专利名称：特定功能微生物制品的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种特定功能微生物制品的制备方法。
背景技术：
进入21世纪人民对生活品质及生活质量的要求越来越高，其对营养品质的要求也越来越高，提高物质生活其源头在于使用的食品及饮品的质量。因此提高食品饮品的营养质量和营养成分对于人类的健康极为重要。目前，一些食品及饮品生产已经实现产品化、 标准化，目前多以含有维生素的食品及饮品；含矿物质的食品及饮品，含中草药的食品及饮品为主，但普遍存在的一个问问题是这些食品及饮品中所含有的添加剂的利用率低，含有副作用，并且这些添加物质大多数都为化学合成品，其长期使用进入消化系统以及血液系统，即会危害人类健康又会对环境造成危害。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以促进人及动物肠道消化功能，减少药物使用，降低生产成本，提高食品及饮品的蛋白质等营养含量，提高食品及饮品中维生素及钙含量的乳酸菌生物添加剂的制备方法。本发明技术方案为一种特定功能微生物制品的制备方法1) (1)从极端化环境下分离乳酸乳杆菌对所获得得菌株采取极端环境条件的塞选试验(1)经过50摄氏度耐高温试验；(2)PH3的耐酸试验PH3的意思是调剂培养基的PH值为3的试验；(3)耐高盐试验；(4)对沙门氏杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球的拮抗实验拮抗能力的验证试验；从中选育出的德氏乳杆菌菌株 (delbrueckii subsp. Lactis) > zFIf lif liftt (paracasei) ^Ii？LIf lif (Lactobacillus brevis)作为工程菌株，挑取工程菌株分别接种到mrs斜面培养基上备用，mrs培养基的组织成分组成成分重量(g)牛肉蛋白粉10鱼肉汁10酵母浸出汁粉5葡萄糖20醋酸钠5柠檬酸二铵2吐温80 0.1硫酸镁0.58硫酸锰0. 蒸溜水IOOOml固体琼脂15g备注用高压锅在121°C灭菌15min，调节pH6. 2 6. 4;2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g， 酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水IOOOml，将以上组份溶解于去离子水中，将其装入21的三角瓶中，在121 °C的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入_4°C的冰箱中待用；3) 一次活化培养将一次活化培养的培养基20ml，分装到IOOml培养瓶中，用5ml 生理盐水冲洗德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)短乳杆菌(LactcAacillus brevis)菌种斜面，将冲洗下来的菌液转种到一次活化培养的培养基中，在温度为36 士 1°C条件下，厌氧静止培养16 1他，待测定ph值在3. 8-4. 5范围时，表明一次活化培养状态达到要求；4)配制二次扩大培养大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克， 去离子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在 121°C条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5) 二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将温度调到40°C恒温厌养静止培养12-14h，待发酵液的ph达到3. 8-4. 5 时，表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水 6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均勻后装到101的三角瓶中，在118°C条件下高压蒸汽灭菌15min后放入-4°C的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在lOOOOrpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有冻干保护剂的101的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混勻，其中发酵后菌泥与冻干保护剂的比例为 1:3;9)冻干将混合均勻的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入-40°C的冰箱中预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干Mh，即可以得到活菌数达到IO11/克的乳酸菌饲料添加剂。本发明的优点在于利用独立分离的乳酸菌菌株作微生物添加剂的发酵菌株，其理化指标稳定，生物学功能稳定安全，在肠道内的作用透彻，易于在肠道内粘附并发挥起作用，且有较强的繁殖能力和生物活性，便于工厂化培养的优质菌株。而且在生产工艺方面操作简单，成本低量可以连续操作，且使用该微生物制品及可以促进人及动物肠道消化功能，减少药物使用，降低生产成本，提高食品及饮品的营养含量，提高食品及饮品中维生素及钙的含量。上述定向微生物制品的制备方法，其特点在于三个方面一是菌种选择的优化；我们突破传统乳酸菌菌株的获取方式，从极端环境中分离植物源乳酸菌作为工程菌株，并对菌株进严格的赛选试验，从中获得有一定抗逆性和一定生物学功能的菌株作为工程菌株；二是发酵工艺的简单低成本；在发酵过程中所应用的培养基均为常规化学用品并且操作简单，便于工厂化应用； 三是冻干工艺的高效，经过我们多年的实验研究终于获得适合乳酸菌菌株在真空冷冻干燥的冻干保护剂可以使活菌数达到IO11/克。本发明的特点在于利用乳酸菌中的优质菌株德氏乳杆菌株(delbryecki i subsp. Lactis)、干酷乳杆菌株(paracasei))短乳杆菌(Lactobacillus brevis)纯化后经过一次扩大培养，二次扩大培养再用脱脂乳甘油葡萄糖乳糖蔗糖作为保护剂经过真空冷冻干燥而得到的活菌数IO11/克的定向微生物添加剂制品。
而乳酸菌是人及动物肠道的正常有益微生物与肠道内的消化吸收有着密切的关系。保持肠道内益生菌群正常时，即可以提高食物消化率和生物效价；控制内毒素；抑制肠道内腐败菌生长。同时益生菌代谢产生的生物菌素对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作，提高机体免疫力等。
图1为本发明工艺流程图
具体实施例方式如图1所示，一种定向多功能乳酸菌添加剂的应用及制备方法1) (1)从极端化环境下分离乳酸乳杆菌对所获得得菌株采取极端环境条件的塞选试验(1)经过50摄氏度耐高温试验；(2)PH3的耐酸试验PH3的意思是调剂培养基的PH值为3的试验；(3)耐高盐试验；(4)对沙门氏杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球的拮抗实验拮抗能力的验证试验；从中选育出的德氏乳杆菌菌株(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌菌株(paracasei)短乳杆菌(LactcAacillus brevis)作为工程菌株，挑取工程菌株分别接种到mrs斜面培养基上备用，mrs培养基的组织成分组成成分重量(g)牛肉蛋白粉10鱼肉汁10酵母浸出汁粉5葡萄糖20醋酸钠5柠檬酸二铵2吐温 80 0. 1硫酸镁0. 58硫酸锰0. 28蒸溜水IOOOml固体琼脂15g备注用高压锅在121°C灭菌15min，调节pH6. 2 6. 4 ；2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g， 酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水IOOOml，将以上组份溶解于去离子水中，将其装入21的三角瓶中，在121 °C的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入_4°C的冰箱中待用；3) 一次活化培养将一次活化培养的培养基20ml，分装到IOOml培养瓶中，用5ml 生理盐水冲洗德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)短乳杆菌(LactcAacillus brevis)菌种斜面，将冲洗下来的菌液转种到一次活化培养的培养基中，在温度为36 士 1°C条件下，厌氧静止培养16 1他，待测定ph值在3. 8-4. 5范围时，表明一次活化培养状态达到要求；4)配制二次扩大培养大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克，
6去离子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在 121°C条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5) 二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将温度调到40°C恒温厌养静止培养12-14h，待发酵液的ph达到3. 8-4. 5 时，表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水 6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均勻后装到101的三角瓶中，在118°C条件下高压蒸汽灭菌15min后放入-4°C的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在lOOOOrpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有冻干保护剂的101的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混勻，其中发酵后菌泥与冻干保护剂的比例为 1:3;9)冻干将混合均勻的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入-40°C的冰箱中预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干Mh，即可以得到活菌数达到IO11/克的乳酸菌添加剂。
权利要求
1. 一种特定功能微生物制品的制备方法，其特征是1)(1)从极端化环境下分离乳酸乳杆菌对所获得得菌株采取极端环境条件的塞选试验(1)经过50摄氏度耐高温试验； (2)PH3的耐酸试验PH3的意思是调节培养基的PH值为3的试验；(3)耐高盐试验；(4) 对沙门氏杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球的拮抗实验拮抗能力的验证试验；从中选育出的德氏乳杆菌菌株(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌菌株 (paracasei)短乳杆菌(LactcAacillus brevis)作为工程菌株，挑取工程菌株分别接种到 mrs斜面培养基上备用，mrs培养基的组织成分 组成成分重量(g) 牛肉蛋白粉10 鱼肉汁10 酵母浸出汁粉5 葡萄糖20 醋酸钠5 柠檬酸二铵2 吐温80 0. 1 硫酸镁0. 58 硫酸锰0. 28 蒸溜水IOOOml 固体琼脂15g备注用高压锅在121°C灭菌15min，调节pH6. 2 6. 4 ；2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g，酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水IOOOml，将以上组份溶解于去离子水中，将其装入21的三角瓶中，在121 °C的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入_4°C的冰箱中待用；3)一次活化培养将一次活化培养的培养基20ml，分装到IOOml培养瓶中，用5ml生理盐水冲洗德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)短乳杆菌 (Lactobacillus brevis)菌种斜面，将冲洗下来的菌液转种到一次活化培养的培养基中， 在温度为36士 1°C条件下，厌氧静止培养16 1他，待测定ph值在3. 8-4. 5范围时，表明一次活化培养状态达到要求；4)配制二次扩大培养大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克，去离子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在121 °C 条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5)二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将温度调到40°C恒温厌养静止培养12-14h，待发酵液的ph达到3. 8-4. 5时， 表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水 6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均勻后装到101的三角瓶中，在118°C条件下高压蒸汽灭菌15min后放入-4°C的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在lOOOOrpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有冻干保护剂的101的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混勻，其中发酵后菌泥与冻干保护剂的比例为1 3;9)冻干将混合均勻的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入-40°C的冰箱中预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干Mh，即可以得到活菌数达到IO11/克的乳酸菌添加剂。
全文摘要
本发明涉及一种特定功能微生物制品的制备方法，利用乳酸菌中的优质乳杆菌经培养得到高活性的乳酸菌发酵液，以脱脂乳等作为保护剂利用真空冷冻干燥机制成活菌数高达1011/克的活菌添加剂。该特定功能微生物添加剂的优点在于经过真空冷冻干燥所得到的乳酸菌活菌添加剂活性高活力强，发酵产物生物学功能稳定，适于工业连续培养且成本低，便于操作等优点。而且既可以直接添加到食品及饮品中也可利用此乳酸菌添加剂发酵食品及饮品，经过该特定功能微生物添加剂发酵所得到的食品或饮品能促进人及动物生长、调节胃畅道正常菌群、维持微生态平衡、而且降解内毒素、抑制肠道内腐败菌生长、提高机体免疫力等，同时对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作用。
文档编号A23L1/30GK102334684SQ201010231320
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月20日 优先权日2010年7月20日
发明者曾广维, 王淼, 陈丽秋 申请人:哈尔滨龙猪科技开发有限公司