专利名称：用于控制血管生成的方法
技术领域：
本发明属于医疗诊断和治疗领域，更特别地，属于诊断对象体内血管生成 (vasculogenesis)的出现和/或进展的领域。本发明目的在于诊断血管生成的进展，尤其 是诊断与医疗方法相关的血管生成的进展。本发明进一步涉及用于诊断患者体内血管生成 的出现和/或进展的生物标记物、用于诊断患者体内血管生成的出现和或进展的方法、用 于进行此种方法的试剂盒和在此种方法中有用的微阵列和诊断试剂。本发明进一步涉及抑 制或刺激需要此种抑制或刺激的对象体内血管生成的方法和适合用在此种治疗方法中的 药物组合物。
背景技术：
缺血性心脏病类疾病的特点为供应到心脏的血液减少，它是西方世界中导致发 病和死亡的主要原因。由于患者所需的加强医疗护理，该疾病构成健康护理医疗费用 和健康护理基础设施的主要投资。该疾病的早期诊断是困难的。实际上，没有适当的 测试可用于诊断进行性缺血(ongoing ischemia)和代偿性新血管形成(compensatory neovascularization)。缺血性心脏病的当前诊断基于功率计(运动)测试(ergometric (exercise) testing)或心肌灌注成像。这些技术具有有限的灵敏度和排他性。更可靠的方法是进行冠 脉血管造影术。然而，此种经皮和侵入性手段伴有相当大的风险。所以，需要用于诊断和预后(预测)缺血性心脏病的可靠的生物标记物。
发明内容
本发明现在已发现在循环EPC中可特异性检测与成年血管生成过程(新血管发 育)相关的基因表达，循环EPC中的特异性基因表达谱因而可用于诊断和预后血管生成。本 发明人获得这项发现是在注意到小鼠Flkl+细胞中大量基因在血管生成(新血管发育)期 间被上调之后。详细的跨物种验证表明这些基因在缺血期间在青春期小鼠模型中被上调， 在跨种验证中细察了小鼠和斑马鱼中发育的血管树中与血管生成相关的这些基因及其表 达产物。这将这些基因的表达与血管生成联系在一起。本发明人因此现在已发现通过检测 代偿性新血管生成过程，特别是通过检测与活化的EPC相关的基因表达谱可诊断人体中的 血管形成。在第一方面，本发明现在提供检测对象中血管生成的出现和/或进展的方法，所 述方法包括在所述对象循环流体的样本中检测活化的内皮祖细胞(EPC)的出现。在此种方法的优选实施方式中，所述血管生成的进展与旨在减少或增多血管生成 的医疗治疗方法相关。在此种方法的可替换的优选实施方式中，所述血管生成的出现和/或进展表示血 管发生(angiogenetic)过程的出现和/或进展。在本发明方法中，检测活化的EPC的步骤合适地包含在所述样本中检测EPC中基因表达水平的增大，该基因为以下组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、4、5、10、15、 20、25、30、35个或所有基因，该组由下列基因组成，即，ADORA1、AD0RA2A、AD0RA2B、AD0RA3、 AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、CDC42、CGNLl、CREBBP, CRIPl、CRIP2、CRIP3、CYB5B、 DLL4、DUSP5、EEAU egr_l、ELKU ELK3、ELK4 (SAPl)、EP300、ERGl (KCNH2)、ETSU ETS2、 EXOC3L、FGDl、FO)2、FGD3、Fa)4、FGD5、FLTl、FST、GATA6、GRRPl、HO-l(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、 IFNG、ILlA、ILlB、LAMA4、Lambl-l、LGMN、MMP3、Nos2、PAIl、PHDl、PLVAP、RAB5a、RIN3、R0CK2、 S0X18、S0X7、SRF、STABU STAB2、STUBl、TFEC、THBS1、THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSD1、 TNFAIP8,和XLKDl (LYVEl)，该基因又优选选自下组中至少1个基因、还更优选至少2、3、 4、5、10、15、20、25、30个或所有基因，该组由下列基因组成，即，AD0RA2A、AGTRLl (APLNR)、 APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、 F⑶5、GRRPl、HO-I (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、LAMA4、Lambl-1、LGMN、PLVAP、RIN3、R0CK2、S0X7、 S0X18、STABl、STAB2、STUBl、TFEC, THSDl、TNFAIP8，和 XLKDl (LYVEl)。基因表达水平的提 高可通过任何合适的方法检测并可针对核酸(例如，mRNA)或蛋白质的检测进行。活化的 EPC可分泌上面提及的基因的蛋白质表达产物，因而通过检测全血中蛋白质，而不是它的 EPC组分中的蛋白质，可检测EPC内基因表达水平。这个方法优于现有技术方法的重要优势(循环EPC数目的计数或功率计(运动) 测试)在于本方法更灵敏且可在前期检测该疾病。基于此，本发明人已发现可在基因和这些基因产物中找到用于检测血管生成在患 者中的出现和/或进展的潜在标记物，且本发明人发现可在血液、血清或血细胞组分中检 测这些标记物，其中，这些基因是指在血管生成期间在活化的EPC中被上调的基因。在另一方面，本发明现在提供用于诊断或预后患者新血管疾病的生物标记物，所 述生物标记物包含内皮祖细胞(EPC)的基因表达产物，内皮祖细胞基因表达在血管生成期 间被调节。优选地，所述生物标记物包含内皮祖细胞(EPC)的基因表达产物，与血管发生期 间相比，内皮祖细胞基因表达在血管生成期间被上调。大体上，本发明以检测对象血液中活化的EPC为基础。活化的EPC，作为循环EPC 标准池(normal pool)的部分，最好通过它们的特异基因库(r印ertoire)(基因表达谱) 鉴定。因为一些基因表达产物可被周围血液中的细胞分泌，因此也可在全血细胞中检测被 分泌的生物标记物。在又一个优选的实施方式中，所述EPC或PMN出现在患者的外周血中。优选地，所 述EPC是Flkl+(Flkl阳性)细胞。最优选地，活化的EPC显示基因表达谱，其中当与它们在 未活化的EPC中的表达水平相比时，优选选自下组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、 4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因被上调，该组由下列基因组成，8卩^00以1、400以2八、 AD0RA2B,AD0RA3,AGTRL1(APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、CDC42、CGNLl、CREBBP、CRIPl、CRIP2、 CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELKl、ELK3、ELK4 (SAPl)、EP300、ERGl (KCNH2)、 ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、F⑶2、FGD3、F⑶4、FGD5、FLTl、FS T、GATA6、GRRPl、H0-1 (HMOXl)、 H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、MMP3、Nos2、PAI1、PHDl、PLVAP, RAB5a、RIN3、R0CK2、S0X18、S0X7、SRF, STABl、STAB2、STUBl、TFEC, THBSl、THBS2、THBS3、 THBS4、THBS5、THSD1、TNFAIP8和XLKDl (LYVEl)，还优选选自下组中至少1个基因、又更优选 至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因被上调，该组由下列基因组成，即，AD0RA2A、AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETSl、 ETS2、EXOC3L、FO)5、GRRP1、HO-1(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、LAMA4、 Lambl_l、LGMN、PLVAP、RIN3、 R0CK2、S0X7、S0X18、STABl、STAB2、STUBU TFEC, THSDl、TNFAIP8 禾口 XLKDl (LYVEl)。本发明生物标记物优选为选自下组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、4、 5、10、15、20、25、30、35个或所有基因的表达产物(多肽或多核糖核苷酸)，该组由下列 基因组成，艮口，ADORAl、AD0RA2A、AD0RA2B、AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、 CDC42、CGNLl、CREBBP、CRIPl、CRIP2、CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr-1、ELKl、ELK3、 ELK4 (SAP 1)、EP300、ERG1 (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、FGD2、FGD3、FGD4、FGD5、FLT1、 FST、GATA6、GRRPl、HO-I (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、 MMP3、No s2、PAI1、PHD1、PLVAP、RAB5a、RIN3、R0CK2、SOX18、S0X7、SRF、STAB1、STAB2、STUB1、 TFEC, THBSl、THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSDl、TNFAIP8，和 XLKDl (LYVEl)，还优选为选自 下组中的至少1个基因、又更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因的表达产物 (多肽或多核糖核苷酸)，该组由下列基因组成，即，AD0RA2A、AGTRLl (APLNR) ,APLN, CCBEU CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、FGD5、GRRPl、 HO-I(HMOXl)、H0-2(HM0X2)、LAMA4、Lambl_l、LGMN、PLVAP、RIN3、R0CK2、S0X7、S0X18、STABl、 STAB2、STUBU TFEC, THSD1、TNFAIP8，和 XLKDl (LYVEl)。本发明生物标记物可具有上面提到的基因之一的表达产物的形式，或可采取蛋白 质谱或RNA谱的形式。在另一方面，本发明提供了如上定义的生物标记物在检测对象中血管生成的出现 和/或进展中的用途。在另一方面，本发明提供了如上定义的生物标记物作为替代终点标记物 (surrogate end-point marker)，在确定治疗方法功效方面的用途。在另一方面，本发明提供了用于检测对象中血管生成的出现和/或进展的方法， 该方法包括在所述对象血液中检测根据本发明的生物标记物。优选地，所述方法在所述对 象的血液样本上进行。在所述方法的其它优选实施方式中，检测生物标记物的步骤可通过 使用微阵列进行。在所述方法的可替换的优选实施方式中，检测生物标记物的步骤通过使 用串联质谱法(MS-MS)、通过MALDI-FT质谱法、MALDI-FT-ICR质谱法、MALDI三重四极杆质 谱法、QPCR或其它杂交方法或免疫分析进行。实际上，任何合适的检测方法均可用于鉴定 生物标记RNA或蛋白质。在另一方面，本发明提供了试剂盒，该试剂盒用于进行根据本发明检测对象中血 管生成的出现和/或进展的方法。所述试剂盒包含至少一个如上文定义的生物标记物，或 特异性结合到所述生物标记物的特异性结合伴侣(partner)。根据本发明的试剂盒可选地 进一步包含下面的一个或多个-至少一个参考样本或对照样本；-关于生物标记物的参考值的信息；-至少一个能够结合到所述特异性结合伴侣的测试化合物；-至少一个用于检测所述生物标记物和所述特异性结合伴侣之间的结合的可检测 的标记物。在另一方面，本发明提供了微阵列，该微阵列用于进行根据本发明检测对象中血管生成的出现和/或进展的方法。所述微阵列包含特异性结合伴侣，该伴侣特异性结合到 至少两种如上文定义的生物标记物上，其中该生物标记物结合在固体载体上 在另一方面，本发明提供了特异性结合到如上文定义的生物标记物上的诊断试 齐 。优选地，该诊断试剂是与所述生物标记物在严格条件下特异性杂交的抗体或核酸分子。在另一方面，本发明提供了包含本发明诊断试剂的诊断组合物。在另一方面，本发明提供了本发明诊断组合物在检测对象中血管生成的出现和/ 或进展方面的用途。在另一方面，本发明提供了抑制或刺激需要此种抑制或刺激的对象血管生成的方 法，该方法包括减少或增加所述对象血液中活化的内皮祖细胞(EPC)的数目。在根据本发明的治疗对象的方法中，减少活化的内皮祖细胞数目的所述步骤包 括减少所述对象血液中内皮祖细胞中基因的表达，该基因为选自下组中的至少1个基因、 甚至更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因，该组由下列基因组成，即， ADORAU AD0RA2A、AD0RA2B、AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN, CCBEU CDC42、CGNLU CREBBP, CRIPl、CRIP2、CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELK1、ELK3、ELK4 (SAPl)、 EP300、ERG1 (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、FGD2、F⑶3、FGD4、FGD5、FLT1、FST、GATA6、 GRRPl、HO-I (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、MMP3、Nos2、 PAIl、PHDl、PLVAP、RAB5a、RIN3、R0CK2、S0X18、S0X7、SRF、STABl、STAB2、STUBl、TFEC、THBSl、 THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSDU TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)，该基因还优选为选自下组 中的至少1个基因、又更优选为至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因，该组由下列 基因组成，即，AD0RA2A、AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、 ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、FGD5、GRRP1、HO-1 (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、LAMA4、 Lambl-I、LGMN、PLVAP、RIN3、R0CK2、S0X7、S0X18、STABl、STAB2、STUBl、TFEC、THSDl、TNFAIP8 和XLKDl (LYVEl)。相反，增加活化的内皮祖细胞数目的所述步骤，包括增加所述对象血液中 内皮祖细胞中基因的表达，该基因为选自下组中至少1个基因、甚至更优选为至少2、3、4、 5、10、15、20、25、30、35个或所有基因，该组由下列基因组成，即，ADORAl、AD0RA2A、AD0RA2B、 AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、CDC42、CGNLl、CREBBP, CRIPl、CRIP2、CRIP3、 CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr-l、ELKl、ELK3、ELK4(SAPl)、EP300、ERG1(KCNH2)、ETS1、ETS2、 EXOC3L、FGDl、FO)2、FGD3、Fa)4、FGD5、FLTl、FST、GATA6、GRRPl、HO-l(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、 IFNG、ILlA、ILlB、LAMA4、Lambl-l、LGMN、MMP3、Nos2、PAIl、PHDl、PLVAP、RAB5a、RIN3、R0CK2、 S0X18、S0X7、SRF、STABU STAB2、STUBl、TFEC、THBS1、THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSD1、 TNFAIP8和XLKDl (LYVEl)，该基因还优选为选自下组中的至少1个基因、又更优选为至少2、 3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因，该组由下列基因组成，S卩，AD0RA2A、AGTRL1 (APLNR)、 APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、 FGD5、GRRPl、HO-1 (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、LAMA4、Lamb 1-1、LGMN、PLVAP、RIN3、R0CK2、S0X7、 S0X18、STABl、STAB2、STUBU TFEC, THSDl、TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)。在优选的实施方式中，所述方法包括，减少与对照对象相比在所述对象中过表达 的至少1种、更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25或30种蛋白质的量，或增加与对照对象相 比在所述对象中低表达(减少表达，under-expressed)的至少1种、更优选至少2、3、4、5、 10、15、20、25或30种蛋白质的量。其中所述蛋白质是选自下组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因的表达产物，该组由下列基因组成， 即，ADORAl、AD0RA2A、AD0RA2B、AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、CDC42、CGNLl、 CREBBP, CRIPl、CRIP2、CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELK1、ELK3、ELK4 (SAPl)、 EP300、ERG1 (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、FGD2、F⑶3、FGD4、FGD5、FLT1、FST、GATA6、 GRRPl、HO-I (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、MMP3、Nos2、 PAIUPHDU PLVAP、RAB5a、RIN3、R0CK2、SOX18、S0X7、SRF、STAB 1、STAB2、STUB 1、TFEC、THBS1、 THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSD1、TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)，所述蛋白质还优选为下组中 的至少1个基因、又更优选为至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因的表达产物，该 组由下列基因组成，即，AD0RA2A、AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、 DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、FGD5、GRRP1、HO-1 (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、 LAMA4、Lamb1-1、LGMN、PLVAP、RIN3、R0CK2、S0X7、SOX18、STAB1、STAB2、STUB1、TFEC、THSD1、 TNFAIP8 和 XLKDl(LYVEl))。
在另一方面，本发明提供了用于抑制或刺激对象血管生成的药物组合物，该组合 物包含至少一种选自以下物质的抑制剂化合物-针对本发明生物标记物，优选针对在细胞膜上表达的生物标记物的抗体或其衍 生物，且所述衍生物优选选自由scFv片段、Fab片段、嵌合抗体、双功能抗体、胞内抗体、和 其他源自抗体的分子组成的组；_如本文定义的生物标记物；-干扰所述生物标记物生物活性的小分子；-干扰所述生物标记物的表达的反义分子，尤其是反义RNA或反义寡脱氧核苷酸；-干扰所述生物标记物表达的RNAi分子-干扰所述生物标记物表达的核酶(核糖核酸酶)，和-干扰所述生物标记物或基因中调节基因的功能的化合物，以及合适的赋形剂、载体(运载体，carrier)或稀释剂。在另一方面，本发明提供了治疗对象的方法，该方法包括向所述对象给予可有效 抑制或刺激血管生成的量的本发明的药物组合物。
具体实施例方式术语术语“内皮祖细胞(EPC) ”是指源自循环骨髓的细胞群体，其似乎参与血管生成和 血管稳态(血管内平衡，vascular homeostasis)。这个祖(干)细胞群体首次被Asahara 等人在1997年(Science Vol. 275，964-967)描述为骨髓中的CD34+CD133+细胞，但是该祖 (干)细胞可从血液的外周血单核细胞(PBMC)组分中分离出来。从健康个体血液中较少数 目可以看出，它们的数目在血管损伤之后倾向于增大。到目前为止，实验已经确定EPC在体 外形成集落(colony)的能力，这暗示它在血管生成和在维持已有血管壁方面的作用。最近 已有证据暗示EPC与肿瘤血管生成相关。术语“活化的内皮祖细胞(EPC) ”是指具有不同于正常循环EPC的基因表达谱的 EPC0这个基因表达谱可例如借助表1中基因的表达上调识别。然而，因为表1中基因表示 可在血液中检测到的生物标记物，所以这些基因仅包括被上调并因而引起产物的阳性表达的基因。本领域的普通技术人员将会意识到，在活化的EPC中也可观测到下调基因，但此种 基因不适合用作生物标记物。然而，此种下调基因可用作表示活化的EPC表达谱的部分基 因。不论EPC是否是活化的EPC，最好通过评估EPC表达谱和将该谱与如在此公开的包含 表1中基因的提高表达的特异谱进行比较，或通过确定表1中一个或更多基因的表达水平 和确定该水平较对照EPC(即，正常健康对象的血液中的循环EPC)是否提高，来评估EPC。
与血管发生(angiogenesis)相比，“血管生成”(在此也称为新血管形成 (neovascularisation)或新血管发生(neoangiogenesis))是指在没有预先存在的血管时 的血管形成，而血管发生这一术语指来自现有血管的血管发育。血管生成最初被认为只在 胚胎发育期间发生，但现在已得知该过程也可发生在成年有机体中。血管生成涉及内皮前 体细胞(成血管细胞)的迁移和分化，以对局部提示(localcues)(例如，生长因子和胞外 基质)和新血管(血管树)的形成作出反应。这些血管树然后被修剪并遍布血管发生。已 知循环内皮祖细胞(干细胞衍生物)促进新血管形成，但是程度不同。本文使用的术语“在血管生成期间”，是指基因表达转向血管生成，而不是转向血 管发生的时期。新血管形成通过血管生成和血管发生进行。在胚胎发生期间，血管生成时期 的特点是Flkl-阳性胚胎干细胞的优势达到峰值。小鼠Flkl基因编码对于血管内皮生长因 子A(VEGF-A)的主要信号受体，血管内皮生长因子受体2 (VEGFR-2)，且对早期胚胎中血管 和造血系统的发育是必要的。在小鼠中，小鼠胚胎干(ES)细胞分化成Flkl+细胞，该Flkl+ 细胞可产生两种类型的细胞，即，周细胞(可通过α-平滑肌肌动蛋白的表达鉴定(但并不 排他地)的血管平滑肌细胞；SMA+)和内皮细胞(可通过血小板-内皮细胞粘附分子的表 达鉴定(但并不排他地)；PECAMl+)。这些周细胞和内皮细胞随后组装成原始血管。因而， 源自胚胎干细胞的Flkl-阳性细胞用作血管祖细胞(vascularprogenitors)。血管生成与血管发生可按如下方式区分。血管生成是从干细胞(祖细胞)重新合 成血管并涉及这些多向性细胞(pleitrophic cells)的募集和分化，而血管发生是从现有 血管形成新血管(内皮细胞去分化、迁移/增生并再次分化成新管且重塑成重要的血液动 力学血管(“修剪(priming)”)。术语“缺血性心血管事件”或简称“缺血事件”，如本文使用的，是指向器官或组织 的血液供给中断。缺血事件通常是血凝块引起的，且在动脉粥样硬化狭窄患者中，当栓子离 开动脉粥样硬化病变区时该缺血事件最经常发生。因这个阻塞造成的动脉或其他血管狭 窄、或窄化或堵塞，可导致许多有害状况，其中许多对该对象产生严重后果。在此提及的缺 血性心血管事件包括但不局限于，中风/短暂性缺血发作或脑血管病发作、心肌梗塞、心肌 缺血(心绞痛)、任何心肌症并发心肌缺血症(例如，有症状的动脉狭窄、H0CM)、脑出血、夕卜 周(不稳定型)心绞痛、间歇性跛行(外周动脉粥样硬化疾病)和其他在血管中发生的主 要异常现象。术语“血管中发生的异常现象”包括提及的冠脉和脑血管事件，以及外周血管 疾病。术语“缺血性心血管事件”通常是术语“新血管疾病”广义上包括的医疗病况的急性 阶段。术语“缺血”，如本文使用的，是指向器官、身体部分或组织的血液供给的绝对或相 对短缺，或流向器官、身体部分或组织的血流不足。相对短缺是指血供给(氧输送)和血需 要(经组织消耗的氧)之间的差异。血供给的限制，一般因血管中的因素引起，最经常但 不排他地，由血栓栓塞(血凝)或动脉粥样硬化(阻塞动脉管腔的载脂斑块(lipid-ladenplaque))致使的血管收缩或堵塞引起。缺血导致组织损伤或功能异常。心肌缺血导致心绞 痛，且在此指缺血性心脏病。术语“新血管疾病(CVD) ”一般指一些影响心脏和循环系统的疾病，包括动脉瘤； 心绞痛；心律不齐；动脉粥样硬化；心肌症；脑血管破裂(中风)；脑血管疾病；先天性心脏 病；充血性心力衰竭；冠心病(CHID)，也称为冠状动脉病(CAD)、缺血性心脏病或动脉粥样 硬化性心脏病；扩张性心肌病；舒张功能不全；心内膜炎；心力衰竭；高血压病(高血压)； 肥厚型心肌病；二尖瓣脱垂；心肌梗塞(心脏病发作)；心肌炎；外周性血管疾病；风湿性心 脏病；瓣膜疾病；和静脉血栓栓塞。如这里使用的，术语“新血管疾病”也包括提及的缺血 ； 因身体损伤(动脉内膜切除术(endartiectomie)、气囊血管成形术)造成的或由于慢性损 伤(包括动脉粥样硬化)引起的动脉损伤(对内皮细胞谱系(endotheliallineage)的损 伤)；心肌损伤(心肌坏死)；和肌坏死。一般地，可引发新血管发生反应的任何生理学或病 理生理学病况均被本文使用的术语“心血管疾病”所包括。术语“循环流体”是指淋巴流体和血液，优选血液。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在此可交换地用于指氨基酸残基的聚合物。该术 语可运用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的类似 物或模拟物(mimetic)，该术语也可运用于天然存在的氨基酸聚合物。多肽可被修饰，例如， 通过加入碳水化合物残基修饰，从而形成糖蛋白。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”包括糖蛋 白和包含任何其他修饰的蛋白质，以及非糖蛋白和另外的未经修饰的蛋白质。如本文使用的“蛋白质谱”指样本中存在的蛋白质、蛋白质片段，或肽的集合 (collection)。该蛋白质谱可包含集合中蛋白质的确认(特性，identity)(例如，已知蛋白 质的种名或氨基酸序列特性，或分子量或关于还没有进一步表征的蛋白质的其他描述性信 息)，而没有提及存在的数量。在其他实施方式中，蛋白质谱包括样本中所描述的蛋白质的 数量信息。类似地，如本文使用的“基因表达谱”，指样本中存在的基因表达产物的集合(包 括如蛋白质和RNA分子的产物)。如在此处使用的，关于基因表达谱中基因表达产物的“定量”，指样本中存在的特 定蛋白、肽或RNA量的确定。定量可以是绝对量(例如，yg/mL)或相对量(例如，信号的 相对强度)。通常，此种操作通过专用的生物化学分析，例如色谱、质谱或杂交分析而进行。 如本文使用的，关于循环流体中细胞的“定量”是指细胞绝对或相对数目的确定。此种操作 通常通过专用的细胞计数器进行，例如流式细胞仪。“标记物”和“生物标记物”可交换地用于指基因表达产物，将从两个不同对象如测 试对象或患有缺血事件(或存在患此病风险)的患者中采取的样本与从对照对象(例如， 没有患缺血事件或(患此病风险)的对象；正常或健康的对象)采取的相当样本相比较，该 表达产物在样本中差异性地存在。可替换地，该术语指相对于另一细胞群体，在一个细胞群 体中差异性存在的基因表达产物。短语“差异性存在”是指从测试对象采取的样本与从对照对象采取的样本相比较， 二者样本中标记物存在的数量或频率(发生率)是有差异的。例如，标记物可以是，与参照 对象样本相比，在风险对象血液样本中存在的水平升高或降低的基因表达产物。可替换地， 标记物可以是，与对照对象样本相比，在风险对象血液样本中检测到的频率更高或更低的 基因表达产物。
如果一个样本中的基因表达产物数量与另一个样本中的基因表达产物数量在统 计学上显著不同，则该基因表达产物在两个样本之间“差异性存在”。例如，如果它存在于一 个样本中比在另一个样本中大至多约120%、至少约130%、至少约150%、至少约180%、至 少约200%、至少约300%、至少约500%、至少约700%、至少约900%、或至少约1000%，或 如果它在一个样本中可检测到而在另一个样本中不可检测到，则该基因表达产物在两个样 本之间差异性存在。如本文使用的，术语“抗体”是指单克隆抗体、多特异性抗体、合成抗体、人抗 体、人源化抗体、嵌合抗体、单链FvS(SCFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab’ )片段、二硫键连 (di sulfide-linked)的Fvs (sdFv)和抗独特型(抗-Id)抗体(包括，例如，本发明抗体的 抗-id抗体)，和上面任何一个抗体的表位结合片段。特别地，本发明抗体包括免疫球蛋 白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即，含有抗原结合位点的分子，该抗原结合位点 免疫特异性地结合到多肽抗原，该多肽抗原被包括在基因组区中的基因编码或受表1中列 出的基因组区中的遗传转化影响。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG、 IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、任何类别(例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亚类 (subclass)的免疫球蛋白分子。“免疫分析”是指使用抗体特异性结合抗原(例如，标记物)的分析。免疫分析的 特点是使用特定抗体的特异性结合特性来分离、靶向，和/或量化抗原。多种免疫分析法 (immunoassay formats)可用于选择与特定蛋白特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA 免疫分析通常用于选择与特定蛋白特异性免疫反应的抗体(参见，例如，Harlow&Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988)，用于描述可用于确定特异性免疫反应性的免疫 分析法和条件)。典型地，特异性或选择性反应是本底信号(背景信号)或噪声的至少两 倍，更典型地大于本底的10倍至100倍。当提及抗体时，短语“特异性(或选择性)结合”，或当提及蛋白质或肽时，短语
“与......特异性(选择性)免疫反应”，是指对蛋白质和其他生物物质(biologies)的异
源性群体中蛋白质的存在起决定性作用的结合反应。因而，在指派的免疫分析条件下，制定 的抗体结合到特定蛋白至少是本底的两倍，且没有大量的抗体显著结合到样本中存在的其 他蛋白质上。在此种条件下特异性结合到抗体上，需要选择对特定蛋白有特异性的抗体。术语关于蛋白质或基因而“影响表达”和“调整表达”，如这里使用的，应当理解为 调节、控制、阻断、抑制、刺激、增强、活化、模仿、避让(bypass)、纠正(correct)、移出、和/ 或取代所述表达，在更一般的术语中为介入(或干预)所述表达，例如通过影响编码该蛋白 质的基因的表达而介入。术语“对象”或“患者”在此可交换地使用，包括但不局限于，有机体；哺乳动物和非 哺乳动物，其中哺乳动物包括，例如，人、非人灵长类动物、小鼠、猪、牛、山羊、猫、兔、大鼠、 豚鼠、仓鼠、马、猴、绵羊或其他非人哺乳动物；非哺乳类脊椎动物和非哺乳类无脊椎动物， 非哺乳类脊椎动物例如为禽(例如，鸡或鸭)、两栖动物和鱼。优选实施方式的描述生物标记物1999年，Asahara最先描述了患者外周血中的内皮祖细胞(EPC)构成对缺血和动 脉损伤作出反应的募集的内皮前体细胞池。从那时起，已显示这些细胞涉及在生理学和病理生理条件下的新血管发生(新血管发育)。而且，EPC涉及，在身体损伤(动脉内膜切除 术(endartiectomie)、气囊血管成形术)、和慢性损伤(包括动脉粥样硬化)及缺血/肌坏 死(引发新血管发生反应)导致的内皮细胞谱系损伤之后的进行性动脉修复和/或再生 在下面的描述中，具体提到了血管生成在其中发挥作用的各种疾病，且血管生成 的检测(或延伸修饰(modification of the extend))因而可用于检测(或甚至治疗)此 种疾病。然而，本申请的目的在于检测对象中血管生成出现和/或进展的潜在可能性，和使 用新获得的知识抑制或刺激需要此种抑制或刺激的对象血管生成的方法，而不拘泥于特定 疾病，尽管特定疾病，尤其是炎症、肿瘤血管发生、新血管疾病和糖尿病的检测、预防和治疗 没有明确地从本发明的范围中排除。然而，本发明的另外特征在于其可用于探查对象促血 管发生(pro-angiogenetic)治疗是否实现它的预期反应。对于本发明的生物标记物，迄今还没有提供血管生成的诊断或预后的生物标记 物。用于心肌损伤的标记物(心肌坏死标记物)通常用在心脏学实践中，但主要包括细胞 内心肌酶的鉴定，该细胞内心肌酶是在包括肌钙蛋白和肌酸激酶MB亚组分的心肌组织损 伤之后的循环中被释放。然而，至今还没有可以量化进行性缺血事件或缺血前事件的标记 物。稳定型心绞痛构成大多数心血管实践且在西方社会包含可观的患者人数(发病和死亡 率大)。可替换的诊断方法，包括运动测试和灌注成像，没有成本效益并缺乏适当的灵敏度 和特异性。这种严重的健康威胁准许合适的生物标记物来鉴定处于风险中的患者并评价对 抗缺血治疗的合适反应。为了寻找此种标记物，本发明人已进行小鼠和斑马鱼的胚胎血管发育的全基因组 分析(使用RNA微阵列分析)，并鉴定了以某种方式涉及动脉发育的2000个以上的基因。 这种大量基因最初是在使用Flkl+胚胎干细胞与Flkl-(阴性)群体(不相关细胞)之间 的差异表达，确定8-11天大的小鼠胚胎中Flkl+胚胎干细胞的RNA表达谱之后而发现的。 通过使用整体原位杂交(WISH)，1150个基因被选作提供潜在的生物标记物。本发明人进一 步选择和验证这些候选基因在小鼠和斑马鱼的发育血管树中的表达，和在缺血期间它们在 青春期小鼠模型中的上调。基于直系同源物搜索，本发明人在2000+个细胞中，鉴定出涉及人、鼠和斑马鱼 血管生成的26个克隆。Flkl+细胞选择早期造血干细胞、专用成血管细胞(dedicated angioblasts)以及完全分化的内皮细胞，从而包括从血管母细胞(hemangioblasts)到内 皮细胞(EC)的完全分化过程。已知Flkl和Tail是早期发育期间专用成血管细胞上的两个 最早期标记物，而Flkl表达在胚外造血干细胞中迅速下调，因为它们定向于(分化，commit to)造血谱系。在斑马鱼中使用原位杂交研究，本发明人最初能够示出通过比较Flkl+和 Flkl-细胞的差异显示分析所鉴定的23%的基因在血管生成位点被排他地表达，而另外 30%示出在血管生成位点和神经元及视网膜上皮样组织(retinal epitheloid tissue)表 达。这强调了本发明人的原始实验原理的有效性，从而通过这个特定基因筛选鉴定血管生 成的基因调节子(genetic regulator)。本发明人鉴定了在血管树中小鼠发育期间差异表 达的2000+鼠基因，并在斑马鱼发育期间进行血管生成的高通量整体原位杂交，以及使用 从缺血鼠模型和人疾病中收集的各种组织，进行定量PCR分析，从而验证斑马鱼发育期间 发育血管床中的适当的时空表达。使用这种涉及小鼠、斑马鱼和人血管生成的不同表现形 式的筛选，本发明人能够鉴定贯穿物种和不同模型保存的普通的调节基因产物，并能够鉴定胚胎和成年小鼠中血管生成的普通基因调节子。血管生成在成年新血管形成中的作用已充分确立，其是许多科学论文的主题。然而，该过程的基因调节至今仍不清楚。本发明人已研究并比较作为模型的小鼠和斑马鱼发 育期间的血管形成，从而在没有造血和血管发生的情况下在体内分析血管生成过程。随后 本发明人使鉴定出的克隆表达与肢体缺血和人疾病的(成年)小鼠模型中的表达交叉相 关。通过这样做，本发明人能够鉴定在胚胎和成年血管生成期间表达的克隆。在后肢缺血 的(成年)小鼠模型中并通过利用发育斑马鱼中的(吗啉环)敲低(knock down)分析，对 这些克隆进行了进一步的体内研究。使用这些技术，本发明人能够鉴定26个涉及成年和胚 胎血管生成的候选调节基因。尽管成年和胚胎血管生成是否由共同路径(common pathways)调节仍然不清楚， 但本发明人能够鉴定共有的表达模式，可能鉴定共有的基因调节子。最后，单个克隆的诱导表达通过在血液样本的循环PML亚群(子集，subset)中进 行的QPCR分析来验证，该血样样本从稳定型缺血性冠状动脉疾病患者和急性冠脉综合征 患者获得。基于通过这些研究得到的结果，本发明人对血管生成和哺乳动物中成血管细胞分 化的分子机制有了必要的理解，并鉴定了基因库或基因表达谱，该基因库或基因表达谱的 特点是涉及EPC募集、活化和到新血管形成区域中的迁移，并可用作特异性EPC表型的活化 EPC存在的指示物(indicator)，并因而可用作进行性血管生成和动脉修复的指示物，该动 脉修复为例如在广泛环境(broad setting)中缺血和动脉受损之后的动脉修复，特别是在 与动脉损伤、心肌损伤或缺血相关的那些新血管疾病之后的动脉修复。共发现26个基因组成活化的EPC表型，并证明它们作为用于这些障碍的生物标记 物的价值。技术人员应很快理解，这些基因不但适合作为上面提及的病理的生物标记物，而 且适合作为用于血管生成，优选成年对象血管生成的生理过程的标记物，且这些基因可用 作治疗靶，用以治疗这些病理，或用于刺激血管生成的生理过程。这些基因列在表1中。表1.缺血性心脏病期间被上调的33个基因的列表。应当理解其它物种的同源物 包括在其中。
官方符号全名I GenBank GeneID a
ADORA2A 腺苷A2a受体 人幼^甜8) ___GeneID: 135_
"AGTRLI(APLNR)血管紧张素II受体样1智人GeneID: 187
APLNapelin, AGTRLl 配体智人 GeneID: 8862
~CCBE1胶原和钙结合EGF结构域1智人GeneID: 147372
“CGNLl~cingulin-# 1智人 GeneID: 84952
CRIP2富含半胱氨酸蛋白2智人GeneID: 1397
CYB5B细月包色素bS型B (线粒体外膜)智人GeneID: 80777
~DLL4I δ -样 4 (果蝇)智人 GeneID: 5456权利要求
一种用于检测对象中血管生成的出现和/或进展的方法，所述方法包括在所述对象的循环流体的样本中检测活化的内皮祖细胞(EPC)的存在的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述血管生成的进展与旨在减少或增加血管生成 的医疗方法相关。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述血管生成的出现和/或进展指示血管发 生过程的出现和/或进展。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述检测活化的EPC的步骤包括在 所述样本中检测EPC中基因表达水平的提高，所述基因为选自以下组中的至少1个基因、 甚至更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因，所述组由AD0RA1、AD0RA2A、 AD0RA2B,AD0RA3,AGTRL1(APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、CDC42、CGNLl、CREBBP、CRIPl、CRIP2、 CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELKl、ELK3、ELK4 (SAPl)、EP300、ERGl (KCNH2)、 ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、F⑶2、FGD3、F⑶4、FGD5、FLTl、FST、GATA6、GRRPl、HO-I (HMOXl)、 H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、MMP3、Nos2、PAI1、PHDl、PLVAP, RAB5a、RIN3、R0CK2、S0X18、S0X7、SRF, STABl、STAB2、STUBl、TFEC, THBSl、THBS2、THBS3、 THBS4、THBS5、THSDU TNFAIP8和XLKDl (LYVEl)组成，所述基因又优选为选自以下组中的 至少1个基因、还更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因，所述组由AD0RA2A、 AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETSl、 ETS2、EXOC3L、FO)5、GRRP1、HO-1(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、LAMA4、Lambl_l、LGMN、PLVAP、RIN3、 R0CK2、S0X7、S0X18、STAB1、STAB2、STUBU TFEC, THSD1、TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)组成。
5.根据权利要求4所述的方法，其中EPC中所述基因表达水平的所述提高通过检测蛋 白质来检测。
6.一种用于检测患者中血管生成的出现和/或进展的生物标记物，所述生物标记物包 含内皮祖细胞(EPC)的基因的表达产物，所述内皮祖细胞的基因的表达在血管生成期间被 调节。
7.根据权利要求6所述的生物标记物，其中所述生物标记物包含内皮祖细胞(EPC)的 基因的表达产物，与血管发生相比所述内皮祖细胞的基因的表达在血管生成期间被上调。
8.根据权利要求6或7所述的生物标记物，其中所述生物标记物存在于内皮祖细胞 (EPC)、多形核白细胞(PMN)或全血中。
9.根据权利要求3所述的生物标记物，其中所述EPC或PMN存在于患者的外周血中。
10.根据权利要求3或4所述的生物标记物，其中所述EPC是Flkl-阳性细胞。
11.根据上述权利要求中任一项所述的生物标记物，其中所述生物标记物为选自以下 组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因的表达 产物，所述组由 ADORAl、AD0RA2A、AD0RA2B、AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEU CDC42、CGNLUCREBBP,CRIPl、CRIP2、CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELKl、ELK3、 ELK4 (SAP 1)、EP300、ERG 1 (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、FGD2、FGD3、FGD4、FGD5、FLT1、 FST, GATA6、GRRPl、HO-I (HMOXl)、Η0-2 (ΗΜ0Χ2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、 MMP3、Nos2、PAIl、PHDl、PLVAP、RAB5a、RIN3、R0CK2、S0X18、S0X7、SRF、STABl、STAB2、STUBl、 TFEC, THBSl、THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSDl、TNFAIP8 禾口 XLKDl (LYVEl)组成，所述生 物标记物还优选为选自以下组中的至少1个基因、又更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因的表达产物，所述组由 AD0RA2A、AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、 CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、FGD5、GRRP1、HO-1 (HMOXl)、 H0-2(HM0X2)、LAMA4、Lamb1-1、LGMN、PLVAP、RIN3、R0CK2、S0X7、SOX18、STAB1、STAB2、STUB1、 TFEC, THSD1、TNFAIP8 禾口 XLKDl (LYVEl)组成。
12.根据上述权利要求中任一项所述的生物标记物，其中所述表达产物是蛋白质或 RNA分子。
13.根据上述权利要求中任一项所述的生物标记物，其中所述生物标记物是蛋白质谱 或RNA谱。
14.权利要求6-13中任一项限定的生物标记物在检测对象中血管生成的出现和/或进 展中的用途。
15.权利要求6-13中任一项所述的生物标记物作为替代终点标记物在确定治疗方法 的功效中的用途。
16.一种用于检测对象中血管生成的出现和/或进展的方法，包括在所述对象的血液 中检测根据权利要求6-13中任一项所述的生物标记物。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述方法在所述对象的血液的样本上进行。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述检测通过使用微阵列进行。
19.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述检测通过使用串联质谱法(MS-MS)、 通过MALDI-FT质谱法、MALDI-FT-ICR质谱法、MALDI三重四极杆质谱法或免疫分析进行。
20.用于进行根据权利要求1-5或16-19中任一项所述的方法的试剂盒，包含至少一种 权利要求6-13中任一项限定的生物标记物或特异性结合至所述生物标记物的特异性结合 伴侣，所述试剂盒可选地进一步包含以下中的一种或多种-至少一种参考样品或对照样品；-关于所述生物标记物的参考值的信息；-能够结合至所述特异性结合伴侣的至少一种测试化合物；_用于检测所述生物标记物和所述特异性结合伴侣之间的结合的至少一种可检测标记物。
21.用于进行根据权利要求16-19中任一项所述的方法的微阵列，包含特异性结合至 权利要求6-13中任一项限定的至少两种生物标记物的特异性结合伴侣，其中所述生物标 记物结合于固体载体上。
22.—种特异性结合至权利要求6-13中任一项限定的生物标记物的诊断试剂。
23.根据权利要求22所述的诊断试剂，其中所述诊断试剂是与所述生物标记物在严格 条件下特异性杂交的抗体或核酸分子。
24.一种包含根据权利要求22或23所述的诊断试剂的诊断组合物。
25.根据权利要求24所述的诊断组合物在检测对象中血管生成的出现和/或进展中的 用途。
26.—种抑制或刺激需要此种抑制或刺激的对象中血管生成的方法，所述方法包括减 少或增加所述对象的血液中活化的内皮祖细胞(EPC)的数目。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述减少活化的内皮祖细胞的数目的步骤， 包括降低所述对象的血液中所述内皮祖细胞中的基因的表达，所述基因为选自以下组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因，所述组由 ADORAU AD0RA2A、AD0RA2B、AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEU CDC42、CGNLU CREBBP, CRIPl、CRIP2、CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELK1、ELK3、ELK4 (SAPl)、 EP300、ERG1 (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、FGD2、F⑶3、FGD4、FGD5、FLT1、FST、GATA6、 GRRPl、HO-I (HMOXl)、H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、MMP3、Nos2、 PAI1、PHDl、PLVAP, RAB5a、RIN3、R0CK2、S0X18、S0X7、SRF, STABl、STAB2、STUBl、TFEC, THBSl、THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、THSDl、TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)组成，所述基因还优 选为选自以下组中的至少1个基因、又更优选为至 少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有 基因，所述组由 AD0RA2A、AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、D USP5、 ELK3、ERGl (KCNH2)、ETS1、ETS2、EX0C3L、FGD5、GRRP1、HO-1 (HMOXl)、Η0-2 (ΗΜ0Χ2)、LAMA4、 Lamb1-1、LGMN、PLVAP、RIΝ3、R0CK2、S0X7、SOX18、STAB1、STAB2、STUB1、TFEC、THSD1、TNFAIP8 和XLKDl (LYVEl)组成，而其中增加活化的内皮祖细胞的数目的步骤，包括提高所述对象 的血液中所述内皮祖细胞中基因的表达，所述基因为选自以下组中的至少1个基因、甚至 更优选为至少2、3、4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因，所述组由AD0RA1、AD0RA2A、 AD0RA2B、AD0RA3、AGTRLl(APLNR)、AMPH、APLN、CCBEl、CDC42、CGNLl、CREBBP、CRIPl、CRIP2、 CRIP3、CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr_l、ELKl、ELK3、ELK4 (SAPl)、EP300、ERGl (KCNH2)、 ETS1、ETS2、EX0C3L、F⑶ 1、F⑶2、FGD3、F⑶4、FGD5、FLTl、FST、GATA6、GRRPl、HO-1 (HMOXl)、 H0-2 (HM0X2)、IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-U LGMN、MMP3、Nos2、PAI1、PHDl、PLVAP, RAB5a、RIN3、R0CK2、S0X18、S0X7、SRF, STABl、STAB2、STUBl、TFEC, THBSl、THBS2、THBS3、 THBS4、THBS5、THSD1、TNFAIP8和XLKDl (LYVEl)组成，所述基因还优选为选自以下组中的至 少1个基因、又更优选为至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因，所述组由AD0RA2A、 AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETSl、 ETS2、EXOC3L、FO)5、GRRP1、HO-1(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、LAMA4、Lambl_l、LGMN、PLVAP、RIN3、 R0CK2、S0X7、S0X18、STAB1、STAB2、STUBU TFEC, THSD1、TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)组成。
28.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述方法包括减少与对照对象相比在所 述对象中过表达的至少1种、更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25或30种蛋白质的量，或增 加与对照对象相比在所述对象中低表达的至少1种、更优选至少2、3、4、5、10、15、20、25或 30种蛋白质的量，其中所述蛋白质是选自以下组中的至少1个基因、甚至更优选至少2、3、 4、5、10、15、20、25、30、35个或所有基因的表达产物，所述组由AD0RA1、AD0RA2A、AD0RA2B、 AD0RA3、AGTRLl (APLNR)、AMPH、APLN、CCBEU CDC42、CGNLU CREBBP, CRIPU CRIP2、CRIP3、 CYB5B、DLL4、DUSP5、EEAl、egr-l、ELKl、ELK3、ELK4(SAPl)、EP300、ERG1(KCNH2)、ETS1、ETS2、 EXOC3L、FGDl、FO)2、FGD3、Fa)4、FGD5、FLTl、FST、GATA6、GRRPl、HO-l(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、 IFNG、ILIA、IL1B、LAMA4、Lambl-I、LGMN、MMP3、Nos2、PAI1、PHDl、PLVAP, RAB5a、RIN3、 R0CK2、S0X18、S0X7、SRF、STAB1、STAB2、STUB 1、TFEC、THBS 1、THBS2、THBS3、THBS4、THBS5、 THSDU TNFAIP8和XLKDl (LYVEl)组成，所述蛋白质还优选为以下组中的至少1个基因、 又更优选为至少2、3、4、5、10、15、20、25、30个或所有基因的表达产物，所述组由AD0RA2A、 AGTRLl (APLNR)、APLN、CCBEl、CGNLl、CRIP2、CYB5B、DLL4、DUSP5、ELK3、ERGl (KCNH2)、ETSl、 ETS2、EXOC3L、FO)5、GRRP1、HO-1(HMOXl)、H0_2(HM0X2)、LAMA4、Lambl_l、LGMN、PLVAP、RIN3、 R0CK2、S0X7、S0X18、STAB1、STAB2、STUBU TFEC, THSD1、TNFAIP8 和 XLKDl (LYVEl)组成。
29.用于抑制或刺激对象中血管生成的药物组合物，包含选自以下中的至少一种抑制 剂化合物-对抗权利要求6-13中任一项所述的生物标记物、优选在细胞膜上表达的生物标记物 的抗体或其衍生物，且所述衍生物优先选自由scFv片段、Fab片段、嵌合抗体、双功能抗体、 胞内抗体和其他抗体衍生分子组成的组；-权利要求6-13中任一项所述的生物标记物； _干扰所述生物标记物的生物活性的小分子；-干扰所述生物标记物的表达的反义分子，尤其是反义RNA或反义寡脱氧核苷酸； -干扰所述生物标记物的表达的RNAi分子， -干扰所述生物标记物的表达的核酶，和-干扰所述生物标记物或权利要求26中所述基因的调节基因的功能的化合物， 以及合适的赋形剂、载体或稀释剂。
30.治疗对象的方法，包括向所述对象给予有效抑制或刺激血管生成的量的权利要求 29所述的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及用于检测对象中血管生成的出现和/或进展的方法，所述方法包括在所述对象的循环流体样本中检测活化的内皮祖细胞(EPC)存在的步骤。
文档编号C12Q1/68GK101946008SQ200880126585
公开日2011年1月12日 申请日期2008年12月12日 优先权日2007年12月12日
发明者亨利克斯·约翰内斯·迪凯尔 申请人:鹿特丹伊拉斯姆斯大学医疗中心