专利名称：一种酵母菌菌株及用它制备噬菌蛭弧菌制剂的方法
技术领域：
本发明涉及了一种酵母菌菌株，同时本发明还涉及了用该酵母菌菌株制备噬菌蛭 弧菌制剂的方法。
背景技术：
噬菌蛭弧菌是美国科学家Stolp和PetZlodl962年发现的一种小型寄生性革兰氏 阴性细菌。它具有独特的生活周期，一是在宿主细胞外的自由游动阶段，另一是在宿主细胞 内的生长繁殖阶段。噬菌蛭弧菌这种奇特的生活方式，引起了人们的广泛兴趣。1963年被 命名为噬菌蛭弧菌。噬菌蛭弧菌是专门以捕食细菌为生的寄生性细菌，它比普通的细菌小，有类似噬 菌体的作用，但它不是病毒，它具有细菌的一切形态特征。噬菌蛭弧菌是自然界的自净因子 之一，它不易于寄生于有益菌中，但易于寄生于致病菌中，在水产养殖中，水体中的许多革 兰氏阴性菌像嗜水气单胞菌、弧菌、鳗壶菌等都是水产动物的病源菌。近10多年来在噬菌蛭弧菌的应用开发方面，国内开展了许多研究。1994年农业部 文件，将噬菌蛭弧菌列入饲料药物添加剂允许使用的微生物有益菌类中。1995年上海大学 生物医药中心邵桂元等人以鲫鱼出血性腹水病病原菌点状产气单胞菌为宿主菌，从自然界 分离到6株噬菌蛭弧菌均对此病菌有溶菌性。并在实验条件下对病原菌的自然净化作用方 面进行了研究，为利用噬菌蛭弧菌控制鱼塘细菌性病害的发生，开展生物防治新技术提供 了依据和途径。1997年厦门大学生物系杨淑专等人在厦门沿海分离到噬菌蛭弧菌。噬菌 蛭弧菌的数量与海水中弧菌类的数量成正相关。灭菌海水中只加入噬菌蛭弧菌，其数量出 现负增长，若同时加入鳗弧菌8927菌株，则噬菌蛭弧菌数量增加并导致宿主菌数减少。以 后他们又用噬菌蛭弧菌对25株对虾病原菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄 球菌采用双层琼脂平板法进行噬菌试验，结果表明不同噬菌蛭弧菌菌株的寄生范围不同， 但所有供试宿主菌都能被某些噬菌蛭弧菌寄生，形成清晰的噬斑。他们的实验为利用噬菌 蛭弧菌进行海产品养殖生物防治细菌感染提供了佐证。2002年赵明森的研究表明噬菌蛭 弧菌在虾蟹病害防治中跨以防止或减少虾蟹病害的发生和蔓延，对引起虾蟹致病的病原菌 清除率相当高，嗜水气单胞菌清除率为97.2%，点状单胞菌清除率为95.8%，弧菌清除率 为93%，大肠杆菌清除率为91. 8%，沙门氏菌清除率为97. 3%，并且噬菌蛭弧菌能改善虾 蟹体内外的环境，促进虾蟹健康生长，增强虾蟹集体的免疫能力。2004年曾地刚等研究表明 在鱼塘水中加入噬菌蛭弧菌能有效地减少池塘水中的细菌总数。可见，随着国内外对噬菌蛭弧菌研究工作的不断深入，随着噬菌蛭弧菌产品的不 断推广应用，在改变人们对抗生素的依赖、减少抗生素、化学消毒剂等的残留等方面将起到 越来越大的作用。目前国内外绝大部分的噬菌蛭弧菌产品都是采用大肠杆菌为宿主菌，将大肠杆菌 灭活后作为噬菌蛭弧菌的宿主这种生产工艺生产的，这种工艺存在几大问题1、大多数大肠杆菌为有害细菌，不小心就会造成污染，风险较大，虽然也有一些工程菌株如大肠杆菌的C600菌株为非致病性菌，但也不属于有益菌，不能作为益生菌直接利 用；2、需要将培养好的大肠杆菌进行离心浓缩，取出菌体后灭活，这样产生了大量的 离心废水，灭活工艺又需要很大的能源消耗；3、终端的噬菌蛭弧菌产品为单一的噬菌蛭弧菌产品，其功能作用十分有限。
发明内容
本发明的第一个目的是提供了一种酵母菌菌株，该菌株可作为噬菌蛭弧菌的宿
主。 本发明的第二个目的提供一种用上述酵母菌菌株制备噬菌蛭弧菌制剂的方法。该 制备方法简化了噬菌蛭弧菌的生产工艺，减少污水排放和能源消耗。本发明的第一个目的提供的酵母菌的新菌株XD03S，它具有作为噬菌蛭弧菌寄生 宿主的能力。该酵母菌的新菌株XD03S已经于2010年1月29日在中国典型培养物保藏中 心保藏，并收到保藏登记号CCTCC NO =M 2010036。本发明第二个目的通过以下技术措施来实现一种用上述酵母菌菌株制备噬菌蛭 弧菌制剂的方法，其包括以下步骤(1)蛭弧菌的纯化以大肠杆菌为靶细胞，采用液体培养和双层自来水琼脂相结 合的方法分离从自然界中分离噬菌蛭弧菌基础菌株，然后采用单个菌斑传代法进行液体培 养和双层自来水琼脂相结合的方法进行至少10代的连续单个菌斑传代纯化，得到噬菌能 力强的噬菌蛭弧菌纯系菌株；(2)将步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO: M2010036)进行复合培养得到噬菌蛭弧菌制剂。本发明所述的步骤(2)中的复合培养中优选使用的培养基采用糖蜜5 20克、 蛋清粉2 5克、水1000毫升，PH条件为3. 3-7. 8。本发明所述的步骤(2)中的复合培养的温度23 36°C。本发明所述的步骤(2)中噬菌蛭弧菌纯系菌株与酵母菌菌株XD03S进行培养的时 间优选1 5天。仅用噬菌蛭弧菌纯系菌株与酵母菌菌株XD03S进行培养得到的噬菌蛭弧菌制剂 的功能较为单一，因此发明人筛选出能与酵母菌菌株XD03S共生的乳酸菌、酵母菌和芽孢 杆菌，建立用上述酵母菌菌株制备噬菌蛭弧菌制剂的同位培养方法，旨在得到功能较为全 面的噬菌蛭弧菌制剂。所述的方法具体如下(1)蛭弧菌的纯化以大肠杆菌为靶细胞，采用液体培养和双层自来水琼脂相结 合的方法分离从自然界中分离噬菌蛭弧菌基础菌株，然后采用单个菌斑传代法进行液体培 养和双层自来水琼脂相结合的方法进行至少10代的连续单个菌斑传代纯化，得到噬菌能 力强的噬菌蛭弧菌纯系菌株；(2)以酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)分别与乳酸菌、酵母菌和芽孢杆 菌进行复合培养，筛选出能与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)共生的乳酸菌、酵 母菌和芽孢杆菌；(3)将步骤(2)中所得的能与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)共生的乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌以及酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)先进行复合培养， 然后再接种步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株继续进行培养得到噬菌蛭弧菌制剂。本发明所述的步骤(2)和步骤(3)中的复合培养中 优选使用的培养基采用糖蜜 5 20克、蛋清粉2 5克、水1000毫升，PH条件为3. 3-7. 8。本发明所述的步骤(2)和步骤(3)中的复合培养的温度23 36°C。本发明所述的步骤(3)中能与酵母菌XD03S(CCTCC NO =M 2010036)共生的乳酸 菌、酵母菌和芽孢杆菌以及酵母菌XD03S(CCTCC NO =M 2010036)进行复合培养的时间优选 1 4天。本发明所述的步骤(3)中接种步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株后继续进行 培养的时间优选1 5天。本发明与现有技术相比具有以下优点1、本发明提供的酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)是非致病性细菌，而且 是一种益生菌，但是具有作为噬菌蛭弧菌寄生宿主的能力。采用该酵母菌菌株制备噬菌蛭 弧菌制剂，可以不需要进行离心、灭活等工序，简化了生产工序，且保障了生产安全。2、本发明采用具有作为噬菌蛭弧菌寄生宿主的能力的酵母菌菌株 XD03S(CCTCCN0 =M 2010036)作为噬菌蛭弧菌的宿主进行制备噬菌蛭弧菌制剂，无需进行 离心、灭活等生产工序，简化了生产工序，提高了生产效率，而且减少污水排放及能源消耗。3、本发明通过共生培养，筛选出可以与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036) 共生的乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌，与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036) 一起培养 一段时间后，加入噬菌蛭弧菌一起培养，最终得到的复合型噬菌蛭弧菌制剂，该产品中不仅 具有噬菌蛭弧菌，同时还有益生菌与其共生，能够同时发挥噬菌蛭弧菌对致病菌的吞噬作 用和益生菌的调节作用。增加和增强了了噬菌蛭弧菌制剂的功能，将大大促进和加速其推 广应用。可以预计，在今后把噬菌蛭弧菌作为一种“活的抗生素”运用于农业以及医学方面 将是国外研究及应用的主要方向，因此本品的开发成功具有非常广阔的市场前景。本发明的复合型噬菌蛭弧菌制剂产品已经在广东省、海南省、福建省等地进行了 大面积的中试推广，例如珠海市对虾产业化研究院有限公司，深圳市绿宝地生物科技有限 公司，古劳镇吕源根养殖场，新珠鱼虾药店，中山市板芙恒达鱼药店，还有海南省文昌李灿 雄渔药店、福建漳州市李长生渔药店等经过一年的中试结果证明，该产品提高了鱼、虾等水 产的成活率，深受养殖户的欢迎，对提高他们的养殖成功率起到了关键性的作用。本发明的酵母菌菌株XDS03已经于于2010年1月29日在中国典型培养物保藏中 心保藏，并收到保藏登记号CCTCC NO =M 2010036。
具体实施例方式实施例一(1)原料的准备1)水样的采集收集养殖塘中取水样，底泥，封存准备作为噬菌蛭弧菌基础菌株的分离试验的菌 源。2)宿主菌的制备
从广东省微生物研究所菌种保藏中心购买大肠杆菌C600作为前期宿主菌，把 C600分别制成C600菌悬液，3500r/min离心成菌泥，并把菌泥制成1010cfu/ml菌悬液，一 部分不灭菌即活菌泥C600，一部分灭菌即灭活菌泥C600，处理完后放入4度冰箱保存待用。(2)蛭弧菌的分离 采用液体培养和双层自来水琼脂相结合的方法进行分离1)取300ml C600的菌悬液、300ml活菌泥C600和300ml灭活菌泥C600分别装在 不同的三角瓶中。把所得的水样一部分在3000r/min离心15min，取上清液分别加入到三 角瓶中的C600的菌悬液、活菌泥C600和灭活菌泥C600中进行培养，每瓶加入20ml上清 液，重复三次，在28-32°C的温度下静置培养4-6天，再把培养好的菌液在3000r/min下离心 15min，取上清液用双层自来水琼脂法做菌斑分离实验；2)取300ml C600的菌悬液、300ml活菌泥C600和300ml灭活菌泥C600分别装在 不同的三角瓶中。把所得的水样分别加入到三角瓶中的的C600的菌悬液、活菌泥C600和 灭活后的C600中进行培养，每瓶加入20ml上清液，重复三次。在28-32°C的温度下静止培 养4-6天。再把培养好的菌液在3000r/min下离心15min，取上清液用双层自来水琼脂法做 菌斑分离实验；3)双层自来水琼脂法下层用灭菌的1. 7%自来水琼脂倒入直径18cm灭菌的培养 皿中，50ml/皿，凝固后放入45度左右的恒温箱中保温3h左右，上层把灭菌的0. 8%自来水 琼脂粉培养基分装到比色管，7ml/管，再加入灭活后的C600的菌泥0. 8ml，放在45度左右 的水浴锅中保温，最后将在3000r/min离心15min的水样上清液0. 5ml加入到40度左右的 比色管中摇勻后迅速倒入准备好的底层培养基上，使其均勻分布在上面，凝固后放入28度 左右的恒温箱倒置培养4-6天，连续观察；(3)蛭弧菌的纯化利用大肠杆菌C600为宿主，采用单个菌斑传代法进行液体培养和双层自来水琼 脂相结合的方法进行反复纯化得到噬菌蛭弧菌的基础菌株，由于菌种不纯，培养出来的噬 菌斑不纯，菌斑小，不清晰，因此需要对野生菌株进行纯化选育。利用单个菌斑传代法进行 液体培养和双层自来水琼脂相结合的方法进行纯化，经过10代连续的单个菌斑传代，选育 出形成噬菌斑大，菌斑清晰，菌斑形成时间短的蛭弧菌菌株XD03。(4)非大肠杆菌宿主的筛选利用XD03分别以3株乳酸菌，3株酵母菌，8株芽孢杆菌为宿主，利用单个菌斑传 代法进行液体培养和双层自来水琼脂相结合的方法进行驯化培养，筛选出能够形成菌斑的 宿主，每次挑起噬菌斑大，菌斑清晰，形成菌斑时间短的菌斑进行下一次筛选实验，经过12 代连续的单个菌斑传代，筛选出一株酵母菌，能够达到形成噬菌斑大，菌斑清晰，菌斑形成 时间短的目标，我们将这株酵母菌命名为XD03S(CCTCC NO =M 2010036)。(5)复合宿主的筛选取3株酵母菌XD03S (CCTCC NO =M 2010036)分别与3株乳酸菌，2株酵母菌，8株 芽孢杆菌益生菌的复合培养实验，筛选能与XD03S共生的菌株，最后筛选出能与XD03S共生 的1株乳酸菌、1株酵母菌、1株芽孢杆菌，将这三株菌进行复合培养得到复合宿主菌，上述 复合培养的培养温度为23°C，PH条件为3. 3，培养基为糖蜜5克、蛋清粉2克、水1000毫升。
(6)噬菌蛭弧菌制剂的培养本步骤采用培养基为糖蜜5克、蛋清粉2克、水1000毫升，PH条件为3. 3。以1 株酵母菌XD03S(CCTCC NO :M 2010036)与步骤(5)中得到可与酵母菌XD03S (CCTCCNO :M 2010036)共生的1株乳酸菌、1株酵母菌和1株芽孢杆菌作为复合宿主菌接种至培养基中， 先在23°C温度下，PH条件为3. 3的条件下进行培养1天，然后再接种步骤(3)中得到的噬 菌蛭弧菌XD03菌种，然后在23°C温度下，PH条件为3. 3的条件下进行培养1天，得到噬菌 蛭弧菌制剂。实施例二 与实施例一不同的是 (5)复合宿主的筛选取株酵母菌XD03S CCTCC NO =M 2010036)与3株乳酸菌，2株酵母菌，8株芽孢杆 菌益生菌的复合培养实验，筛选能与XD03S共生的菌株，最后筛选出能与XD03S共生的1株 乳酸菌、1株酵母菌、1株芽孢杆菌，将这三株菌进行复合培养得到复合宿主菌，上述复合培 养的培养温度为36°C，PH条件为7. 8，培养基为糖蜜20克、蛋清粉5克、水1000毫升。(6)噬菌蛭弧菌制剂的培养本步骤采用培养基为糖蜜20克、蛋清粉5克、水1000毫升，PH条件为7. 8。以 1株酵母菌XD03S (CCTCC NO :M 2010036)与步骤(5)中得到可与酵母菌XD03S (CCTCCNO :M 2010036)共生的1株乳酸菌、1株酵母菌和1株芽孢杆菌作为复合宿主菌接种至培养基中， 先在36°C温度下，PH条件为7. 8的条件下进行培养4天，然后再接种步骤(3)中得到的噬 菌蛭弧菌XD03菌种，然后在36°C温度下，PH条件为7. 8的条件下进行培养5天，得到噬菌 蛭弧菌制剂。实施例三与实施例一不同的是(5)复合宿主的筛选取株酵母菌XD03S (CCTCC NO =M 2010036)与3株乳酸菌，2株酵母菌，8株芽孢杆 菌益生菌的复合培养实验，筛选能与XD03S共生的菌株，最后筛选出能与XD03S共生的1株 乳酸菌、1株酵母菌、1株芽孢杆菌，将这三株菌进行复合培养得到复合宿主菌，上述复合培 养的培养温度为30°C，PH条件为5. 5，培养基为糖蜜15克、蛋清粉3. 5克、水1000毫升。(6)噬菌蛭弧菌制剂的培养本步骤采用培养基为糖蜜15克、蛋清粉3. 5克、水1000毫升，PH条件为5. 5。以 1株酵母菌XD03S (CCTCC NO :M 2010036)与步骤(5)中得到可与酵母菌XD03S (CCTCC NO: M 2010036)共生的1株乳酸菌、1株酵母菌和1株芽孢杆菌作为复合宿主菌接种至培养基 中，先在30°C温度下，PH条件为5. 5的条件下进行培养3天，然后再接种步骤(3)中得到的 噬菌蛭弧菌XD03菌种，然后在30°C温度下，PH条件为5. 5的条件下进行培养4天，得到噬 菌蛭弧菌制剂。实施例四与实施例一不同的是(5)复合宿主的筛选取株酵母菌XD03S (CCTCC NO =M 2010036)与3株乳酸菌，2株酵母菌，8株芽孢杆菌益生菌的复合培养实验，筛选能与XD03S共生的菌株，最后筛选出能与XD03S共生的1株 乳酸菌、1株酵母菌、1株芽孢杆菌，将这三株菌进行复合培养得到复合宿主菌，上述复合培 养的培养温度为26°C，PH条件为4. 0，培养基为糖蜜10克、蛋清粉4克、水1000毫升。(6)噬菌蛭弧菌制剂的培养本步骤采用培养基为糖蜜10克、蛋清粉4克、水1000毫升，PH条件为4. 0。以 1株酵母菌XD03S (CCTCC NO :M 2010036)与步骤(5)中得到可与酵母菌XD03S (CCTCCNO :M 2010036)共生的1株乳酸菌、1株酵母菌和1株芽孢杆菌作为复合宿主菌接种至培养基中， 先在26°C温度下，PH条件为4. 0的条件下进行培养2天，然后再接种步骤(3)中得到的噬 菌蛭弧菌XD03菌种，然后在26°C温度下，PH条件为4. 0的条件下进行培养3天，得到噬菌 蛭弧菌制剂。
实施例五与实施例一 四不同的是本实施例不采用复合宿主菌，只采用酵母菌 XD03S(CCTCC NO :M 2010036)作为宿主菌。步骤(6)噬菌蛭弧菌制剂的培养本步骤采用培养基为糖蜜10克、蛋清粉4克、水1000毫升，PH条件为6. 0。以1 株酵母菌XD03S(CCTCC NO =M 2010036)接种至培养基中，先在28°C温度下，PH条件为6. 0 的条件下进行培养3天，然后再接种步骤(3)中得到的噬菌蛭弧菌XD03菌种，然后在28°C 温度下，PH条件为6. 0的条件下进行培养5天，得到噬菌蛭弧菌制剂。实施例六本发明提供的噬菌蛭弧菌制剂在南美白对虾养殖过程中的应用试验应用试验在珠三角进行，分别在江门大鳌、台山，中山板芙、横栏和珠海白蕉的冬 棚虾塘同时进行实验，每个地区选择两个养殖技术条件比较好、养殖水平基本一致的养殖 户进行试验，共在5个区域10个养殖户30 口南美白对虾养殖塘中进行试验，每个养殖户选 择3 口面积为5亩左右的养殖塘，试验塘采用本发明提供的噬菌蛭弧菌制剂，用量是每公斤 产品用1亩水体(按一米水深计算)，用法是用本塘水稀释后全塘均勻泼洒，每隔7天使用 一次。对照养殖塘一采用市面上普通的噬菌蛭弧菌(南京福润德公司生产的三联噬菌王)， 用法用量同上；对照养殖塘二采用普通的生物制剂(江西天意公司生产的EM菌)，用法用 量同上。所有试验养殖塘和对照养殖塘种苗、放苗时间、使用的饲料及其他用药情况基本一 致，三个月后各试验养殖塘的试验结果非常一致，10个养殖户的试验养殖塘成活率平均超 过95 %，对照养殖塘一的成活率平均85 %，对照养殖塘二的成活率平均为50 %，整个养殖 过程各试验塘的发病率很低，养殖水质一直保持稳定，说明本发明的噬菌蛭弧菌制剂在养 殖水体中应用不仅对控制致病性细菌有较好的作用，对稳定养殖水质，调节样子微生态环 境也有良好的作用。对照养殖塘一所采用的普通噬菌蛭弧菌对控制致病性细菌有较好的作 用，但是由于其中没有有益菌的作用，没有调节微生态平衡、稳定水质的菌种，养殖过程中 水质不够稳定，由水质引起的死亡现象时有发生。对照塘二采用的普通EM菌对有较强的调 节水质的作用，但是对有害的致病性细菌无能为力，因此，养殖过程中细菌性疾病及其并发 的病毒性病害时有发生，养殖成功率总体较低。本发明以上实施例仅用于对本发明进行阐述，然而本发明的保护范围并非仅仅局 限于以上实施例。所属技术领域的普通技术人员只需取酵母菌、芽孢杆菌和乳酸菌作为原 料，依据本发明公开的内容，均可实现本发明的目的。
权利要求
一种酵母菌的新菌株XD03S(CCTCC NOM 2010036)，其具有作为噬菌蛭弧菌寄生宿主的能力。
2.一种用权利要求1所述的酵母菌菌株制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，其 包括以下步骤(1)蛭弧菌的纯化以大肠杆菌为靶细胞，采用液体培养和双层自来水琼脂相结合的 方法分离从自然界中分离噬菌蛭弧菌基础菌株，然后采用单个菌斑传代法进行液体培养和 双层自来水琼脂相结合的方法进行至少10代的连续单个菌斑传代纯化，得到噬菌能力强 的噬菌蛭弧菌纯系菌株；(2)将步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株与酵母菌菌株XD03S(CCTCCNO M2010036)进行复合培养得到噬菌蛭弧菌制剂。
3.根据权利要求2所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中 的复合培养中优选使用的培养基采用糖蜜5 20克、蛋清粉2 5克、水1000毫升，PH 条件为3. 3-7.8。
4.根据权利要求2所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中 的复合培养的温度23 36°C。
5.根据权利要求2所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中 噬菌蛭弧菌纯系菌株与酵母菌菌株XD03S进行培养的时间为1 5天。
6.一种用权利要求1所述的酵母菌菌株制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，其 包括以下步骤(1)蛭弧菌的纯化以大肠杆菌为靶细胞，采用液体培养和双层自来水琼脂相结合的 方法分离从自然界中分离噬菌蛭弧菌基础菌株，然后采用单个菌斑传代法进行液体培养和 双层自来水琼脂相结合的方法进行至少10代的连续单个菌斑传代纯化，得到噬菌能力强 的噬菌蛭弧菌纯系菌株；(2)以酵母菌菌株XD03S(CCTCCNO =M 2010036)分别与乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌进 行复合培养，筛选出能与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)共生的乳酸菌、酵母菌 和芽孢杆菌；(3)将步骤(2)中所得的能与酵母菌菌株XD03S(CCTCCNO =M 2010036)共生的乳酸菌、 酵母菌和芽孢杆菌以及酵母菌菌株XD03S(CCTCC NO =M 2010036)先进行复合培养，然后再 接种步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株继续进行培养得到噬菌蛭弧菌制剂。
7.根据权利要求6所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(2)和 步骤(3)中的复合培养中使用的培养基采用糖蜜5 20克、蛋清粉2 5克、水1000毫 升，PH条件为3. 3-7.8。
8.根据权利要求6所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(2)和 步骤(3)中的复合培养的温度23 36°C。
9.根据权利要求6所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(3) 中能与酵母菌XD03S(CCTCC NO =M 2010036)共生的乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌以及酵 母菌 XD03S (CCTCC NO :M 2010036)进行复合培养的时间为1 4天。
10.根据权利要求6所述的制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(3) 中接种步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株后继续进行培养的时间为1 5天。
全文摘要
本发明公开了一种酵母菌的新菌株XD03S(CCTCC NOM 2010036)，其具有作为噬菌蛭弧菌寄生宿主的能力。本发明还公开了使用上述的酵母菌菌株制备噬菌蛭弧菌制剂的方法，其包括以下步骤(1)蛭弧菌的纯化以大肠杆菌为靶细胞，采用液体培养和双层自来水琼脂相结合的方法分离从自然界中分离噬菌蛭弧菌基础菌株，然后采用单个菌斑传代法进行液体培养和双层自来水琼脂相结合的方法进行至少10代的连续单个菌斑传代纯化，得到噬菌能力强的噬菌蛭弧菌纯系菌株；(2)将步骤(1)中所得的噬菌蛭弧菌纯系菌株与酵母菌菌株XD03S(CCTCC NOM 2010036)进行复合培养得到噬菌蛭弧菌制剂。该制备方法简化了噬菌蛭弧菌的生产工艺，减少污水排放和能源消耗。
文档编号C12R1/01GK101845403SQ20101016190
公开日2010年9月29日 申请日期2010年4月26日 优先权日2010年4月26日
发明者杨雄, 黄洁容 申请人:杨雄