一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列的制作方法

专利名称：一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及病毒防疫，尤其涉及一种分离病毒变 异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列。
背景技术：
口蹄疫(foot and mouth disease, FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性、 高度传染性传染病，是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)
感染引起的人畜共患的传染病，是当今世界上最为严重的家畜传染病，危害牛、 猪、羊等偶蹄类动物，以传播迅速、感染率高而著称，国际兽疫局将其列为A 类传染病之首。世界上绝大多数国家都流行过口蹄疫，目前该病主要在亚洲部 分国家和地区、非洲、中东和南美呈地方性流行或零星散发。
由于病毒的快速变异，口蹄疫疫苗难以对被免疫动物达到有效的保护，已 消灭口蹄疫的国家和地区常常会重新暴发口蹄疫，如1967年，在英国发生了持 续5个月的口蹄疫，为了遏止疾病的蔓延，在几千个流行疫区内有442,000头家 畜被杀掉，1981年英国再次爆发口蹄疫，2000年口蹄疫首先在亚洲和非洲爆发， 继而蔓延至欧洲和美洲，2001年英国又发生口蹄疫，共发现病例2030起，其间 共有400多万头牲畜被屠宰，损失惨重。由于目前控制口蹄疫主要是采取屠宰 措施，因此给畜禽养殖业带来毁灭性打击。
当前，控制病毒性疾病最经济有效的手段就是疫苗，然而随着病毒的快速 变异，越来越多的疫苗出现丧失保护作用的现象，如流感疫苗、禽流感疫苗、 乙肝疫苗等都出现这种情况，如何能针对病毒变异快这一情况，提出合适有效的解决方法是目前摆在人们面前的一道难题。

发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种通过对病毒变异区域进 行分析，并结合随机肽技术，分离病毒变异序列的方法。
本发明的另一个目的在于提供采用上述方法分离得到的口蹄疫病毒变异 序列。
本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的
针对病毒变异速度快，现有疫苗易失去保护作用的现象，本发明提供一种 分离病毒变异序列的方法，该方法通过先对病毒变异区域进行分析，然后利用 随机肽技术，分离得到能够模拟病毒变异的多条多肽，将这些多肽用于疫苗研 发，可以使得疫苗研制能兼顾病毒的变异，起到未雨绸缪的作用。
本发明的分离病毒变异序列的方法，包括如下步骤
(1) 分析对比数据库中病毒的氨基酸序列，根据现有对该病毒抗原性的研 究，找出该病毒抗原决定簇位点的编码序列以及高可变区域的编码序列，并设 计混合多肽，根据该混合多肽设计随机引物；
(2) 将上述随机引物进行不对称PCR拼接；
(3) 将上述拼接产物与酵母分泌表达信号肽序列制备融合基因；将该融合 基因和大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体分别进行双酶切，大肠杆菌-酿酒酵母穿梭 载体在双酶切位点间再多进行一次酶切，且酶切后用牛小肠碱性磷酸酶
(CIAP)处理；将融合基因的双酶切产物和大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体的三 酶切产物连接；
(4) 将上述连接产物电激转化大肠杆菌，得到质粒，酶切处理该质粒后，再次电激转化，转化产物经筛选后，挑取克隆进行测序，即分离得到病毒变异 序列。
上述步骤(1)中，病毒抗原决定簇位点可选择T细胞抗原决定簇位点、 B细胞抗原决定簇位点等。
上述歩骤(2)中，现有对随机引物的拼接有很多种方法，如鸟枪法、限 制性内切酶拼接法等，本发明人通过试验发现对随机引物采用不对称PCR拼
接，可取得较好的拼接效果，不对称PCR的操作采用本领域常规操作即可。 上述步骤(3)中，为拼接产物加上酵母分泌表达信号肽序列，可使得拼
接产物能很好地分泌表达到胞外，易于纯化，酵母分泌表达信号序列可采用任
意一种本领域技术人员常用的，如酿酒酵母(x凌配因子(AMF)的信号肽序 列。
上述步骤(3)中，大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体可采用任意一种本领域技 术人员常用的，如pYES2/CT、 pYES6/CT或YEp352等。
上述步骤(3)中，对大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体进行三酶切，是因为常 规操作——双酶切经常不能酶切彻底，留下少量环状DNA载体，这些没有插 入片段的空载体会形成大量菌落，从而影响阳性菌落的筛选，而本发明采用三 酶切处理载体，使得酶切更加彻底，酶切后再进行一歩CIAP处理，使得未插 入目的片段的空载体被切成线性DNA并去磷酸化后不能被转化大肠杆菌，从 而可减少非重组质粒的混入，保证最终获得的均为阳性克隆。
上述步骤(4)中，将上述连接产物进行大肠杆菌电激转化并涂板，收菌 并生长后提取质粒，并用限制性内切酶NotI和CIAP处理所提取的质粒，以 彻底去掉没有插入片段的空载体，然后再次电激转化，转化产物涂布于含有花青素的LBGG氨卞青霉素抗性平板，挑取克隆进行测序，即分离得到病毒变 异序列。
本发明采用上述分离病毒变异序列的方法，对口蹄疫病毒的变异序列进行 了分离，其具体步骤如下
(1) 搜索数据库中多个O型口蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白的氨基酸序 列进行分析比对，设计具有E-F-PPS"G结构的混合多肽，其中E段与T细胞 抗原决定簇位点有关，F段与B细胞抗原决定簇位点有关，G段为G-H环区 域，该G-H环区域为口蹄疫病毒中主要的中和性抗原位点，F段与G段之间 由一个二脯氨酸接头(PPS)连接，因为G-H环是O型口蹄疫病毒(FMDV) 上重要的可变区，因此将G段设计为有限随机化的区域；根据该E-F-PPS"G 结构的混合多肽，设计随机引物；
(2) 将上述随机引物进行不对称PCR拼接；
(3) 将上述拼接产物与酵母分泌表达信号肽序列制备融合基因；将该融合 基因和大肠杆菌"fi酒酵母穿梭载体分别进行双酶切，大肠杆菌-酿酒酵母穿梭 载体在双酶切位点间再多进行一次酶切，且酶切后用牛小肠碱性磷酸酶
(CIAP)处理；将融合基因的双酶切产物和大肠杆菌"l良酒酵母穿梭载体的三 酶切产物连接；
(4) 将上述连接产物进行大肠杆菌高效电激转化并涂板，收菌并生长后提 取质粒，并用限制性内切酶NotI和CIAP处理所提取的质粒，使得未插入目的 片段的空载体被切成线性DNA并去磷酸化后不能被转化大肠杆菌，从而可减 少非重组质粒的混入。然后再次高效电激转化，转化产物涂布于含有花青素的 LBGG氨卞青霉素抗性平板，挑取克隆进行测序，即分离得到病毒变异序列。，上述步骤(1)中，从Genebank中搜索到目前已报道的如下多种O型口 蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白的氨基酸顺序AJ294914、 AJ303520、 AJ29491 8、 AJ303521、 AJ296328、 AJ004663、 AJ303522、 AJ303484、 AJ303523、 AJ3 03483、 AJ318833、 AJ318844、 AJ318847、 AJ303525、 AJ303526、 AJ318848、 AJ131469、 AF095884、 AF095885、 AF026168、 AJ296322、 AJ294923、 AJ318 836、 AJ294925、 AJ294922、 AJ294924、 AF525458、 AJ131468、 AJ131470、 A J294917、 AJ294913、 AJ294915、 AJ294916、 AJ294919和AJ294920。根据这 些氨基酸的分析比对，设计出具有E-F-PPS《结构的混合多肽，其中E段为E TQTQRRHHTDVAFVLDRFV, F段为RHKQPLIAPAKQLL, G段设计为部分
(N/K/T)VRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)Lp和完全随机肽链K YXXXXXXXVRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)LP两种，具体如
下所示
a. 该混合多肽的部分随机肽链为ETQTQRRHHTDVAFVLDRFV-RHKQPL IAPAKQLL-PPS-KY(G/S/A)(D/T/V/G/E/Q)(T/A/G/S)(S/R/H/P/A/L)(T/V/A/L)(N/ S/T/A)(N/K/T)VRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)LP，该部分随机 肽链的核苷酸序列如SEQ ID No: 201所示；
b. 该混合多肽的完全随机肽链为ETQTQRRHHTDVAFVLDRFV- RHKQP LIAPAKQLL-PPS-KYXXXXXXXVRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/ P/S)LP，该完全随机肽链的核苷酸序列如SEQ ID NO: 202所示。
上述步骤(1)中，根据序列SEQ ID No: 1和SEQ ID NO: 2分别设计 随机引物fmdl (其核苷酸序列如SEQ ID No: 203所示)、fmd2 (其核苷酸
8序列如SEQ ID No: 204所示)、fmd3 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 205所 示)、fmd4 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 206所示)和fmd5 (其核苷酸序 列如SEQ ID No: 207所示)，其中引物fmd4主要是针对G-H环设计的，由 于G-H环为高可变区，因此采用部分随机设计出引物fmd4，同时再根据完全 随机设计出引物fmd4b (其核苷酸序列如SEQ ID No: 208所示)，引物fmd 4b中有7个密码子采用了 VNN密码子，除了不编码芳香族氨基酸和半胱氨酸 之外，可编码其它任意氨基酸。
上述步骤(2)中，采用不对称PCR对随机引物进行拼接，采用本领域技 术人员常用的不对称PCR操作均可实现本发明。
上述步骤(4)中，采用了两次超高效电激处理；筛选转化子时，可在所 用的抗性平板上加入适量的花青素，因为随机肽通常是带有一点毒性的，而抗 氧化剂花青素的加入可以减弱毒性，使转化子生长的更好。
本发明分离病毒变异序列的方法中，利用Xhol酶切是为了去除大部分未 插入目的片段的空载体，只有这些空载体才具有XhoI位点， 一旦被切成线性 DNA后并去磷酸化后不能被转化大肠，可以减少非重组质粒的混入；利用Notl 酶切是为了去除大部分未插入目的片段的空载体，只有这些空载体才具有Notl 位点， 一旦被切成线性DNA后并去磷酸化后不能被转化大肠，可以减少非重 组质粒的混入。
本发明釆用上述分离方法，最终获得100条口蹄疫病毒变异序列，其氨基 酸序列如SEQ ID NO: 101 200所示，其对应的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1 100所示。
本发明的分离方法适用于分离各种新的病毒变异序列，这些病毒变异序列可用于病毒疫苗的制备，因为这些病毒变异序列可模拟病毒进化，因此所制备 的疫苗能够起到兼顾病毒变异的作用。
本发明得到的ioo条口蹄疫病毒变异序列可用于口蹄疫病毒疫苗的制备。
本发明的DNA编码序列其中，M=A/C、 R=A/G、 W=A/T 、 S=G/C、 Y=C/T、 K=G/T、 V=A/G/C、 H=A/C/T、 D=A/G/T、 B=G/C/T、 N=A/G/C/T; X
代表任意氨基酸。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果
1. 本发明提供一种可适用于分离各种新的病毒变异序列的方法，由该方法 获得的病毒变异序列可用于疫苗的研制，由于变异是病毒的一大特点，而疫苗 是防制病毒传染性疾病最有效的手段，因此利用本发明所得病毒变异序列研制 疫苗，能兼顾病毒的变异，起到未雨绸繆的作用，对经济发展和人类健康产生 良好的、巨大的效益；
2. 本发明的分离方法利用随机肽技术进行混合多肽疫苗的研发，同时对分 离方法进行优化改进，如采用不对称PCR进行随机引物拼接、对大肠杆菌魂 母穿梭表达载体采用三酶切和CIAP处理、采用高效电激转化等，都使得本发 明取得很好的分离效果；
3. 本发明的方法能简单、高效地发现病毒新的变异序列，为广谱疫苗的开 发开辟新途径，也为全国的畜禽养殖业带来有力的保障，也会为开发相应的禽 流感疫苗、爱滋病疫苗等积累宝贵的经验。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明做进一歩地解释，但具体实施例并不对本发 明做任何限定。实施例l
本实施例的口蹄疫病毒变异序列的分离方法，其具体步骤如下所示
(1) 从Genebank中搜索到以下多个O型口蹄疫病毒VP1蛋白G-H环的 氨基酸序列并对这些氨基酸序列进行分析比对AJ294914、 AD03520、 AJ294 918、 AJ303521、 AJ296328、 AJ004663、 AJ303522、 AJ303484、 AJ303523、 A J303483、 AJ318833、 AJ318844、 AJ318847、 AJ303525、 AJ303526、 AJ31884 8、 AJ131469、 AF095884、 AF095885、 AF026168、 AJ296322、 AJ294923、 AJ 318836、 AJ294925、 AJ294922、 AJ294924、 AF525458、 AJ131468、 AJ131470、 AJ294917、 AJ294913、 AJ294915、 AJ294916、 AJ294919和AJ294920;根据 这些氨基酸序列的一致序列设计出具有E-F-PPS《结构的混合多肽，该混合多 肽的氨基酸序列为ETQTQRRHHTDVAFVLDRFV-RHKQPLIAPAKQLL-PPS-K
GDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)Lp,其核苷酸序列如SEQ ID N
o: 201所示；根据该混合多肽设计出随机引物fmdl (其核苷酸序列如SEQI D No: 203所示)、fmd2 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 204所示)、fmd3 (其 核苷酸序列如SEQ ID No: 205所示)、fmd4 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 206所示)和fmd5 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 207所示)；
(2) 将上述随机引物通过不对称PCR进行拼接，其过程如下 a.利用不对称PCR技术，按重量比fmd2: fmd3=15: 1禾卩fmd4: fmd5 = l:
15，采用高保真的PfuDNA聚合酶(市售)在有2.5%的24t咯烷酮(体积 百分比)存在的情况下，分别进行引物fmd2和fmd3，以及引物fmd4和fmd5 的融合拼接，其PCR反应条件是94。C预变性2分钟，94。C变性20秒，35°C退火45秒，72°C延伸35秒，进行26个循环，最后7(TC延伸5分钟；
b.将上述PCR反应的拼接产物fmd23和fmd45以重量比1: 4混合，继 续使用上述的反应条件进行扩增，除了改变退火温度为3(TC外，其余条件不 变，从而获得一个长175bp的fmd25拼接产物；然后将引物fmdl和fmd25以 相等的摩尔比混合，扩增出长220bp的产物fmd15，此反应的条件是94。C预 变性2分钟，95。C变性30秒，27'C退火45秒，72°C延伸30秒，进行30个 循环，最后7(TC延伸5分钟；
(3)将上述拼接产物再通过PCR连接在酿酒酵母a々配因子分泌信号 的Kex2信号切割位点序列的下游，其过程如图2所示以40ng质粒pPICZ a A (市售，含酿酒酵母a A配因子分泌信号序列)和50ng fmdl5为模板， 以P6 (其核苷酸序列如SEQ ID NO: 209所示)和fmd5为引物，PCR扩增 475bp的酿酒酵母a凌配因子分泌信号的片段和组合多肽的嵌合片段，PCR 反应条件为94。C预变性2分钟，94。C变性20秒，37。C退火45秒，72°C延 伸35秒，进行30个循环反应，最后7(TC延伸5分钟，所得PCR产物即为融 合基因；
凝胶回收上述PCR产物，然后用40U的EcoRI和Xbal双酶切4小时，随后酶 切产物70。C失活15分钟，用乙醇沉淀后融于30pl去离子水；
将酿酒酵母的穿梭质粒pYES2/CT各用40U的EcoRI、 XhoI和XbaI酶切过 夜，并用40UCIAP处理三酶切产物，随后产物进行酶失活处理并用乙醇沉淀； 因为XhoI位于EcoRI和XbaI之间，利用XhoI酶切是为了去除大部分未插入目的 片段的空载体，只有这些空载体才具有XhoI位点， 一旦被切成线性DNA后不 能被转化大肠，可以减少非重组质粒的混入；取350ng上述融合基因的双酶切产物和质粒pYES2/CT的三酶切产物，以 摩尔比10: l进行连接反应，并用乙醇沉淀连接产物；
(4)将上述乙醇沉淀后的连接产物用电激高效转化DH10B感受态细胞 (ElectroMax-DH10B，市售)，涂布在加有10mg/L花青素的LBGG氨卞青霉 素抗性平板上3(TC培养，水洗下转化子后扩培并提取质粒，并用限制性内切 酶20U Notl和16U CIAP过夜处理所提取的质粒，利用Notl酶切是为了去除 残余的未插入目的片段的空载体，只有这些空载体才具有Notl位点， 一旦被 切成线性DNA后并用CIAP去磷酸化后不能被转化大肠，可以减少非重组质 粒的混入。然后再次电激转化(操作同前)，转化产物涂布于含有10mg/L花 青素的LBGG氮卞青霉素抗性平板，37"C培养；
用引物P7 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 210所示)和P8 (其核苷酸序 列如SEQ ID NO: 211所示)配对对上述培养后的菌落进行菌落PCR检测， 阳性菌落应该产生相应的730bp条带，有80%的克隆子可以检测到这些相应 大小的片段，最后提取单菌落的质粒，用引物T7(其核苷酸序列如SEQ ID NO: 212所示)进行测序，测定了 100个左右克隆，获得了正确序列的克隆再用反 向引物P9 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 213所示)进行反向测序检验。
测序是由广州景瑞生物科技有限公司和华大基因深圳测序中心的 ABI3730XL测序仪完成，绝大部分序列Qv值大于30，表明错误的几率小于 0.1%。个别序列的个别碱基Qv值为10-20左右，表明错误的几率为10%-1% 左右，本实施例得到的口蹄疫病毒变异序列为Y1 Y10(其氨基酸序列如SEQ ID NO: 100 110所示，相对应的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1 10所示)， Y23 30 (其氨基酸序列如SEQ ID NO: 123 130所示，相对应的核苷酸序列如SEQ ID NO: 23 30所示)，Y32 Y94 (其氨基酸序列如SEQ ID NO: 132 194所示，相对应的核苷酸序列如SEQIDNO: 32 94所示)。 实施例2
本实施例的口蹄疫病毒变异序列的分离方法，为了达到完全随机化片段的 目的，采用引物fmd4b代替引物fmd4，其余制备步骤同实施例1，本实施例 得到的口蹄疫病毒变异序列为Y11 Y22(其氨基酸序列如SEQ ID NO: 111 122所示，相对应的核苷酸序列如SEQ ID NO: 11 22所示)，Y95 Y100 (其氨基酸序列如SEQ ID NO: 195 200所示，相对应的核苷酸序列如SEQ ID NO: 95 100所示)。 实施例3
本实施例的口蹄疫病毒变异序列的分离方法，其第一步随机引物的获得同
实施例l，其余三步如下所示
(2)以质粒pPICZaA (含酿酒酵母a凌配因子分泌信号序列，市售)作 为模板，以P6(其核苷酸序列如SEQIDNO: 209所示)为上游引物，以fmdl (其核苷酸序列如SEQ ID No: 203所示)为下游引物，采用高保真活性的P> DNA聚合酶(市售)进行PCR反应，其PCR反应条件是9(C预变性5分钟， 然后94。C变性30秒，46C退火40秒，72°C延伸1分钟，30个循环反应，最 后72"C延伸10分钟，得到扩增产物l，其长度为305bp;
同时，将引物fmd2 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 204所示)、fmd3 (其 核苷酸序列如SEQ ID No: 205所示)、fmd4 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 206所示)和fmd5 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 207所示)按照2: 1: 1: 2 的摩尔比加入PCR管中，在2.5%的2—吡咯烷酮存在的情况下采用Pfu DNAPolymerase进行扩增，其反应条件是95"C预变性5分钟，95'C变性30秒，44 。C退火2分钟，72°C延伸2分钟，进行30个循环，最后，72。C延伸10分钟， 得到扩增产物2;
将上述得到的扩增产物1和扩增产物2混合作为模板(体积为400pl)， 以P6 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 209所示)为上游引物，以fmd5 (其核 苷酸序列如SEQ ID No: 207所示)为下游引物，在2.5%的2—吡咯垸酮存 在的情况下采用PfiiDNA Polymerase进行PCR反应，其反应条件如下95°C 预变性5分钟，95。C变性30秒，33。C退火1分钟40秒，72°C延伸2分钟， 进行30个循环，最后，72。C延伸10分钟，获得长度为457bp的片段，产物用 乙醇沉淀后溶于50^1 ddH20。
G)取上述经乙醇沉淀并溶于ddH20的扩增产物80ng，EcoRI和Xbal在 37。C酶切过夜，再用乙醇失活、沉淀，低温烘干后溶于10pl双蒸水；将15pg 的酿酒酵母穿梭质粒pYES2/CT进行EcoRI和Xbal双酶切，其中6pg用10U CIAP处理30分钟，去除5'的磷酸根离子，防止载体自连，酶切产物用苯酚/ 氯仿抽提，并用乙醇沉淀，低温烘干后溶于60nl双蒸水；取200ng pYES2/CT (用EcoRl/Xbal双酶切)和150ng的扩增产物(用EcoRI/Xbal双酶切)，加 入3ji1 T4 DNA连接酶buffer和15U T4 DNA连接酶，4。C连接过夜，连接产 物用乙醇失活并沉淀，低温烘干后溶于13(il双蒸水；
(4)将上述连接产物通过电激转化至大肠杆菌XL1-Blue MRF，菌株(市 售)，涂LB/氨苄青霉素抗性平板，37'C培养过夜；从抗性平板上挑取单菌落， 转入5mlLB/氨苄青霉素液体培养基，37。C过夜，200rpm摇床培养后提质粒； 将抗性平板上的菌落用无菌水洗下，扩大培养之后，大量提质粒；将所得混合质粒用限制性内切酶20U Notl处理；
因为在pYES2/CT质粒的EcoRI和Xbal位点之间有Notl酶切位点，在有 插入片段的重组质粒上该位点不存在。在此使用限制性内切酶Notl切割之后， 由于线性片段转化效率很低，因此可以减少非重组质粒的混入。将所得的质粒 再次电转XL1-Blue MRF'菌株，涂LB/氨苄青霉素抗性平板，37。C培养15小 时，挑取单菌落作为PCR模板，以P7 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 210所 示)为上游引物，以fmd3 (其核苷酸序列如SEQIDNo: 205所示)为下游引 物，进行PCR反应，其条件如下95'C预变性5分钟，95。C变性30秒，53 。C退火1分钟，72°C延伸1分钟，进行41个循环，最后，72"延伸10分钟， 检测到扩增产物中490bp的片段后就用P9 (其核苷酸序列如SEQ ID NO: 213 所示)引物测序，发现了ZX序列的氨基酸序列如SEQIDNO: 131所示，其 编码核苷酸序列如SEQ ID NO: 31所示。
上述实施例l、 2、 3和4中所用的LB配方为(500ml): 5g蛋白胨，2.5g 酵母抽提物(市售)，5g氯化钠，用蒸馏水补至500ml， pH7.0。
上述实施例l、 2和4中所用的LBGG配方为(500ml): 5g蛋白胨，2.5g 酵母抽提物(市售)，5g氯化钠，2%葡萄糖，4%甘油，用蒸馏水补至500ml， pH7.0。
上述实施例1、 2和4中所用的花青素为上海康九化工有限公司产品，纯度 为98.75%,其使用终浓度为10毫克/升。
16-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 SEQUENCE LISTING
<110〉中山大学、广东温氏食品集团有限公司
〈120> —种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列 〈130〉
〈160〉 213
<170〉 Patentln version 3.5
<210> 1
〈211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
〈400〉 1
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt ctttgtgcat ttgatactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt
60 120 180 192
〈210> 2
<211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
〈400〉 2
gaaactcaaa ctca肪gaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gtaagtggta ctgctactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tggctc朋肪肌ctgasaga
60 120 180 192
<210> 3
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
〈400> 3
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt cattgtcttt cgtctaaagt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct tg3ctc肪aa aactgstag3
60 120 180 192
<210> 4
〈211〉 192
<212> DNA <213〉人工序列
〈400〉 4
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacata肪c agccattgat tgctccagct aaacaattgt ctatctgttt tggctactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct tggctcaaaa aactgaaaga
60 120 180 192
〈210〉 5 〈211〉 192 <212> DNA
17<213〉 人工序列
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的U蹄疫病毒变异序列序列表
<400> 5
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gttggtccat ttgatacagt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactct tgactc肪a3 3gCtgatElg3
60 120 180 192
<210〉 6
<211〉 192
〈212> DNA <213>人工序列
〈400> 6
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gattctgttg ttcataatgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tg3ctca肪a aactgcsags
60 120 180 192
〈210〉 7
<211> 192
<212> 醒
<213〉 人工序列
〈400〉 7
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gattctgctg tgtctactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tgactcaasa agctgaaaga
60 120 180 192
<210> 8
<211〉 192
<212〉 DNA 〈213〉人工序列
〈400〉 8
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gttgctctat tgcctacagt cagaggtgat ttgcaagttt ccattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tgsctcaaaa aactg肪ags
60 120 180 192
〈210〉 9
<211> 192
<212> 腿 <213〉人工序列
〈400> 9
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt catggtcgat tggatactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct
tg3CtC3aaa 83Ctg3肪g3
60 120 180 192
<210> 10 <211> 192 〈212〉 醒〈213〉人工序列
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
〈400〉 10
gaaactcaaa ctc腿agaag acstcatact agacataaac agccattgat tgctccagct ctaagtgttg tgtctactgt cagaggtgat acattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt ttgcaagttt tggctcaaaa aactgcaaga
60 120 180 192
〈210> 11
〈211〉 192
〈212〉 DNA 〈213〉人工序列
〈柳> 11
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct gtaagcatta gtgttgttgt cagaggtgat tcattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacatt ttgcaagttt tggctcaaaa aactgaaaga
60 120 180 192
〈210〉 12
〈211〉 192
〈212〉 DNA
<213> 人工序列
〈400〉 12
gaaactca旭ctcaaagaag acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct attcttggca atggacaagt cagaggtgat cctttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacatg ttgcgagttt tggctcaaaa agctgctaga
60 120 180 192
<210> 13
<211> 192
<212〉 DNA 〈213〉人工序列
<400> 13
gsaactcaaa ctca朋g肌g acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct 卿gtgcaca gsgtggccgt csgsggtgst actttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacact
ttgCgagttt tggCtC3333 3gCtgC,a3g3
60 120 180 192
<210> 14
<211〉 192
<212> DNA <213>人工序列
〈400〉 14
g肪actca肪ctc肌agaag acatcatsct agacata朋c agccattgat tgctccagct agagttcgaa atacaaaagt cagaggtgat actttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacaat ttgcgagttt tgactcaaaa agctgataga
60 120 180 192
〈210〉 15 <211〉 192 <212〉 腿<213> 人工序列
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<400> 15
gaaactc3肌ctca肪g肪g acatcatsct agacataaac agccattg3t tgctccsgct catattagta gtacgattgt cagaggtgat actttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 333C33ttgt tgccscc3tc taagt,acata ttgcaagttt tggctcaaaa agctgctaga
60 120 180 192
〈210〉 16
〈211> 192
〈212〉 靈
〈213〉 人工序列
〈400〉 16
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct gtgcatcaaa atcgtctggt cagaggtgat gctttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacaat ttgcgagttt tggctcaaaa aactgctaga
60 120 180 192
<210> 17
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
〈400〉 17
gaaactcaaa ctca肪gaag acatcstact agacataaac agccattgat tgctccagct atcattccga gtattgccgt cagaggtgat tctttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc t肪gtacatt ttgcaagttt tggctcaaaa aactgctaga
60 120 180 192
<210> 18
〈211> 192
<212〉 腿
〈213〉 人工序列
<400〉 18
g肪actcaaa ctcaaagaag acBtceitact agacataaac agccattgat tgctccagct catattgccc tggtagtggt cagaggtgat tcattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aa3c3attgt tgccaccatc taagtacaga ttgcaagttt tggctcaaaa agctgcaaga
60 120 180 192
<210> 19
〈211〉 192
〈212〉 腿
〈213> 人工序列
〈400〉 19
gaaactcasa ctcaaagaag acatcatsct agacataaac agccattgat tgctccagct ataaccagta caaatggtgt cagaggtgat gcattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacatg ttgcaagttt tggctcaaaa agctgctaga
60 120 180 192
<210> 20 <211> 192 <212> 腿〈213〉 人工序列 <400> 20
gaaactcaaa ctcaaagaag
3gaC3ta肪C 3gCC3ttg3t
attataattc atgtcaccgt tctttgccat ga
〈210〉 21
〈211〉 192
<212> DNA
〈213〉 人工序列
<400〉 21
ga朋ctca朋ctcsaagaag agacataaac agccattgat cttagtcatg atcgtgttgt cctttgccat ga
〈210〉 22
<211〉 192
〈212> 腿
<213〉 人工序列
<柳> 22
gaaactcsaa ctca33g朋g agacataaac agccattgat atcgatgtca ttcgcacggt gctttgccat ga
<210> 23
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<柳〉23
ga肪ctca3a ctcaasgaag 3gacat朋ac agccattg3t catactgttg ttgataatgt acattgccat ga
〈210〉 24
〈211〉 192
<212〉 跳
<213> 人工序列
<400> 24
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catactcgaa ttgctaatgt cctttgccat ga
<210〉 25 〈211〉 192 〈212〉 腿
种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt Ugcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttg"tt aactgctaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct
gatgtxgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctc朋aa
tagatttgtt taagtacgtt agctgctaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt a犯caattgt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacgtt agctgcaaga
60 120 180 192
acatcata^ct tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgct1: aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taag"tactct 3gctga犯g3
60 120 180 192〈213〉人工序列 <400〉 25
ga33CtC333 CtC333g3ag
agacataasc agccattgat gtttgtcgtt cggctacagt gcattgccat ga
<210〉 26
〈211〉 192
<212〉 腿
〈213〉 人工序列
〈400> 26
gaaactcaaa ctc肪agaag agacataaac agccattgat gttactgttt cggctactgt ccattgccat ga
<210〉 27
〈211〉 192
<212〉 腿
<213〉 人工序列
<400> 27
gaaactcaaa ctcaaag助g agacata肪c agccattgst ctatgtcgag ctgctaatgt acattgccat ga
<210> 28
〈211> 192
〈212> 腿 <213〉人工序列
〈400> 28
g3肪ctcaa3 ctcsasgaag agacataaac agccattgat catgctcttg ttgatacagt tcattgccat ga
<210> 29
〈211> 192
〈212> DNA <213>人工序列
<400> 29
gaaactcaaa ctcaaagaag ag3C3t肪ac 3gccattgat cttagtggag ctgctactgt acattgccat ga.
〈210> 30 〈211〉 192 〈212〉 DNA
种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
3catcat3ct tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
"tCgttttgg3
tgccaccatc
tagatttgtt taagtacgct
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacgct 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctcaaaa aactgaaaga 180
192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt
3犯C犯t"tgt
ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aa_ctgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtacgct agctgcaaga
60 120 180 192
22<213〉人工序列 <400〉 30
ga肪ctc^a ctc^3gaag agacataaac agccattgat ctaactgttg ctact朋tgt acattgccat ga
〈210〉 31
<211〉 192
<212〉 腿 〈213〉人工序列
〈400〉 31
gaaactcaaa ctxaaagaag agacataaac agccattgat gatggtctat cgtctacagt ccattgccat ga
<210> 32
〈211〉 192
<212> 腿 〈213〉人工序列
<400〉 32
gaaactcaaa ctcaaagaag agacat朋ac agccattgat catgctcgat cgtctaaagt cctttgccat ga
〈210〉 33
〈211〉 192
<212> DNA <213〉人工序列
〈400〉 33
ga^ctx朋a ctc^i3gaag agacataaac agccattgat catactgctt ttgctaaagt ccattgccat ga
〈210〉 34
<211〉 192
〈212〉 DNA <213〉人工序列
<400〉 34
gaaactxaaa ctcaaagaag
gttggtcgag cggctaatgt gcattgccat ga
〈210〉 35 <211> 192 <212〉 腿
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aacc朋ttgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc犯犯
tagatttgtt aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctcaaaa aactgataga 180
192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaacatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacggt
60 120 180 192
tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt "ttgcgagttt
txgttttgga tgccaccatc tgactc^a3
tagatttgtt taagtacggt agctga犯ga
60 120 180 192
acatxatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct agctgctaga
60 120 180 192
23〈213〉人工序列 〈400〉 35
gaaactcaaa ctcaaag朋g agacataaac agccattgat cttagtcttg ttgataatgt actttgccat ga
<210〉 36
<211〉 192
<212〉 DNA 〈213>人工序列
<400〉 36
gaaactcaaa ctcaaagaag 3gacat肌3c 3gccattgat cttgctgtat ttgataatgt tcattgccat ga
〈210〉 37
〈211〉 192
<212〉 DNA
<213> 人工序列
<400> 37
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctatgtcctt, cggctacagt ccattgccat ga
<210> 38
〈211〉 192
〈212> DNA 〈213〉人工序列
<400> 38
gaaactca^ ctc肌ag犯g agacataaac agccattgat gttagtcgat ttgctactgt acattgccat ga
〈210〉 39
〈211〉 192
〈212〉 DNA 〈213〉人工序列
〈400〉 39
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gUagtgcag cggctacagt acattgccat ga
<210〉 40 <211> 192 <212〉 DNA
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt
3EL3C肌ttgt
ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtacggt
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cag3ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatx tgactcaaaa
tsgstttgtt
60 120 180 192
acatcatwt tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc "tggctca肪3
tagatttgtt taagtacggt
60 120 180 192
aca/tcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttt
■tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacgct
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtactct agctgcaaga
60 120 180 192<213〉 人工序列 〈400> 40
gaaactcaaa ctcaaagaag agacat肪ac 3gccattgat cttagtgct.g tgactactgt acattgccat ga
〈210〉 41
〈211> 192
<212> DNA <213>人工序列
〈400〉 41
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctatgtgcaa ctcctaaagt acattgccat g3
<210> 42
<211〉 192
〈212> DNA <213>人工序列
〈400〉 42
gaaactcaaa ctca肪gaag agacataaac agccattgat gatactcgtt tgtctaaagt ccattgccat ga
<210> 43
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<400〉 43
ga朋ctcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catactgtag ttcctactgt acattgccat ga
〈210〉 44
<211〉 192
<212〉 DNA
〈213> 人工序列
<400〉 44
g朋3CtC333 Ctca33g83g
agacataaac agccattgat cattgtggtt tgcataatgt acattgccat ga
〈210> 45 <211> 192 <212〉 腿
种分离病毒变异序列的方法及其分离的U蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct C3gsggtgat
gatgtcgctt aaac貼t tgt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
taagtactgt aac"Lgataga
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcgagttt tgactcaaaa aactgaaaga 180
192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt
ngcg3gtn
tcgttttgga tgccaccatc tg3ctc犯aEi
tagatttgtt taagtactxt agctgcaaga
60 120 180 192
acstcatEict tgctccagct
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
■tagatttgtt taagtacgct,
3gCtgC33g3
60 120 180 192
tgctccagct c卿ggtgat
ttgc朋gttt
tcgttttgga tgccaccatc
t3辟tttgtt taagtactct
60 120 180 192〈213〉 人工序列 <400> 45gaaactcaaa ctcaaagaag 3gacataaac agccattgat ctttctctat ttcatacagt acattgccat ga〈210〉 46<211> 192<212> DNA<213〉 人工序列<400〉 46agacataaac agccattgat gttactctaa tttctaatgt 3cattgccat ga<210> 47<211> 192<212〉 DNA<213〉 人工序列<柳> 47gaaactcaaa ctcaaagaag agac.ataaac agccattgat catgctcttg ctgctacagt acattgccat ga<210> 48<211> 192〈212〉 DNA〈213> 人工序列<400〉 48ggi朋ctca33 ctca幼g肪g3gaC3t33aC 8gCC3ttg3tctagctgctg tggctacagt tcattgccat ga<210〉 49<211> 192<212> DNA<213> 人工序列<400> 49g肪actcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catagtgctg tgcataatgt actttgccat ga〈210〉 50 <211> 192 <212> DNA-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表acatcatact tgctccagctgatgtcgcU aaacwttgt ttgc犯gttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaa肪tagatttgtt taagtactct aactgaaaga60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt "taagtacgct60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtacgct agctgaeiaga60 120 180 192acatcatact tgctxcagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt Ugcgagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt taagtactgt 犯ctg3taga60 120 180 192acatxatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgtttgcgagtntcgttttgga tgccaccatctagat.ttgtt taagtacggt agctgcteiga60 120 180 192<213> 人工序列一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表<400> 50gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtc.gctt agacataaac agccatt.gat tgctccagct aaacaattgt gtttctcttg tgtatactgt cagaggtgat t.tgcgagttt acattgccat gatcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt. tgactcaaaa aactgctaga60 120 180 192〈210〉 51<211> 192〈212〉 腿<213> 人工序列<■> 51gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct幼acaattgtctaggtcgat tggataatgt cagaggtgat ttgcaagttt tcattgccat gatcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagta(:tgt tgactc肪aa agctgcaaga60 120 180 192<210> 52〈211〉 192<212> 脆<213> 人工序列<400> 52gsaactc333 ctc333gsag 3C3tcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct a朋caattgt gtttgtgtta tgtatactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat gatcgt.tttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct tggctcaaaa agctgaaaga60 120 180 192<210〉 53<211> 192<212> DNA〈213〉 人工序列<400> 53ga朋ctcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaatt.gt gttggtcttg ttactaaagt cagaggtgat ttgcaagttt gctttgccat gatcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tgactcaaaa aactgcaaga60 120 180 192〈210〉 54<211〉 192<212〉 腿 <213>人工序列〈400〉 54gaaactcaaa ctca朋gaag acatcatact gatgt.cgctt 3gacat3a3c agccattgst tgctccsgct 333c33ttgt gtatgtcctg ttgctaaagt cagaggtgat ttgcgagttt acattgccat gatcgttttgga tagatttgt.t tgccaccatc taagtactgt tggctcaaaa aactgaaaga60 120 180 192〈210〉 55 〈211〉 192 <212> 醒<213〉人工序列 <400〉 55g犯actc肪3 ctca犯g^gcatagtggtt tggctacagt cctttgccat ga<210> 56<211〉 192〈212〉 DNA<213〉 人丄序列<400〉 56g3^ctcaaa_ ctc肪ag33g agacataaac agccattgat gaagctgcat cgcatacagt ccattgccat ga〈210〉 57<211> 192<212〉 DNA<213〉 人工序列〈400〉 57g3朋CtC肪3 CtC犯3g犯gagacataaac agccattgat ctttatggat tgtctactgt actttgccat ga〈210〉 58〈211〉 192〈212〉 DNA <213〉人工序列<400〉 58gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cttggtcttt ctgctactgt gcattgccat ga<210〉 59<211〉 192<212> DNA<213〉 人工序列<400〉 59gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gaatgtcctt ctactactgt acattgccat ga<210> 60 <211〉 192 <212〉 DNA种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表acstcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccac.catc tggctcaaaatagatttgtt taagtacggt60 120 180 192acatcatact "tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt taagtacggt aactgcaaga60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttttcgttttgga tgccaccatc tgsctc犯犯tagatttgta taagtactgt aactgataga60 120 180 192tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcg"ttttgga tgcccccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtactgt aactgataga60 120 180 192acatcatac1: tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt taagtactct60 120 180 192〈213〉人工序列 <400〉 60gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catgctcgag tggatacagt gcattgccat ga〈210> 61〈211〉 192<212〉 腿 <213〉人工序列<400> 61gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cattgtgcag ttcgtacagt acattgccat ga〈210〉 62〈211〉 192〈212〉 腿 〈213〉人工序列<400> 62gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cttaatc"tta tgtctaatgt acattgccat ga<210> 63〈211〉 192〈212〉 腿 <213>人工序列〈400〉 63gatagtgcta tggataaagt acattgccat ga<210> 64〈2U〉 192〈212〉 DNA 〈213>人工序列〈400〉 64gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctaggtggtt tgcctaatgt acattgccat ga〈210〉 65 〈211〉 192 <212〉 DNA种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tg3ctca朋atagatttgtt taagtacgct60 120 180 192acatxatact tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgc犯gttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtacgct aactgaaaga60 120 180 192acatcatact tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt a^caattgt ttgcgagttttcgttttgga tgccaccatctagatttgtt taagtacgct60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtactct aactgaaaga60 120 180 192acstcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaa/ttgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt t肌gtacggt aactgctaga60 120 180 192<213〉 人工序列 <400〉 65
gaaactcaaa ctcaaagaag agscataaac agccsttgat gtatg"tcctt tggctaatgt ccattgcca"t ga
<210> 66
<211〉 192
<212〉 ■
<213〉 人工序列
<400〉 66
3gacataaac agccattgat ctttctctag ctcatactgt acattgccat ga
〈210〉 67
<211〉 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
<400〉 67
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gatactcctt cttctactgt actttgccat ga
<210> 68
〈211〉 192
<212〉 腿
〈213〉 人工序列
<400〉 68
gaaactcaaa ctcaaagaeLg agacataaac agccattgat gttactcctt ttcatacagt acattgccat ga
<210> 69
〈211〉 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 69
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gaaggtgcat ttgct犯tgt cctttgcc3t ga
〈210> 70 <211〉 192 〈212〉 腿
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt 犯scaattgt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa aactgcaaga 180
192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt 犯acasttgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct aactgstaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt
60 120 180 192<213〉人工序列 <400> 70
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catactgcat tttctacagt gcattgccat ga
<210〉 71
<211〉 192
〈212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 71
g犯actcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gtaactxttg tggatacagt gcat"tgccat ga
<210> 72
<211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
<■〉 72
g3犯ctc朋3 ctc^agsag agacataaac agccattgat gaagatgtag ttgatactg"t actttgccat ga
〈210〉 73
〈211> 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 73
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gattgtcgtt tgactaaagt cca"ttgccat ga
〈210〉 74
〈211> 192
〈212〉 腿 <213〉人工序列
<■〉 74
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctaggtgcag tgtctactgt tcattgccat ga
〈210〉 75 <211> 192 <212> 腿
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatac"t tgctccagct c聊ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgcaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtactct
60 120 180 192
acatxatact. tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgc朋gttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactca肪3
tagatttgtt taagtactct aactgcaaga
60 120 180 192
3catc3tact tgctccagct
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccacaatc
tagatttgtt taagtacgct aactgcaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgc肌gttt
tcgttttgga "tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt t朋gtacggt aactgcaaga
60 120 180 192<213〉人工序列 <400〉 75
g犯3ctc犯3 ctca犯g犯g agacataaac agccattgat ctatgtggtg tggatacagt acattgccat ga
<210〉 76
〈211〉 192
<212〉 腿 <213>人工序列
〈400〉 76
ga朋ctcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctttgtgcta ttaataaagt acattgccat ga
〈210> 77
〈211〉 192
〈212〉 腿 <213〉人工序列
〈400〉 77
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cattctggag ctcctactgt ccattgccat ga
<210〉 78
<211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
〈400〉 78
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gatactgctt tgaataatgt ccattgccat ga
<210> 79
〈211〉 192
<212> 靈 <213〉人工序列
〈400〉 79
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctttctacag ctgatactgt acattgtcat ga
<210〉 80 <211〉 192 <212〉 靈
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcgagttt tgactcaaaa aactgctaga 180
192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtactct 120 cagaggtgat ttgcgagttt tgactcaaaa aactgcaaga 180
192
acatc3twt tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt t肌gtacgct aactgaaaga
60 120 180 192
awtcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aactg犯aga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtxgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga "tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgaaaga
60 120 180 192〈213〉 人工序列 〈400〉 80
gaaactcaaa ctcaaagaag
gtttgtxgta tttctactgt acattgccat ga
〈210> 81
<211〉 192
<212〉 DNA
〈213〉 人工序列
<400> 81
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catgctgtaa cgtctactgt acattgccat ga
<210〉 82
〈211> 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 82
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gttgctcttg ctcatacagt acattgccat ga
〈210> 83
<211> 192
<212〉 腿 〈213〉人工序列
〈400〉 83
agacataaac agccattgat cttgctgctt tgtctaaagt gcattgccat ga
〈210〉 84
〈211〉 192
〈212〉 丽
<213〉 人工序列
〈400> 84
gaaactcaaa ctcaaagaag eLgeLcataaac etgccattgat ctaactgctt ttgctaatgt actttgccat ga
<210> 85 <211〉 192 〈212〉 醒
种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtactgt
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c柳ggtgst
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagt已cgct aactgcaaga
60 120 180 192
tgctccagct
C卿ggtg3t
gatgtcgctt a犯caattgt ttgcaagttt
tcgtntgga tgccaccatc tgactcaaaa
taagtacggt
33Ctg朋3ga
60 120 180 192
acstcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtacgct
60 120 180 192
tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtactgt aactgataga
60 120 180 192<213〉 人工序列 <400〉 85
gaaactcaaa ctcaaagaag 3gac3t肪3c stccattgat gaagctgctt ttcctaatgt acattgccat ga
<210〉 86
〈211〉 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<400〉 86
gaaactcaaa ctc肌agaag agacataaac agccattgat gttagtattg tgcataatgt acattgccat ga
<210> 87
<211> 192
<212> DNA
<213〉 人工序列
<400> 87
gaaactCEiaa ctcaaagaag
agaC3t333C 3gCC3ttg3t
gttgctcttt tggctaatgt acattgccat ga
<210> 88
<211> 192
<212〉 腿 <213〉人工序列
<400> 88
gaaactcaaa ctcaaagaag 3gacata朋c agccattgst gtaagtcttt tgtatactgt cctttgccat ga
<210〉 89
<211〉 192
<212> DNA <213>人工序列
<400〉 89
g333CtC朋3 CtC333g33g
agacataaac agccattgat catggtccaa ttgctaatgt acattgccat ga
<210> 90 〈211〉 192 〈212〉 DNA
种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact tgctccagct
gatgtcgctt ttgc朋gttt
tcgnttgga tgccaccatx
tagatttgtt taagtacgct 朋ct g3肪g3
60 120 180 192
acatcstact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgtUtgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccat:c tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgcaaga
60 120 180 192
tgctccagct
C聊ggtg3t
g3tgtCgCtt
ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc犯aa
t观3tttgtt t犯gtacggt aactgataga
60 120 180 192<213〉 人工序列 <■〉 90
gaaactcaaa ctxaaagaag agacataaac agccattgat gtaactcctg cgactaatgt actttgccat ga
〈210〉 91
〈211〉 192
〈212〉 靈
<213〉 人工序列
〈400〉 91
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gttagtcctt ttaatacagt ccattgccat ga
<210> 92
<211> 192
〈212> 腿
〈213〉 人工序列
〈400〉 92
gaaactcaaa ctcaaagaag agacata犯c agccattgat cattgtgctg cgaataatgt acattgccat ga
<210> 93
<211> 192
〈212〉 DNA
〈213〉 人工序列
<400> 93
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gtttctcttg cttctactgt gcattgccat ga
<210> 94
〈211〉 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 94
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catagtgtag tgtctacagt gcattgccat ga
〈210〉 95 〈211〉 192 <212〉 DNA
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
acatcatact gatgtcgctt txgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtactct 120 cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa aactgaaaga 180
192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtactgt 120 cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa aactgaaaga 180
192
3catcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc肌犯
tagatttgtt taagtscgga aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt "ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt tasgtactct aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaag"ttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtactgt aac"tg3taga
60 120 180 192<213〉 人工序列 <400〉 95
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat agtataatcg tgaacgcggt ccattgccat ga
<210> 96
<211> 192
〈212> DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 96
g333CtC333 Ct.C333g33g
3aacat肪ac agccsttgat gtaatcacgc tgc邻gcggt ccattgccat ga
<210〉 97
〈211〉 192
<212> 醒
〈213〉 人工序列
〈400> 97
agacataaac agccattgat cattgtgctg cggata.cagt acattgccat ga
<210〉 98
〈211> 192
<212〉 DNA 〈213〉人工序列
<400> 98
agacataaac agccattgat gatgctcaca gtgtt.gatgt. tctttgccat ga
〈210〉 99
<211> 192
〈212> 腿 〈213>人工序列
<400〉 99
gaaactcaaa ctcassgaag agacataaac agccattgat attattagta atcttggagt gcattgccat ga
<210> 100 <211〉 192 〈212〉 隱
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
ac3tcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc朋aa
tagatttgtt aactgataga
60 120 180 i92
3C3tc3t3ct gatgtcgctt tcgttttgga tag3tttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacgat 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctxaaaa agctgctaga 180
192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacgct 120 cagaggtgat ttgcaagttt tggctcaaaa agctgcaaga 180
192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagtn
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtac-8ta aactgctaga
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt GO tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacatg 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctcaaaa agctgcaaga 180
192<213> 人工序列
4巾分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<■> 100 gaaactcaaa
agacataaac
attattatgc
cctttgccat
ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60
agccattgat tgctccagct 祖acaattgt tgccaccatc taagtacgtt 120
tggctaatgt cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa agctgctaga 180
ga 192
〈210> 101
<211> 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<400〉 101
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Cys Ala Phe Asp Thr Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 102
〈211〉 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 102
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ser Gly Thr Ala Thr Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 103
<211> 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 103
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Cys Leu Ser Ser Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 104
<211> 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
<400> 104
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ser Val Leu Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr I>eu Pro 50 55 60
〈210> 105
<211> 63
〈212> PRT <213〉人工序列
<400〉 105
Glu Thr Gin Thr 1
Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Gly Pro Phe Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Asp Arg Thr Leu Pro '50 55 60
〈210> 106
〈211〉 63
<212> PRT
〈213> 人工序列
<400〉 106
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Ser Val Val His Asn Val Arg
35
40 45-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro
50
55 60
<210> <211〉 〈212〉 <213〉
107
63
PRT
人工序列
<400〉 107
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Ser Ala Val Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 108
〈211〉 63
<212> PRT
<213〉 人工序列
〈400〉 108
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ala Leu Leu Pro Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin匕ys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210> 109
<211〉 63
<212> PRT <213〉人工序列
<400〉 109
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Gly Arg Leu Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
3一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
〈210> 110
〈211〉 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 110
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Val Val Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 111
<211〉 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 111
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lvs Tyr lie Val Ser lie Ser Val Val Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210〉 112
<211〉 63
<212> PRT 〈213〉人工序列
〈400〉 112
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Uu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met lie Leu Gly Asn Gly Gin Val Arg 35 '40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210〉 113 〈211〉 63一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<柳> 113
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Uu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Thr Arg Val His Arg Val Ala Val Arg
35
40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro
50
〈210〉 114
〈211〉 63
<212〉 PRT 〈213>人工序列
〈400〉 114
Glu Thr Gin Thr 1
55 60
Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Asn Arg Val Arg Asn Thr Lys Val Arg
35
40 45
Gly Asp Leu Arg Val !>eu Thr Gin L_ys Ala Asp Arg Thr Leu Pro
50
<210〉 115
〈211> 63
〈212> PRT
<213〉 人工序列
〈400> 115
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie His lie Ser Ser Thr lie Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 116
<211> 63
〈212〉 PRT
〈213> 人工序列
<400〉 116Glu Thr 1
一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Asn Val His Gin Asn Arg Leu Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro
50
<210> 117
〈211〉 63
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<400〉 117
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie lie lie Pro Ser lie Ala Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
〈210〉 118
<211〉 63
<212> PRT 〈213〉人工序列
<400〉 118
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Arg His lie Ala Leu Val Val Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210> 119
〈211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
<400> 119
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met lie Thr Ser Thr Asn Gly Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
〈210〉 120
〈211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 120
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie lie lie lie His Val Thr Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp I>eu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro
50
55 60
<210> <211〉 〈212〉 〈213〉
121
63
PRT
人工序列
<400〉 121
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Val Leu Ser His Asp Arg Val Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210〉 122
<211> 63
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<400> 122
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
43一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Val lie Asp Val lie Arg Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro '50 55 60
〈210〉 123
<211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
<400> 123
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Thr Val Val Asp Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro
50
55 60
<210> 124
<211〉 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 124
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro I>eu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser His Thr Arg lie Ala Asn Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 125
〈211〉 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 125
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr A印Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Cys Arg Ser Ala Thr Val Arg
35
40 45-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro
50
55 60
〈210〉 〈211> 〈212> <213>
126
63
PRT
人工序列
〈400〉 126
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Thr Val Ser Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210〉 127
〈211> 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 127
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Leu Cys Arg Ala Ala Asn Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro
50
55 60
<210〉 128
<211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 128
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys His Ala Leu Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ser Leu Pro
50
55 60-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<210> 129
<211> 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
<400〉 129
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ser Gly Ala Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 130
〈211> 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
〈400〉 130
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Asn Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Thr Val Ala Thr Asn Val Arg 35 '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 131
<211> 63
<212> PRT 〈213>人工序列
<400> 131
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Asp Gly Leu Ser Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Pro Leu Pro
50
〈210〉 132 〈211〉 63
55 60一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<212> PRT <213〉 人工序列
<400> 132
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Thr Ser Lys Tyr Gly His Ala Arg Ser Ser Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 133
〈211〉 63
<212> PRT
<213〉 人工序列
<400〉 133
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala I>ys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Thr Ala Phe Ala Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210> 134
<211〉 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400〉 134
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Gly Arg Ala Ala Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 135
〈211〉 63
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 135
47一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Leu Val Asp Asn Val Arg
35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro
50
〈210〉 136
<211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
〈400> 136
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ala Val Phe Asp Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210〉 137
<211〉 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 137
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Cys Pro Ser Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210> 138
<211〉 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
<400〉 138
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Ser Arg Phe Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr I>eu Pro 50 55 60
<210〉 139
<211〉 63
〈212〉 PRT 〈213>人工序列
<400> 139
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Ser Ala Ala Ala Thr Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro '50 55 60
〈210〉 140
〈211> 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400> 140
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Ser Ala Val Thr Thr Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210> 141
<211〉 63
<212> PRT 〈213>人工序列
〈400〉 141
Glu Thr Gin 1
Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Cys Ala Thr Pro Lys Val Arg
35
40 45一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro '50 55 60
〈210〉142
〈211〉63
<212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400>142
Glu Thr Gin Thr1
10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Asp Thr Arg Leu Ser Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 143
〈211〉 63
<212> PRT
<213> 人工序列
〈柳〉143
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Thr Val Val Pro Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Uu Gin Val Leu Ala Gin I>ys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 144
<211> 63
〈212〉 PRT 〈213>人工序列
<400> 144
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser His Cys Gly Leu His Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 145 〈211〉 63一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<212〉 PRT 〈213〉人工序列
〈400〉 145
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Leu Ser Leu Phe His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 146
〈211〉 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 146
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Thr Leu lie Ser Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 147
<211> 63
〈212> PRT
<213> 人工序列
<400〉 147
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ala Leu Ala Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 148
<211> 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
<400> 148
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Ala Ala Val Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Ser Leu Pro 50 55 60
〈210〉 149
<211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 149
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Ser Ala Val His Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 150
<211〉 63
<212> PRT 〈213〉人工序列
<400> 150
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Thr Val Arg 35 4JD 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 151
〈211> 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400〉 151
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Gly Arg Leu Asp Asn Val Arg 35 4i) 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210〉 152
<211> 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400> 152
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Cys Val Met Tyr Thr Val Arg 35 40 ' 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 153
<211〉 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400> 153
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Gly Leu Val Thr Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 154
〈211〉 63
〈212〉 PRT 〈213>人工序列
〈400〉 154
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Cys Pro Val Ala Lys Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 50 55 60
<210>155
〈211〉63
<212>PRT
〈213>人工序列
<400>155
Glu Thr Gin Thr10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Ser Gly Leu Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210〉 156
<211> 63
<212> PRT
〈213> 人工序列
〈柳〉156
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Glu Ala Ala Ser His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Pro Leu Pro
50
55 60
<210> 157
<211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<400> 157
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30 '
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Tyr Gly Leu Ser Thr Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210〉 158 <211> 63 <212〉 PRT一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<213〉人工序列 〈400〉 158
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Gly Leu Ser Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 159
〈211> 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 159
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala I>ys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Glu Cys Pro Ser Thr Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 160
〈211〉 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400> 160
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ala Arg Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 161
〈211> 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400> 161
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Cvs Ala Val Arg Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 162
<211> 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
〈400> 162
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Asn Leu Met Ser Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210> 163
<211> 63
〈212〉 PRT
<213〉 人工序列
<400〉 163
Glu Thr Gin Thr 1
Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Asp Ser Ala Met Asp Lys Val Arg
35
40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 164
〈211〉 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 164
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Tkr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Gly Gly Leu Pro Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 ' 60
〈210〉 165
〈211〉 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
〈400> 165
Glu Thr Gin ThrGin Arg Arg His HisThr Asp VslAlaPhe Val Leu
151015
Asp Arg Phe ValArg His Lys Gin ProLeu lie AlaProAls Lys Gin
202530
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Cys Pro Leu Ala Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro '50 55 60
〈210〉 166
〈211〉 63
〈212〉 PRT
<213〉 人工序列
〈400〉 166
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Leu Ala His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 167
〈211〉 63
<212〉 PRT <213>人工序列
<400〉 167
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro
50
55 60一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<210> 168
〈211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
<柳〉168
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Thr Pro Phe His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 169
〈211> 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
<400> 169
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Glu Gly Ala Phe Ala Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Pro Leu Pro '50 55 60
〈210〉 170 〈212〉 PRT <213>人工序列
<■〉 170
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Thr Ala Phe Ser Thr Val Arg 35 40. 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> m
<212〉 PRT <213>人工序列
<400〉 171一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Thr Leu Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro
50
55 60
〈210> 172
〈211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
〈400> 172
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Glu Asp Val Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210>173
〈211〉63
〈212〉PRT
<213>人工序列
<400>173
Glu Thr Gin Thr1
10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Gin Ser Lys Tyr Ala Asp Cys Arg Leu Thr Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210〉 174
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 174
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Gly Ala Val Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro '50 55 60
〈210〉 175
<211〉 63
〈212〉 PRT <213〉人工序列
<400> 175
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Cys Gly Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro
50
〈210〉 176
<211> 63
<212> PRT
<213> 人工序列
<400〉 176
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Leu Cys Ala lie Asn Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 177
〈211〉 63
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<400〉 177
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ser Gly Ala Pro Thr Val Arg
35
40 45一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 178
〈211> 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈柳〉178
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Thr Ala Leu Asn Asn Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro
50
55 60
〈210〉 179 <211> 63 <212> PRT <213>人工序列
〈400〉 179
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Thr Ala Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Ser 50 55 60
<210〉 180
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<400> 180
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Cys Arg lie Ser Thr Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro
50
<210> 181 〈211〉 63
55 60一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<212> PRT 〈213>人工序列
〈400〉 181
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ala Val Thr Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro
50
〈210> 182
<211> 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 182
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Val Ala Leu Ala His Thr Val Arg 35 40. 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro
50
<210〉 183
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<■> 183
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ala Ala Leu Ser Lys Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 184
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 184
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu-种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表5 1015Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 2530Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Thr Ala Phe Ala Asn Val Arg 35 ' '40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210> 185<211> 63<212> PRT<213> 人工序列〈400〉 185Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys His Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Glu Ala Ala Phe Pro Asn Val Arg 35 '40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210> 186<211> 63<212〉 PRT<213〉 人工序列〈400> 186Glu Thr Gin ThrGin Arg Arg His HisThr Asp ValAla Phe Val151015Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Ser lie Val His Asn Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60〈210〉 187〈211〉 63〈212〉 PRT <213〉人工序列〈400〉 187Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ala Leu Leu Ala Asn Val Arg 35 ' 4i) 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210〉 188<211> 63〈212〉 PRT <213〉人工序列<400> 188Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Val Ser Leu Leu Tyr Thr Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60〈210〉 189〈211〉 63〈212〉 PRT <213〉人工序列〈400> 189Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Gly Pro lie Ala Asn Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210> 190<211> 63<212〉 PRT<213> 人工序列<400> 190Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Thr Pro Ala Thr Asn Val Arg 35 ' 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表 50 55 60〈210> 191〈211〉 63〈212> PRT 〈213>人工序列<400〉 191Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin2025 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ser Pro Phe Asn Thr Val Arg3540 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro50〈210〉 192〈211> 63<212> PRT 〈213〉人工序列<400〉 19255 60Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Cys Ala Ala Asn Asn Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60〈210> 193<211> 63〈212〉 PRT <213>人工序列〈400〉 193Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Ser Leu Ala Ser Thr Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro 50 55 60<210> 194〈21D 63<212〉 PRT <213〉人工序列一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表<400〉 194PheGlu Thr 1Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala 5 10Val Leu 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 2530Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys His Ser Val Val Ser Thr Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Ala Leu Pro50〈210> 195<211> 63〈212〉 PRT<213〉 人工序列<400> 19555 60Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met Ser lie lie Val Asn Ala Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Pro Leu Pro 50 55 60<210> 196<211> 63〈212> PRT<213〉人工序列<400〉 196Glu Thr Gin ThrGin Arg Arg HisHis Thr Asp ValAla Phe Val151015Asp Arg Phe Val Lys His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Asp Val lie Thr Leu Gin Ala Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro5055 60<210> 〈211〉 <212〉 〈213>19763PRT人工序列〈400〉 197Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Cys Ala Ala Asp Thr Val Arg35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro50 55 60
<210> 198
〈211〉 63
〈212〉 PRT〈213〉人工序列
〈400〉 198
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie Asp Ala His Ser Val Asp Val Arg35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro50 55 60
〈210> 199
<211> 63
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 199
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr A印Val Ala Phe Val Leu15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met lie lie Ser Asn Leu Gly Val Arg35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro50 55 60
<210> 200
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 200
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Val lie lie Met Leu Ala Asn Val Arg一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro50 55 60
<210> 201
<211〉 189
<212〉 DNA〈213>人工序列
〈400〉 201
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgttagacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtackstswwdstv鼎d yknmtamwgt cagaggtgat ttgcragttt tgrctcaaaa arctgmwagancwttgcca
60120180189
〈210〉 202
〈211〉 189
<212> DNA
〈213> 人工序列
<400> 202
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60
agacataaac agccattgat tgctccagct肪acaattgt tgccaccatc taagtacvrm 120
vnnvnnvnnv rmvmivrmgt cagaggtgat ttgcragttt tgrctcaaaa arctg,aga 180
ncwttgcca 189
〈210〉 203
<211> 59
<212> 靈<213>人工序列
<■> 203
tctctcgaga aaagagaaac tcaaactcaa agaagacatc atactgatgt cgctttcgt 59
<210> 204
<211> 59
<212> DNA<213〉人工序列
〈400〉 204
catactgatg tcgctttcgt tttggataga tttgttagac ataaacagcc attgattgc 159
〈210〉 205
〈211> 56
〈212〉 DNA
<213> 人工序列
〈400〉 205
gtacttagat ggtggcaaca attgtttagc tggagcaatc aatggctgtt tatgtc 156
〈210> 206
<211> 56
<212〉 DNA<213>人工序列
〈400〉 206
tgttgccacc atctaagtac kstswwdstv nwdyknmtam wgtcagaggt gatttg 56
〈210> 207一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列序列表
<211><212〉<213>
63腿
人工序列
<400> 207
cctctagatc atggcaawgn tctwkcagyt ttttgagyca aaactygcaa atcacctctt
〈210〉208
<211〉56
<212>DNA
<213〉人工序列
<400〉208
tgttgccacc atctaagtac vmrvnnvrmv rmvrmvnnvn ngtcagaggt gatttg 56
<210〉 209
<211> 28
<212〉 DNA〈213〉人工序列
<400〉 209
gcgaattcaa aaatgagatt tccttcaa 28
<210〉 210
〈211〉 40
<212> 腿
〈213〉 人工序列
<400〉 210
cctctatact ttaacgtcaa ggagaaaaaa ccccggatcg 40
<210> 211
<211> 40
<212〉 DNA〈213〉人工序列
<400〉 211
ggcgtgaatg taagcgtgac ataactaatt acatgatgcg 40
<210> 212
<211〉 20
〈212> DNA<213>人工序列
〈400〉 212
taatacgact cactataggg 20
<210〉 213
<211〉 22
<212> DNA〈213〉人工序列
〈400〉 213
taggatcagc gggtttaaac tc 2权利要求
1、一种分离病毒变异序列的方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)分析对比数据库中该病毒的氨基酸序列，找出该病毒抗原决定簇位点的编码序列以及高可变区域的编码序列，设计混合多肽，并设计该混合多肽的随机引物；(2)将上述随机引物进行不对称PCR拼接；(3)将上述拼接产物与酵母分泌表达信号肽序列构建成融合基因；将该融合基因和大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体分别进行双酶切，大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体在双酶切位点间再多进行一次酶切，且酶切后用牛小肠碱性磷酸酶处理；将融合基因的双酶切产物和大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体的三酶切产物连接；(4)将上述连接产物电激转化大肠杆菌，得到质粒，酶切处理该质粒后，再次电激转化，转化产物经筛选后，挑取克隆进行测序，即分离得到病毒变异序列。
2、 根据权利要求1所述分离方法，其特征在于所述病毒为口蹄疫病毒。
3、 根据权利要求2所述分离方法，其特征在于步骤(1)中，所述随机引 物为如SEQIDNo: 203、 SEQIDNo: 204、 SEQIDNo: 205、 SEQIDNo: 206和SEQIDNo: 207所示核苷酸序列，或如SEQIDNo: 203、 SEQIDNo: 205、 SEQIDNo: 206、 SEQIDNo: 207和SEQIDNo: 208所示核苷酸序列。
4、 根据权利要求2所述分离方法，其特征在于步骤(3)中，所述酵母分 泌表达信号肽序列为酿酒酵母a凌配因子的信号肽序列。
5、 根据权利要求2所述分离方法，其特征在于步骤(3)中，所述双酶切 的酶切位点为EcoRI和Xbal，所述三酶切的酶切位点为EcoRI、 Xhol和Xbal。
6、 根据权利要求2所述分离方法，其特征在于步骤(4)中，所述酶切处理是用限制性内切酶Notl和牛小肠碱性磷酸酶处理质粒。
7、 根据权利要求2所述分离方法，其特征在于步骤(4)中，所述筛选转 化子的筛选平板上加有花青素。
8、 利用权力要求2方法分离得到的口蹄疫病毒变异序列，其氨基酸序列 如SEQ ID NO: 101 200所示。
9、 根据权利要求8所述口蹄疫病毒变异序列，其特征在于编码所述氨基 酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1 100所示。
全文摘要
本发明公开一种分离病毒变异序列的方法及其分离的口蹄疫病毒变异序列，该方法通过先对已报道的病毒变异区域进行分析，并利用随机肽技术，分离得到能够模拟病毒变异的多条多肽，将这些多肽用于疫苗研发，可使得疫苗研制能兼顾病毒的变异，起到未雨绸缪的作用。本发明还得到口蹄疫病毒的变异序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO101～200所示，对应的核苷酸序列如SEQ ID NO1～100所示。本发明的方法操作简单，且可高效地发现病毒新的变异序列，有力地保障了全国畜禽养殖业，为广谱疫苗的开发开辟新途径，也为开发禽流感疫苗、爱滋病疫苗等提供了新的技术方向。
文档编号C12P19/00GK101629195SQ20091004162
公开日2010年1月20日 申请日期2009年8月4日 优先权日2009年8月4日
发明者于雯雯, 刘秋云, 周庆丰, 张潇潇, 王建兵, 阳新明, 马小倩, 晔 高 申请人:中山大学;广东温氏食品集团有限公司