者(n=55)、IMF患者(n=3)、CMPD-未分类(CMPD-U)患者(n=15)和高嗜酸性粒细胞综合征(hypereosinophilicsyndrome:HES)(n=5)的共计130名患者中制备出基因组DNA。另外，从正常人中制备基因组DNA。而且，分别用QIAampDNAMini试剂盒(商品名，QIAGEN公司制)从由患者中采集的骨髓的血沉棕黄层中才是耳又患者的基因组DNA，从由正常人中釆集的末梢血粒细胞中提取正常人的基因组DNA。而且，正常人基因组DNA作为正常对照使用，使用突变分析装置(爱科来公司制)，进行突变和多态性的分析。为了分析130名患者的基因组DNA的JAK2V""的突变，按照常规方法(BaxterEJ等人，AcquiredmutationofthetyrosinekinaseJAK2inhumanmyeloproliferativedisorders.Lancet.2005;365:1054-1061)进行ASP-PCR法和直接测序法。并且，用TOPOTA克隆试剂盒(商品名；Invitrogen公司制)，将PCR产物导入到pCR(注册商标)2.1-TOPO载体中，通过对获得的重组质粒测序，确认前述PCR产物的序列。通过前述分析，在52名PV患者中的31名(59.6%)、55名ET患者中的28名(50.9%)、3名IMF中的l名(33.3%)、15名CMPD-U患者中的5名(33.3%)、5名HES患者中的1名(20%)中确认了JAK2V617F。根据该结果，如前所述，确认了JAK2V""阳性的日本PV患者的发病率(59.6%)低于西方人的发病率(65~99%)。接着，对JAK2V""阴性的CMPD患者的基因组DNA进行突变分析。其结果是，在JAK2V""阴性的PV患者中确认了序列号1中的第2116位(序列号3的CDS中的第1621位)的核苷酸残基G被A替代(JAK2R541K),序列号1中的第2121~第2126位(序歹'J号3的CDS中的第1625~第1630位)的核苷酸残基(计6bp)缺失的突变(JAK2E543—D544del)。图l中示出了JAK2基因的部分区域的模式图和测序结果。图l中，箭头指示新发现的突变(jAK2R541KE543-D544del)的位置。在图l中，左侧的碱基序列是野生型等位基因的序列，右侧的碱基序列是突变型等位基因的序列。而且，添加下划线的密码子是发生突变的密码子。如图l所示，JAK2R5411^。JAK2E543-D544del在JAK2基因的外显子12(含有非转录区域的外显子1和2时，为外显子14)内，是存在于SH2功能域和蛋白激酶1功能域之间的新突变。该突变与已才艮道的缺失突变相邻(ScottLM等人，JAK2exon12mutationsinpolycythemiaveraandidiopathicerythrocytosis.NEnglJMed.2007;356:459-468)。而且，由于序列号1中的第2116位的G被A代换，序列号2中的第541位的氨基酸残基由精氨酸(R)被赖氨酸(L)代换。从正常人中没有检测到这些突变JAK2""k和JAK2E543—D544del。检测到突变的一名患者，其临床特征示于下表l。其结果，如下表l所示，尽管该患者是JAK2V""阴性PV患者，但与JAK2V617F阳性患者一样，可以确认呈现PV中典型的临床特征。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>WBC:白细胞数(/lU)RBC:红细胞数(X10Vul)Hb:血红蛋白浓度(mg/100ml)Ht:红细胞比容(％)PLT:血小板数(X104/H1)然后，对于前述CMPD患者，进行EPOR基因的全测序。其结果是，从两名JAK2V617F阴性ET患者中确认了序列号3中的第1641位(序列号6的CDS中的第1505位)的核苷酸残基C被G替代的突变(EPORP5Q2R)。图2中示出了EPOR基因的部分区域的模式图和测序结果。粗箭头表示新发现的突变(EPORP478K)的位置，Y表示基因中的酪氨酸残基的位置。图中的碱基序列是野生型等位基因的序如该图所示，EPORP，R从脯氨酸变为精氨酸。该突变是存在于EPOR基因的胞浆结构域的作为负调控区域的外显子8中的新突变。而且，由于序列号3中的第1641位的C被G替代，序列号4中的第502位的氨基酸残基由脯氨酸变为精氨酸。在正常人中没有检测到该突变EPORP5G2R。如上所述，在JAK2V617F阴性CMPD患者中发现了JAK2R541K、JAK2E543-D544de>EPORP5()2R,因此通过这些突变的检测，对迄今为止无法评价的JAK2V617FK性的试样也可以进行患CMPD的可能性的评价。而且，由于这些突变是在JAK2V""阴性CMPD患者中新发现的，因此认为不属于继发突变。工业上利用的可能性如上所述，本发明的突变型核酸及其表达产物突变型多肽由于与CMPD相关，因此可作为CMPD的标记物使用。而且，通过对其进行检测，可以评价CMPD发病的可能性。尤其是，由于在以往报道的JAK2V""呈阴性的CMPD患者中检测到这些突变，因此通过本发明的突变型核酸和突变型多肽的检测，对于在JAK2V617F的检测中无法评价的JAK2V617F阴性患者也可以评价CMPD发病的可能性。因此，本发明在临床医疗等领域中可以说是极为有用的技术。而且，本发明人等首次发现了本发明中的突变以及突变与疾病的相关性。权利要求1.一种突变型核酸，其由选自于下述(i)～(iii)构成的组中的至少一个核酸构成(i)由具有下述(a)和(b)中的任意一种突变的JAK2基因或具有前述突变的其片段构成的核酸，(a)序列号1中所述的碱基序列中的第2116位的G突变成A，(b)序列号1中所述的碱基序列中的第2121位～第2126位的核苷酸残基缺失；(ii)由具有下述(c)突变的EPOR基因或具有前述突变的其片段构成的核酸，(c)序列号4中所述的碱基序列中的第1641位的C突变成G；(iii)由与前述(i)的核酸和(ii)的核酸中的至少一者互补的碱基序列构成的核酸。2.由下述(I)或(II)中任意一种多肽构成的突变型多肽(I)由具有下述(A)和(B)中的任意一种突变的JAK2蛋白质或具有前述突变的其片段构成的多肽，(A)序列号2中所述的氨基酸序列中的第541位的Arg突变成Lys，(B)序列号2中所述的氨基酸序列中的第543位的Glu和第544位的Asp缺失；(II)由具有下述(C)突变的EPOR蛋白质或具有前述突变的其片段构成的多肽，(C)序列号5中所述的氨基酸序列中的第502位的Pro突变成Arg。3.—种慢性骨髓增殖性疾病的标记物，其含有权利要求l所述的突变型核酸。4.一种慢性骨髓增殖性疾病的标记物，其含有权利要求2所述的突变型多肽。5.—种评1介方法，其为通过^r测生物试样中的核酸和多肽中的至少一者的突变来评价慢性骨髓增殖性疾病的可能性的评价方法，其特征在于，包括下述(X)和(Y)中任意一种工序(X)检测前述试样中有无权利要求l所述的突变型核酸的工序，(Y)检测前述试样中有无权利要求2所述的突变型多肽的工序。6.根据权利要求5所述的评价方法，其中，在前述(X)工序中，对前述试样中的核酸，^r测选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变(a)序列号1中所述的碱基序列中的第2116位的G突变成A,(b)序列号l中所述的碱基序列中的第2121位~第2126位的核普酸残基缺失，(c)序列号4中所述的碱基序列中的第1641位的C突变成G。7.根据权利要求5所述的评价方法，在前述(X)工序中，使用探针，所述探针为含有选自于前述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核普酸或由与其互补的碱基序列构成的多核苷酸，且所述探针能与权利要求l所述的突变型核酸杂交，通过前述4罙针与前述试样中的核酸的杂交来才企测前述突变8.根据权利要求5所述的评价方法，在前述(X)工序中，使用引物，所述引物为含有选自于前述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的石咸基序列构成的多核苷酸，且所述引物能与权利要求l所述的突变型核酸杂交，通过以前述试样中的核酸作为才莫板的核酸扩增反应来检测前述突变。9.根据权利要求8所述的评价方法，前述引物在其3，区域中具有前述突变碱基或与前述突变碱基互补的^咸基。10.根据权利要求5所述的评价方法，在前述(Y)工序中，对于前述试样中的多肽，检测选自于下述(A)~(C)构成的组中的至少一个突变(A)序列号2中所述的氨基酸序列中的第541位的Arg突变成Lys,(B)序列号2中所述的氨基酸序列中的第543位的Glu和第544位的Asp击夬失，(C)序列号5中所述的氨基酸序列中的第502位的Pro突变成Arg。11.根据权利要求5所述的评价方法，其中，在前述(Y)工序中，使用以权利要求2所述的突变型多肽作为抗原的抗体，通过前述抗体与前述试样中的多肽的抗原抗体反应来检测前述突变。12.根据权利要求5所述的评价方法，其中，前述试样是JAK2V""突变为阴性的生物试样。13.—种评价用试剂盒，其为用于评价慢性骨髓增殖性疾病的评价用试剂盒，其特征在于，包括下述引物或探针中的任意一种探针，所述探针为含有选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的碱基序列构成的多核香酸，且所述探针能与权利要求l所述的突变型核酸杂交；引物，所述引物为含有选自于下述(a)~(c)构成的组中的至少一个突变的多核苷酸或由与其互补的石成基序列构成的多核苷酸，且所述引物能与权利要求l所述的突变型核酸杂交。14.一种评价用试剂盒，其为用于评价慢性骨髓增殖性疾病的评价用试剂盒，其特征在于，含有以权利要求2所述的突变型多肽作为抗原的抗体。全文摘要提供一种与CMPD的发病相关的新的突变基因，尤其是尽管为JAK2<sup>V617F</sup>阴性但CMPD发病的患者所具有的与CMPD的发病相关的新的突变基因以及评价CMPD的评价方法。通过检测人来源的生物试样中的JAK2基因或EPOR基因中的下述突变，来评价慢性骨髓增殖性疾病的可能性。(a)序列号1中所述的碱基序列中的第2116位的G突变成A，(b)序列号1中所述的碱基序列中的第2121位～第2126位的核苷酸残基缺失，(c)序列号4中所述的碱基序列中的第1641位的C突变成G。文档编号C12N15/09GK101617044SQ20088000546公开日2009年12月30日申请日期2008年10月31日优先权日2007年11月7日发明者山口博树,稻见光春申请人:爱科来株式会社;学校法人日本医科大学