多潜能细胞的处理的制作方法

专利名称：多潜能细胞的处理的制作方法
技术领域：
本发明涉及处理多潜能细胞的方法，其中通过用GSK-;3B酶活性抑制剂处理多潜 能细胞，该多潜能细胞可在培养物中有效扩增和分化。
背景技术：
由于I型糖尿病细胞替代疗法的进步和可移植胰岛的不足，人们已重点关注于开 发适于移植的胰岛素生成细胞或β细胞来源。一种方法是从多潜能细胞(例如胚胎干细 胞)产生功能性β细胞。在脊椎动物的胚胎发育中，多能干细胞可在称为原肠胚形成的过程中产生包括三 个胚层(外胚层、中胚层和内胚层)的一组细胞。诸如例如甲状腺、胸腺、胰腺、肠和肝脏之 类的组织将从内胚层，经由中间阶段发育而来。该过程中的中间阶段是形成定形内胚层。定 形内胚层细胞可表达多种标志物，例如HNF-3 3、GATA-4、Mixll、CXCR4和S0X-17。定形内胚层分化成胰腺内胚层导致形成胰腺。胰腺内胚层细胞可表达胰-十二 指肠同源盒基因PDX-1。在不存在PDX-I时，胰腺形成腹胰芽和背胰芽后不再发育。因此， PDX-I的表达标志着胰腺器官形成中的关键步骤。除了其他细胞类型，成熟的胰腺还包括外 分泌组织和内分泌组织。外分泌和内分泌组织来自胰腺内胚层的分化。产生足够量的细胞物质用于移植需要可在培养物中有效扩增并有效分化成所关 注的组织(例如功能性β细胞)的细胞物质来源。当前培养胚胎干细胞的方法很复杂，它们需要使用外源因子或化学成分确定的培 养基，以便细胞在不丧失其多潜能性的情况下分化。此外，胚胎干细胞的分化通常导致细胞 在培养物中扩增减少。例如，Cheon等人(BioR印rod DOI :10. 1095/biolreprod. 105. 046870,2005 年 10
月19日)公开了一种无饲养细胞的无血清培养系统，其中胚胎干细胞维持在补充有能引发 胚胎干细胞自我更新的不同生长因子的未经调理的血清替代(SR)培养基中。又如，US20050233446公开了一种用于培养干细胞，包括未分化的灵长类原始干细 胞的限定培养基。在溶液中，此培养基较于在培养的干细胞基本上是等渗的。在给定的培养 物中，特定的培养基包含基础培养基和各为一定量的bFGF、胰岛素和抗坏血酸，所述bFGF、 胰岛素和抗坏血酸为支持胚性干细胞进行基本上非分化性生长所必需。又如，W02005086845公开了维持未分化干细胞的方法，所述方法包括使干细胞暴 露于量足以将细胞维持在未分化状态的转化生长因子-β (TGFi3)蛋白家族的成员、成纤 维细胞生长因子(FGF)蛋白家族的成员或烟酰胺(NIC)，维持足够的时间以实现所需的结^ ο已知糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的抑制剂可促进成体干细胞的增殖和扩增。例如， Tateishi 等人(Biochemical and Biophysical ResearchCommunications (2007) 352 635)显示，抑制GSK-3可增强从新生儿或成人心脏回收并具有间质特征的人心脏干细胞 (hCSC)的生长和存活。
例如，Rulifson等人(PNAS 144，6247-6252，(2007))声称 “Wnt 信号传导可刺激
胰岛β细胞增殖”。又如，W02007016485报道，添加GSK-3抑制剂至非胚胎干细胞(包括专能 (multipotent)成体祖细胞)可导致在扩增期间维持多潜能表型，并导致更强的分化响应。又如，US2006030042利用通过添加Wnt或GSK-3的小分子抑制剂来抑制GSK-3的 方法，来在不使用饲养细胞层的情况下维持胚胎干细胞。又如，W02006026473报道添加GSKIB抑制剂，通过转录激活c_myc和稳定c_myc 蛋白来使多潜能细胞保持稳定。又如，W02006100490报道使用含有GSK-3抑制剂和gpl30激动剂的干细胞培养基 来维持多能干细胞(包括小鼠或人胚胎干细胞)的自我更新群体。又如，Sato等人(Nature Medicine (2004) 10 :55-63)表明，用特异性药理性化合 物抑制GSK-3可维持胚胎干细胞的未分化表型以及维持多潜能状态特异性转录因子例如 0ct-3/4、Rex-I 禾口 Nanog 的表达。又如，Maurer 等人(Journal of Proteome Research (2007) 6 :1198-1208)表明，用 GSK-3抑制剂处理成体神经元干细胞可显示出神经元分化的增强，特别是通过促进β-连 环蛋白靶基因的转录和使凋亡降低。又如，Gregory 等人(Annals of the New York Academy of Sciences (2005) 1049 97-106)报道，GSK-3B的抑制剂可增强体外成骨作用。又 如，Feng 等 人(Biochemical and Biophysical Research Communcations (2004) 324 :1333-1339)表明，胚胎干细胞向造血分化与Wnt/ β -连环蛋白 途径的下调相关，其中Wnt是GSK3的天然抑制剂。因此，仍然非常需要开发用于处理多能干细胞而使得多能干细胞可被扩增以满足 当前临床需要，同时保持分化为胰腺内分泌细胞、胰腺激素表达细胞或胰腺激素分泌细胞 的潜能的方法。

发明内容
本发明提供了通过用GSK-;3B酶活性抑制剂处理多潜能细胞而使多潜能细胞扩增 和分化的方法。在一个实施例中，本发明提供了使多潜能细胞扩增和分化的方法，该方法包括如 下步骤a.培养多潜能细胞，以及b.用GSKIB酶活性抑制剂处理所述多潜能细胞。在一个实施例中，所述多潜能细胞分化成可表达定形内胚层谱系特征性标志物的 细胞。多潜能细胞可以是人胚胎干细胞，或者它们可以是根据60/913475中公开的方法 衍生自人胚胎干细胞的表达多潜能标志物的细胞。在一个实施例中，GSK-3B酶活性抑制剂是式(I)化合物
1权利要求
1.一种使多潜能细胞扩增和分化的方法，所述方法包括如下步骤a.培养多潜能细胞，以及b.用GSK-;3B酶活性抑制剂处理所述多潜能细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多潜能细胞是胚胎干细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述多潜能细胞是衍生自胚胎干细胞的表达多潜 能标志物的细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述表达多潜能标志物的细胞可表达至少一种 选自如下的多潜能标志物ABCG2、cripto、R)xD3、连接蛋白43、连接蛋白45、0ct4、S0X-2、 Nanog、hTERT、UTF-1、ZFP42、SSEA-3、SSEA-4、Tra 1-60 和 Tra 1-81。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述多潜能细胞分化成表达定形内胚层谱系特征 性标志物的细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其中将所述多潜能细胞用GSKjB酶活性抑制剂处理约 1至约72小时。
7.根据权利要求1所述的方法，其中将所述多潜能细胞用GSKjB酶活性抑制剂处理约 12至约48小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其中将所述多潜能细胞用GSKjB酶活性抑制剂处理约 48小时。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSKIB酶活性抑制剂以约IOOnM至约100μ M的浓度使用。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSK-;3B酶活性抑制剂以约1μ M至约10 μ M 的浓度使用。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSK-;3B酶活性抑制剂以约ΙΟμΜ的浓度使用。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSKjB酶活性抑制剂是式(I)化合物
13.根据权利要求12所述的方法，其中R1是苯基；取代的苯基，其中所述苯基取代基选 自Cp5烷基、卤素、硝基、三氟甲基和腈；或嘧啶基。
14.根据权利要求12所述的方法，其中&是苯基；取代的苯基，其中所述苯基取代基选 自CV5烷基、卤素、硝基、三氟甲基和腈；或任选被Cy烷基取代的嘧啶基，并且R1和&中的 至少一者是嘧啶基。
15.根据权利要求12所述的方法，其中民是氢；2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基；CV5 烷氧羰基；芳氧羰基；芳基CV5烷氧羰基；芳基。烷基；取代的芳基CV5烷基，其中一个或 多个芳基取代基独立地选自Cp5烷基、C"烷氧基、卤素、氨基、CV5烷基氨基和二 Cp5烷基氨基；邻苯二甲酰亚胺基CV5烷基；氨基C"烷基；二氨基CV5烷基；琥珀酰亚胺基C"烷基； (V5烷基羰基；芳基羰基；CV5烷基羰基Ci_5烷基和芳氧羰基Ci_5烷基。
16.根据权利要求12所述的方法，其中R4是-(A)-(CH2)q-X。
17.根据权利要求16所述的方法，其中A是乙烯撑基、亚乙炔基或
18.根据权利要求17所述的方法，其中&选自氢、CV5烷基、苯基和苯基CV5烷基。
19.根据权利要求16所述的方法，其中q为0-9。
20.根据权利要求16所述的方法，其中X选自氢；羟基；乙烯基；取代的乙烯基，其中 一个或多个乙烯基取代基各自独立地选自氟、溴、氯和碘；乙炔基；取代的乙炔基，其中所 述乙炔基取代基选自氟、溴、氯和碘；Cp5烷基；取代的(V5烷基，其中一个或多个烷基取代 基各自选自Ci_5烷氧基、三卤代烷基、邻苯二甲酰亚胺基和氨基；C3_7环烷基；Ci_5烷氧基；取 代的(V5烷氧基，其中所述烷基取代基选自邻苯二甲酰亚胺基和氨基；邻苯二甲酰亚胺基 氧基；苯氧基；取代的苯氧基，其中一个或多个苯基取代基各自选自(V5烷基、卤素和Cp5烷 氧基；苯基；取代的苯基，其中一个或多个苯基取代基各自选自Cp5烷基、卤素和C"烷氧 基；芳基C"烷基；取代的芳基Cp5烷基，其中一个或多个芳基取代基各自选自Cp5烷基、卤 素和Ci_5烷氧基；芳氧基CV5烷基氨基；CV5烷基氨基；二 CV5烷基氨基；腈；肟；苄氧基亚 胺基；Cp5烷氧基亚胺基；邻苯二甲酰亚胺基；琥珀酰亚胺基；烷基羰氧基；苯基羰氧基； 取代的苯基羰氧基，其中一个或多个苯基取代基各自选自Cu烷基、卤素和CV5烷氧基；苯 基Cp5烷基羰氧基，其中一个或多个苯基取代基各自选自CV5烷基、卤素和Cp5烷氧基；氨基 羰氧基；Cp5烷基氨基羰氧基；二 (V5烷基氨基羰氧基；Cp5烷氧羰氧基；取代的(V5烷氧羰 氧基，其中一个或多个烷基取代基各自选自甲基、乙基、异丙基和己基；苯氧基羰氧基；取 代的苯氧基羰氧基，其中一个或多个苯基取代基各自选自CV5烷基、C1^5烷氧基和卤素；(V5 烷硫基；取代的(V5烷硫基，其中所述烷基取代基选自羟基和邻苯二甲酰亚胺基；Cp5烷基 磺酰基；苯基磺酰基；取代的苯基磺酰基，其中一个或多个苯基取代基各自选自溴、氟、氯、C1-5烷氧基和三氟甲基；前提条件是，如果A是
21.根据权利要求12所述的方法，其中R1是取代的苯基并且&是嘧啶-3-基。
22.根据权利要求12所述的方法，其中R1是4-氟苯基。
23.根据权利要求12所述的方法，其中民是氢、芳基Cp5烷基或取代的芳基Cp5烷基。
24.根据权利要求12所述的方法，其中民是氢或苯基Cp5烷基。
25.根据权利要求16所述的方法，其中A是亚乙炔基且q为0_5。
26.根据权利要求16所述的方法，其中X是琥珀酰亚胺基、羟基、甲基、苯基、C1^5烷基 磺酰基、c3_6环烷基、Ci_5烷基羰氧基、Ci_5烷氧基、苯基羰氧基、Ci_5烷基氨基、二 Ci_5烷基氨 基或月青。
27.根据权利要求12所述的方法，其中所述式I化合物是4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基 丁炔-1-基)-1-(3-苯丙基)-5" (4-吡啶基)咪唑。
28.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSKjB酶活性抑制剂是式(II)化合物
29.根据权利要求观所述的方法，其中R选自Ra、-(V8烷基-Ra、_C2_8烯基-Ra、-Q-8炔基-Ra和氰基。
30.根据权利要求四所述的方法，其中Ra选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。
31.根据权利要求观所述的方法，其中R1选自氢、-CV8烷基-R5、-C2_8烯基-R5、-C2_8 炔基-R5、-C (0) - (C1^8)烷基-R9、-C (0)-芳基-R8、-C (0) -0- (C1^8)烷基-R9、-C (0) -0-芳 基-R8、-C (0) -NH ((V8 烷基-R9)、-C (0) -NH (芳基-R8)、-C (0) -N (C1^8 烷基-R9) 2、-SO2- (C1^8) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-环烷基-R6、-杂环基-R6、-芳基-R6和-杂芳基-R6 ；其中杂环 基和杂芳基通过杂环基或杂芳基环碳原子与1位氮杂吲哚氮原子连接。
32.根据权利要求31所述的方法，其中R5是1至2个独立地选自如下基团的取 代基氢、-O-(CV8)烷基、-O-(C1^8)烷基-OH、-O-(C1^8)烷基-O-(Cb)烷基、-O-(C1^8) 烷基-NH2、-O-(Ch)烷基-MKCV8 烷基)、-O-(Cb)烷基-Nd8 烷基)2、-O-(CV8)烷 基-S-(CV8)烷基、-O-(Cp8)烷基-SO2-(Ch8)烷基、-O-(CV8)烷基-SO2-NH2、-O-(Cp8)烷 基-SO2-MKCV8 烷基)、-O-(CV8)烷基-SO2-N(。卜8 烷基)2、-O-C(O) H、-O-C(O)-(C1^8)烷 基、-O-C(0) -NH2、-O-C(0) -NH(C1^8 烷基)、-O-C(0) -N(C1^8 烷基)2、_0_(C1^8)烷基-C(0) H、-O-(C1-S)烷基-C(O)-(CV8)烷基、-O-(C1-S)烷基-CO2H、-O-(CB)烷基-C(O)-O-(CV8) 烷基、-O-(C1^8)烷基-C(O)-NH2、-O-(C1^8)烷基-(:(0)-^((^8 烷基)、-O-(Ch8)烷 基-C(O)-N((V8 烷基)2、-C(O)H、-C(O)-(C1^8)烷基、-CO2H, -C(O)-O-(C1^8)烷基、-C (0)-NH2, -C(NH)-NH2, -C(O)-NH(C1^8 烷基)、-C(O)-N(C1^8 烷基)2、_SH、-S-(C1^8)烷 基、-S-(C1-S)烧基-S-(C1-s)烧基、(C^8)烧基-0-((^-8)烧基、(C^8)烧基-0-((^-8) 烷基-OH、-S- (Cp8)烷基-O- (CV8)烷基-NH2、-S" (Cp8)烷基-0- (C1^8)烷基-NH (C1^8 烷 基)、-S- (U 烷基-0- (CV8)烷基-N ((V8 烷基)2、-S- (CV8)烷基-NH ((V8 烷基)、-SO2- (CV8) 烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH ((V8 烷基)、-SO2-N (C1^8 烷基)2、-N-R7、氰基、(卤素)“、羟基、硝基、 氧代基、-环烷基-R6、-杂环基-R6、-芳基-R6和-杂芳基-R6。
33.根据权利要求31所述的方法，其中R6是1至4个独立地选自如下基团的与碳 或氮原子连接的取代基氢、-CV8烷基、-c2_8烯基、-c2_8炔基、-C(O)H, -C(O)-(CV8)烷 基、-C02H、-C (0) -ο- (C1-s)烷基、-C (0) -NH2、-C (NH) -NH2、-C (0) -NH (C1^8 烷基)、-C (0) -N (C1^8) 烷基)2、-SO2-(C1^8)烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH(Cb 烷基)、-SO2-N((^8 烷基)2、-(C1^8)烷基-N-R7、-((V8)烷基 _(卤素)n -(C1^8)烷基-0H、-芳基-R8、-((V8)烷基-芳基-R8 和-(C1J烷基-杂芳基-R8 ；前提条件是，当R6与碳原子连接时，R6进一步选自-C"烷氧 基、"(C1^8)烷氧基_(卤素)i_3、_SH、-S-(CV8)烷基、-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、氧代基 和-杂芳基-R8。
34.根据权利要求33所述的方法，其中R7是2个独立地选自如下基团的取代基 S、"C1^ 焼基、_C2_8 烯基、_C2_8 炔基、-(Cb)烷基 H-(CB)烷基-O-(CV8)烷基、-(Cb) 烷基-NH2、- (CV8)烷基-NH ((V8 烷基)、-(CV8)烷基-N (C1^8 烷基)2、- (CV8)烷基-S- (C1^8) 烷基、-C(O) H、-C(O)-(CV8)烷基、-C(O)-O-(CV8)烷基、-C (O)-NH2、-C(O)-赚“烧 基)、-C (O)-N((V8 烷基)2、-SO2-(C1^8)烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH(Cp8 烷基)、-SO2-N((^8 烷 基)2、-C(N)-NH2、_ 环烷基-R8,-(C1^8)烷基-杂环基-R8,-芳基-R8,-(C1^8)烷基-芳基-R8 和-(C1J烷基-杂芳基-R8。
35.根据权利要求31所述的方法，其中R8是1至4个独立地选自如下基团的与碳或氮 原子连接的取代基氢、-Cp8烷基、-((V8)烷基_(卤素)和-(C1J烷基-0H;前提条件 是，当R8与碳原子连接时，R8进一步选自-C^8烷氧基、-ΝΗ2、-ΝΗ((ν8烷基)、-N^8烷基)2、 氰基、卤素、-(C1J烷氧基_(卤素)、羟基和硝基。
36.根据权利要求31所述的方法，其中R9是1至2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-C^8烷氧基、-NH2CNHd8烷基)、-NOV8烷基)2、氰基、(卤素)…羟基和硝基。
37.根据权利要求观所述的方法，其中R2是1个选自如下基团的与碳或氮原子 连接的取代基氢、-C1^8 烷基-R5、-C2_8 烯基-R5、-C2_8 炔基-R5、-C (0) H、-C (0) - (C1^8) 烷基-R9、-C(O)-NH2、-C(O)-MKCV8 烷基-R9)、-C(O) -N (C1^8 烷基-R9) 2、-C(O) -NH (芳 基-R8)、-C(O)-环烷基-R8、-C(O)-杂环基-R8、-C(O)-芳基-R8、-C(O)-杂芳 基-R8、-CO2H, -C(O)-O-(C1-S)烷基-R9、-C(O)-O-芳基-R8、-SO2-(C1^8)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-环烷基-R6、-芳基-R6和-((V8)烷基-N-R7 ；前提条件是，当R2与碳原子连接时， R2进一步选自-C"烷氧基-R5、-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、氧代基、-杂环基-R6和-杂 芳基-R6。
38.根据权利要求观所述的方法，其中R3是1至3个独立地选自如下基团的与 碳原子连接的取代基氢、-CV8烷基-R10、-C2_8烯基-R10、-C2_8炔基-R10、-CV8烷氧 基-R10、-C (0) H、-C (0) - (U 烷基-R9、-C (0) -NH2, -C (0) -NH (C1^8 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^8 烷基-R9) 2、-C (0)-环烷基-R8、-C (0)-杂环基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-杂芳基-R8、-C ( NH) -NH2, -CO2H, -C (0) -0- (C1^8)烷基-R9、-C (0) -0-芳基-R8、-SO2- (C1^8)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、-环烷基-R8、-杂环基-R8、-芳基-R8和-杂芳基-R8。
39.根据权利要求38所述的方法，其中Rltl是1至2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-ΝΗ2、-ΝΗ((ν8烷基)、-Ν((^_8烷基)2、氰基、(卤素)μ、羟基、硝基和氧代基。
40.根据权利要求观所述的方法，其中R4是1至4个独立地选自如下基团的与 碳原子连接的取代基氢、-CV8烷基-R10、-C2_8烯基-R10、-C2_8炔基-R10、-CV8烷氧 基-R1。、-C (0) H、-C (0) - (CV8)烷基-R9、-C (0) -NH2、-C (0) -NH (C1^8 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^8 烷 基-R9) 2、_C (0)-环烷基-R8、-C (0)-杂环基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-杂芳基-R8、-C (NH) -NH2,-CO2H,-C (0) -0- (Cb)烷基-R9、-C (0) -0-芳基-R8、-SH、_S- (C1^8)烷基-Rici、-SO2- (C1^8) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-SO2-NH2, -SO2-NH (CB 烷基-R9)、-SO2-N (Cb 烷基-R9) 2、-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、-环烷基-R8、-杂环基-R8、-芳基-R8和-杂芳基-R8。
41.根据权利要求40所述的方法，其中Rltl是1至2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-ΝΗ2、-ΝΗ((ν8烷基)、-Ν((^8烷基)2、氰基、(卤素)μ、羟基、硝基和氧代基。
42.根据权利要求观所述的方法，其中Y和Z独立地选自0、S、(H、0H)和(H、H)；前提 条件是，Y和Z其中一者是0而另一者选自0、S、(H、0H)和(H、H)；以及其可药用盐。
43.根据权利要求28所述的方法，其中R选自Ra、-(V4烷基-Ra、_C2_4烯基-Ra、-Q-4炔 基-Ra和氰基。
44.根据权利要求四所述的方法，其中Ra选自杂环基、芳基和杂芳基。
45.根据权利要求四所述的方法，Ra选自二氢-吡喃基、苯基、萘基、噻吩基、吡咯基、 咪唑基、吡唑基、吡啶基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、二苯并呋喃基和二 苯并噻吩基。
46.根据权利要求观所述的方法，其中R1选自氢、-CV4烷基-R5、-C2_4烯基-R5、-C2_4 炔基-R5、-C (0) - (Ch)烧基-R9、-C (0)-芳基-R8、-C (0) _0_ (C1^4)烷基-R9、-C (0) _0_ 芳 基-R8、-C (0) -NH ((V4 烷基-R9)、-C (0) -NH (芳基-R8)、-C (0) -N (C1^4 烷基-R9) 2、-SO2- (C1^4) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-环烷基-R6、-杂环基-R6、-芳基-R6和-杂芳基-R6 ；其中杂环 基和杂芳基通过杂环基或杂芳基环碳原子与1位上的氮杂吲哚氮原子连接。
47.根据权利要求观所述的方法，其中R1选自氢、-CV4烷基-R5、-芳基-R6和-杂芳 基-R6 ；其中杂芳基通过杂芳基环碳原子与1位上的氮杂吲哚氮原子连接。
48.根据权利要求观所述的方法，其中R1选自氢、-CV4烷基-R5和-萘基-R6。
49.根据权利要求31所述的方法，其中R5是1至2个独立地选自如下基团的取 代基氢、-O-(CV4)烷基、-O-(Ch)烷基 _0H、-O-(C1^4)烷基-O-(Ch)烷基、"O-(C1^4) 烷基-NH2、-O-(Ch)烷基-NH((V4 烷基)、-O-(C1^4)烷基-N(C1^4 烷基)2、-O-(CV4)烷 基-S-(CV4)烷基、-O-(Cp4)烷基-SO2-(Ch)烷基、-O-(CV4)烷基-SO2-NH2、-O-(Cp4)烷 基-SO2-MKCh 烷基)、-O-(CV4)烷基 _S02_N((^4 烷基)2、-O-C(O) H、-O-C(O)-(C1^4)烷 基、-O-C(0) -NH2、-O-C(0) -NH(C1^4 烷基)、-O-C(0) -N(C1^4 烷基)2、_0_(C1^4)烷基-C(0) H、-O-(Ch)烷基-C(O)-(Ch)烷基、"O-(C1^4)烷基-CO2H、-O-(C1^4)烷基-C(0) _0_OV4) 烷基、-O-(Ch)烷基-C(O)-NH2、-O-(C1^4)烷基-C(O) -NH (C1^4 烷基)、-O-(Ch)烷 基-C(O)-N((V4 烷基)2、-C(O)H、-C(O)-(C1^4)烷基、-CO2H, -C(O)-O-(C1^4)烷基、-C (0)-NH2, -C(NH)-NH2, -C(O)-NH(C1^4 烷基)、-C(O)-N^4 烷基)2、_SH、-S-(C1^4)烷 基、-S-(Cp4)焼基-S-(Cu )烧基、-S-(Ch)烧基-O-(Ch)烧基、"S" (C1^4)烧基-O-(CV4) 烷基-OH、-S- (Ch)烷基-0- (CV4)烷基-NH2、_S_ (C1^4)烷基 _0_ (C1^4)烷基-NH (C1^4 烷 基)、-S- (Ch)烷基-0- (CV4)烷基-N (C1^4 烷基)2、_S_ (C1^4)烷基-NH (C1^4 烷基)、-SO2- (C1^4) 烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH ((V4 烷基)、-SO2-N (C1^4 烷基)2、-N-R7、氰基、(卤素)“、羟基、硝基、 氧代基、-环烷基-R6、-杂环基-R6、-芳基-R6和-杂芳基-R6。
50.根据权利要求31所述的方法，其中R5是1至2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-O-(C1^4)烷基、-N-R7、羟基和-杂芳基-R6。
51.根据权利要求31所述的方法，其中R5是1至2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-O-(Cy)烷基、-N-R7、羟基、-咪唑基-R6、-三唑基-R6和-四唑基-R6。
52.根据权利要求31所述的方法，其中R6是1至4个独立地选自如下基团的与碳或氮原 子连接的取代基氢、-(V4烷基、_C2_4烯基、_C2_4炔基、-C(O)H、-C(O)-(CV4)烷 基、-C02H、-C (0) -ο- (Ch)烷基、-C (0) -NH2、-C (NH) -NH2、-C (0) -NH (C1^4 烷基)、-C (0) -N (C1^4) 烷基)2、-SO2-(Ch)烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH(CH 烷基)、-SO2-N((^4 烷基)2、-(C1^4)烷 基-N-R7、-((V4)烷基-(卤素)n -(C1^4)烷基-0H、-芳基-R8、-((V4)烷基-芳基-R8 和-(Cy)烷基-杂芳基-R8 ；前提条件是，当R6与碳原子连接时，R6进一步选自-Cy烷氧 基、"(C1^4)烷氧基_(卤素)i_3、_SH、-S-(CV4)烷基、-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、氧代基 和-杂芳基-R8。
53.根据权利要求31所述的方法，其中R6是氢。
54.根据权利要求33所述的方法，其中R7是2个独立地选自如下基团的取代基 氢、- "Ci-4 焼基、_C2—4 烯基、_C2_4炔基、-(CH)烷基H-(CH)烷基_0_(C 1—4)焼基、~ (Ch) 烷基-NH2、- (Ch)烷基-NH (C1^4 烷基)、-(C1^4)烷基-N (C1^4 烷基)2、- (C1^4)烷基 _S_ (C1^4) 烷基、-C(O) H、-C(O)-(CV4)烷基、-C(O)-O-(Ch)烷基、-C (O)-NH2、-C (O)-NH (C"烧 基)、-C (O)-N((V4 烷基)2、-SO2-(Ch)烷基、-SO2-NH2、-SO2-MKCH 烷基)、-SO2-MCH 烷 基)2、-C(N)-NH2、_环烷基-R8A-(Ch)烷基-杂环基-R8,-芳基-R8,-(C1^4)烷基-芳基-R8 和U烷基-杂芳基-R8。
55.根据权利要求33所述的方法，其中R7是2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-Cp4 烷基、-C(O)H、-C(O)-(Ch)烷基、"C(O)-O-(C1^4)烷基、-SO2-NH2, -SO2-NH((^4 烷 基)和-SO2-N((V4 烷基)2。
56.根据权利要求31所述的方法，其中R8是1至4个独立地选自如下基团的与碳或氮 原子连接的取代基氧、-Ch烷基、-((V4)烷基_(卤素)Η和-(CH)烷基-0H;前提条件 是，当R8与碳原子连接时，R8进一步选自-Ch烷氧基、-ΝΗ2、_ΝΗ((ν4烷基)、-N((^4烷基)2、 氰基、卤素、-(Cy)烷氧基_(卤素)、羟基和硝基。
57.根据权利要求31所述的方法，其中R8是氢。
58.根据权利要求31所述的方法，其中R9是1至2个独立地选自如下基团的取代基 氢、-C^4烷氧基、-NHy-NHOV4烷基)、-NOV4烷基)2、氰基、(卤素)H、羟基和硝基。
59.根据权利要求31所述的方法，其中R9是氢。
60.根据权利要求观所述的方法，其中R2是1个选自如下基团的与碳或氮原子 连接的取代基氢、-Ch 烷基-R5、_C2_4 烯基-R5、-C2_4 炔基-R5、-C (0) H、-C (0) - (C1^4) 烷基-R9、-C(O)-NH2、-C(O)-MKCV4 烷基-R9)、-C(O) -N^4 烷基-R9) 2、-C(O) -NH (芳 基-R8)、-C(O)-环烷基-R8、-C(O)-杂环基-R8、-C(O)-芳基-R8、-C(O)-杂芳 基-R8、-CO2H, -C(O)-O-(Ch)烷基-妒、-C(O)-O-芳基-R8、-SO2-(C1^4)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-环烷基-R6、-芳基-R6和-((V4)烷基-N-R7 ；前提条件是，当R2与碳原子连接时， R2进一步选自-Ch烷氧基-R5、-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、氧代基、-杂环基-R6和-杂 芳基-R6。
61.根据权利要求28所述的方法，其中R2是1个选自如下基团的与碳或氮原子连接的 取代基氢、-Ch 烷基-R5、-C2_4 烯基-R5、-C2_4 炔基-R5A-CO2^-C(O)-O-(CV4)烷基-R9、-环 烷基-R6、-芳基-R6和-((V4)烷基-N-R7 ；前提条件是，当R2与氮原子连接时，不形成季铵 盐；并且，前提条件是，当R2与碳原子连接时，R2进一步选自-Cy烷氧基-R5、-N-R7、氰基、 卤素、羟基、硝基、氧代基、-杂环基-R6和-杂芳基-R6。
62.根据权利要求观所述的方法，其中R2是1个选自如下基团的与碳或氮原子连接的 取代基氢、-Cy烷基-R5和-芳基-R6 ；前提条件是，当R2与氮原子连接时，不形成季铵盐； 并且，前提条件是，当R2与碳原子连接时，R2进一步选自-N-R7、卤素、羟基和-杂芳基-R6。
63.根据权利要求观所述的方法，其中R3是1至3个独立地选自如下基团的与 碳原子连接的取代基氢、-Ch烷基-R10、_C2_4烯基-R10、_C2_4炔基-R10、-C1^4烷氧 基-R10、-C (0) H、-C (0) - (Ch)烷基-R9、-C (0) -NH2, -C (0) -NH (C1^4 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^4 烷基-R9) 2、-C (0)-环烷基-R8、-C (0)-杂环基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-杂芳基-R8、-C ( NH) -NH2, -CO2H, -C (0) -0- (C1^4)烷基-R9、-C (0) -0-芳基-R8、-SO2- (C1^8)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-N-R7, -((V4)烷基-N-R7、氰基、卤素、羟基、硝基、-环烷基-R8、-杂环基-R8、-芳 基-R8和-杂芳基-R8。
64.根据权利要求观所述的方法，其中R3是1个选自如下基团的与碳原子连接 的取代基氢、-Ch 烷基-R1(l、_C2_4 烯基-R1(l、-C2_4 炔基-R1(l、-C1^4 烷氧基-R1(l、-C (0) H、-CO2H, -NH2、-NH ((V4烷基)、-N ((^4烷基)2、氰基、卤素、羟基和硝基。
65.根据权利要求28所述的方法，其中R3是1个选自如下基团的与碳原子连接的取代 基氢、-Ch烷基-R10、-NH2, .(CH烷基)、-N(C1^4烷基)2、卤素和羟基。
66.根据权利要求观所述的方法，其中R4是1至4个独立地选自如下基团的与 碳原子连接的取代基氢、-Ch烷基-R10、_C2_4烯基-R10、_C2_4炔基-R10、-C1^4烷氧 基-R1。、-C (0) H、-C (0) - (CV4)烷基-R9、-C (0) _NH2、-C (0) -NH (C1^4 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^4 烷 基-R9) 2、_C (0)-环烷基-R8、-C (0)-杂环基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-杂芳基-R8、-C (NH) -NH2,-CO2H,-C (0) -0- (Ch)烷基-R9、-C (0) _0_ 芳基-R8、-SH、_S- (C1^4)烷基-Rici、-SO2- (C1^4) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-SO2-NH2, -SO2-MKCH 烷基-R9)、-SO2-MCh 烷基-R9) 2、-N-R7、氰 基、卤素、羟基、硝基、-环烷基-R8、-杂环基-R8、-芳基-R8和-杂芳基-R8。
67.根据权利要求观所述的方法，其中R4是1至4个独立地选自如下基团的与碳原子 连接的取代基氧、-C1^4 烷基-R1(l、_C2_4 烯基-R1(l、_C2_4 炔基-R1(l、-Ch 烷氧基-R1(l、-C(O) H、-CO2H, -NH2, -NH((V4烷基)、-N^4烷基)2、氰基、卤素、羟基、硝基、-环烷基、-杂环 基、-芳基和-杂芳基。
68.根据权利要求观所述的方法，其中R4是1至4个独立地选自如下基团的与碳原子 连接的取代基氢、CV4烷基-R1(l、Ch烷氧基-R1(l、-NH2, -NHd4烷基)、_N((V4烷基)2、卤 素和羟基。
69.根据权利要求观所述的方法，其中R4是1至4个独立地选自如下基团的与碳原子 连接的取代基氢、CV4烷基-Rltl、Ci_4烷氧基-R1(l、-NHp-NHd4烷基)、_N((V4烷基)2、氯、 氟和羟基。
70.根据权利要求38和41所述的方法，其中Rltl是1至2个独立地选自如下基团的取 代基氢、-NH2, -NH(C1^4烷基)、-N(C1^4烷基)2、氰基、(卤素)η、羟基、硝基和氧代基。
71.根据权利要求38和41所述的方法，其中Rltl是1至2个独立地选自氢和(卤素)i_3 的取代基。
72.根据权利要求38和41所述的方法，其中Rltl是1至2个独立地选自氢和(氟)3的 取代基。
73.根据权利要求观所述的方法，其中Y和Z独立地选自0、S、(H、0H)和(H、H)；前提条件是，Y和ζ其中一者是0而另一者选自0、S、(H、0H)和(H、H)。
74.根据权利要求观所述的方法，其中Y和Z独立地选自0和(H、H)；前提条件是，Y 和Z其中一者是0而另一者选自0和(H、H)。
75.根据权利要求观所述的方法，其中Y和Z独立地选自0。
76.根据权利要求观所述的方法，其中所述式II化合物是3-[1-(3_羟丙基)-1Η-吡 咯并[2,3-b]吡啶-3-基]-4-[2-(三氟甲基)苯基]-IH-吡咯-2，5-二酮。
77.根据权利要求观所述的方法，其中所述式II化合物是3-[1-(3_羟丙基)-1Η-吡 咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-(1-甲基-IH-吡唑-3-基)-IH-吡咯-2，5-二酮。
78.根据权利要求观所述的方法，其中所述式II化合物是3-[1-(3_羟基-丙 基)-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-吡嗪-2-基-吡咯-2，5-二酮。
79.根据权利要求28所述的方法，其中所述式II化合物是3- ，4-二甲氧基-嘧 啶-5-基)-4-[1-(3-羟基-丙基)-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡咯-2，5- 二酮。
80.根据权利要求观所述的方法，其中所述式II化合物是4-{3-[4-(2，4_二甲 氧基-嘧啶-5-基)-2，5- 二氧代-2，5- 二氢-IH-吡咯-3-基]-吡咯并[2，3-b]吡 啶-1-基}_ 丁腈。
81.根据权利要求观所述的方法，其中所述式II化合物是4-{3-[4-(1_甲基-IH-吡 唑-3-基)-2，5- 二氧代-2，5- 二氢-IH-吡咯-3-基]-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-基} -丁腈。
82.根据权利要求观所述的方法，其中所述式II化合物是3- ，4-二甲氧基-嘧 啶-5-基)-4-(1-苯乙基-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
83.根据权利要求1所述的方法，其中GSKjB酶活性抑制剂是式(III)化合物
84.根据权利要求83所述的方法，其中A和E独立地选自氢取代的碳原子和氮原子；其中I独立地选自IH-吲哚、IH-吡咯并[2，3-b]吡啶、IH-吡唑并[3，4-b]吡啶
85.根据权利要求83所述的方法，其中Z选自0 ；或者，Z选自二氢，其中每个氢原子通 过单键连接。
86.根据权利要求83所述的方法，其中R4和R5独立地选自任选被氧代基取代的C^8 焼基、C2—8 烯基和 炔基。
87.根据权利要求83所述的方法，其中&选自-CV8烷基-、-C2_8烯基-、-C2_8 炔基-、-O-(Cp8)烷基-0-、-0-(C2_8)烯基-0-、-0-(C2_8)炔基-0-、-C(O)-(C1^8)烷 基-C(0)-(其中上述烷基、烯基和炔基连接基团中任一者是直链碳链，任选被1至4个独 立地选自如下基团的取代基取代C"烷基、CV8烷氧基、C"烷氧基(Cp8)烷基、羧基、羧基 (C1^8)烷基、-C (0)0-(U烷基、-Ch烷基-C (0)0-(U烷基、氨基(被独立地选自氢和CV4 烷基的取代基取代)、氨基(Ci_8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和CV4烷基的取代基取 代)、卤素、(卤素)h(Ch8)烷基、(卤素)h(Ch8)烷氧基、羟基、羟基(C1^8)烷基和氧代基； 并且，其中上述烷基、烯基和炔基连接基团中任一者任选被一个或两个独立地选自如下基 团的取代基取代杂环基、芳基、杂芳基、杂环基(Ci_8)烷基、芳基(CV8)烷基、杂芳基(CV8) 烷基、螺环烷基和螺杂环基(其中上述环烷基、杂环基、芳基和杂芳基取代基中任一者任选 被1至4个独立地选自如下基团的取代基取代Ci_8烷基、CV8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ci_8)烷 基、羧基、羧基(CV8)烷基、氨基(被独立地选自氢和CV4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷 基(其中氨基被独立地选自氢和Ch烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)(C1^8)烷基、(卤 素)h(CV8)烷氧基、羟基和羟基(CV8)烷基；并且，其中上述杂环基取代基中任一者任选被 氧代基取代))、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基(其中环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选被 1至4个独立地选自如下基团的取代基取代而_8烷基、Ci_8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ci_8)烷基、 羧基、羧基(CV8)烷基、氨基(被独立地选自氢和CV4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷基 (其中氨基被独立地选自氢和Ch烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)h(Ch8)烷基、(卤 素)m(Ch8)烷氧基、羟基和羟基(Ci_8)烷基；并且，其中杂环基任选被氧代基取代)、-(o-(c H2)卜6)。-5-0-、-0- (CH2) ^6-O- (CH2) h-O-、-。- (CH2) ^6-O- (CH2) ^6-O- (CH2)卜厂。-、-(O- (CH2)卜6) 0_5 -NR6-、-O- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-O-, -O- (CH2) ^6-O- (CH2) ^6-NR6-, - (O- (CH2)卜6) 0_5-S_、-O- (CH 2) !_6-S- (CH2) ^6-0-,-0- (CH2) ^6-O- (CH2) h-S-、-NR6-、-M6-NR7-、-M6- (CH2) ^6-NR7-,-NR6- (CH2 )h-NR7- (CH2) h-NR8-、-NR6-C (O) -、-C (O) -NR6-、-C (O) - (CH2) 0_6-NR6- (CH2) Q_6-C (O) -、-NR6- (C H2) 0_6-C (O) - (CH2) h-C (O) - (CH2)。_6-NR7-、-NR6-C (O) -NR7-、-NR6-C (NR7) -NR8-、-O- (CH2) ^6-NR6 -(CH2) ^6-S-,-S- (CH2) h-NR6- (CH2) ^6-O-,-S- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-S-,-NR6- (CH2) ^6-S- (CH2) ^ 6-殿7-和-S02-(其中&為和1 8独立地选自氢、Ci_8烷基、Ci_8烷氧基(C1J烷基、羧基(CV8) 烷基、氨基(CV8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和CV4烷基的取代基取代)、羟基(CV8)烷 基、杂环基(CV8)烷基、芳基(Ci_8)烷基和杂芳基(Ci_8)烷基(其中上述杂环基、芳基和杂芳 基取代基任选被1至4个独立地选自如下基团的取代基取代(V8烷基、CV8烷氧基、Ci_8烷氧 基(CV8)烷基、羧基、羧基(CV8)烷基、氨基(被独立地选自氢和Ci_4烷基的取代基取代)、氨 基(Ci_8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和Ch烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)(CV8) 烷基、(卤素)m(Ch8)烷氧基、羟基和羟基(CV8)烷基；并且，其中杂环基任选被氧代基取 代))；前提条件是，如果A和E选自氢取代的碳原子，则民选自-c2_8炔基-、-O-(CV8)烷 基-ο-、-ο-(c2_8)烯基-ο-、-O-(C2_8)炔基-O-、-C(O)-(CV8)烷基-C(O)-(其中上述烷基、 烯基和炔基连接基中任一者是直链碳链，任选被1至4个独立地选自如下基团的取代基取 代而_8烷基、Ci_8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ci_8)烷基、羧基、羧基(U烷基、-C(O)O-(CV8)烷 基、-CV8烷基-C(O) O-(Ci_8)烷基、氨基(被独立地选自氢和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基((V8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和Ci_4烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)H(CV8)烷 基、(卤素)M(Ch8)烷氧基、羟基、羟基(Ci_8)烷基和氧代基；并且，其中上述烷基、烯基和炔 基连接基团中任一者任选被一个或两个独立地选自如下基团的取代基取代杂环基、芳基、 杂芳基、杂环基(Ch8)烷基、芳基(Ci_8)烷基、杂芳基(Ci_8)烷基、螺环烷基和螺杂环基(其 中上述环烷基、杂环基、芳基和杂芳基取代基中任一者任选被1至4个独立地选自如下基 团的取代基取代而_8烷基、Ci_8烷氧基、CV8烷氧基(Ci_8)烷基、羧基、羧基(Ci_8)烷基、氨基 (被独立地选自氢和CV4烷基的取代基取代)、氨基(Ci_8)烷基(其中氨基被独立地选自氢 和Ch烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)(CV8)烷基、(卤素)(CV8)烷氧基、羟基和羟 基(Ci_8)烷基；并且，其中上述杂环基取代基任选被氧代基取代))、环烷基(其中环烷基任 选被1至4个独立地选自如下基团的取代基取代烷基、CV8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ch8) 烷基、羧基、羧基(Ci_8)烷基、氨基(被独立地选自氢和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基(CV8) 烷基(其中氨基被独立地选自氢和CV4烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)H(Ch8)烷基、 (卤素)H (CV8)烷氧基、羟基和羟基(C1-S)烷基)、-(0- (CH2) H-0-、-O- (CH2) ^6-O- (CH2) H-O-、-。- (CH2) ^6-O- (CH2) ^6-O- (CH2) ^-0-,-(0- (CH2)卜6) ^5-NR6-,-O- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-O -、-O- (CH2) ^6-O- (CH2) H-NR6-、- (O- (CH2)卜6) 0_5_S-、-O- (CH2) ^6-S- (CH2) ^6-O-,-O- (CH2) ^6-O -(CH2) H-S-、-NR6-NR7-, -NR6- (CH2) ^6-NR7-, -NR6- (CH2) ^6-NR7- (CH2) ^6-NR8-, -NR9-C (O) -、-C (O) -NR9-、-C (O) - (CH2) Ch5-NR6- (CH2)。_6-C (O) -NR6- (CH2)。_6-C (O) - (CH2) ^6-C (O) - (CH2)。_6-NR7-、-NR6-C (O) -NR7-、-M6-C (NR7) -NR8-^-O- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-S-,-S- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-O -、-S- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-S-和-NR6- (CH2) ^6-S- (CH2) ^6-NR7-(其中 R6、R7 和 & 独立地选自 氢、(V8烷基、Cp8烷氧基(CV8)烷基、羧基(Q_8)烷基、氨基(CV8)烷基(其中氨基被独立地 选自氢和Cy烷基的取代基取代)、羟基(CV8)烷基、杂环基(C")烷基、芳基(C")烷基和 杂芳基(CV8)烷基(其中上述杂环基、芳基和杂芳基取代基任选被1至4个独立地选自如 下基团的取代基取代(；_8烷基、Cp8烷氧基、CV8烷氧基(C")烷基、羧基、羧基(C")烷基、 氨基(被独立地选自氢和Cy烷基的取代基取代)、氨基(C")烷基(其中氨基被独立地选 自氢和C"烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)"(Cu)烷基、(卤素)"(Cu)烷氧基、羟基 和羟基(C")烷基；并且，其中杂环基任选被氧代基取代)；并且，其中&选自CV8烷基、CV8 烷氧基(U烷基、羧基(Cp8)烷基、氨基(CV8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和CV4烷 基的取代基取代)、羟基(CV8)烷基、杂环基(CV8)烷基、芳基(C")烷基和杂芳基(C")烷 基(其中上述杂环基、芳基和杂芳基取代基任选被1至4个独立地选自如下基团的取代基 取代烷基、烷氧基、CV8烷氧基(Q_8)烷基、羧基、羧基(Q_8)烷基、氨基(被独立地 选自氢和CV4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和CV4烷基 的取代基取代)、卤素、(卤素)H(Ch8)烷基、(卤素)H(Ch8)烷氧基、羟基和羟基(C1^8)烷 基；并且，其中杂环基任选被氧代基取代))。
88.根据权利要求83所述的方法，其中R1和民独立地选自氢、CV8烷基、C2_8烯基、C2_8 炔基(其中烷基、烯基和炔基任选被选自如下基团的取代基取代=Ch8烷氧基、烷氧基(CV8) 烷基、羧基、羧基(Ci_8)烷基、氨基(被独立地选自氢和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基(CV8) 烷基(其中氨基被独立地选自氢和CH烷基的取代基取代)、(卤素)H、(卤素)H(Ch8)烷 基、(卤素)H (CV8)烷氧基、羟基、羟基(Ci_8)烷基和氧代基)、Ci_8烷氧基、Ci_8烷氧羰基、 (卤素)"(Cu)烷氧基、C"烷硫基、芳基、杂芳基(其中芳基和杂芳基任选被选自如下基团的取代基取代=Cm烷基、C"烷氧基、烷氧基(C")烷基、羧基、羧基(C")烷基、氨基(被独 立地选自氢和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷基(其中氨基被独立地选自氢和Ci_4 烷基的取代基取代)、卤素、(卤素)M(Ch8)烷基、(卤素)M(CV8)烷氧基、羟基和羟基(CV8) 烷基)、氨基(被独立地选自氢和Ch烷基的取代基取代)、氰基、卤素、羟基和硝基；以及其 可药用盐。
89.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，9，10，12，13，15， 16-八氢-23H-5J6 :17,22-二次甲基-5H-二吡啶并[2，3_k:3'，2' -q]吡咯并[3，4_n] [1,4,7,10,19]三氧杂二氮杂环二4^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
90.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是10，11，13，14，16，17， 19，20，22，23-十氢-9，4 :24，29-二次甲基-IH-二吡啶并[2，3_n:3'，2' _t]吡咯并[3， 4-q] [1，4，7，10，13，22]四氧杂二氮杂环二十四碳烯_1，3 QH) - 二酮。
91.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是10，11，13，14，16，17， 19，20，22，23，25，26-十二氢-9，4 :27，32-二次甲基-IH-二吡啶并[2，3_q:3'，2' -w]吡 咯并[3,4-t] [1，4，7，10，13，16，25]五氧杂二氮杂环二十七碳烯_1，3 QH) - 二酮。
92.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，9，10，12，13_六 氢-20H-5，23 :14,19-二次甲基-5H-二苯并[h，n]吡咯并[3，4_k] [1,4,7,16] 二氧杂二氮 杂环十八碳烯-20，22 (21H) - 二酮。
93.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，9，10，12，13，15， 16-八氢-23H-5，26 :17，22-二次甲基-5H-二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1,4,7,10,19] 三氧杂二氮杂环二i^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
94.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是10，11，13，14，16，17， 19，20，22，23-十氢-9，4 :24，29-二次甲基-IH-二苯并[n, t]吡咯并[3,4-q] [1,4,7,10, 13,22]四氧杂二氮杂环二十四碳烯-1，3QH)-二酮。
95.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是化合物la。
96.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-[3-[(2_羟基乙 基)甲基氨基]丙基]-IH-吲唑-3-基]-4-[l-(3-吡啶基)-IH-吲哚-3-基]-IH-吡 咯-2，5-二酮。
97.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3，5_二 氯-N-[3-氯-4-[(3，4，12，12a-四氢 _1Η_[1，4]噻嗪并[3，4_c][l，4]苯并二氮杂蕈 -11(6H)_基)羰基]苯基]-苯甲酰胺。
98.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2_羟基-乙 基)-IH-吲哚-3-基]-4-(1-吡啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
99.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3- -甲氧基-苯 基)-4-(1-吡啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
100.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6-[[2-[[442，4-二氯 苯基)-5-甲基-IH-咪唑-2-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶甲腈。
101.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(5-氯-1-甲 基-IH-吲哚-3-基)-4-[1-(3-咪唑-1-基-丙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯_2，5- 二酮。
102.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(5-氯-1-甲基-IH-吲哚-3-基)-4-[1-(3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯_2，5-二酮。
103.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_羟基-丙 基)-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-(1-甲基-IH-吡唑-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
104.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是化合物10a。
105.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_羟基-3-甲 基-丁基)-IH-吲唑-3-基]-4-(1-吡啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯_2，5_ 二酮。
106.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2_羟基-乙 基)-IH-吲唑-3-基]-4-(1-嘧啶-5-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯_2，5_ 二酮。
107.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2_羟基-乙 基)-IH-吲哚-3-基]-4-(1-嘧啶-5-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
108.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是(11Z)-8，9，10，13， 14，15-六氢-2，6 :17,21-二(次甲基)吡咯并[3，4_h] [1,15,7] 二氧杂氮杂环二十三碳 烯-22，24(1H，23H)-二酮。
109.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(5-氯-1-吡 啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-4-[1-(3-羟基-丙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯_2，5_ 二酮。
110.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3- -甲氧基-苯 基)-4-[1-(3_甲氧基-丙基)-IH-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮。
111.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_羟基-丙 基)-IH-吲唑-3-基]-4-[1-(四氢-吡喃-4-基)-IH-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮。
112.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是2-{3-[4-(5-氯-1-甲 基-IH-吲哚-3-基)-2，5_ 二氧代-2，5- 二氢-IH-吡咯-3-基]-吲唑-1-基}N_(2_羟 基-乙基)-乙酰胺。
113.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是4-(3-氯-苯 基)-6-(3-二甲基氨基-丙基)-5，6-二氢-4H-2，4，6-三氮杂-环戊并[c]芴_1，3_ 二酮。
114.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-乙基_6，7，9，10， 13，14，15，16-八氢-12扎23!1-5，26 17，22-二次甲基二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1,4,7, 10，19] 二氧杂三氮杂环二i^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
115.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-苄基_6，7，9，10， 13，14，15，16-八氢-12扎23!1-5，26 :17，22_ 二 (次甲基)二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1， 4,7,10,19] 二氧杂三氮杂环二i^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
116.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(1-{2-[2-(2_羟 基-乙氧基)-乙氧基]-乙基}-1Η-吲哚-3-基)-4-[1-(2_羟基-乙基)-1Η-吲 哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮。
117.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，8，9，10，11，12， 13-八氢-8，11-二甲基-5，23 :14,19-二次甲基-20H-二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1,4, 7,10]四氮杂环十八碳烯-20，22 QlH)-二酮。
118.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是7，8，9，10，12，13，16， 17，18，19-十氢-8，17-二甲基-15!1，26!1-5，29:20，25-二次甲基-6!1-二苯并[k, q]吡咯并[3,4-n] [1，4，7，10，19，22] 二氧杂四氮杂环二十四碳烯，28 (27H) - 二酮。
119.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(2-呋喃基甲 基)-6，7，9，10，13，14，15，16-八氢-12!1，23!1-5，26 :17,22-二 (次甲基)二苯并[k, q]吡 咯并[3,4-n] [1,4,7,10,19] 二氧杂三氮杂环二4^一碳烯-23，25 (MH)- 二酮。
120.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(2-噻吩基甲 基)-6，7，9，10，13，14，15，16-八氢-12!1，23!1-5，26 :17,22-二 (次甲基)二苯并[k, q]吡 咯并[3,4-n] [1,4,7,10,19] 二氧杂三氮杂环二4^一碳烯-23，25 Q4H)- 二酮。
121.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(1-萘基甲基)-6， 7，9，10，13，14，15，16-八氢-12扎23!1-5，26 :17，22_ 二 (次甲基)二苯并[k，q]吡咯并[3，4-n][1,4,7,10,19] 二氧杂三氮杂环二4^一碳烯-23，25 Q4H) - 二酮。
122.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(吡啶-4-基甲 基)-6，7，9，10，13，14，15，16-八氢-12!1，23!1-5，26 :17,22-二 (次甲基)二苯并[k, q]吡 咯并[3，4-n] [1，4，7，10，19] 二氧杂三氮杂环二4^一碳烯-23，25 (MH) - 二酮。
123.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2-{2-[2-(1，2， 3,4-四氢-萘-1-基氨基)_乙氧基]-乙氧基}_乙基)-1Η-吲哚-3-基]-4-{1-[2-(1， 2，3，4-四氢-萘-1-基氨基)-乙基]-IH-吲哚-3-基}-吡咯-2，5- 二酮。
124.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_二甲基氨 基-苯基)-IH-吲哚-3-基]-4- [1- (2-羟基-乙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯-2，5- 二酮。
125.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[5-氯-1-(6-二甲 基氨基-吡啶-3-基)-IH-吲哚-3-基]-4-[1- (2-羟基-乙基)-IH-吲唑_3_基]-吡 咯-2，5-二酮。
126.根据权利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是5-(5-氯-3-{4-[1-(2-羟基-乙基)-IH-吲唑-3-基]_2，5_二氧代-2,5- 二氢-IH-吡 咯-3-基}_吲哚-1-基)_烟酸甲酯。
全文摘要
本发明涉及处理多潜能细胞的方法，其中通过用GSK-3B酶活性抑制剂处理所述多潜能细胞，所述多潜能细胞可在培养物中有效扩增和分化。
文档编号C12N5/0735GK102105580SQ200980124647
公开日2011年6月22日 申请日期2009年4月22日 优先权日2008年4月24日
发明者J·E·戴维斯, J·刘 申请人:森托科尔奥索生物科技公司