专利名称：N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其编码基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其编码基因和应 用。
背景技术：
N-乙酰高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactones, AHLs)是一类广泛存在于 革兰氏阴性细菌中，调控群体感应(quorum-sensing)系统中的信号分子。这些信号分子是 由病原菌本身产生，可自由穿透细菌的细胞壁和细胞膜同时参与许多病原菌致病基因的表 达调控，当分子浓度达到一定阈值时，就可启动病原菌致病基因的表达。苏云金芽胞杆菌 (Bacillus thuringiensis)不同亚种中广泛存在着对AHLs分子有降解作用的非分泌性蛋 白N-乙酰高丝氨酸内酯酶(Ai iA)，这类蛋白通过水解进入胞内的AHLs分子的内酯键，降低 其浓度，使致病基因不能表达，从而阻止了病原菌对生物的侵染，是一类群体感应淬灭酶。内切-1，4_β-D-木聚糖酶，简称木聚糖酶，能够随机的切割木聚糖主链骨架的 β-1，4-糖苷键，其水解产物主要是木二糖和木寡糖，以及少量的木糖和阿拉伯糖。木聚糖 酶作为环保型饲料添加剂广泛应用于畜牧业，具有改善畜禽消化道功能，降低食糜粘度和 抗营养性，提高饲料利用率和减少环境污染等特点。
发明内容
本发明的目的是提供一种N-乙酰高丝氨酸内酯酶_木聚糖酶融合蛋白及其编码 基因和应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或 添加且同时具有N-乙酰高丝氨酸内酯酶与木聚糖酶活性的由序列1衍生的蛋白质。为了使(a)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成 的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1标签的序列
权利要求
一种蛋白质，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且同时具有N 乙酰高丝氨酸内酯酶与木聚糖酶活性的的由序列1衍生的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于它为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子1)序列表中序列2自5，末端第10至1677位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且同时具有N-乙酰高丝氨酸内酯酶 与木聚糖酶活性的的DNA分子；4)与1)或2)或限定的DNA序列具有90%以上同源性，且同时具有N-乙酰高丝氨酸 内酯酶与木聚糖酶活性的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于所述重组表达载体为将权利要求2 或3所述基因插入pPIC9的多克隆位点得到的重组质粒。
6.如权利要求4所述的重组菌，其特征在于所述重组菌为将权利要求4或5所述重 组表达载体导入宿主菌得到的重组菌；所述宿主菌为大肠杆菌或酵母菌；所述酵母菌优选 为毕赤酵母。
7.如权利要求6所述的重组菌，其特征在于所述重组菌为巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)XynAS27-L2-AiiAB546(SL2B)，其保藏号为 CGMCC No. 3974。
8.生产权利要求1所述蛋白质的方法，是发酵培养权利要求4或6所述的重组菌，得到 权利要求1所述蛋白质。
9.权利要求1所述蛋白、权利要求2或3所述基因、权利要求4至6中任一所述的重组 表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在制备饲料添加剂中的应用。
10.一种饲料添加剂，它的活性成分为权利要求1所述蛋白。
全文摘要
本发明公开了N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与序列1所示蛋白具有相同功能的由序列1衍生的蛋白质。本发明将具有淬灭酶活性的N-乙酰高丝氨酸内酯酶基因与木聚糖酶基因融合，得到了融合蛋白(N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白)SL2B-6。本发明提供的融合蛋白具有适宜的作用pH值，较强的金属离子和表面活性剂抗性，较强的蛋白酶抗性和较好的水解各种底物的能力，可作为一种新型饲料或食品添加剂应用于饲料与食品行业。
文档编号C12N9/00GK101948818SQ20101025145
公开日2011年1月19日 申请日期2010年8月11日 优先权日2010年8月11日
发明者何夙旭, 刘玉春, 周志刚, 姚斌, 孟昆, 张美超, 曹雅男, 杨培龙 申请人:中国农业科学院饲料研究所