专利名称：一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基，特别能用于支 持HEK293细胞、Vero细胞、Marcl45细胞或BHK21细胞的培养，属于细胞工程领域。
背景技术：
目前应用于重组病毒载体扩增、重组蛋白表达或是疫苗规模化制备所用的宿主 细胞基本是哺乳动物的肾脏组织来源细胞，如人胚胎肾细胞(HEK293)、非洲绿猿肾细胞 (Vero)、恒河猴肾细胞(Marcl45)以及幼小仓鼠肾细胞(BHK21)等。这些细胞在传统培养 过程中通常需要添加一定量(5 10% )的牛血清，血清中含有细胞生长所需的生长因子、 激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以促进细胞生长。但是，在规模 化生产和实际应用中，血清的添加存在如下缺点1)血清易受病毒、支原体或其他病原体的污染；2)不同批次的血清之间的质量差异造成最终产品批次间的质量差异；3)大量血清的存在增加生产后期纯化的难度，增加工艺流程、提高生产成本，回收 率降低；4)部分血清成分难以彻底去除，严重影响最终产品质量，具有安全隐患。为了克服血清添加带来的上述缺陷，自上世纪八十年代起许多科研单位或生物医 药公司就相继开发出了若干无血清培养基，如Sigma公司旗下JRH公司生产的Excell系列 无血清培养基，Invitrogen公司旗下Gibco公司生产的VP-AGT系列无血清培养基等等。上述无血清培养基都有各自特点，大都可以支持细胞生长，但同时也存在不足之 处1)无血清培养基中依然含有动物蛋白来源成分，如牛血清白蛋白(BSA)、胰岛素、 转铁蛋白等，仍然遗留着应用血清可能出现的问题，此外其价格昂贵，一般只适合实验室小 规模培养使用；2)目前开发的无血清培养基对细胞具有较高的特异性，通常一种培养基只能适合 一种细胞株的生长，而不适合其他细胞株；所以目前急需开发出适用于同为动物肾脏组织来源细胞的普适型无血清培养基， 同时要求该培养基的添加组分中无动物来源成分，满足细胞生长所需的营养成分。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基，该 培养基不含动物来源成分，以提高生物安全性，并能适用于多种肾脏组织来源细胞的培养， 细胞存活率高。本发明提供一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无动物成分来源、无血清培养 基，包含如下组分
权利要求
一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基，包含如下组分组分 含量DMEM/F12(1∶1) 14.8g/L酵母自水解物 1～3g/L大豆蛋白水解物 1～3g/L氨基酸类L 丙氨酸 10～30mg/LL 缬氨酸 50～150mg/LL 亮氨酸 30～80mg/LL 异亮氨酸 50～180mg/LL 甲硫氨酸 150～300mg/LL 脯氨酸 100～250mg/LL 苯丙氨酸 100～250mg/LL 色氨酸 50～300mg/LL 甘氨酸 0～50mg/LL 丝氨酸 50～150mg/LL 苏氨酸 50～250mg/LL 半胱氨酸 50～250mg/LL 天冬酰胺 50～200mg/LL 谷氨酰胺 250～400mg/LL 酪氨酸 50～250mg/LL 天冬氨酸 20～80mg/LL 谷氨酸 50～200mg/LL 赖氨酸 60～100mg/LL 精氨酸 50～300mg/LL 组氨酸 50～300mg/L羟脯氨酸 0～40mg/L脂肪酸复合剂 0.1～0.3ml/L抗氧化试剂 0.1～0.3ml/L多胺混合物 0.1～0.3ml/L还原型谷胱甘肽 1～3mg/L乙醇胺 1.5～3ml/Lβ 巯基乙醇0.5～2ml/L甘油 5～20g/L矿物质类CaCl2 50～154mg/LMgCl2 20～60mg/LMgSO4 20～50mg/LNaHCO31～1.5g/LFeSO4·7H2O 5～20mg/LFe(NO3)3·9H2O 2～10mg/L柠檬酸铁2～20mg/LPluronic F 68 0.5～1g/L所述培养基的pH为7.2。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于所述培养基包含如下组分组分含量DMEM/F12(1 1)14. 8g/L酵母自水解物2g/L大豆蛋白水解物lg/L氨基酸L-丙氨酸10mg/LL-缬氨酸80mg/LL-亮氨酸30mg/LL-异亮氨酸50mg/LL-甲硫氨酸190mg/LL-脯氨酸lOOmg/LL-苯丙氨酸lOOmg/LL-色氨酸150mg/LL-甘氨酸15mg/LL-丝氨酸lOOmg/LL-苏氨酸120mg/LL-半胱氨酸50mg/LL-天冬酰胺50mg/LL-谷氨酰胺400mg/LL-酪氨酸50mg/LL-天冬氨酸40mg/LL-谷氨酸50mg/LL-赖氨酸60mg/LL-精氨酸50mg/LL-组氨酸50mg/L羟脯氨酸lOmg/L脂肪酸复合剂0.26ml/L抗氧化试剂0.21ml/L多胺混合物0.21ml/L还原型谷胱甘肽3mg/L乙醇胺1. 5ml/Lβ-巯基乙醇0. 5ml/L甘油8g/L矿物质CaCl275mg/LMgCl260mg/LMgSO450mg/LNaHCO31. 5g/LFeSO4 · 7H2018mg/LFe (NO3) 3 · 9H208mg/L柠檬酸铁2mg/LPluronic F—68lg/L所述培养基的PH为7. 2。
3.根据权利要求1所述培养基，其特征在于所述肾脏组织来源细胞为HEK293细胞、 Vero细胞、Marc 145细胞或BHK21细胞。
全文摘要
本发明涉及一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基，以DMEM/F12(1∶1)为基础培养基，含有酵母自水解物、大豆蛋白水解物、多种氨基酸、脂肪酸复合剂、抗氧化试剂、还原型谷胱甘肽、多胺混合物、乙醇胺、β-巯基乙醇、甘油、多种矿物质和Pluronic F-68等组分，pH值为7.2。本发明培养基可用于多种肾脏组织来源的细胞系，如HEK293细胞、Marc145细胞、Vero细胞以及BHK21细胞的培养及病毒增殖。
文档编号C12N5/071GK101974481SQ201010524600
公开日2011年2月16日 申请日期2010年10月29日 优先权日2010年10月29日
发明者侯继波, 冯磊 申请人:国家兽用生物制品工程技术研究中心